Name: a rabbit venous interposition model mimicking revascularization surgery using vein grafts to assess intimal hyperplasia under arterial blood pressure
Uploaded: 2020-05-15T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Rabbit Venous Interposition Model Mimicking Revascularization Surgery using Vein Grafts to Assess Intimal Hyperplasia under Arterial Blood Pressure at JoVE.

Questo lavoro è stato sostenuto da sovvenzioni per la ricerca del Ministero dell'Istruzione, della Cultura, dello Sport, della Scienza e della Tecnologia, del Giappone (25462136).

NOTA: Tutte le procedure chirurgiche eseguite sugli animali devono essere eseguite in conformità con la Guida per la cura e l'uso degli animali da laboratorio (www.nap.edu/catalog/5140.html) o altre linee guida etiche appropriate. I protocolli devono essere approvati dal comitato per il benessere degli animali presso l'istituto competente prima di procedere.
1. Preparazione degli animali
<ol><li>Acquistare conigli bianchi giapponesi maschi (o conigli con dimensioni corporee equivalenti) del...

<ol>
	<li>Causes of death, 2000-2016, Global Health Estimates (GHE). World Health Organization (WHO) Available from: <a target="_blank" href="https://www.who.int/healthinfo/global_burden_disease/estimates/en/">https://www.who.int/healthinfo/global_burden_disease/estimates/en/</a> (2019)</li><li>Benjamin, E. 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D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=2016+AHA/ACC+Guideline+on+the+Management+of+Patients+With+Lower+Extremity+Peripheral+Artery+Disease:+Executive+Summary:+A+Report+of+the+American+College+of+Cardiology/American+Heart+Association+Task+Force+on+Clinical+Practice+Guidelines.">2016 AHA/ACC Guideline on the Management of Patients With Lower Extremity Peripheral Artery Disease: Executive Summary: A Report of the American College of Cardiology/American Heart Association Task Force on Clinical Practice Guidelines.</a> Circulation. 135 (12), 686-725 (2017).</li><li>Aboyans, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=2017+ESC+Guidelines+on+the+Diagnosis+and+Treatment+of+Peripheral+Arterial+Diseases,+in+collaboration+with+the+European+Society+for+Vascular+Surgery+(ESVS):+Document+covering+atherosclerotic+disease+of+extracranial+carotid+and+vertebral,+mesenteric,+renal,+upper+and+lower+extremity+arteries+Endorsed+by:+the+European+Stroke+Organization+(ESO)+The+Task+Force+for+the+Diagnosis+and+Treatment+of+Peripheral+Arterial+Diseases+of+the+European+Society+of+Cardiology+(ESC)+and+of+the+European+Society+for+Vascular+Surgery+(ESVS).">2017 ESC Guidelines on the Diagnosis and Treatment of Peripheral Arterial Diseases, in collaboration with the European Society for Vascular Surgery (ESVS): Document covering atherosclerotic disease of extracranial carotid and vertebral, mesenteric, renal, upper and lower extremity arteries Endorsed by: the European Stroke Organization (ESO) The Task Force for the Diagnosis and Treatment of Peripheral Arterial Diseases of the European Society of Cardiology (ESC) and of the European Society for Vascular Surgery (ESVS).</a> European Heart Journal. 39 (9), 763-816 (2018).</li><li>Neumann, F. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=2018+ESC/EACTS+Guidelines+on+myocardial+revascularization.">2018 ESC/EACTS Guidelines on myocardial revascularization.</a> European Heart Journal. 40 (2), 87-165 (2019).</li><li>Alexander, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+and+safety+of+edifoligide,+an+E2F+transcription+factor+decoy,+for+prevention+of+vein+graft+failure+following+coronary+artery+bypass+graft+surgery:+PREVENT+IV:+a+randomized+controlled+trial.">Efficacy and safety of edifoligide, an E2F transcription factor decoy, for prevention of vein graft failure following coronary artery bypass graft surgery: PREVENT IV: a randomized controlled trial.</a> Journal of the American Medical Association. 294 (19), 2446-2454 (2005).</li><li>Carrel, A., Guthrie, C. 