Name: laser-induced brain injury in the motor cortex of rats
Uploaded: 2020-09-26T12:30:00
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소로카 대학 의료 센터의 마취학과와 네게브 대학의 실험실 직원에게 이 실험의 성과에 도움을 주신 것에 감사드립니다.

다음 절차는 유럽 공동체의 실험 동물 사용 지침에 따라 수행되었습니다. 실험은 또한 네게브의 벤 구리온 대학에 동물 관리 위원회에 의해 승인되었습니다.
1. 동물 선택 및 준비
<ol><li>이 절차에 대한 과도한 병리학없이 300에서 350 g의 무게 65 남성 Sprague-Dawley 쥐를 선택합니다. 크기가 작을수록 MCAO 절차에 기술적 어려움이 있습니다.</li>
	<li>케이지 당 3 마리의 쥐를 할당하?...

<ol>
	<li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+health+estimates:+deaths+by+cause,+age,+sex+and+country,+2000-2012.">Global health estimates: deaths by cause, age, sex and country, 2000-2012.</a> World Health Organization. 9, (2014).</li><li>Meadows, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+models+of+focal+and+multifocal+cerebral+ischemia:+a+review.">Experimental models of focal and multifocal cerebral ischemia: a review.</a> Reviews in the Neurosciences. 29, 661-674 (2018).</li><li>Durukan, A., Strbian, D., Tatlisumak, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+of+ischemic+stroke:+a+useful+tool+for+stroke+drug+development.">Rodent models of ischemic stroke: a useful tool for stroke drug development.</a> Current Pharmaceutical Designs. 14, 359-370 (2008).</li><li>Fluri, F., Schuhmann, M. K., Kleinschnitz, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+ischemic+stroke+and+their+application+in+clinical+research.">Animal models of ischemic stroke and their application in clinical research.</a> Drug Design, Development and Therapy. 9, 3445-3454 (2015).</li><li>Li, F., Omae, T., Fisher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+hyperthermia+and+its+mechanism+in+the+intraluminal+suture+middle+cerebral+artery+occlusion+model+of+rats.">Spontaneous hyperthermia and its mechanism in the intraluminal suture middle cerebral artery occlusion model of rats.</a> Stroke. 30, 2464-2470 (1999).</li><li>Boyko, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+experimental+model+of+focal+ischemia+using+an+internal+carotid+artery+approach.">An experimental model of focal ischemia using an internal carotid artery approach.</a> Journal of Neuroscience Methods. 193, 246-253 (2010).</li><li>Zhao, Q., Memezawa, H., Smith, M. L., Siesjo, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperthermia+complicates+middle+cerebral+artery+occlusion+induced+by+an+intraluminal+filament.">Hyperthermia complicates middle cerebral artery occlusion induced by an intraluminal filament.</a> Brain Research. 649, 253-259 (1994).</li><li>Braeuninger, S., Kleinschnitz, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+of+focal+cerebral+ischemia:+procedural+pitfalls+and+translational+problems.">Rodent models of focal cerebral ischemia: procedural pitfalls and translational problems.</a> Experimental and Translational Stroke Medicine. 1, 8 (2009).</li><li>Choi, B. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurobehavioural+deficits+correlate+with+the+cerebral+infarction+volume+of+stroke+animals:+a+comparative+study+on+ischaemia-reperfusion+and+photothrombosis+models.">Neurobehavioural deficits correlate with the cerebral infarction volume of stroke animals: a comparative study on ischaemia-reperfusion and photothrombosis models.</a> Environmental Toxicology and Pharmacology. 33, 60-69 (2012).</li><li>Boyko, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Alternative+Model+of+Laser-Induced+Stroke+in+the+Motor+Cortex+of+Rats.">An Alternative Model of Laser-Induced Stroke in the Motor Cortex of Rats.</a> Biological Procedure Online. 21, 9 (2019).</li><li>Bleilevens, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+anesthesia+and+cerebral+blood+flow+on+neuronal+injury+in+a+rat+middle+cerebral+artery+occlusion+(MCAO)+model.">Effect of anesthesia and cerebral blood flow on neuronal injury in a rat middle cerebral artery occlusion (MCAO) model.</a> Experimental Brain Research. 224, 155-164 (2013).</li><li>Kuts, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Middle+Cerebral+Artery+Occlusion+Technique+for+Inducing+Post-stroke+Depression+in+Rats.">A Middle Cerebral Artery Occlusion Technique for Inducing Post-stroke Depression in Rats.</a> Journal of Visualized Experiments. (147), e58875 (2019).</li><li>Boyko, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+and+neuro-behavioral+parallels+in+the+rat+model+of+stroke.">Morphological and neuro-behavioral parallels in the rat model of stroke.</a> Behavioural Brain Research. 223, 17-23 (2011).</li></ol>

