Name: live cell imaging of microtubule cytoskeleton and micromechanical manipulation of the arabidopsis shoot apical meristem
Uploaded: 2020-05-23T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live Cell Imaging of Microtubule Cytoskeleton and Micromechanical Manipulation of the Arabidopsis Shoot Apical Meristem at JoVE.com

1. Växttillväxt
<ol><li>Sugga Arabidopsis frön uttrycker mikrotubuli bindande domän smält med grön fluorescerande protein (MBD-GFP)10 på jord och hålla i långa dag (16 h dag / 8 h natt), 20 °C/6 °C villkor för 1 vecka för groning.</li>
	<li>Efter groning, överför plantor till nya krukor med tillräckligt tillväxtutrymme för att möjliggöra robust vegetativ tillväxt. Håll växter i kort dag (8 h dag / 16 h natt), 20 °C/16 °C villkor för 3-5 veckor.</li>
	<li>Överf...

<ol>
	<li>Cosgrove, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Re-constructing+our+models+of+cellulose+and+primary+cell+wall+assembly.">Re-constructing our models of cellulose and primary cell wall assembly.</a> Current Opinion in Plant Biology. 22, 122-131 (2014).</li><li>McFarlane, H. E., Doring, A., Persson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cell+biology+of+cellulose+synthesis.">The cell biology of cellulose synthesis.</a> Annual Reviews in Plant Biology. 65, 69-94 (2014).</li><li>Burgert, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploring+the+micromechanical+design+of+plant+cell+walls.">Exploring the micromechanical design of plant cell walls.</a> American Journal of Botany. 93 (10), 1391-1401 (2006).</li><li>Paredez, A. R., Somerville, C. R., Ehrhardt, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+cellulose+synthase+demonstrates+functional+association+with+microtubules.">Visualization of cellulose synthase demonstrates functional association with microtubules.</a> Science. 312 (5779), 1491-1495 (2006).</li><li>Barbier de Reuille, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MorphoGraphX:+A+platform+for+quantifying+morphogenesis+in+4D.">MorphoGraphX: A platform for quantifying morphogenesis in 4D.</a> Elife. 4, 05864 (2015).</li><li>Kierzkowski, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elastic+domains+regulate+growth+and+organogenesis+in+the+plant+shoot+apical+meristem.">Elastic domains regulate growth and organogenesis in the plant shoot apical meristem.</a> Science. 335 (6072), 1096-1099 (2012).</li><li>Heisler, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alignment+between+PIN1+polarity+and+microtubule+orientation+in+the+shoot+apical+meristem+reveals+a+tight+coupling+between+morphogenesis+and+auxin+transport.">Alignment between PIN1 polarity and microtubule orientation in the shoot apical meristem reveals a tight coupling between morphogenesis and auxin transport.</a> PLoS Biology. 8 (10), e1000516 (2010).</li><li>Louveaux, M., Rochette, S., Beauzamy, L., Boudaoud, A., Hamant, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+mechanical+compression+on+cortical+microtubules+in+Arabidopsis:+a+quantitative+pipeline.">The impact of mechanical compression on cortical microtubules in Arabidopsis: a quantitative pipeline.</a> Plant Journal. 88 (2), 328-342 (2016).</li><li>Nakayama, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+regulation+of+auxin-mediated+growth.">Mechanical regulation of auxin-mediated growth.