Name: live cell imaging of microtubule cytoskeleton and micromechanical manipulation of the arabidopsis shoot apical meristem
Uploaded: 2020-05-23T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live Cell Imaging of Microtubule Cytoskeleton and Micromechanical Manipulation of the Arabidopsis Shoot Apical Meristem at JoVE.com

1. نمو النبات
<ol><li>بذور زرع Arabidopsis التعبير عن مجال microtubule ملزمة تنصهر مع البروتين الفلورسنت الأخضر (MBD-GFP)10 على التربة والحفاظ في يوم طويل (16 ساعة يوم / 8 ساعة ليلة)، 20 درجة مئوية / 6 درجة مئوية شروط لمدة أسبوع واحد للإنبات.</li>
	<li>بعد الإنبات، نقل الشتلات إلى الأواني الجديدة مع م?...

<ol>
	<li>Cosgrove, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Re-constructing+our+models+of+cellulose+and+primary+cell+wall+assembly.">Re-constructing our models of cellulose and primary cell wall assembly.</a> Current Opinion in Plant Biology. 22, 122-131 (2014).</li><li>McFarlane, H. E., Doring, A., Persson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cell+biology+of+cellulose+synthesis.">The cell biology of cellulose synthesis.</a> Annual Reviews in Plant Biology. 65, 69-94 (2014).</li><li>Burgert, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploring+the+micromechanical+design+of+plant+cell+walls.">Exploring the micromechanical design of plant cell walls.</a> American Journal of Botany. 93 (10), 1391-1401 (2006).</li><li>Paredez, A. R., Somerville, C. R., Ehrhardt, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+cellulose+synthase+demonstrates+functional+association+with+microtubules.">Visualization of cellulose synthase demonstrates functional association with microtubules.</a> Science. 312 (5779), 1491-1495 (2006).</li><li>Barbier de Reuille, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MorphoGraphX:+A+platform+for+quantifying+morphogenesis+in+4D.">MorphoGraphX: A platform for quantifying morphogenesis in 4D.</a> Elife. 4, 05864 (2015).</li><li>Kierzkowski, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elastic+domains+regulate+growth+and+organogenesis+in+the+plant+shoot+apical+meristem.">Elastic domains regulate growth and organogenesis in the plant shoot apical meristem.</a> Science. 335 (6072), 1096-1099 (2012).</li><li>Heisler, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alignment+between+PIN1+polarity+and+microtubule+orientation+in+the+shoot+apical+meristem+reveals+a+tight+coupling+between+morphogenesis+and+auxin+transport.">Alignment between PIN1 polarity and microtubule orientation in the shoot apical meristem reveals a tight coupling between morphogenesis and auxin transport.</a> PLoS Biology. 8 (10), e1000516 (2010).</li><li>Louveaux, M., Rochette, S., Beauzamy, L., Boudaoud, A., Hamant, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+mechanical+compression+on+cortical+microtubules+in+Arabidopsis:+a+quantitative+pipeline.">The impact of mechanical compression on cortical microtubules in Arabidopsis: a quantitative pipeline.</a> Plant Journal. 88 (2), 328-342 (2016).</li><li>Nakayama, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+regulation+of+auxin-mediated+growth.">Mechanical regulation of auxin-mediated growth.</a> Current Biology. 22 (16), 1468-1476 (2012).</li><li>Marc, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+GFP-MAP4+reporter+gene+for+visualizing+cortical+microtubule+rearrangements+in+living+epidermal+cells.">A GFP-MAP4 reporter gene for visualizing cortical microtubule rearrangements in living epidermal cells.</a> Plant Cell. 10 (11), 1927-1940 (1998).</li><li>Strauss, S., Sapala, A., Kierzkowski, D., Smith, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+Plant+Growth+and+Cell+Proliferation+with+MorphoGraphX.">Quantifying Plant Growth and Cell Proliferation with MorphoGraphX.</a> Methods in Molecular Biology. 1992, 269-290 (2019).</li><li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiji:+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis.">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li><li>Erguvan, O., Louveaux, M., Hamant, O., Verger, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ImageJ+SurfCut:+a+user-friendly+pipeline+for+high-throughput+extraction+of+cell+contours+from+3D+image+stacks.">ImageJ SurfCut: a user-friendly pipeline for high-throughput extraction of cell contours from 3D image stacks.</a> BMC Biology. 17 (1), 38 (2019).</li><li>Boudaoud, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FibrilTool,+an+ImageJ+plug-in+to+quantify+fibrillar+structures+in+raw+microscopy+images.">FibrilTool, an ImageJ plug-in to quantify fibrillar structures in raw microscopy images.</a> Nature Protocols. 9 (2), 457-463 (2014).</li><li>Sampathkumar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+wall+cellulose+synthase+regulates+shoot+apical+meristem+mechanics+and+growth.">Primary wall cellulose synthase regulates shoot apical meristem mechanics and growth.</a> Development. 146 (10), (2019).</li><li>Hervieux, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Mechanical+Feedback+Restricts+Sepal+Growth+and+Shape+in+Arabidopsis.">A Mechanical Feedback Restricts Sepal Growth and Shape in Arabidopsis.</a> Current Biology. 6 (8), P1019-P1028 (2016).</li><li>Sampathkumar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subcellular+and+supracellular+mechanical+stress+prescribes+cytoskeleton+behavior+in+Arabidopsis+cotyledon+pavement+cells.">Subcellular and supracellular mechanical stress prescribes cytoskeleton behavior in Arabidopsis cotyledon pavement cells.</a> Elife. 3, e01967 (2014).</li><li>Sampathkumar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+wall+cellulose+synthase+regulates+shoot+apical+meristem+mechanics+and+growth.">Primary wall cellulose synthase regulates shoot apical meristem mechanics and growth.</a> Development. 146 (10), dev179036 (2019).</li><li>Uyttewaal, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+stress+acts+via+katanin+to+amplify+differences+in+growth+rate+between+adjacent+cells+in+Arabidopsis.">Mechanical stress acts via katanin to amplify differences in growth rate between adjacent cells in Arabidopsis.</a> Cell. 149 (2), 439-451 (2012).</li><li>Hamant, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+patterning+by+mechanical+signals+in+Arabidopsis.">Developmental patterning by mechanical signals in Arabidopsis.</a> Science. 322 (5908), 1650-1655 (2008).</li></ol>

