Name: live cell imaging of microtubule cytoskeleton and micromechanical manipulation of the arabidopsis shoot apical meristem
Uploaded: 2020-05-23T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live Cell Imaging of Microtubule Cytoskeleton and Micromechanical Manipulation of the Arabidopsis Shoot Apical Meristem at JoVE.com

1. Plantevækst
<ol><li>So Arabidopsis frø udtrykker mikrotubule bindende domæne fusioneret med grønne fluorescerende protein (MBD-GFP)10 på jorden og holde i lang dag (16 h dag / 8 h nat), 20 °C/6 °C betingelser for 1 uge for spiring.</li>
	<li>Efter spiring overføres planter til nye potter med tilstrækkelig vækstplads til at muliggøre robust vegetativ vækst. Hold planter på kort dag (8 timer dag /16 h nat), 20 °C/16 °C betingelser for 3-5 uger.</li>
	<li>Overfør planter...

<ol>
	<li>Cosgrove, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Re-constructing+our+models+of+cellulose+and+primary+cell+wall+assembly.">Re-constructing our models of cellulose and primary cell wall assembly.</a> Current Opinion in Plant Biology. 22, 122-131 (2014).</li><li>McFarlane, H. E., Doring, A., Persson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cell+biology+of+cellulose+synthesis.">The cell biology of cellulose synthesis.</a> Annual Reviews in Plant Biology. 65, 69-94 (2014).</li><li>Burgert, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploring+the+micromechanical+design+of+plant+cell+walls.">Exploring the micromechanical design of plant cell walls.</a> American Journal of Botany. 93 (10), 1391-1401 (2006).</li><li>Paredez, A. R., Somerville, C. R., Ehrhardt, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+cellulose+synthase+demonstrates+functional+association+with+microtubules.">Visualization of cellulose synthase demonstrates functional association with microtubules.</a> Science. 312 (5779), 1491-1495 (2006).</li><li>Barbier de Reuille, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MorphoGraphX:+A+platform+for+quantifying+morphogenesis+in+4D.">MorphoGraphX: A platform for quantifying morphogenesis in 4D.</a> Elife. 4, 05864 (2015).</li><li>Kierzkowski, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elastic+domains+regulate+growth+and+organogenesis+in+the+plant+shoot+apical+meristem.">Elastic domains regulate growth and organogenesis in the plant shoot apical meristem.</a> Science. 335 (6072), 1096-1099 (2012).</li><li>Heisler, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alignment+between+PIN1+polarity+and+microtubule+orientation+in+the+shoot+apical+meristem+reveals+a+tight+coupling+between+morphogenesis+and+auxin+transport.">Alignment between PIN1 polarity and microtubule orientation in the shoot apical meristem reveals a tight coupling between morphogenesis and auxin transport.</a> PLoS Biology. 8 (10), e1000516 (2010).</li><li>Louveaux, M., Rochette, S., Beauzamy, L., Boudaoud, A., Hamant, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+mechanical+compression+on+cortical+microtubules+in+Arabidopsis:+a+quantitative+pipeline.">The impact of mechanical compression on cortical microtubules in Arabidopsis: a quantitative pipeline.</a> Plant Journal. 88 (2), 328-342 (2016).</li><li>Nakayama, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+regulation+of+auxin-mediated+growth.">Mechanical regulation of auxin-mediated growth.