</a> Current Biology. 22 (16), 1468-1476 (2012).</li><li>Marc, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+GFP-MAP4+reporter+gene+for+visualizing+cortical+microtubule+rearrangements+in+living+epidermal+cells.">A GFP-MAP4 reporter gene for visualizing cortical microtubule rearrangements in living epidermal cells.</a> Plant Cell. 10 (11), 1927-1940 (1998).</li><li>Strauss, S., Sapala, A., Kierzkowski, D., Smith, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+Plant+Growth+and+Cell+Proliferation+with+MorphoGraphX.">Quantifying Plant Growth and Cell Proliferation with MorphoGraphX.</a> Methods in Molecular Biology. 1992, 269-290 (2019).</li><li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiji:+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis.">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li><li>Erguvan, O., Louveaux, M., Hamant, O., Verger, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ImageJ+SurfCut:+a+user-friendly+pipeline+for+high-throughput+extraction+of+cell+contours+from+3D+image+stacks.">ImageJ SurfCut: a user-friendly pipeline for high-throughput extraction of cell contours from 3D image stacks.</a> BMC Biology. 17 (1), 38 (2019).</li><li>Boudaoud, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FibrilTool,+an+ImageJ+plug-in+to+quantify+fibrillar+structures+in+raw+microscopy+images.">FibrilTool, an ImageJ plug-in to quantify fibrillar structures in raw microscopy images.</a> Nature Protocols. 9 (2), 457-463 (2014).</li><li>Sampathkumar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+wall+cellulose+synthase+regulates+shoot+apical+meristem+mechanics+and+growth.">Primary wall cellulose synthase regulates shoot apical meristem mechanics and growth.</a> Development. 146 (10), (2019).</li><li>Hervieux, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Mechanical+Feedback+Restricts+Sepal+Growth+and+Shape+in+Arabidopsis.">A Mechanical Feedback Restricts Sepal Growth and Shape in Arabidopsis.</a> Current Biology. 6 (8), P1019-P1028 (2016).</li><li>Sampathkumar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subcellular+and+supracellular+mechanical+stress+prescribes+cytoskeleton+behavior+in+Arabidopsis+cotyledon+pavement+cells.">Subcellular and supracellular mechanical stress prescribes cytoskeleton behavior in Arabidopsis cotyledon pavement cells.</a> Elife. 3, e01967 (2014).</li><li>Sampathkumar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+wall+cellulose+synthase+regulates+shoot+apical+meristem+mechanics+and+growth.">Primary wall cellulose synthase regulates shoot apical meristem mechanics and growth.</a> Development. 146 (10), dev179036 (2019).</li><li>Uyttewaal, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+stress+acts+via+katanin+to+amplify+differences+in+growth+rate+between+adjacent+cells+in+Arabidopsis.">Mechanical stress acts via katanin to amplify differences in growth rate between adjacent cells in Arabidopsis.</a> Cell. 149 (2), 439-451 (2012).</li><li>Hamant, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+patterning+by+mechanical+signals+in+Arabidopsis.">Developmental patterning by mechanical signals in Arabidopsis.</a> Science. 322 (5908), 1650-1655 (2008).</li></ol>

