Name: an immunological model for heterotopic heart and cardiac muscle cell transplantation in rats
Uploaded: 2020-05-08T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An Immunological Model for Heterotopic Heart and Cardiac Muscle Cell Transplantation in Rats at JoVE.com

ブリッタ・トラウテヴィヒ、コリンナ・レーバート、イングリッド・メダーのコミットメントに感謝したいと思います。

すべての動物の経験は、承認ID12/0768と17/2472でニーダーザクセン州(LAVES、オルデンブルク、ドイツ)の消費者保護と食品安全のための地域当局の地元の倫理動物審査委員会のガイドラインに従って行われています。
1. 心臓の流出と灌流
注:移植片ドナーとして、7〜22週齢の雌または雄のラットが使用された。
<ol><li>イソフルラン吸入(1 L/minのO2?...

<ol>
	<li>Abbott, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Technique+for+Heart+Transplantation+In+the+Rat.">A Technique for Heart Transplantation In the Rat.</a> Archives of Surgery. 89 (4), 645-652 (1964).</li><li>Tomita, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+homotransplantation+in+the+rat.">Heart homotransplantation in the rat.</a> Sapporo igaku zasshi. The Sapporo Medical Journal. 30 (4), 165-183 (1966).</li><li>Ono, K., Lindsey, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+technique+of+heart+transplantation+in+rats.">Improved technique of heart transplantation in rats.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 57 (2), 225-229 (1969).</li><li>Wen, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+technique+for+a+new+working+heterotopic+heart+transplantation+model+in+rats.">A simple technique for a new working heterotopic heart transplantation model in rats.</a> Transplantation Proceedings. 45 (6), 2522-2526 (2013).</li><li>Benke, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterotopic+abdominal+rat+heart+transplantation+as+a+model+to+investigate+volume+dependency+of+myocardial+remodeling.">Heterotopic abdominal rat heart transplantation as a model to investigate volume dependency of myocardial remodeling.</a> Transplantation. 101 (3), 498-505 (2017).</li><li>Kearns, M. 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R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulse+doppler+and+M-mode+to+assess+viability+of+cardiac+allografts+using+heterotopic+femoral+heart+transplantation+in+rats.">Pulse doppler and M-mode to assess viability of cardiac allografts using heterotopic femoral heart transplantation in rats.</a> Microsurgery. 27 (4), 240-244 (2007).</li><li>Gordon, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+modified+technique+for+heterotopic+femoral+heart+transplantation+in+rats.">A new modified technique for heterotopic femoral heart transplantation in rats.</a> The Journal of Surgical Research. 139 (2), 157-163 (2007).</li><li>Ma, Y., Wang, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+2+heterotopic+heart+transplant+techniques+in+rats:+cervical+and+abdominal+heart.">Comparison of 2 heterotopic heart transplant techniques in rats: cervical and abdominal heart.</a> Experimental and Clinical Transplantation. 9 (2), 128-133 (2011).</li><li>Bektas, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+effect+of+donor-specific+blood+transfusions+after+kidney,+heart,+pancreas,+and+skin+transplantation+in+major+histocompatibility+complex-incompatible+rats.">Differential effect of donor-specific blood transfusions after kidney, heart, pancreas, and skin transplantation in major histocompatibility complex-incompatible rats.</a> Transfusion. 37 (2), 226-230 (1997).</li><li>Saiho, K. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+allograft+acceptance+induced+by+single+dose+anti-leukocyte+common+antigen+(RT7)+antibody+in+the+rat.">Long-term allograft acceptance induced by single dose anti-leukocyte common antigen (RT7) antibody in the rat.</a> Transplantation. 71 (8), 1124-1131 (2001).</li><li>Bektas, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+transfers+infectious+immunologic+tolerance+in+MHC-incompatible+heart+transplantation+in+rats.">Blood transfers infectious immunologic tolerance in MHC-incompatible heart transplantation in rats.</a> Journal of Heart and Lung Transplantation. 24 (5), 614-617 (2005).</li><li>J&#228;ger, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sirolimus+promotes+tolerance+for+donor+and+recipient+antigens+after+MHC+class+II+disparate+bone+marrow+transplantation+in+rats.">Sirolimus promotes tolerance for donor and recipient antigens after MHC class II disparate bone marrow transplantation in rats.</a> Experimental Hematology. 35 (1), 164-170 (2007).</li><li>Timrott, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+allogeneic+bone+marrow+cells+in+view+of+residual+alloreactivity:+Sirolimus+but+not+cyclosporine+evolves+tolerogenic+properties.">Application of allogeneic bone marrow cells in view of residual alloreactivity: Sirolimus but not cyclosporine evolves tolerogenic properties.</a> PLoS ONE. 10 (4), 1-16 (2015).</li><li>Hadamitzky, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Memory-updating+abrogates+extinction+of+learned+immunosuppression.">Memory-updating abrogates extinction of learned immunosuppression.</a> Brain, Behavior, and Immunity. 52, 40-48 (2016).</li><li>Beetz, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recipient+natural+killer+cells+alter+the+course+of+rejection+of+allogeneic+heart+grafts+in+rats.">Recipient natural killer cells alter the course of rejection of allogeneic heart grafts in rats.</a> Plos One. 14 (8), e0220546 (2019).