</a> Current Biology. 22 (16), 1468-1476 (2012).</li><li>Marc, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+GFP-MAP4+reporter+gene+for+visualizing+cortical+microtubule+rearrangements+in+living+epidermal+cells.">A GFP-MAP4 reporter gene for visualizing cortical microtubule rearrangements in living epidermal cells.</a> Plant Cell. 10 (11), 1927-1940 (1998).</li><li>Strauss, S., Sapala, A., Kierzkowski, D., Smith, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+Plant+Growth+and+Cell+Proliferation+with+MorphoGraphX.">Quantifying Plant Growth and Cell Proliferation with MorphoGraphX.</a> Methods in Molecular Biology. 1992, 269-290 (2019).</li><li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiji:+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis.">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li><li>Erguvan, O., Louveaux, M., Hamant, O., Verger, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ImageJ+SurfCut:+a+user-friendly+pipeline+for+high-throughput+extraction+of+cell+contours+from+3D+image+stacks.">ImageJ SurfCut: a user-friendly pipeline for high-throughput extraction of cell contours from 3D image stacks.</a> BMC Biology. 17 (1), 38 (2019).</li><li>Boudaoud, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FibrilTool,+an+ImageJ+plug-in+to+quantify+fibrillar+structures+in+raw+microscopy+images.">FibrilTool, an ImageJ plug-in to quantify fibrillar structures in raw microscopy images.</a> Nature Protocols. 9 (2), 457-463 (2014).</li><li>Sampathkumar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+wall+cellulose+synthase+regulates+shoot+apical+meristem+mechanics+and+growth.">Primary wall cellulose synthase regulates shoot apical meristem mechanics and growth.</a> Development. 146 (10), (2019).</li><li>Hervieux, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Mechanical+Feedback+Restricts+Sepal+Growth+and+Shape+in+Arabidopsis.">A Mechanical Feedback Restricts Sepal Growth and Shape in Arabidopsis.</a> Current Biology. 6 (8), P1019-P1028 (2016).</li><li>Sampathkumar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subcellular+and+supracellular+mechanical+stress+prescribes+cytoskeleton+behavior+in+Arabidopsis+cotyledon+pavement+cells.">Subcellular and supracellular mechanical stress prescribes cytoskeleton behavior in Arabidopsis cotyledon pavement cells.</a> Elife. 3, e01967 (2014).</li><li>Sampathkumar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+wall+cellulose+synthase+regulates+shoot+apical+meristem+mechanics+and+growth.">Primary wall cellulose synthase regulates shoot apical meristem mechanics and growth.</a> Development. 146 (10), dev179036 (2019).</li><li>Uyttewaal, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+stress+acts+via+katanin+to+amplify+differences+in+growth+rate+between+adjacent+cells+in+Arabidopsis.">Mechanical stress acts via katanin to amplify differences in growth rate between adjacent cells in Arabidopsis.</a> Cell. 149 (2), 439-451 (2012).</li><li>Hamant, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+patterning+by+mechanical+signals+in+Arabidopsis.">Developmental patterning by mechanical signals in Arabidopsis.</a> Science. 322 (5908), 1650-1655 (2008).</li></ol>