Bedömningen av mekaniska signaltransduktionshändelser är avgörande för att identifiera molekylära regulatorer som är involverade i mekanosuppfattningen och transduktionsvägarna. Protokollet som beskrivs här ger en kvantitativ vy av sådana händelser genom att använda svaret för när mikrotubuli som en avläsning för en sådan process i Arabidopsis SAMs. Det förfarande som beskrivs här används rutinmässigt i flera studier i olika vävnadstyper16,<sup class="xref...

Växtceller omges av en extracellulär matris av polysackarider och glykoproteiner som mekaniskt liknar ett fiberförstärkta kompositmaterial som kan dynamiskt ändra dess mekaniska egenskaper1. Tillväxt i växtceller drivs av upptaget av vatten i cellen, vilket resulterar i en samtidig uppbyggd av dragkrafter på cellväggen. Som svar på sådana krafter möjliggör modifieringar av cellväggens fysiska tillstånd cellexpansion. Celler med primära väggar är kapabla att genomgå snabb tillväxt jämfört med sekundär cellvägg som innehåller celler främst på grund av skillnader i den kemiska sammansättningen av polysackarider inom. Primära väggceller är sammansatta av cellulosa, hemicellulosa, och pektin förutom glykoproteiner, och saknar lignin, en komponent som finns i den sekundäracellväggen 2. Cellulosa, en glukospolymer som är β-1,4 obligationer, är den viktigaste komponenten i cellväggarna. Den är organiserad i fibrillarstrukturer som klarar av att motstå höga dragkrafter som upplevs under celltillväxt3. Förutom att motstå dragkrafter, mekanisk förstärkning längs en förmånsvis riktning resulterar i turgor-driven expansion längs en axel vinkelrätt mot netto orientering av cellulosa microfibril. Organisationen av cellulosa mikrofibriller påverkas av den kortikala mikrotubulicytoskeletten, eftersom de styr riktningsrörelsen för de cellulosa-syntetiserande komplex som ligger vid plasmamembranet4. Därför, övervakning när mikrotubuli organisation med hjälp av en microtubule-associerade protein eller tubulin smält med en fluorescerande molekyl fungerar därför som en proxy för observation av överlyckliga mönster av cellulosa i växtceller.
Mönstningen av den kortikala mikrotubulicytoskeletten är under kontroll av cell- och vävnadsmorfologi härledda mekaniska krafter. Kortikala mikrotubuli organisation har inte någon förmånlig organisation över tiden i celler som ligger vid spetsen av SAM, medan celler i periferin och gränsen mellan SAM och det framväxande organet har en stabil, mycket organiserad överstatlig array av kortikala mikrotubuli5. Flera tillvägagångssätt har utvecklats för att fysiskt perturb den mekaniska status av cellerna. Förändringar av osmotisk status, samt behandling med farmakologiska och enzymatiska föreningar som påverkar styvheten i cellväggen kan resultera i efterföljande förändringar i de dragkrafter som upplevs avcellen 6,7. Användningen av contraptions som möjliggör den gradvisa ökningen av tryckkrafter upplevs av vävnader är ett annat alternativ8. Applicering av centrifugalkrafter har också visat sig påverka de mekaniska krafterna utan någon fysisk kontakt med cellerna9. Men de mest använda sätten att ändra riktningskrafter i en grupp celler dra nytta av det faktum att alla epidermal celler är under spänning och fysisk ablation av celler kommer att eliminera turgor tryck lokalt samt störa cell-till-cell adhesion, och därmed modifiera de dragkrafter upplevs av de angränsande cellerna. Detta utförs antingen genom att rikta en kraftfull pulsad ultraviolett laser eller med hjälp av en fin nål.
Här utvecklar vi på processen för bildbehandling och bedöma kortikalt mikrotubuli beteende för mekanisk perturbation vid SAM.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>FibrilTool</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Boudaoud, A. et al., Nat Protoc. 2014</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FIJI</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Schindelin, J. et al., Nat Methods. 2012</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glycine</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.04201.1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica SP8 confocal microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>DM6000 CS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MAP4-GFP</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Marc, J. et al., Plant Cell 1998</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>micropore tape</td>
			<td>Leukopor</td>
			<td>02482-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MorphographX</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Strauss, S. et al., Methods Mol Biol. 2019</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>myo-inositol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I5125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N6-benzyladenine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>B3408</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>nicotinic acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>N4126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>plastic hinged box</td>
			<td>Electron microscopy sciences</td>
			<td>64312</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PPM (Plant Preservative Mixture)</td>
			<td>Plant Cell Technology</td>
			<td>PPM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propidium iodide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P4864</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pyridoxine hydrochloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P9755</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SURFCUT</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Erguvan, O. et al., BMC Biol. 2019</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>thiamine hydrochloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T4625</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live cell imaging of microtubule cytoskeleton and micromechanical manipulation of the arabidopsis shoot apical meristem