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A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+vascular+grafts.+I.+The+effects+of+dicetyl+phosphate+on+venous+autografts+implanted+in+the+thoracic+aorta+of+growing+pigs:+a+preliminary+report.">Experimental vascular grafts. I. The effects of dicetyl phosphate on venous autografts implanted in the thoracic aorta of growing pigs: a preliminary report.</a> Annals of Surgery. 138 (1), 73-81 (1953).</li><li>Jones, T. I., Dale, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+of+peripheral+autogenous+vein+grafts.">Study of peripheral autogenous vein grafts.</a> AMA Archives of Surgery. 76 (2), 294-306 (1958).</li><li>Stehbens, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+production+of+aneurysms+by+microvascular+surgery+in+rabbits.">Experimental production of aneurysms by microvascular surgery in rabbits.</a> Vascular Surgery. 7 (3), 165-175 (1973).</li><li>Bannister, C. M., Mundy, L. A., Mundy, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fate+of+small+diameter+cervical+veins+grafted+into+the+common+carotid+arteries+of+growing+rabbits.">Fate of small diameter cervical veins grafted into the common carotid arteries of growing rabbits.</a> Journal of Neurosurgery. 46 (1), 72-77 (1977).</li><li>Bergmann, M., Walther, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructural+changes+of+venous+autologous+bypass+grafts+in+rabbits:+correlation+of+patency+and+development.">Ultrastructural changes of venous autologous bypass grafts in rabbits: correlation of patency and development.</a> Basic Research in Cardiology. 77 (6), 682-694 (1982).</li><li>Murday, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intimal+hyperplasia+in+arterial+autogenous+vein+grafts:+a+new+animal+model.">Intimal hyperplasia in arterial autogenous vein grafts: a new animal model.</a> Cardiovascular Research. 17 (8), 446-451 (1983).</li><li>Quist, W. C., LoGerfo, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevention+of+smooth+muscle+cell+phenotypic+modulation+in+vein+grafts:+a+histomorphometric.">Prevention of smooth muscle cell phenotypic modulation in vein grafts: a histomorphometric.</a> Journal of Vascular Surgery. 16 (2), 225-231 (1992).</li><li>Davies, M. G., Dalen, H., Svendsen, E., Hagan, P. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+perioperative+catheter+injury+on+the+long-term+vein+graft+function+and+morphology.">Influence of perioperative catheter injury on the long-term vein graft function and morphology.</a> Journal of Surgical Research. 66 (2), 109-114 (1996).</li><li>Davies, M. G., Dalen, H., Svendsen, E., Hagan, P. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Balloon+catheter+injury+and+vein+graft+morphology+and+function.">Balloon catheter injury and vein graft morphology and function.</a> Annals of Vascular Surgery. 10 (5), 429-442 (1996).</li><li>Jiang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+vein+grat+model:+adaptation+to+differential+flow+environments.">A novel vein grat model: adaptation to differential flow environments.</a> American Journal of Physiology Heart and Circulatory Physiology. 286 (1), 240-245 (2004).</li><li>Ohnaka, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+microRNA-145+to+prevent+vein+graft+disease+in+rabbits+by+regulation+of+smooth+muscle+cell+phenotype.">Effect of microRNA-145 to prevent vein graft disease in rabbits by regulation of smooth muscle cell phenotype.</a> Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 148 (2), 676-682 (2014).</li><li>Nishio, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNA-145-loaded+poly(lactic-co-glycolic+acid)+nanoparticles+attenuate+venous+intimal+hyperplasia+in+a+rabbit+model.">MicroRNA-145-loaded poly(lactic-co-glycolic acid) nanoparticles attenuate venous intimal hyperplasia in a rabbit model.</a> Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 157 (6), 2242-2251 (2019).