Vurderingen af mekaniske signaltransduktionshændelser er afgørende for at identificere molekylære regulatorer, der er involveret i mechano-perception og transduktionsveje. Den protokol, der er beskrevet her, giver et kvantitativt billede af sådanne hændelser ved at bruge det kortikale mikrotubulerespons som en udlæsning for en sådan proces i Arabidopsis SAM'er. Den her beskrevne fremgangsmåde anvendes rutinemæssigt i flere undersøgelser i forskellige vævstyper16,<sup...

Planteceller er omgivet af en ekstracellulær matrix af polysaccharider og glycoproteiner, der mekanisk ligner et fiberforstærket kompositmateriale, der dynamisk kan ændre dets mekaniske egenskaber1. Vækst i planteceller er drevet af optagelsen af vand i cellen, hvilket resulterer i en samtidig ophobning af trækkræfter på cellevæggen. Som reaktion på sådanne kræfter giver ændringer af cellevæggens fysiske tilstand mulighed for celleudvidelse. Celler med primære vægge er i stand til at gennemgå hurtig vækst i forhold til sekundære cellevæg, der indeholder celler, hovedsagelig på grund af forskelle i den kemiske sammensætning af polysacchariderne inden for. Primære vægceller er sammensat af cellulose, hemicellulose, og pektin ud over glycoproteiner, og mangler lignin, en komponent, der er til stede i den sekundære cellevæg2. Cellulose, en glukose polymer forbundet via β-1,4 obligationer, er den vigtigste del af cellevæggene. Det er organiseret i fibrillar strukturer, der er i stand til at modstå høje trækkræfter oplevet under cellevækst3. Ud over at modstå trækkræfter resulterer mekanisk forstærkning langs en præferenceretning i turgor-drevet ekspansion langs en aks vinkelret på netretningen af cellulosemikrofibril. Organiseringen af cellulose mikrofibrils er påvirket af kortikale mikrotubule cytoskelet, da de guider retningsbestemt bevægelse af cellulose-syntetiserende komplekser placeret på plasmamembranen4. Derfor, overvågning kortikale mikrotubule organisation ved hjælp af en microtubule-associeret protein eller tubulin fusioneret med en fluorescerende molekyle tjener som en proxy for observation af overliggende mønstre af cellulose i planteceller.
Mønstret af det kortikale mikrotubule cytoskeleti er under kontrol af celle- og vævsmorfologi afledte mekaniske kræfter. Kortikal mikrotubule organisation ikke har nogen præferenceorganisation over tid i celler placeret på toppen af SAM, mens celler i periferien og grænsen mellem SAM og det nye organ har en stabil, velorganiseret supracellular vifte af kortikale mikrotubuli5. Flere tilgange er blevet udviklet til fysisk forstyrre den mekaniske status af cellerne. Ændringer i osmotisk status samt behandling med farmakologiske og enzymatiske forbindelser, der påvirker cellevæggens stivhed, kan resultere i efterfølgende ændringer i trækkræfterne, som celle6,7oplever. Brugen af tingester, der giver mulighed for den gradvise stigning i trykkræfter opleves af væv er et andet alternativ8. Anvendelse af centrifugalkræfter har også vist sig at påvirke de mekaniske kræfter uden fysisk kontakt med cellerne9. Men de mest udbredte midler til at ændre retningsbestemte kræfter i en gruppe af celler drage fordel af det faktum, at alle epidermale celler er under spænding og fysisk ablation af celler vil fjerne turgor pres lokalt samt forstyrre celle-til-celle vedhæftning, og dermed ændre trækkræfter opleves af de omkringliggende celler. Dette udføres enten ved at målrette en høj-drevne pulserende ultraviolet laser eller ved hjælp af en fin nål.
Her uddyber vi processen med billeddannelse og vurdering af kortikal mikrotubule adfærd for mekanisk perturbation på SAM.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>FibrilTool</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Boudaoud, A. et al., Nat Protoc. 2014</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FIJI</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Schindelin, J. et al., Nat Methods. 2012</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glycine</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.04201.1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica SP8 confocal microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>DM6000 CS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MAP4-GFP</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Marc, J. et al., Plant Cell 1998</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>micropore tape</td>
			<td>Leukopor</td>
			<td>02482-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MorphographX</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Strauss, S. et al., Methods Mol Biol. 2019</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>myo-inositol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I5125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N6-benzyladenine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>B3408</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>nicotinic acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>N4126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>plastic hinged box</td>
			<td>Electron microscopy sciences</td>
			<td>64312</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PPM (Plant Preservative Mixture)</td>
			<td>Plant Cell Technology</td>
			<td>PPM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propidium iodide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P4864</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pyridoxine hydrochloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P9755</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SURFCUT</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Erguvan, O. et al., BMC Biol. 2019</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>thiamine hydrochloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T4625</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live cell imaging of microtubule cytoskeleton and micromechanical manipulation of the arabidopsis shoot apical meristem