Förstå cell-och vävnadsnivå reglering av tillväxt och morfogenes har varit i spetsen för biologisk forskning i många decennier. Framsteg inom molekylär- och bildteknik gjorde det möjligt för oss att få insikter i hur biokemiska signaler påverkar morfogetiska händelser. Det är dock allt tydligare att bortsett från biokemiska signaler, mekaniska ledtrådar också påverka flera aspekter av cell-och vävnadstillväxt. Arabidopsisen skjuter apikal meristem (SAM) är en kupol-formad struktur ansvarig för generation av alla ovan jord organ. Organisationen av den kortikala mikrotubuli cytoskelett som förmedlar apoplastiskt cellulosa nedfall i växtceller är rumsligt distinkt. Visualisering och kvantitativ bedömning av mönster av när mikrotubuli är nödvändiga för att förstå biofysiska karaktär av celler vid SAM, som cellulosa är den styvaste komponenten i anläggningen cellväggen. Den stereotypa formen av när mikrotubuli organisation är också en följd av vävnadsomfattande fysiska krafter som finns vid SAM. Perturbation av dessa fysiska krafter och efterföljande övervakning av när mikrotubuli organisation möjliggör identifiering av kandidat proteiner som deltar i medla mechano-perception och transduktion. Här beskriver vi ett protokoll som hjälper till att undersöka sådana processer.

Bild 1 visar typiska projektionsbilder som erhållits från MBD-GFP-linjer med celler i mitten av kupolen som innehåller oorganiserade när mikrotubuli och celler i periferin som har en cirkumferential fördelning (Figur 1A,B), medan gränsdomänens celler innehåller när mikrotubuler som är inriktade parallellt med cellens långa axel. Dessa observationer visar skillnader i den rumsliga fördelningen av när ...

Watch this Scientific Journal Video about Live Cell Imaging of Microtubule Cytoskeleton and Micromechanical Manipulation of the Arabidopsis Shoot Apical Meristem at JoVE.com

Live Cell Imaging of Microtubule Cytoskeleton and Micromechanical Manipulation of the Arabidopsis Shoot Apical Meristem

Här beskriver vi ett protokoll för levande cell imaging av den kortikala microtubule cytoskeleton vid skjuta apikala meristem och övervakning dess svar på förändringar i fysiska krafter.

Live Cell Imaging av Microtubule Cytoskelett och mikromekanisk manipulation av den Arabidopsis Shoot Apical Meristem

Understanding cell and tissue level regulation of growth and morphogenesis has been at the forefront of biological research for many decades. Advances in ...