</li><li>Ohno, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+reendothelialization+with+suppressed+thrombogenic+property+and+neointimal+hyperplasia+of+rabbit+jugular+vein+grafts+by+adenovirus-mediated+gene+transfer+of+C-type+natriuretic+peptide.">Accelerated reendothelialization with suppressed thrombogenic property and neointimal hyperplasia of rabbit jugular vein grafts by adenovirus-mediated gene transfer of C-type natriuretic peptide.</a> Circulation. 105 (14), 1623-1626 (2002).</li><li>Osgood, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+vein+graft+preparation+promotes+cellular+dysfunction,+oxydative+stress,+and+intimal+hyperplasia+in+human+saphenous+vein.">Surgical vein graft preparation promotes cellular dysfunction, oxydative stress, and intimal hyperplasia in human saphenous vein.</a> Journal of Vascular Surgery. 60 (1), 202-211 (2014).</li><li>Shintani, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraoperative+transfection+of+vein+grafts+with+the+NFkappaB+decoy+in+a+canine+aortocoronary+bypass+model:+a+strategy+to+attenuate+intimal+hyperplasia.">Intraoperative transfection of vein grafts with the NFkappaB decoy in a canine aortocoronary bypass model: a strategy to attenuate intimal hyperplasia.</a> Annals of Thoracic Surgery. 74 (4), 1132-1137 (2002).</li><li>Petrofski, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+delivery+to+aortocoronary+saphenous+vein+grafts+in+a+large+animal+model+of+intimal+hyperplasia.">Gene delivery to aortocoronary saphenous vein grafts in a large animal model of intimal hyperplasia.</a> Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 127 (1), 27-33 (2004).</li><li>Steger, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neointimal+hyperplasia+in+a+porcine+model+of+vein+graft+disease:+comparison+between+organ+culture+and+coronary+artery+bypass+grafting.">Neointimal hyperplasia in a porcine model of vein graft disease: comparison between organ culture and coronary artery bypass grafting.</a> European Surgery. 43 (3), 174-180 (2011).</li><li>Thim, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oversized+vein+grafts+develop+advanced+atherosclerosis+in+hypercholesterolemic+minipigs.">Oversized vein grafts develop advanced atherosclerosis in hypercholesterolemic minipigs.</a> BMC Cardiovascular Disorders. 12 (24), (2012).</li><li>Zou, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+of+venous+bypass+graft+arteriosclerosis.">Mouse model of venous bypass graft arteriosclerosis.</a> American Journal of Pathology. 153 (4), 1301-1310 (1998).</li><li>de Vries, M. R., Simons, K. H., Jukema, J. W., Braun, J., Quax, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vein+graft+failure:+from+pathophysiology+to+clinical+outcomes.">Vein graft failure: from pathophysiology to clinical outcomes.</a> Nature Reviews Cardiology. 13 (8), 451-470 (2016).</li><li>Dietrich, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+development+of+vein+graft+atheroma+in+ApoE-deficient+mice.">Rapid development of vein graft atheroma in ApoE-deficient mice.</a> American Journal of Pathology. 157 (2), 659-669 (2000).</li><li>Kumar, A., Lindner, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Remodeling+with+neointima+formation+in+the+mouse+carotid+artery+after+cessation+of+blood+flow.">Remodeling with neointima formation in the mouse carotid artery after cessation of blood flow.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 17 (10), 2238-2244 (1997).</li><li>Lindner, V., Fingerie, J., Reidy, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+of+arterial+injury.">Mouse model of arterial injury.</a> Circulation Research. 73 (5), 792-796 (1993).</li><li>Moroi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+of+genetic+deficiency+of+endothelial+nitric+oxide,+gender,+and+pregnancy+in+vascular+response+to+injury+in+mice.">Interaction of genetic deficiency of endothelial nitric oxide, gender, and pregnancy in vascular response to injury in mice.</a> Journal of Clinical Investigation. 101 (6), 1225-1232 (1998).</li></ol>