</li><li>Hirschburger, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nicotine+Attenuates+Macrophage+Infiltration+in+Rat+Lung+Allografts.">Nicotine Attenuates Macrophage Infiltration in Rat Lung Allografts.</a> The Journal of Heart and Lung Transplantation. 28 (5), 493-500 (2009).</li><li>Ruzza, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterotopic+heart+transplantation+in+rats:+improved+anesthetic+and+surgical+technique.">Heterotopic heart transplantation in rats: improved anesthetic and surgical technique.</a> Transplantation Proceedings. 42 (9), 3828-3832 (2010).</li><li>Wang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+technique+for+heart+transplantation+in+rats:+abdominal+vessel+branch-sparing+and+modified+venotomy.">A simplified technique for heart transplantation in rats: abdominal vessel branch-sparing and modified venotomy.</a> Microsurgery. 26 (6), 470-472 (2006).</li><li>Wang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+modified+method+for+heterotopic+mouse+heart+transplantion.">A modified method for heterotopic mouse heart transplantion.</a> Journal of Visualized Experiments. (88), (2014).</li><li>Al-Amran, F. G., Shahkolahi, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Total+arterial+anastomosis+heterotopic+heart+transplantation+model.">Total arterial anastomosis heterotopic heart transplantation model.</a> Transplantation Proceedings. 45 (2), 625-629 (2013).</li><li>Hoerstrup, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modified+technique+for+heterotopic+rat+heart+transplantation+under+cardioplegic+arrest.">Modified technique for heterotopic rat heart transplantation under cardioplegic arrest.</a> Journal of Investigative Surgery. 13 (2), 73-77 (2000).</li><li>Fry, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+vascular+endothelial+changes+associated+with+increased+blood+velocity+gradients.">Acute vascular endothelial changes associated with increased blood velocity gradients.</a> Circulation Research. 22 (2), 165-197 (1968).</li><li>Ahmadi, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+Rat+Kidney+Transplantation:+A+Novel+and+Simplified+Surgical+Approach.">Orthotopic Rat Kidney Transplantation: A Novel and Simplified Surgical Approach.</a> Journal of Visualized Experiments. (147), (2019).</li><li>Schmid, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+heterotopic+heart+transplantation+in+rat.">Successful heterotopic heart transplantation in rat.</a> Microsurgery. 15 (4), 279-281 (1994).</li><li>Shan, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+modified+technique+for+heterotopic+heart+transplantation+in+rats.">A modified technique for heterotopic heart transplantation in rats.</a> Journal of Surgical Research. 164 (1), 155-161 (2010).</li><li>Moris, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+liver-induced+tolerance.">Mechanisms of liver-induced tolerance.</a> Current Opinion in Organ Transplantation. 22 (1), 71-78 (2017).</li><li>Bickerstaff, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+renal+allografts:+spontaneous+acceptance+is+associated+with+regulated+T+cell-mediated+immunity.">Murine renal allografts: spontaneous acceptance is associated with regulated T cell-mediated immunity.</a> Journal of Immunology. 167 (9), 4821-4827 (2001).</li><li>Mottram, P. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrocardiographic+monitoring+of+cardiac+transplants+in+mice.">Electrocardiographic monitoring of cardiac transplants in mice.</a> Cardiovascular Research. 22 (5), 315-321 (1988).</li><li>Torre-Amione, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decreased+expression+of+tumor+necrosis+factor-&#945;+in+failing+human+myocardium+after+mechanical+circulatory+support:+A+potential+mechanism+for+cardiac+recovery.">Decreased expression of tumor necrosis factor-&#945; in failing human myocardium after mechanical circulatory support: A potential mechanism for cardiac recovery.</a> Circulation. 100 (11), 1189-1193 (1999).</li><li>Goldstein, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulatory+resuscitation+with+left+ventricular+assist+device+support+reduces+interleukins+6+and+8+levels.">Circulatory resuscitation with left ventricular assist device support reduces interleukins 6 and 8 levels.</a> The Annals of Thoracic Surgery. 63 (4), 971-974 (1997).</li><li>Tang-Quan, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-volume-loaded+heart+provides+a+more+relevant+heterotopic+transplantation+model.">Non-volume-loaded heart provides a more relevant heterotopic transplantation model.</a> Transplant Immunology. 23 (1-2), 65-70 (2010).</li><li>Lakhal-Naouar, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcutaneous+immunization+using+SLA+or+rLACK+skews+the+immune+response+towards+a+Th1+profile+but+fails+to+protect+BALB/c+mice+against+a+Leishmania+major+challenge.">Transcutaneous immunization using SLA or rLACK skews the immune response towards a Th1 profile but fails to protect BALB/c mice against a Leishmania major challenge.</a> Vaccine. 37 (3), 516-523 (2019).</li><li>Sousa-Batista, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+and+safe+single-dose+treatment+of+cutaneous+leishmaniasis+with+implantable+amphotericin+B-loaded+microparticles.">Novel and safe single-dose treatment of cutaneous leishmaniasis with implantable amphotericin B-loaded microparticles.</a> International Journal for Parasitology: Drugs and Drug Resistance. , (2019).</li></ol>