Forståelse celle-og vævsniveau regulering af vækst og morfogenese har været på forkant med biologisk forskning i mange årtier. Fremskridt inden for molekylær- og billeddannelsesteknologier gav os mulighed for at få indsigt i, hvordan biokemiske signaler påvirker morfogenetiske hændelser. Men det er mere og mere tydeligt, at bortset fra biokemiske signaler, mekaniske signaler også påvirke flere aspekter af celle og væv vækst. Den Arabidopsis skyde apisk meristem (SAM) er en kuppel-formet struktur ansvarlig for generation af alle overjordiske organer. Organiseringen af det kortikale mikrotubule cytoskeletton, der formidler apoplastisk celluloseaflejring i planteceller, er rumligt adskilt. Visualisering og kvantitativ vurdering af mønstre af kortikale mikrotubuli er nødvendige for at forstå den biofysiske karakter af celler på SAM, som cellulose er den stiveste komponent i plantecellevæggen. Den stereotype form for kortikal mikrotubule organisation er også en konsekvens af væv-dækkende fysiske kræfter, der findes på SAM. Forstyrrelsen af disse fysiske kræfter og efterfølgende overvågning af kortikale mikrotubule organisation giver mulighed for identifikation af kandidat proteiner involveret i mægle mechano-perception og transduktion. Her beskriver vi en protokol, der hjælper med at undersøge sådanne processer.

Figur 1 viser typiske projektionsbilleder fra MBD-GFP-linjer med celler i midten af kuplen, der indeholder uorganiserede kortikale mikrotubuli, og celler i periferien med en omkredsfordeling (Figur 1A,B), mens grænsedomænecellerne indeholder kortikale mikrotubuli, der er justeret parallelt med cellens lange akse. Disse observationer viser forskelle i den rumlige fordeling af kortikale mikrotubuli i sam'ens fors...

Watch this Scientific Journal Video about Live Cell Imaging of Microtubule Cytoskeleton and Micromechanical Manipulation of the Arabidopsis Shoot Apical Meristem at JoVE.com

Live Cell Imaging of Microtubule Cytoskeleton and Micromechanical Manipulation of the Arabidopsis Shoot Apical Meristem

Her beskriver vi en protokol for levende celle billeddannelse af kortikale mikrotubule cytoskeleton på skyde apical meristem og overvåge dens reaktion på ændringer i fysiske kræfter.

Live Cell Imaging af Microtubule Cytoskeleton og mikromekanisk manipulation af Arabidopsis Skyd Apical Meristem

Understanding cell and tissue level regulation of growth and morphogenesis has been at the forefront of biological research for many decades. Advances in ...