Il protocollo attuale è progettato per fornire una piattaforma sperimentale per testare vari interventi molecolari o genetici per le VSMC per controllare il fenotipo dal proliferare allo stato contrattile e successivamente attenuare la progressione dell'iperplasia intima venosa in vivo. Utilizzando questo modello, abbiamo preparato con successo l'iperplasia intima a 2 settimane dopo l'intervento chirurgico (Figura 1A) e indicato il potenziale terapeutico del microRNA-145 per controllare il ...

Il numero di pazienti affetti da malattie ischemiche a causa dell'aterosclerosi è in aumento in tutto il mondo1. Nonostante gli attuali progressi nelle terapie mediche e chirurgiche per le malattie cardiovascolari, le malattie cardiache ischemiche, come l'infarto miocardico, rimangono una delle principali cause di morbilità e mortalità2. Inoltre, le malattie arteriose periferiche caratterizzate da un ridotto flusso sanguigno agli arti provocano un'ischemia critica degli arti, in cui circa il 40% dei pazienti perde le gambe entro 6 mesi dalla diagnosi e il tasso di mortalità è fino al 20%3.
Gli interventi chirurgici di rivascolarizzazione, come l'innesto di bypass coronarico (CABG) e la chirurgia di bypass per le arterie periferiche, sono le principali opzioni terapeutiche per le malattie ischemiche. Lo scopo di questi interventi chirurgici è quello di fornire un nuovo percorso sanguigno per fornire sufficiente flusso sanguigno verso il sito distale delle lesioni stenotiche o occluse delle arterie aterosclerotiche. Anche se negli innesti arteriosi situ, come le arterie toraciche interne per CABG, sono preferiti come gli innesti di bypass a causa della patenza più lunga prevista, gli innesti di vene, come le vene sapheno autologhe, sono comunemente utilizzati a causa della maggiore accessibilità e disponibilità4. Il punto debole degli innesti venosi è il tasso di patenza povero rispetto a quello degli innesti delle arterie5 a causa dell'iperplasia intimale accelerata quando sottoposta a pressione arteriosa, che porta alla malattia dell'innesto delle vene6.
La malattia dell'innesto di vena si sviluppa attraverso i seguenti tre passaggi: 1) trombosi; 2) iperplasia intima; e 3) aterosclerosi7. Al fine di affrontare la malattia dell'innesto della vena, sono state condotte molte ricerche di base8. Finora, nessuna strategia farmacologica diversa dalle terapie antiplatletine e lipidi-abbassamento sono raccomandate per la prevenzione secondaria dopo interventi chirurgici di vascolarizzazione coronarica o periferica nelle recenti linee guida9,10,11,12. Pertanto, per superare la malattia dell'innesto venoso, in particolare l'iperplasia intima, è necessaria la creazione di una piattaforma sperimentale rilevante per ulteriori studi.
L'iperplasia intima è un fenomeno adattivo che si verifica in risposta al cambiamento nell'ambiente circostante, dove le cellule muscolari limpiche (VSMC) proliferano, accumulano e generano matrice extracellulare nell'intima. Di conseguenza, presenta una base per l'innesto atheroma7. Nell'intimaica iperplastica, le VSMC sorregono la proliferazione, e la produzione piuttosto che la contrazione, definita "cambiamento fenotipico"8. Si tratta di un obiettivo chiave di ricerca per controllare il fenotipo dei VSMC degli innesti vena per prevenire la malattia di innesto vena, e numerosi studi di base sono stati condotti su questo argomento8. Tuttavia, uno studio clinico controllato randomizzato che mirava a ottenere il controllo farmacologico del fenotipo VSMC ha mostrato risultati limitati13. Inoltre, non ci sono terapie standardizzate per prevenire l'iperplasia intima. Sono necessarie ulteriori ricerche di base, compresi gli studi sui modelli animali.