레이저 그룹에서 사망이나 SAH가 발생하지 않았다는 점을 감안할 때 레이저 기술이 최소 침습적이라고 가정하는 것은 공평합니다. 사망과 SAH의 주요 원인은 원래 MCAO기술(10)에도시된 바와 같이 두개내 압력(ICP)의 고도로 이어지는 혈관에 대한 손상이다. 레이저 단에 있는 죽음과 SAH의 부재는 레이저의 특정 효력 때문에 확률이 높습니다: 그(것)들은 혈관에 직접적인 충격이 있지 ?...

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Erratum: Laser-Induced Brain Injury in the Motor Cortex of Rats

전 세계적으로 뇌졸중은 두 번째 주요 사망 원인이며 장애1의세 번째 주요 원인입니다. 뇌졸중은 또한 심각한 장애로 이어지며 종종 의료진과 친척으로부터 추가 치료를 필요로합니다. 그러므로 장애와 관련된 합병증을 이해하고 더 긍정적인 결과를 위한 잠재력을 향상시킬 필요가 있습니다.
동물 모델의 사용은 질병을 이해하는 초기 단계입니다. 최상의 연구 결과를 보장하기 위해 일반적인 모델에는 간단한 기술, 경제성, 높은 재현성 및 최소한의 가변성이 포함됩니다. 허혈성 뇌졸중 모델의 결정요인은 뇌 부종 부종 부피, 경색 크기, 혈액 뇌 장벽 (BBB) 고장의 정도 및 일반적으로 신경 학적 심각도 점수2를통해 평가되는 기능 장애를 포함한다.
설치류 모델에서 가장 널리 사용되는 뇌졸중 유도 기술은 중간 뇌동맥(MCA)을 일시적으로 또는 영구적으로3으로바폐합니다. 이 기술은 인간에 있는 것과 유사한 치기 모형을 생성합니다: 그것은 치기 지역을 둘러싼 음경을 가지고 있고, 높게 재현할 수 있고, 허혈 기간 및 재관류4를조절합니다. 그럼에도 불구 하 고, MCAO 방법은 몇 가지 합병증이 있다. 이 기술은 종종 추가 결과5,6,67로이끌어 내는 시각 피질 및 일반적인 고온증의 기능 장애를 가진 입각 망막에 두개 내 출혈 및 상해를 경향이있습니다. 그밖 한계는 유도한 치기에 있는 높은 변이를 포함합니다 (외부 경동맥 지구같이 의도하지 않은 지구에 허혈의 가능성 연장에서 생기는), MCA의 불충분한 폐색, 및 조기 재관류. 또한, 다른 균주와 크기의 쥐는 다양한 경색 볼륨8을나타낸다. 언급 된 모든 단점 외에도 MCAO 모델은 카테터화에 대한 최소 혈관 크기의 요구 사항 측면에서 기술적으로 제한적이기 때문에 깊은 뇌 영역에서 작은 고립 된 뇌졸중을 유도 할 수 없습니다. 따라서 대체 모델에 대한 필요성이 더욱 중요해집니다. 또 다른 방법, photothrombosis, MCAO 절차에 대한 가능한 대안을 제공하지만 효율9에개선되지 않습니다. 이 기술은 빛으로 스트로크를 대상으로하고 이전 모델에 몇 가지 개선을 제공합니다. 그러나, 광혈전증은 이차상화9과연관되는 침략적인 두개부 절제술을 요구합니다.
설명된 단점에 비추어 볼 때, 여기에 제시된 프로토콜은 설치류의 뇌 손상을 유도하기 위한 유능한 대체 레이저 기술을 제공합니다. 레이저 기술의 작용 메커니즘은 살아있는 조직에 부여 된 레이저의 광열 효과를 기반으로하며, 이는 신체 조직에 의한 광선의 흡수와 열로의 변환으로 이어집니다. 레이저 기술을 사용하는 장점은 조작의 안전성과 용이성입니다. 레이저의 출혈을 중지 하는 열을 생산 하는 능력은 의학에서 매우 중요 한, 주어진 된 만남 지점에서 다른 빔을 증폭 하는 그것의 능력은 레이저 대상 점의 방해에 서 건강 한 조직을 파괴 방지 보장 하는 동안10. 이 프로토콜에 사용되는 레이저 빔은 에너지를 방출하거나 파괴를 일으키지 않고 뼈와 같은 낮은 액체 매체를 통과할 수 있습니다. 일단 두뇌 조직과 같은 높은 액체 매체에 도달하면, 표적 조직을 파괴하는 그것의 에너지를 이용합니다. 기술, 따라서, 뇌의 적절 한 영역에서만 뇌 손상을 유도할 수 있습니다.
여기에 제시 된 기술은 조사 수준을 조절하는 능력의 엄청난 금액을 보여 주었다, 처음부터 의도 된 뇌 손상의 선택 된 변화를 생산. 피질과 줄무늬 모두에 영향을 미치는 원래 MCAO와는 달리, 레이저 기술은 의도 된 모터 피질에만 부상을 유도, 뇌 손상의 영향을 조절 할 수 있었다. 본 명세서에서, 레이저 유도뇌 손상 프로토콜 및 쥐의 대뇌 피질상에서 수행되는 절차에 대한 대표적인 결과의 요약이 제공된다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:667px;" width="666">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride</td>
			<td style="width:123px;">SIGMA - ALDRICH</td>
			<td style="width:161px;">298-96-4</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">50% trichloroacetic acid</td>
			<td style="width:123px;">SIGMA - ALDRICH</td>
			<td style="width:161px;">76-03-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">Brain &#38; Tissue Matrices</td>
			<td style="width:123px;">SIGMA - ALDRICH</td>
			<td>15013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">Cannula Venflon 22 G</td>
			<td style="width:123px;">KD-FIX</td>
			<td style="width:161px;">1.83604E+11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">Centrifuge Sigma 2-16P</td>
			<td style="width:123px;">SIGMA - ALDRICH</td>
			<td style="width:161px;">Sigma 2-16P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">Compact Analytical Balances</td>
			<td style="width:123px;">SIGMA - ALDRICH</td>