Denne protokol det hjælper os med at forstå, hvordan Microtubule Cytoskeleton adfærd forekommer i planter. Samtidig hjælper det os også med at forstå, hvordan disse strukturelle komponenter, der påvirker celle- og orgelform, reagerer på ændringer i mekaniske kræfter. Selv om denne metode kræver lidt raffinement, det giver robust, kvantitativ read-after, den mekaniske reaktion forskelle mellem forskellige genotyper og betingelser.Begynd med at dyrke arabidopsisfrø, der udtrykker mikrotubulebindingsdomæner, der er fusioneret med grønt fluorescerende protein i jorden, ved 20 og 6 grader Celsius under lange dagsforhold i en uge. Efter spiring, overføre planterne i nye potter med tilstrækkelig vækst plads til at tillade robust vegetativ vækst, og placere planterne på 20 og 16 grader Celsius under korte dagforhold. Efter tre til fem uger, overføre planterne tilbage til lange dag betingelser ved samme temperatur, indtil planterne bolt, så blomsterstanden til at vokse op til to til fem centimeter lang.For Skyd Apical Meristem dissektion, putt blomsterstanden, og bruge skarpe kraftvipper til at skrælle blomsterne i bunden af stilke, indtil det er svært at se stilke med det blotte øje for at fjerne de ældre blomsterknopper. Brug de visne til at skabe en slids i agros i en dissekere fad, og plante blomsterstand base i den tykke Augur. Ansink skålen under et dissekerende mikroskop.Begyndende med den ældste blomsterknop, tryk med sniver til at fjerne blomsterknop fra planten. Skuddet apical meristem er normalt udsættes, når ældre blomster op til fase seks til syv er fjernet. Og bruge de visniver til at skubbe hver blomst knop ned, indtil skyde apical meristem er synlig.Så snart skyde apikale meristem er udsat, lad frisk dissekeret prøve i vækstmedium i en ethanol-steriliseret rektangulær plast hængslet kultur boks med skyde apikale meristem netop udsat over medium overflade. Tilsæt et par dråber sterilt deioniseret vand til kanterne af kulturboksen og luk låget for at opretholde luftfugtigheden inde i kassen. Wrap boksen med mikropor tape, og placere vækst boksen under lange eller sammenhængende dag betingelser ved 22 grader Celsius i 12 til 24 timer.Når anlægget er bjærget efter dissektionsproceduren, dækkes prøven med sterilt deioniseret vand, og luftboblerne kontrolleres under det dissekerende mikroskop. Overfør kulturboksen til et opretstående konfokalt mikroskoptrin, og vælg 40 eller 60X vanddypningslinseglasset. Sænk målet i vandet og kontroller for luftbobler på objektets forreste linse.For at fjerne bobler, sænke scenen og forsigtigt tørre linsen med et optisk væv. Brug derefter en Pasteur pipette til at tilføje en lille mængde vand til den forreste linse af målet, før re-nedsænkning linsen i vandet. Brug derefter GFP-filteret og epibelysningsmodulet i konfokale mikroskop til at justere XY-controlleren for at finde prøven.Justering af placeringen af okularer, placere skyde apikale meristem direkte under lyskilden, og fokus langs Z-aksen, indtil spidsen er placeret. Brug en laser i stand til spændende GFP at belyse prøven, og justere den optiske zoom af mikroskopet, således at hele skyde apikale meristem og scenen en blomstret primordia er i synsfeltet. Juster derefter laseroutputtets effekt og forstærkningsindstillingerne for at opnå et optimalt signal til støjforhold.Når prøven er blevet taget i brug i to til fem minutter, anskaffes der konfokale Z-stakke af prøven ved 0,25 til 0,5 mikrometer Z-skiveintervaller, hvilket tilføjer en opløsning på ca. 0,3 mikrometerpixel. Ved afslutningen af købet skal du straks fjerne vandet og overføre kulturboksen tilbage til vækstkammeret. For Micromechanical Shoot Apical Meristem Perturbation, erhverve præ-ablation billede stakke af den kortikale mikrotubule organisation som netop vist, og koffeinfri vandet fra kultur boksen i en kultur parabol.Overfør skyde apikale meristem under en dissekere mikroskop, og langsomt nærmede skyde apical meristem med en ren 0,4 af 20 millimeter sprøjtenål. Kontakt kortvarigt periferien af kuplen af skyde apical meristem med nålen spidsen for at bekræfte, at ablationen er afsluttet. Og genopfyld kulturskålen med sterilt deioniseret vand.Derefter tilsættes 10 mikrogram pr. milliliter propidiumdodid til skålen og anskaf straks billedstakke som påvist hver anden time i seks timer, hvor kulturskålen returneres til inkubationen mellem hvert tidspunkt. Til dataanalyse skal du generere overfladeprojektioner af billedstakkene ved hjælp af et passende billedanalysesoftwareprogram og udføre udvinding af den kortikale mikrotubule anisotropi ved hjælp af Fibril Tool Macro i Fiji. Her kan typiske projektionbilleder fra microtubule-bindingsdomæne GFP-linjer med celler i midten af kuplen, der indeholder uorganiserede kortikale mikrotubuli, celler i periferien, med en omkredsfordeling og grænsedomæneceller, der indeholder kortikale mikrotubuli justeret parallelt med cellens lange akse, observeres.Time-lapse imaging, viser kortikal mikrotubule justering skifter fra en meget uorganiseret array til en mere organiseret array inden for seks timer efter ablation. Tensorer kunne overlejres på de kortikale mikrotubule billeder, og de udtrukne oplysninger kunne være repræsenteret ved at plotte den gennemsnitlige anisotropi over tid. Når du justerer laser udgangseffekt og få indstillinger, bør vi sikre, at det klar observation af filamenter og forsøge at undgå overeksponering, som over mættede signaler kan bias trækretningen i senere analyse.Atomic force mikroskopi kan også udføres for at vurdere, hvordan ændringerne i de mekaniske kræfter faktisk påvirker den fysiske status af cellevæggen.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Live Cell Imaging of Microtubule Cytoskeleton and Micromechanical Manipulation of the Arabidopsis Shoot Apical Meristem