Per promuovere la ricerca in questo campo, è fondamentale stabilire un modello animale che riassume gli innesti vena sotto la pressione arteriosa, consentendo un'osservazione postoperatoria a lungo termine. Carrel et al. ha stabilito un modello canino di impianto della vena giugulare esterna nell'arteria carotide14. Inseguito, una varietà di innesti vena sono stati impiegati per studiare gli effetti fisiologici e patologici delle alterazioni della pressione arteriosa, tra cui la vena cava inferiore innestata nell'aorta toracica o addominale, o la vena sapiente innestata nell'arte sia artemorale15,16,17. Questi modelli sono stati costruiti in animali più grandi, come maiali o cani, che sono adatti per imitare una malattia di innesto venoso in un caso clinico. Tuttavia, la creazione di un modello animale che può essere preparato senza tecniche chirurgiche speciali e a un costo inferiore sarebbe l'ideale per i ricercatori che cercano di sviluppare una nuova strategia terapeutica per attenuare l'iperplasia intima attraverso il controllo del fenotipo VSMC in vivo. Inizialmente, l'interposizione della vena giugulare nell'arteria carotide in un coniglio è stata introdotta nel campo della neurochirurgia18,19. Successivamente, è stato applicato alla ricerca sull'iperplasia intima20,21. Il modello iniziale è costituito da un'interposizione venosa da solo, risparmiando così tempo. Inoltre, uno studio successivo ha dimostrato che la preparazione di un innesto veno sopitto ha interessato anche l'iperplasia intima22. Ha valutato l'effetto della lesione del catetere a palloncino sull'iperplasia intima in un coniglio venoso modello di interposizione23,24. Anche se la lesione del catetere a palloncino oltre all'interposizione della vena era più rilevante per un ambiente clinico, era anche desiderato un modello più riproducibile. Così, Jiang e altri hanno esaminato l'impatto degli ambienti di flusso differenziale sull'iperplasia intima e hanno stabilito una procedura di legatura dirami distale come modello riproducibile25. Tuttavia, hanno impiegato una tecnica di polsino al momento dell'interposizione dell'innesto venoso che sembra diverso dagli anastomosi cuciti a mano nell'ambiente clinico. Nel presente protocollo, riportiamo una procedura riproducibile, clinicamente rilevante e ampiamente disponibile per la preparazione di un modello di interposizione venosa del coniglio per valutare l'iperplasia intima sotto pressione arteriosa.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>10% Povidone-iodine solution</td>
			<td>Nakakita</td>
			<td>872612</td>
			<td>Surgical expendables</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-0 VICRYL Plus</td>
			<td>Johnson and Johnson</td>
			<td>VCP316H</td>
			<td>Surgical expendables</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 Silk suture</td>
			<td>Alfresa pharma</td>
			<td>GA04SB</td>
			<td>Surgical expendables</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-0 polypropylene suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>8741H</td>
			<td>Surgical expendables</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cefazorin sodium</td>
			<td>Nichi-Iko Pharmaceutical</td>
			<td>6132401D3196</td>
			<td>Antibiotics</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fogarty Catheter (2Fr)</td>
			<td>Edwards Lifesciences LLC</td>
			<td>E-060-2F</td>
			<td>Surgical expendables</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin</td>
			<td>Nipro</td>
			<td>873334</td>
			<td>Anticoagulant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intravenous catheter (20G)</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SR-OT2051C</td>
			<td>Surgical expendables</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Fujifilm</td>
			<td>095-06573</td>
			<td>Anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lidocaine hydrochloride</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>193917</td>
			<td>Anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbital sodium</td>
			<td>Tokyo Chemical Industry</td>
			<td>P0776</td>
			<td>Anesthesia</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a rabbit venous interposition model mimicking revascularization surgery using vein grafts to assess intimal hyperplasia under arterial blood pressure

