Kemisk biopsi är en ny diagnostisk lösning vid organtransplantation för snabb och komplex graftkvalitetsbedömning. För närvarande finns det inga andra låga invasiva metoder som möjliggör sådan analys. Den största fördelen med denna teknik är möjligheten att övervaka ympmaterial vävnadsmodifieringar över tiden för bevarande på grund av enkelhet och låg invasivitet av SPME sonder.
Sondens lilla diameter och en stor variation av biokompatibla beläggningar gör denna metod lämplig för analys av transplanterade organ och tillämplig i medicinsk forskning såsom tumöranalys. När du försöker denna teknik för första gången uppmärksamma detaljer och tidpunkt för särskilda steg eftersom små misstag kan starkt påverka resultaten. Protokollet är enkelt, men det är lättare att förstå och utföra efter visuell demonstration.
Börja med att förbereda en prekonditionering blandning består av en till en metanol och vatten. Pipettera en milliliter av lösningen i varje två milliliter glasflaska och placera en sond i varje injektionsflaska. Agitera injektionsflaskan på en virvelagittor vid 1200 RPM i en timme.
Skölj sedan sonderna med LCMS-gradvatten och sterilisera dem enligt standardprotokollet för kirurgisk sterilisering eller i steril bearbetningsavdelning. När du är redo att extrahera provet, öppna den sterila förpackningen och sätt in två sonder direkt i njurbarken i 10 minuter per tidpunkt, se till att hela beläggningens längd täcks av vävnadsmatrisen. Se till att hålla reda på tiden för provtagningen för varje sond.
Dra tillbaka sonden genom att dra ut den från vävnaden och skölj omedelbart beläggningen med LCMS-grad vatten för att avlägsna eventuellt kvarvarande blod se till att skölja bort från operationsstället. För att transportera sonderna, placera dem i separata injektionsflaska och stänga dem. Placera sedan injektionsflaskan i en låda fylld med torris eller flytande kväve.
Förvara proverna vid negativa 80 grader Celsius eller fortsätt omedelbart med desorption. Bered en desorptionslösning som består av acetonitril och vatten för metabolomisk analys och en annan sammansatt av isopropanol och metanol för lipidomic analys. Tillsätt 100 mikroliter av lösningen till insatser i de två milliliter märkta injektionsflaskan och placera en sond i varje injektionsflaska agitera injektionsflaskan vid 1200 RPM i två timmar och ta sedan bort sonderna från injektionsflaskan och fortsätt med LCMS-analys.
Flytande kromatografi tillsammans med hög upplösning massa spektrometri användes för att genomföra oriktade metabolomic och lipidomic analys. Uppgifterna utsattes för huvudkomponentanalys för att bedöma kvalitet underhålla allmänna insikter om resultaten. Kvalitetskontrollproven bildade ett tätt kluster som bekräftar analysens kvalitet.
De studerade grupperna uppvisade relativt god separation, vilket möjliggör visualisering av skillnader i metaboliska och lipidomic profiler före och efter transplantation samt under orgelperfusion. Ett brett spektrum av extraherade funktioner separerades på både omvänd fas och flytande kromatografi kolumner. Ändringar och metabolit nivåer under hela experimentet visades med låda morrhår tomter av de valda metaboliterna.
När du utför denna procedur, tänk på organen heterogenitet. Placera sonden på önskad plats hålla tiden för provtagning identiska vid alla tidpunkter, och säkra fibern ordentligt efter provtagning. De biomarkörer som upptäckts med SPME kan kvantifieras med hjälp av denna extraktionsmetod som kopplas ihop med MSMS, LCMS eller annan analysinstrumentering.
Dessutom, eftersom inget prov förbrukas, rutinmässig analys såsom biopsi kan utföras. Metoden kan anpassas för andra vävnadsmetabolomik och lipidomicsanalys utan nödvändighet för provförbehandling. För specifika metaboliter.
Andra beläggningar kan användas för att öka selektivitet och känslighet av uppsatsen.