			<td style="width:161px;">HR-AZ/HR-A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">Digital Weighing Scale</td>
			<td style="width:123px;">SIGMA - ALDRICH</td>
			<td style="width:161px;">Rs 4,000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">Dissecting scissors</td>
			<td style="width:123px;">SIGMA - ALDRICH</td>
			<td style="width:161px;">Z265969</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">Eppendorf pipette</td>
			<td style="width:123px;">SIGMA - ALDRICH</td>
			<td style="width:161px;">Z683884</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">Eppendorf Tube</td>
			<td style="width:123px;">SIGMA - ALDRICH</td>
			<td>EP0030119460</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">Ethanol 96 %</td>
			<td style="width:123px;">ROMICAL</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td>Flammable Liquid</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">Evans Blue 2%</td>
			<td style="width:123px;">SIGMA - ALDRICH</td>
			<td style="width:161px;">314-13-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">Fluorescence detector</td>
			<td style="width:123px;">Tecan, M&#228;nnedorf Switzerland</td>
			<td style="width:161px;">model Infinite 200 PRO multimode reader</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">Heater with thermometer</td>
			<td>Heatingpad-1</td>
			<td>Model: HEATINGPAD-1/2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">Infusion Cuff</td>
			<td style="width:123px;">ABN</td>
			<td style="width:161px;">IC-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">Isofluran, USP 100%</td>
			<td style="width:123px;">Piramamal Critical Care, Inc</td>
			<td style="width:161px;">NDC 66794-017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">Multiset</td>
			<td style="width:123px;">TEVA MEDICAL</td>
			<td style="width:161px;">998702</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">Olympus BX 40 microscope</td>
			<td style="width:123px;">Olympus</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">Optical scanner</td>
			<td style="width:123px;">Canon</td>
			<td style="width:161px;">Cano Scan 4200F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">Petri dishes</td>
			<td style="width:123px;">SIGMA - ALDRICH</td>
			<td style="width:161px;">P5606</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">Scalpel blades 11</td>
			<td style="width:123px;">SIGMA - ALDRICH</td>
			<td style="width:161px;">S2771</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">Sharplan 3000 Nd:YAG (neodymium-doped yttrium aluminum garnet) laser machine</td>
			<td style="width:123px;">Laser Industries Ltd</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">Stereotaxic head holder</td>
			<td style="width:123px;">KOPF</td>
			<td style="width:161px;">900LS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">Sterile Syringe 2 ml</td>
			<td style="width:123px;">Braun</td>
			<td>4606027V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Syringe-needle 27 G</td>
			<td style="width:123px;">Braun</td>
			<td style="width:161px;">305620</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