Detta protokoll det hjälper oss att förstå hur Microtubule Cytoskelett beteende förekommer i växter. Samtidigt hjälper det oss också att förstå hur dessa strukturella komponenter som påverkar cell- och organform, reagerar på förändringar i mekaniska krafter. Även om, denna metod kräver lite finess, det ger robust, kvantitativ read-after, de mekaniska svarsskillnaderna mellan olika genotyper och villkor.Börja med att odla arabidopsis frön uttrycker mikrotubuli bindande domäner smält med gröna fluorescerande protein i jord, vid 20 och 6 grader Celsius under långa dagar förhållanden för en vecka. Efter groning, överföra plantorna till nya krukor med tillräckligt tillväxtutrymme för att möjliggöra robust vegetativ tillväxt, och placera växterna på 20 och 16 grader Celsius under korta dagar. Efter tre till fem veckor, överför växterna tillbaka till långa dagar förhållanden vid samma temperatur tills växterna bult, vilket gör att blomställningen att växa upp till två till fem centimeter lång.För Shoot Apical Meristem dissektion, putt blomställningen, och använda skarpa kraftpiskar för att skala blommorna vid basen av peduncles, tills det är svårt att se peduncles med blotta ögat för att ta bort de äldre blomknopparna. Använd tärnorna för att skapa en slits i agros i en dissekering skålen, och plantera blomställning bas i den tjocka Augur. Placera skålen under ett dissekerande mikroskop.Från och med den äldsta blomknoppen, tryck med tänja för att ta bort blomknoppen från växten. Den skjuta apikala meristem är oftast utsätts när äldre blommor upp till steg sex till sju tas bort. Och använd tänjas för att trycka varje blomknopp ner tills skottet apikkalt meristem är synligt.Så snart skottet apikala meristem är utsatt, låt nyligen dissekerat prov i tillväxt medium i en etanol-steriliserad rektangulär plast gångjärn kultur låda med skjuta apikala meristem bara exponeras ovanför medelytan. Tillsätt några droppar sterilt avjoniserat vatten till kanterna på kulturlådan och stäng locket för att bibehålla luftfuktigheten inuti lådan. Linda lådan med micropore tejp, och placera tillväxtlådan under långa eller kontinuerliga dagar förhållanden på 22 grader Celsius i 12 till 24 timmar.När anläggningen har återhämtat sig från dissektionsproceduren, täck provet med sterilt avjoniserat vatten och kontrollera om det finns luftbubblor under dissekerings mikroskopet. Överför kulturboxen till ett upprätt konfokalmikroskopsteg och välj vattendoppningslinsen på 40 eller 60X. Sänk målet i vattnet och kontrollera om det finns luftbubblor på objektets främre lins.För att ta bort bubblor, sänka scenen och försiktigt torka av linsen med en optisk vävnad. Använd sedan en Pasteur pipett för att lägga till en liten volym vatten till den främre linsen av målet innan åter doppa linsen i vattnet. Därefter använder du GFP-filtret och epi-belysningsmodulen i konfokalmikroskopet för att justera XY-styrenheten för att lokalisera provet.Justera läget för okulär, placera skjuta apikala meristem direkt under ljuskällan, och fokusera längs Z-axeln tills apexet är placerad. Använd en laser som kan spännande GFP för att belysa provet, och justera den optiska zoomen i mikroskopet, så att hela skjuta apikala meristem och scenen ett blommig primordia är i synfältet. Justera sedan laserutgångens effekt och förstärkningsinställningarna för att få ett optimalt signal-brusförhållande.Efter att ha tillåtit provet att nöja sig med två till fem minuter, förvärva confocal Z stackar av provet på 0,25 till 0,5 mikrometer Z segment intervall, lägga till cirka 0,3 mikrometer pixel storleksupplösning. I slutet av förvärvet, omedelbart ta bort vattnet och överföra kultur rutan tillbaka till tillväxtkammaren. För Micromechanical Shoot Apical Meristem Perturbation, förvärva pre-ablation bild stackar av den kortikala mikrotubuli organisationen som just visat, och koffeinfritt vattnet från kultur rutan till en kultur skålen.Överför skjuta apikala meristem under en dissekerande mikroskop, och sakta närmade skott apikala meristem med en ren 0,4 med 20 millimeter spruta nål. Kort kontakta periferin av kupolen på skjuta apikala meristem med nålspetsen för att bekräfta att ablationen har slutförts. Och fylla på kulturfatet med sterilt avjoniserat vatten.Tillsätt sedan 10 mikrogram per milliliter propidium iodid till skålen och omedelbart förvärva bildstaplar som visas varannan timme i sex timmar, återvänder kultur skålen till inkubationen mellan varje tidpunkt. För dataanalys generera ytprojektioner av bildstackarna med hjälp av ett lämpligt program för bildanalysprogram, och utföra extraktion av den kortikala anisotropin för mikrotubuli med hjälp av Fibril Tool Macro i Fiji. Här, typiska projektion bilder som erhållits från mikrotubuli bindande domän GFP linjer med celler i mitten av kupolen som innehåller oorganiserade när mikrotubuli, celler i periferin, med en circumferential fördelning och gräns domän celler som innehåller kortikala mikrotuli justeras parallellt med cellens långa axel kan observeras.Time-lapse imaging, visar när mikrotubuli anpassning ändras från en mycket oordnad array till en mer organiserad array inom sex timmar efter ablation. Tensors kan läggas ovanpå kortikala mikrotubulibilder, och den extraherade informationen kan representeras genom att rita den genomsnittliga anisotropin över tiden. Vid justering av laserutgångseffekt och förstärkningsinställningar bör vi se till att det är en tydlig observation av glödtrådarna och försöka undvika överexponering, eftersom över mättade signaler kan snedvrida den dragiga riktningen i senare analys.Atomkraftmikroskopi kan också utföras för att bedöma hur förändringarna i de mekaniska krafterna faktiskt påverkar cellväggens fysiska status.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Live Cell Imaging of Microtubule Cytoskeleton and Micromechanical Manipulation of the Arabidopsis Shoot Apical Meristem