إن تقييم أحداث نقل الإشارات الميكانيكية أمر بالغ الأهمية لتحديد المنظمين الجزيئيين المشاركين في إدراك mechano ومسارات النقل. ويوفر البروتوكول الموصوف هنا نظرة كمية لمثل هذه الأحداث باستخدام استجابة ميكروتوبول القشرية كمقرة لمثل هذه العملية في Arabidopsis SAMs. يتم استخدام الإجراء الموضح هنا ...

الخلايا النباتية محاطة بمصفوفة خارج الخلية من السكريات والسكريات glycoproteins التي تشبه ميكانيكيا مادة الألياف المركبة المعززة قادرة على تغيير خصائصها الميكانيكية بشكل حيوي1. النمو في الخلايا النباتية هو مدفوع من امتصاص المياه في الخلية، مما يؤدي إلى تراكم متزامن للقوى الشد على جدار الخلية. واستجابة لهذه القوى، فإن التعديلات على الحالة المادية للجدار الخلوي تسمح بتوسيع الخلايا. الخلايا ذات الجدران الأولية قادرة على الخضوع للنمو السريع مقارنة بجدار الخلية الثانوية التي تحتوي على خلايا ويرجع ذلك أساسا إلى الاختلافات في التركيب الكيميائي للبوليسكاريد داخل. تتكون خلايا الجدار الأولية من السليلوز والهيميوللوز والبكتين بالإضافة إلى بروتين الجليكوبروتين، وتفتقر إلى اللجنين، وهو مكون موجود في جدار الخليةالثانوية 2. السليلوز، بوليمر الجلوكوز المرتبطة عبر β-1،4 السندات، هو العنصر الرئيسي من جدران الخلية. يتم تنظيمها في هياكل الفيبريلار التي هي قادرة على تحمل قوى الشد العالية التي شهدتها أثناء نمو الخلايا3. بالإضافة إلى تحمل قوى الشد، يؤدي التعزيز الميكانيكي على طول اتجاه تفضيلي إلى توسع يحركه تورغور على طول محور عمودي على التوجه الصافي للسيليلوز microfibril. ويتأثر تنظيم السليلوز microfibrils من قبل القشرية المجهرية cytoskeleton، لأنها توجه الحركة الاتجاهية للمجمعات السليلوز توليف الموجود في غشاء البلازما4. لذلك ، فإن مراقبة منظمة ميكروتوبول القشرية باستخدام بروتين أو طوبولين مرتبط بالميكروبوليه ، يعمل بمثابة وكيل لمراقبة الأنماط المفرطة للسليلوز في الخلايا النباتية.
نقش الهيكل الخلوي القشري المجهري هو تحت سيطرة الخلايا والأنسجة القوى الميكانيكية المشتقة. لا تملك منظمة microtubule القشرية أي منظمة تفضيلية مع مرور الوقت في الخلايا الموجودة في قمة سام، في حين أن الخلايا في المحيط والحدود بين سام والجهاز الناشئ لديها مجموعة مستقرة، منظمة للغاية فوق الخلوية من microtubules القشرية5. وقد وضعت عدة نهج لانزعاج جسديا الوضع الميكانيكي للخلايا. يمكن أن يؤدي تغيير الحالة التناضحية ، وكذلك العلاج بالمركبات الدوائية والإزيمية التي تؤثر على صلابة جدار الخلية إلى تغييرات لاحقة في قوى الشد التي تعاني منها الخلية6،7. استخدام البدع التي تسمح للزيادة التدريجية في القوى الضغط التي تعاني منها الأنسجة هو بديل آخر8. كما ثبت تطبيق قوات الطرد المركزي للتأثير على القوى الميكانيكية دون أي اتصال مادي مع الخلايا9. ومع ذلك، فإن الوسائل الأكثر استخداما لتغيير قوى الاتجاه في مجموعة من الخلايا الاستفادة من حقيقة أن جميع خلايا البشرة هي تحت التوتر والاستئصال المادي للخلايا سوف القضاء على ضغط تورغور محليا، فضلا عن تعطيل التصاق من خلية إلى خلية، وبالتالي تعديل قوى الشد التي تعاني منها الخلايا المجاورة. ويتم ذلك إما عن طريق استهداف ليزر فوق البنفسجية النبضية عالية الطاقة أو عن طريق إبرة غرامة.