Anche se gli innesti venosi sono stati comunemente utilizzati come innesti autologi in interventi chirurgici di rivascolarizzazione per malattie ischemiche, la patenza a lungo termine rimane scarsa a causa dell'accelerazione dell'iperplasia intimale a causa dell'esposizione alla pressione arteriosa. Il presente protocollo è progettato per la creazione di iperplasia intima venosa sperimentale interponendo le vene giugulare del coniglio alle arterie carotidee ipsilaterali. Il protocollo non richiede procedure chirurgiche in profondità nel tronco del corpo e l'estensione dell'incisione è limitata, il che è meno invasivo per gli animali, consentendo l'osservazione a lungo termine dopo l'impianto. Questa semplice procedura consente ai ricercatori di studiare strategie per attenuare la progressione dell'iperplasia intima degli innesti vena impiantati. Utilizzando questo protocollo, abbiamo segnalato gli effetti di trasduzione del microRNA-145 (miR-145), che è noto per controllare il fenotipo delle cellule muscolari lisce vascolari (VSMC) dalla proliferazione allo stato contrattile, in innesti di vena raccolti. Abbiamo confermato l'attenuazione dell'iperplasia intima degli innesti venosi trasducendo miR-145 prima dell'intervento di impianto attraverso il cambiamento del fenotipo delle VSMC. Qui segnaliamo una piattaforma sperimentale meno invasiva per studiare le strategie che possono essere utilizzate per attenuare l'iperplasia intima di innesti venosi negli interventi chirurgici di vascolarizzazione.