laser-induced brain injury in the motor cortex of rats

실험 설치류 모델에서 뇌졸중을 유도하는 일반적인 기술은 카테터를 사용하여 중간 뇌동맥(MCA)의 일시적인(종종 MCAO-t로 표시) 또는 영구(MCAO-p로 지정)를 포함한다. 그러나 이 기술은 몇 가지 제한사항이 있어 광범위한 사용을 제한합니다. 이 방법에 의한 뇌졸중 유도는 종종 허혈 영역의 국소화 및 크기, 출혈의 정기적 인 발생 및 높은 사망률의 높은 가변성을 특징으로합니다. 또한 일시적 또는 영구적인 절차를 성공적으로 완료하려면 전문 지식이 필요하며 종종 약 30 분 동안 지속됩니다. 이 프로토콜에서, 레이저 조사 기술은 설치류 모형에 있는 두뇌 상해를 유도하고 공부하기 위한 대안으로 봉사할 수 있는 제시됩니다.
대조군과 MCAO 군의 쥐와 비교했을 때, 레이저 유도에 의한 뇌 손상은 체온, 경색 볼륨, 뇌 부종, 두개 내 출혈 및 사망률의 변동성이 감소하는 것으로 나타났습니다. 더욱이, 레이저 유발 상해의 사용은 모터 피질과 현악 조직의 파괴가 관찰되는 MCAO 실험과 는 달리 모터 피질에서만 뇌 조직에 손상을 일으켰다.
이 조사에서 사실 인정은 레이저 조사가 모터 피질에 있는 두뇌 상해를 유도하기 위한 대안그리고 효과적인 기술으로 봉사할 수 있었다는 것을 건의합니다. 이 방법은 또한 절차를 완료하는 데 필요한 시간을 단축하고 전문가 처리기가 필요하지 않습니다.

사망 또는 SAH는 대조군 또는 실험집단(표1)에등록되지 않았다. MCAO 그룹은 사망률과 SAH 모두의 20%의 비율을 가졌습니다.
두 그룹의 쥐의 상대적인 체온 변화도 두 그룹의 가변성의 차이에도 불구하고 유사하였다(표1).
레이저(16±1.1)와 MCAO(20±1.5) 모델 모두에서 훨씬 더 악화된 NSS가 있었고, 샴 조작 대조군(1±0.3)에 비해; 표 1;<...

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Laser-Induced Brain Injury in the Motor Cortex of Rats

여기에 제시된 프로토콜은 뇌 손상의 설치류 모델을 만드는 기술을 보여줍니다. 여기에 설명된 방법은 레이저 조사를 사용하고 모터 피질을 대상으로 합니다.

쥐의 모터 피질에서 레이저 유도 된 뇌 손상

A common technique for inducing stroke in experimental rodent models involves the transient (often denoted as MCAO-t) or permanent (designated as MCAO-p) ...