هنا نتوسع في عملية التصوير وتقييم سلوك الميككتوبول القشري للانزعاج الميكانيكي في SAM.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>FibrilTool</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Boudaoud, A. et al., Nat Protoc. 2014</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FIJI</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Schindelin, J. et al., Nat Methods. 2012</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glycine</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.04201.1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica SP8 confocal microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>DM6000 CS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MAP4-GFP</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Marc, J. et al., Plant Cell 1998</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>micropore tape</td>
			<td>Leukopor</td>
			<td>02482-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MorphographX</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Strauss, S. et al., Methods Mol Biol. 2019</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>myo-inositol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I5125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N6-benzyladenine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>B3408</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>nicotinic acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>N4126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>plastic hinged box</td>
			<td>Electron microscopy sciences</td>
			<td>64312</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PPM (Plant Preservative Mixture)</td>
			<td>Plant Cell Technology</td>
			<td>PPM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propidium iodide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P4864</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pyridoxine hydrochloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P9755</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SURFCUT</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Erguvan, O. et al., BMC Biol. 2019</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>thiamine hydrochloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T4625</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live cell imaging of microtubule cytoskeleton and micromechanical manipulation of the arabidopsis shoot apical meristem

وقد فهم الخلايا والأنسجة على مستوى التنظيم للنمو وmorphogenesis في طليعة البحوث البيولوجية لعقود عديدة. سمح لنا التقدم في التقنيات الجزيئية والتصويرية بالحصول على رؤى حول كيفية تأثير الإشارات الكيميائية الحيوية على الأحداث المورفوجينية. ومع ذلك، فمن الواضح بشكل متزايد أنه بصرف النظر عن الإشارات الكيميائية الحيوية، الإشارات الميكانيكية تؤثر أيضا على عدة جوانب من نمو الخلايا والأنسجة. وعربيدوبسيس تبادل لاطلاق النار meristem (SAM) هو هيكل القبة على شكل مسؤول عن توليد جميع الأجهزة فوق الأرض. تنظيم الهيكل الخلوي القشري المجهري الذي يتوسط ترسب السليلوز في الخلايا النباتية هو متميز مكانياً. التصور والتقييم الكمي لأنماط ميكروتوبولس القشرية ضرورية لفهم الطبيعة البيوفيزيائية للخلايا في سام، كما السليلوز هو أشد عنصر من جدار الخلية النباتية. الشكل النمطي لتنظيم ميكروتوبول القشرية هو أيضا نتيجة للقوى المادية على نطاق الأنسجة الموجودة في SAM. إن اجتياز هذه القوى المادية وما يتبعها من رصد لتنظيم ميكروتوبول القشري يسمح بتحديد البروتينات المرشحة المشاركة في التوسط في إدراك mechano وtransduction. هنا نحن وصف بروتوكول يساعد في التحقيق في مثل هذه العمليات.