Figura 1A mostra un'immagine rappresentativa di iperplasia intima di successo a 2 settimane dopo la chirurgia di interposizione venosa (pannello superiore). Il pannello inferiore mostra gli effetti terapeutici delle nanoparticelle poliscientifiche caricate a microRNA-145 (acido lattico-co-colico) che attenuavano l'iperplasia intima (pannello inferiore). La figura 1B mostra il confronto tra l'iperplasia intima tra il gruppo di controllo utilizzando il controllo s...

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A Rabbit Venous Interposition Model Mimicking Revascularization Surgery using Vein Grafts to Assess Intimal Hyperplasia under Arterial Blood Pressure

Il presente protocollo mira a creare sperimentalmente iperplasia intima venosa sottoponendo le vene alla pressione arteriosa per lo sviluppo di strategie per attenuare l'iperplasia intimave venosa a seguito di chirurgia di rivascolazione utilizzando innesti vena.

Un modello di interposizione venosa di coniglio che imita la chirurgia di rivascolarizzazione usando grafts di venina per valutare l'iperplasia intima sotto la pressione sanguigna arteriosa

Although vein grafts have been commonly used as autologous grafts in revascularization surgeries for ischemic diseases, the long-term patency remains poor ...

Il nostro protocollo fornisce un modello semplice, economico, riproducibile e clinico rilevante per i ricercatori nel campo dell'iperplasia intimale venosa. Il nostro protocollo è economicamente, clinicamente e tecnicamente equilibrato. Pertanto, è altamente raccomandato per i ricercatori che desiderano applicare i loro risultati in vitro a un ambiente in vivo.Crediamo che il nostro protocollo possa essere applicato a un modello animale più ampio per lo sviluppo di nuove strategie di trattamento nelle malattie ischemiche del cuore e degli arti inferiori. Il nostro protocollo è principalmente rilevante per il campo della chirurgia cardiovascolare. Tuttavia, può anche essere usato per affrontare i cambiamenti degenerativi nelle fistole arteriovenose in pazienti con malattia renale allo stadio finale.Dopo somministrazione analgesica di antibiotici anestetici locali e profilattici, disinfettare il sito chirurgico con il 10%povidone-iodio. E fare un'incisione da 50 a 60 millimetri con un bisturi chirurgico nella regione cervicale del coniglio bianco giapponese maschio anestetizzato. Sezionare senza mezzi termini i tessuti sottocutanei e la fascia per esporre un segmento da 20 a 30 millimetri della vena giugulare.E usa 4-0 suture di seta per legare tutti i rami della vena esposta. Posizionare una sutura di seta 2-0 intorno alle vene giugulare interne ed esterne e fare un'incisione di un millimetro nella parete venosa del lato distale della vena. Inserire un catetere a palloncino a 2 francesi dal taglio verso il lato prossimale della vena.E legare la sutura di seta 2-0 nei siti distali delle vene giugulare. Gonfiare il pallone con 200 microlitri d'aria. E usa il palloncino per denudare l'intima della vena tre volte per l'esfoliazione endoteliale.Dopo il terzo passaggio, legare l'estremità prossimale della vena e tagliare la vena nel sito distale. Quindi inserire un catetere endovenoso calibro 20 nella vena raccolta dalla direzione prossimale alla direzione prossimale e tagliare la vena nel sito prossimale. Per interporre l'arteria carotide con la vena giugulare di raccolta, esporre un segmento da 20 a 30 millimetri dell'arteria carotide ipsilaterale.E separare attentamente l'arteria dalla vena e dal nervo vicini. Legare tutti i rami della vena esposta con sutura di seta 4-0. E somministrazione endovenosa di 200 unità internazionali per chilogrammo di sodio eparina.Bloccare le estremità prossimali e distali dell'arteria con morsetti chirurgici in gomma. E tagliare l'arteria tra i morsetti. Iniettare la soluzione salina normale nell'arteria carotide incisa prossimamente e distally per distesa l'arteria.E posizionare la vena di raccolta vicino all'arteria per anastomose il vaso in modo invertito end-to-end. Per anastonosio l'estremità prossimale della vena fino all'estremità distale dell'arteria, posizionare due punti di ancoraggio di 8-0 polipropilene nel sito e nel sito opposto. Aggiungere punti sul lato superiore della linea di anastomosi tra i punti di ancoraggio.Capovolgere l'arteria e l'innesto venale a testa in giù. E aggiungere punti sulla parte rimanente della linea di anastomosi. Quindi, rimuovere il catetere endovenoso dalla vena e bloccare l'innesto venoso prossimale.Declamp l'arteria carotide distally. E osserva se l'innesto venale si espande gradualmente. Utilizzo dell'8-0 suture interrotte in polipropilene, anastonosio l'estremità distale della vena fino all'estremità prossimale dell'arteria.E sganciare l'arteria per verificare la presenza di sanguinamento dai siti di anastomosi. Infine, ligate l'arteria carotide interna con una sutura di seta 4-0 per simulare una cattiva condizione di deflusso e facilitare l'iperplasia intimale. Quindi pulire la ferita con soluzione salina.Chiudere l'incisione con 3-0 poliglatina 910 a strati. E consentire al coniglio di riprendersi completamente con il monitoraggio prima di riportare l'animale nella sua gabbia domestica. In questa immagine rappresentativa, è possibile osservare un'iperplasia intimale di successo a 2 settimane dopo un intervento di interposizione venosa.Qui, si possono osservare gli effetti terapeutici delle nanoparticelle poli(acido lattico-co-glicolico) cariche di microRNA-145 sulla morfologia intimale dell'iperplasia. Infatti, il trattamento con microRNA carichi di nanoparticelle poli(acido lattico-co-glicolico)si traduce in una significativa attenuazione dell'iperplasia intimale. Inoltre, l'immunostaining per Ki-67, un marcatore proliferatore cellulare, rivela meno cellule Ki-67-positive all'interno del gruppo trattato con microRNA-145 che indica un cambiamento fenotipo nelle cellule muscolari lisce vascolari dallo stato proliferativo immaturo allo stato contrattile maturo.L'obiettivo principale del nostro protocollo è raggiungere la persistenza dell'innesto impiantato. È anche importante confermare che l'innesto si espande dopo aver declamato l'arteria carotide.

Research

JoVE Journal

Medicine

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