Live Imaging of Innate Immune and Preneoplastic Cell Interactions Using an Inducible Gal4/UAS Expression System in Larval Zebrafish Skin

Live-Imaging af medfødte immunsystem og præneoplastiske celleinteraktioner Brug en inducerbar Gal4 / UAS Expression System i Larve Zebrafisk Skin

Here we describe a method to conditionally induce epithelial cell transformation by the use of the 4-Hydroxytamoxifen (4-OHT) inducible KalTA4-ERT2/UAS ...

Live-imaging of the Drosophila Pupal Eye

Live-imaging of the Drosophila Pupal Eye

Levende-billeddannelse af<em&gt; Drosophila</em&gt; Puppe Eye

Inherent processes of Drosophila pupal development can shift and distort the eye epithelium in ways that make individual cell behavior difficult to track ...

Live Confocal Imaging of Developing Arabidopsis Flowers

Lev Konfokal Imaging af Udvikling Arabidopsis Blomster

The study of plant growth and development has long relied on experimental techniques using dead, fixed tissues and lacking proper cellular resolution. ...

Bioengineering of Humanized Bone Marrow Microenvironments in Mouse and Their Visualization by Live Imaging

Bioengineering af humaniserede knoglemarv mikro miljøer i mus og deres visualisering ved Live Imaging

Human hematopoietic stem cells (HSCs) reside in the bone marrow (BM) niche, an intricate, multifactorial network of components producing cytokines, growth ...

In Vitro Ovule Cultivation for Live-cell Imaging of Zygote Polarization and Embryo Patterning in Arabidopsis thaliana

In Vitro Ovule Cultivation for Live-cell Imaging of Zygote Polarization and Embryo Patterning in Arabidopsis thaliana

In Vitro Ovule dyrkning for Live-celle Imaging af Zygote polarisering og Embryo mønstre i Arabidopsis thaliana

In most flowering plants, the zygote and embryo are hidden deep in the mother tissue, and thus it has long been a mystery of how they develop dynamically; ...

Live Imaging of Mouse Secondary Palate Fusion

The fusion of the secondary palatal shelves to form the intact secondary palate is a key process in mammalian development and its disruption can lead to ...

Live Cell Imaging of Chromosome Segregation During Mitosis

Levende celle billeddannelse af kromosom Segregation under mitosen

Chromosomes must be reliably and uniformly segregated into daughter cells during mitotic cell division. Fidelity of chromosomal segregation is controlled ...

Confocal Live Imaging of Shoot Apical Meristems from Different Plant Species

Konfokal Live Imaging af skyde apikale ildens fra forskellige plantearter

The shoot apical meristem (SAM) functions as a conserved stem cell reservoir and it generates almost all aboveground tissues during the postembryonic ...

Dissection and Live-Imaging of the Late Embryonic Drosophila Gonad

Dissection and Live-Imaging of the Late Embryonic Drosophila Gonad

Dissektion og levende billeddannelse af den sene embryonale Drosophila Gonad

The Drosophila melanogaster male embryonic gonad is an advantageous model to study various aspects of developmental biology including, but not limited to, ...

Applications of Immobilization of Drosophila Tissues with Fibrin Clots for Live Imaging

Applications of Immobilization of Drosophila Tissues with Fibrin Clots for Live Imaging

Anvendelse af immobilisering af Drosophila Tissues med Fibrin Blodpropper til Live Imaging

Drosophila is an important model system to study a vast range of biological questions. Various organs and tissues from different developmental stages of ...