ويبين الشكل 1 صور الإسقاط النموذجية التي تم الحصول عليها من خطوط MBD-GFP مع خلايا في وسط القبة تحتوي على ميكروتومات القشرية غير منظمة، وخلايا في المحيط مع وجود توزيع محيطي(الشكل 1A,B)، في حين أن خلايا المجال الحدي تحتوي على ميكروتوبولا...

Watch this Scientific Journal Video about Live Cell Imaging of Microtubule Cytoskeleton and Micromechanical Manipulation of the Arabidopsis Shoot Apical Meristem at JoVE.com

Live Cell Imaging of Microtubule Cytoskeleton and Micromechanical Manipulation of the Arabidopsis Shoot Apical Meristem

هنا نحن وصف بروتوكول للتصوير الخلية الحية من القشرية المجهرية cytoskeleton في تبادل لاطلاق النار meristem apical ورصد استجابتها للتغيرات في القوات المادية.

حية الخلية التصوير من Microtubule Cytoskeleton والتلاعب micromechanical من عربيدوبسيس تبادل لاطلاق النار Apical Meristem

Understanding cell and tissue level regulation of growth and morphogenesis has been at the forefront of biological research for many decades. Advances in ...

هذا البروتوكول يساعدنا على فهم كيفية سلوك ميكروتوبول Cytoskeleton يحدث في النباتات. في الوقت نفسه، فإنه يساعدنا أيضا على فهم كيفية هذه المكونات الهيكلية التي تؤثر على شكل الخلية والجهاز، والاستجابة للتغيرات في القوى الميكانيكية. وعلى الرغم من أن هذه الطريقة تتطلب القليل من التطور، إلا أنها توفر قراءة كمية قوية، وهي اختلافات الاستجابة الميكانيكية بين الأنماط الوراثية والظروف المختلفة.تبدأ بزراعة بذور arabidopsis التي تعبر عن مجالات الربط microtubule تنصهر مع البروتين الفلورسنت الأخضر في التربة، في 20 و 6 درجات مئوية في ظل ظروف يوم طويل لمدة أسبوع واحد. بعد الإنبات، نقل الشتلات إلى أوعية جديدة مع مساحة نمو كافية للسماح بنمو نباتي قوي، ووضع النباتات في 20 و 16 درجة مئوية في ظل ظروف اليوم القصير. بعد ثلاثة إلى خمسة أسابيع، نقل النباتات مرة أخرى إلى ظروف اليوم الطويل في نفس درجة الحرارة حتى الترباس النباتات، مما يسمح للانفتاح أن تنمو ما يصل إلى 2-5 سم طويلة.لتشريح Meristem التقطية، وضع الانفلات، واستخدام ملقط حادة لقشر الزهور في قاعدة peduncles، حتى أنه من الصعب أن نرى peduncles بالعين المجردة لإزالة براعم الزهور القديمة. استخدام ملقط لإنشاء شق في الزراعة في طبق تشريح، وزرع قاعدة إينفلورسنس في أوور سميكة. ضع الطبق تحت مجهر تشريح.بدءا من أقدم برعم الزهور، ودفع مع ملقط لإزالة برعم زهرة من النبات. وعادة ما يتعرض التصوير meristem apical عندما تتم إزالة الزهور القديمة تصل إلى المرحلة السادسة إلى السابعة. واستخدام ملقط لدفع كل برعم زهرة إلى أسفل حتى تبادل لاطلاق النار meristem apical مرئية.بمجرد أن يتعرض تبادل لاطلاق النار meristem apical ، والسماح للعينة تشريح حديثا في منتصف النمو في الايثانول المعقم مستطيلة البلاستيك يتوقف مربع الثقافة مع تبادل لاطلاق النار meristem apical فقط يتعرض فوق السطح المتوسط. إضافة بضع قطرات من الماء المعقم غير المؤين إلى حواف مربع الثقافة وإغلاق الغطاء للحفاظ على الرطوبة داخل منطقة الجزاء. التفاف مربع مع الشريط micropore، ووضع مربع النمو في ظل ظروف طويلة أو مستمرة اليوم في 22 درجة مئوية لمدة 12 إلى 24 ساعة.