우리의 프로토콜은 모터 피질에 초점 충격을 만들기 위해 레이저 조사를 사용하여 쥐에 외상성 뇌 손상을 만들기위한 새로운 방법론을 제공합니다. 이 기술의 주요 장점은 경색 지역의 낮은 가변성, 낮은 사망률 및 전문가 처리기를 필요로하지 않는 절차의 상대적 단순성입니다. 절차를 보여주는 드미트리 나타넬, 우리의 실험실에서 연구원이 될 것입니다.레이저 로 인한 뇌 손상을 수행하기 위해 먼저 20, 300 ~ 350 그램 스프라그 Dawley 쥐를 레이저 그룹에 할당하고 20을 제어 샴 작동 그룹에 할당합니다. 철수 반사에 대한 반응의 부족을 확인 한 후, 직장 온도 조절 가열 패드에 하나의 쥐를 배치하고 절개 주위에 약 2 센티미터 머리없는 마진으로 부상 부위에서 충분한 머리를 제거하기 위해 면도기를 사용합니다. 노출된 피부를 70%에탄올로 소독하고 쥐를 스테레오탁스 헤드 홀더에 놓습니다.세 센티미터 절개를 만들어 두피의 측면 반사가 브레그와 람다 사이의 영역을 노출할 수 있도록 합니다. 두개골에서 2밀리미터 거리에서 1064 나노미터의 피크 파장을 가진 Nd:YAG 레이저를 잡고, 오른쪽 반구 위의 두개골의 노출 부위에 1초 펄스 지속 시간으로 50 줄횟수를 10점 투여합니다. 레이저 부상이 전달 된 후, 장치에서 쥐를 제거하고 3-0 실크 수술 봉합사로 두피를 닫습니다.그런 다음 쥐를 케이지에 놓고 전체 재조정이 있을 때까지 모니터링합니다. 시술 후 24시간 후, 43점 득점 시스템을 사용하여 신경학적 심각도 점수를 평가합니다. 신경 결핍, 행동 장애, 빔 균형 작업 및 반사 신경에 대 한 동물을 테스트 하 고 더 심각한 장애에 대 한 높은 점수를 할당.평가 후, 표준 프로토콜에 따라 각 실험 동물에서 뇌를 수확하고 제어합니다. 뇌의 경색 볼륨을 평가하기 위해 수확한 뇌를 6mm 두께의 관상 슬라이스로 섹션화하고 각 슬라이스를 섭씨 37도에서 30분 동안 0.05%TTC로 배양합니다. 염색 후 인치 해상도당 1600 점당 1600점의 광학 스캐너로 이 슬라이스를 스캔합니다.고정 된 뇌 조각의 얼룩없는 영역은 경색으로 정의됩니다. 혈액 뇌 장벽 파손의 발생률을 평가하기 위해, 레이저 유도 된 부상 후 24 시간 식염수 용액의 킬로그램 당 4 밀리리터에서 희석 2 %에반스 블루 염료와 주사기를로드하고 캔누울 꼬리 정맥을 통해 부상 과 제어 쥐에 정맥 내 용액을 제공합니다. 수술 용 핀셋과 가위를 사용하여 첫 번째 동물의 가슴을 열기 전에 용액이 1 시간 동안 순환하도록 하십시오.오른쪽 아트리움에서 무색 증혈액이 관찰될 때까지 110mm의 압력수은 좌심실을 통해 0.9%의 식힌 심장을 감은 심장을 퍼퓨즈한다. 다음으로, 뇌를 수확하고 2 밀리미터 장미 코골 조각을 얻을. 왼쪽 뇌 조각을 오른쪽 뇌 조각에서 분리하여 부상당한 반구와 비부상 반구를 별도로 평가하고 샘플을 계량합니다.모르타르와 페슬을 사용하여 샘플을 균질화하고 24 시간 동안 50 % 트리클로로아세트산으로 조직 샘플을 배양합니다. 다음 날, 원심분리된 뇌 조직 샘플을 10, 000배 G 및 실온에서 20분 동안 원심분리하고, 1.5 밀리리터의 96%에탄올을 1~3비율로 혼합한다. 그런 다음 620 나노미터 의 발광 및 680 나노미터 방출 파장에서 형광 검출기를 사용하여 혈액 뇌 장벽 파손을 평가합니다.조직학적 분석에 의해 관찰된 바와 같이, 에반스 블루 염색은 레이저 및 MCAO 모델 동물에서 뇌 손상의 발생률을 밝히는 데 사용될 수 있다. 이 대표적인 분석에서는 사망이나 지주막 출혈이 대조군 또는 실험집단에 등록되지 않았으며, MCAO 그룹은 사망률과 지주막 출혈의 20%의 비율을 가졌다. 두 그룹에서 쥐의 상대적인 체온 변화는 두 그룹의 가변성에 차이가 있음에도 불구하고 유사했습니다.신경학적 심각도 점수는 Sham 작동 대조군에 비해 레이저 및 MCAO 모델 모두에서 훨씬 더 나빴습니다. 뇌 손상에 레이저 유도 또한 샴 작동 대조군에 비해 대상 반구에서 경색 볼륨의 상당한 증가를 발생. 그러나, 레이저 모델의 경피량은 MCAO 기술에 의해 부상된 동물에 비해 작아졌다.뇌 부종에 차이가 레이저 유발 뇌 손상 모델과 샴 작동 대조군 사이에 관찰되지 않았다. 그러나, 레이저 모델과 MCAO 부상 그룹 사이 뇌 부종에 상당한 차이가 있었다. Sham 작동 대조군에 비해 레이저로 인한 뇌 손상 및 MCAO 기술은 모두 비부상 및 표적 반구에서 혈액 뇌 장벽 파손의 상당한 증가를 일으켰습니다.이 모델을 시도하는 동안 모터 피질 영역을 정밀하게 타겟팅하고 에너지, 조사되는 포인트 수 및 총 박람회 시간을 표준화해야 합니다. 이 절차에 따라 빔 워킹, 프로에데르트 및 기타 평가와 같은 광범위한 행동 테스트를 수행할 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Live Imaging of Mitosis in the Developing Mouse Embryonic Cortex