Live Imaging of Innate Immune and Preneoplastic Cell Interactions Using an Inducible Gal4/UAS Expression System in Larval Zebrafish Skin

Live avbildning av medfödda immun och preneoplastiska Cell interaktioner Använda en Inducerbar Gal4 / UAS Expression System i Larvzebrafish Skin

Here we describe a method to conditionally induce epithelial cell transformation by the use of the 4-Hydroxytamoxifen (4-OHT) inducible KalTA4-ERT2/UAS ...

Live-imaging of the Drosophila Pupal Eye

Live-imaging of the Drosophila Pupal Eye

Live-avbildning av<em&gt; Drosophila</em&gt; PUPP Eye

Inherent processes of Drosophila pupal development can shift and distort the eye epithelium in ways that make individual cell behavior difficult to track ...

Live Confocal Imaging of Developing Arabidopsis Flowers

Live Confocal Imaging för att utveckla Arabidopsis blommor

The study of plant growth and development has long relied on experimental techniques using dead, fixed tissues and lacking proper cellular resolution. ...

Bioengineering of Humanized Bone Marrow Microenvironments in Mouse and Their Visualization by Live Imaging

Bioengineering av humaniserade benmärgsmiljöer i mus och deras visualisering genom Live Imaging

Human hematopoietic stem cells (HSCs) reside in the bone marrow (BM) niche, an intricate, multifactorial network of components producing cytokines, growth ...

In Vitro Ovule Cultivation for Live-cell Imaging of Zygote Polarization and Embryo Patterning in Arabidopsis thaliana

In Vitro Ovule Cultivation for Live-cell Imaging of Zygote Polarization and Embryo Patterning in Arabidopsis thaliana

In Vitro Fröämnet odling för Live-cell Imaging av zygot polarisering och Embryo mallning i Arabidopsis thaliana.

In most flowering plants, the zygote and embryo are hidden deep in the mother tissue, and thus it has long been a mystery of how they develop dynamically; ...

Live Imaging of Mouse Secondary Palate Fusion

The fusion of the secondary palatal shelves to form the intact secondary palate is a key process in mammalian development and its disruption can lead to ...

Live Cell Imaging of Chromosome Segregation During Mitosis

Levande cellen avbildning av kromosomsegregering under Mitos

Chromosomes must be reliably and uniformly segregated into daughter cells during mitotic cell division. Fidelity of chromosomal segregation is controlled ...

Confocal Live Imaging of Shoot Apical Meristems from Different Plant Species

Confocal levande avbildning av skjuta Apical Meristems från olika växtarter

The shoot apical meristem (SAM) functions as a conserved stem cell reservoir and it generates almost all aboveground tissues during the postembryonic ...

Dissection and Live-Imaging of the Late Embryonic Drosophila Gonad

Dissection and Live-Imaging of the Late Embryonic Drosophila Gonad

Dissektion och live-avbildning av den sena embryonala Drosophila Gonad

The Drosophila melanogaster male embryonic gonad is an advantageous model to study various aspects of developmental biology including, but not limited to, ...

Applications of Immobilization of Drosophila Tissues with Fibrin Clots for Live Imaging

Applications of Immobilization of Drosophila Tissues with Fibrin Clots for Live Imaging

Tillämpningar av immobilisering av Drosophila vävnader med fibrin blodproppar för live imaging

Drosophila is an important model system to study a vast range of biological questions. Various organs and tissues from different developmental stages of ...