عندما يكون النبات قد تعافى من إجراء التشريح ، قم بتغطية العينة بالماء المعقم والتحقق من فقاعات الهواء تحت المجهر التشريحي. نقل مربع الثقافة إلى مرحلة المجهر confocal تستقيم، واختيار عدسة غمس الماء 40 أو 60X. خفض الهدف في الماء والتحقق من فقاعات الهواء على العدسة الأمامية للكائن.لإزالة الفقاعات، قم بخفض المرحلة ومسح العدسة برفق باستخدام نسيج بصري. ثم استخدام ماصة باستور لإضافة كمية صغيرة من الماء إلى العدسة الأمامية للهدف قبل إعادة غمر العدسة في الماء. بعد ذلك، استخدم فلتر GFP ووحدة إنارة النسل في المجهر confocal لضبط وحدة التحكم XY لتحديد مكان العينة.ضبط موقف العينين، وضع التصوير meristem apical مباشرة تحت مصدر الضوء، والتركيز على طول المحور Z حتى يقع قمة. استخدام ليزر قادرة على GFP مثيرة لإلقاء الضوء على العينة، وضبط التكبير البصري للمجهر، بحيث تبادل لاطلاق النار كامل meristem والمرحلة واحدة primordia الأزهار هي في مجال الرؤية. ثم، ضبط قوة إخراج الليزر وإعدادات كسب للحصول على إشارة الأمثل إلى نسبة الضوضاء.بعد السماح للعينة لتسوية لمدة دقيقتين إلى خمس دقائق، والحصول على أكوام من 0.25 إلى 0.5 ميكرومترات Z شريحة الفواصل الزمنية، إضافة ما يقرب من 0.3 مايكرو متر بكسل القرار. في نهاية عملية الاستحواذ، قم بإزالة المياه على الفور ونقل مربع الثقافة مرة أخرى إلى غرفة النمو. لMimechanical تبادل لاطلاق النار Apical Meristem الانزعاج ، والحصول على مداخن صورة ما قبل الاجتثاث من منظمة microtubule القشرية كما أظهرت للتو ، وdeaf الماء من مربع الثقافة في طبق الثقافة.نقل تبادل لاطلاق النار apical meristem تحت مجهر تشريح ، واقترب ببطء من تبادل لاطلاق النار apical meristem مع حقنة نظيفة 0.4 من قبل 20 ملليمتر إبرة الحقن. الاتصال لفترة وجيزة على محيط قبة من meristem تبادل لاطلاق النار apical مع طرف إبرة للتأكد من أن تم الانتهاء من الاستئصال. وإعادة ملء طبق الثقافة مع المياه الأيونية العقيمة.ثم إضافة 10 ميكروغرام لكل ملليلتر من يوديد بروبدييوم إلى الطبق والحصول على الفور أكوام الصورة كما هو موضح كل ساعتين لمدة ست ساعات، والعودة طبق الثقافة إلى الحضانة بين كل نقطة زمنية. لتحليل البيانات، توليد الإسقاطات السطحية من مداخن الصورة باستخدام برنامج تحليل الصور المناسبة، وتنفيذ استخراج النظائر المجهرية القشرية باستخدام ماكرو أداة فيبريل في فيجي. هنا، يمكن ملاحظة صور الإسقاط النموذجية التي تم الحصول عليها من خطوط نطاق الربط المجهري GFP مع الخلايا في وسط القبة التي تحتوي على جيوتومات القشرية غير المنظمة، والخلايا في المحيط، وجود توزيع محيطي وخلايا نطاق حدودية تحتوي على ميكروتوبولات القشرية المنحازة بالتوازي مع محور الخلية الطويل.تصوير الفاصل الزمني، يظهر محاذاة ميكروتوبول القشرية المتغيرة من مجموعة شديدة الاضطراب إلى مجموعة أكثر تنظيما في غضون ست ساعات من الاستئصال. يمكن فرضها على التوزّر على صور ميكروتوبي القشرية، ويمكن تمثيل المعلومات المستخرجة من خلال رسم النظائر الوسطية مع مرور الوقت. عند ضبط قوة إخراج الليزر وإعدادات الحصول عليها ، يجب أن نضمن أن مراقبة واضحة للخيوط ومحاولة تجنب التعرض المفرط ، حيث أن الإشارات المشبعة يمكن أن تحيز اتجاه الشد في التحليل اللاحق.يمكن أيضًا إجراء المجهر المجهري للقوة الذرية لتقييم كيفية تأثير التغيرات في القوى الميكانيكية فعليًا على الحالة المادية لسور الخلية.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Live Cell Imaging of Microtubule Cytoskeleton and Micromechanical Manipulation of the Arabidopsis Shoot Apical Meristem