개발 마우스 배아의 피질 유사 분열의 라이브 영상

Although of short duration, mitosis is a complex and dynamic multi-step process fundamental for development of organs including the brain. In the ...

연구

신경과학

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

<em&gt; 전의 VIVO</em&gt; 레이저에 의한 척수 손상 모델은 실시간으로 축삭 변성의 메커니즘을 평가하기 위해

Injured CNS axons fail to regenerate and often retract away from the injury site. Axons spared from the initial injury may later undergo secondary axonal ...

Effects of Transcranial Alternating Current Stimulation on the Primary Motor Cortex by Online Combined Approach with Transcranial Magnetic Stimulation

Transcranial Alternating Current Stimulation (tACS) is a neuromodulatory technique able to act through sinusoidal electrical waveforms in a specific ...

Imaging Neural Activity in the Primary Somatosensory Cortex Using Thy1-GCaMP6s Transgenic Mice

Imaging Neural Activity in the Primary Somatosensory Cortex Using Thy1-GCaMP6s Transgenic Mice

Thy1를 사용 하 여 기본 Somatosensory 피 질에서 신경 활동을 이미징-GCaMP6s 유전자 변형 쥐

The mammalian brain exhibits marked symmetry across the sagittal plane. However, detailed description of neural dynamics in symmetric brain regions in ...

In Vivo Single-Molecule Tracking at the Drosophila Presynaptic Motor Nerve Terminal

In Vivo Single-Molecule Tracking at the Drosophila Presynaptic Motor Nerve Terminal

Vivo에서 단일 분자 초파리 연 접 모터 신경 맨끝에 추적

An increasing number of super-resolution microscopy techniques are helping to uncover the mechanisms that govern the nanoscale cellular world. ...

Combined Transcranial Magnetic Stimulation and Electroencephalography of the Dorsolateral Prefrontal Cortex

Transcranial magnetic stimulation (TMS) is a non-invasive method that produces neural excitation in the cortex by means of brief, time-varying magnetic ...

Evaluation of Hemisphere Lateralization with Bilateral Local Field Potential Recording in Secondary Motor Cortex of Mice

마우스의 보조 모터 피질에서 양측 지역 필드 전위 기록을 가진 반구 측면화의 평가

This article demonstrates complete, detailed procedures for both in vivo bilateral recording and analysis of local field potential (LFP) in the cortical ...

Investigating Alterations in Caecum Microbiota After Traumatic Brain Injury in Mice

쥐에서 외상성 뇌 손상 후 Caecum Microbiota에서 변경 을 조사

Increasing evidence shows that the microbiota-gut-brain axis plays an important role in the pathogenesis of brain diseases. Several studies also ...

Non-Invasive Modulation and Robotic Mapping of Motor Cortex in the Developing Brain

개발 뇌에서 모터 피질의 비 침습적 변조 및 로봇 매핑

Mapping the motor cortex with transcranial magnetic stimulation (TMS) has potential to interrogate motor cortex physiology and plasticity but carries ...