Live Imaging of Innate Immune and Preneoplastic Cell Interactions Using an Inducible Gal4/UAS Expression System in Larval Zebrafish Skin

تصوير لايف الفطرية المناعي والتفاعلات سابق للورم الخلية باستخدام نظام التعبير / UAS محرض GAL4 في اليرقات الزرد الجلد

Here we describe a method to conditionally induce epithelial cell transformation by the use of the 4-Hydroxytamoxifen (4-OHT) inducible KalTA4-ERT2/UAS ...

Live-imaging of the Drosophila Pupal Eye

Live-imaging of the Drosophila Pupal Eye

يعيش التصوير لل<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; العذراء العين

Inherent processes of Drosophila pupal development can shift and distort the eye epithelium in ways that make individual cell behavior difficult to track ...

Live Confocal Imaging of Developing Arabidopsis Flowers

يعيش متحد البؤر التصوير من تطوير نبات الأرابيدوبسيس الزهور

The study of plant growth and development has long relied on experimental techniques using dead, fixed tissues and lacking proper cellular resolution. ...

Bioengineering of Humanized Bone Marrow Microenvironments in Mouse and Their Visualization by Live Imaging

الهندسة الحيوية من أنسنة نخاع العظام ميكرونفيرونمنتس في الماوس والتصور من خلال التصوير لايف

Human hematopoietic stem cells (HSCs) reside in the bone marrow (BM) niche, an intricate, multifactorial network of components producing cytokines, growth ...

In Vitro Ovule Cultivation for Live-cell Imaging of Zygote Polarization and Embryo Patterning in Arabidopsis thaliana

In Vitro Ovule Cultivation for Live-cell Imaging of Zygote Polarization and Embryo Patterning in Arabidopsis thaliana

في المختبر زراعة ovule للتصوير خلايا حية من الاستقطاب الزيجوت والزخرفة الجنين في التمويل نبات

In most flowering plants, the zygote and embryo are hidden deep in the mother tissue, and thus it has long been a mystery of how they develop dynamically; ...

Live Imaging of Mouse Secondary Palate Fusion

تصوير لايف من ماوس الثانوي باليت فيوجن

The fusion of the secondary palatal shelves to form the intact secondary palate is a key process in mammalian development and its disruption can lead to ...

Live Cell Imaging of Chromosome Segregation During Mitosis

تصوير الخلايا الحية لفصل الكروموسومات أثناء الانقسام

Chromosomes must be reliably and uniformly segregated into daughter cells during mitotic cell division. Fidelity of chromosomal segregation is controlled ...

Confocal Live Imaging of Shoot Apical Meristems from Different Plant Species

[كنفوكل] تصوير مباشر من تبادل لإطلاق النار قمية الخلايا الإنشائية من الأنواع النباتية المختلفة

The shoot apical meristem (SAM) functions as a conserved stem cell reservoir and it generates almost all aboveground tissues during the postembryonic ...

Dissection and Live-Imaging of the Late Embryonic Drosophila Gonad

Dissection and Live-Imaging of the Late Embryonic Drosophila Gonad

تشريح وتصوير حي للغدد التناسلية ذبابة الفاكهة الجنينية المتأخرة

The Drosophila melanogaster male embryonic gonad is an advantageous model to study various aspects of developmental biology including, but not limited to, ...

Applications of Immobilization of Drosophila Tissues with Fibrin Clots for Live Imaging

Applications of Immobilization of Drosophila Tissues with Fibrin Clots for Live Imaging

تطبيقات شل حركة أنسجة الدروزوفيلا مع جلطات فيبرين للتصوير الحي

Drosophila is an important model system to study a vast range of biological questions. Various organs and tissues from different developmental stages of ...