ラットにおける異所性心移植の先に説明した方法は、主に1969年の大野とリンジーの記述に基づく3.それ以来、このモデルの多様性を広げ、様々な種に幾つかの改変が導入されている。これらの変更のいくつかを組み合わせ、実験室で異所性心臓移植を行った30年以上の経験を紹介し、長いトレーニング期間や外科的背景を必要としない実行可能な外科的アプローチを作成し?...

異所性心臓移植は、移植耐性、急性および慢性同種移植片拒絶、虚血再灌流傷害、機械灌流または心臓改造に関する様々な調査のために頻繁に使用される実験モデルである。他の利点の中で、移植機能は、触診および移植片の障害によって非侵襲的に監視することができ、腎臓または肝臓などの他の器官とは対照的に、レシピエントの重要な障害をもたさない。
1964年、Abbottらは当初ラット1における異所性腹部心臓移植について説明した。その後、1966年に、解剖学のためのエンドツーサイド技術は、Tomitaららによって記述されました。現在使用されているモデルの基礎は、1969年に小野とリンジーによって報告されました 3.過去数十年の間に、異種の異所性心臓肺移植4、5、6,6を含む、アンロードされた、部分的にロードされた、または積み込まれた左心室4の心臓移植片の異なるタイプを作成するためにいくつかの変更が公開されている。免疫学的分析では、非体積負荷の心臓移植移植が最も一般的に行われる。この場合、血流は逆行してドナーの大動脈を上昇し、その後冠状動脈に入る。静脈の排水は、冠動脈静脈内に沿って右心房と心室に入って起こる(図1A-B)。したがって、左心室は、テベシア静脈からの血液の限界量とは別に、血流から除外される。これはまた、左心室補助装置療法7の間に病態生理学的メカニズムを研究するための有用なモデルになる。
異所性心臓移植は、マウス、ウサギ、ブタを含む様々な種で行われ、,ヒト8、9、10、119のユニまたは自転車補助装置としても8使用されている。,1011ラットは移植モデルに対して依然として一般的な実験動物を表しており、特に異なるラット株の組み合わせに対する移植片生存時間が過去に明確に定義されており、多数の免疫学的試薬が12,13,13にアクセス可能であるためである。マウスとは異なり、ラットは、より大きな手術を行い、免疫学的分析のためのより現実的な12のためにリンパ組織へのアクセスを行う。さらに、近年ラットに商業的クローニング技術が導入されると、実験ラットモデル14に対する関心が再び高まる可能性が高い。
一般に、異所性心臓移植片は、子宮頸部または腹部吻当を行うことによって、レシピエント血管に結合することができる。しかし、いくつかの研究は、大腿骨吻合が手動触診または経胎児心エコー検査のためのより良いアクセスによる改善されたモニタリングを促進し、したがって、移植片の失敗15、16,16のより正確な検出を可能にすることを示唆している。
両方の吻合技術17の間に、手術時間、合併症率、転帰および移植片生存時間に関する相違がないことを示している。明らかに、十分な数のリンパ節の排出の可用性は、子宮頸部吻合の利点として言及されなければならない。ただし、より長いトレーニング期間が必要です。対照的に、腹部吻合は、特に同種心筋細胞の耳内注射とその後の子宮頸部リンパ管切除術の新しい方法の結果と組み合わせると、免疫学的調査のためにそれほど複雑ではなく、同様に価値がある。両方のモデルの組み合わせは、介入後の免疫学的分析の広いスペクトルを提供しています。
以下のプロトコルは、虚血時間を短縮するために外科医の対で動作することを指す。しかし、すべての実験は、単一の人が行うことができます。心臓の排泄および移植のための器具および材料のセットアップは図2A-Bに表示される。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Anesthesia device (including isoflurane vaporizer)</td>
			<td>Summit Anesthesia Solutions</td>
			<td>No Catalog Number available</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cannula (27 G)</td>
			<td>BD Microlance</td>
			<td>302200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carprofen</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td>Rimadyl 50 mg/mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cellstar Tubes (15 mL)</td>
			<td>GreinerBioOne</td>
			<td>188271</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainer (40 &#181;m)</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>2271680</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase Type CLSII</td>
			<td>Biochrome</td>
			<td>C2-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compresses 5x5 cm</td>
			<td>Fuhrmann</td>
			<td>31501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compresses 7.5x7.5 cm</td>
			<td>Fuhrmann</td>
			<td>31505</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton swabs</td>
			<td>Heinz Herenz Medizinalbedarf</td>
			<td>1032128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dexpathenol (5 %)</td>
			<td>Bayer</td>
			<td>&#34;Bepanthen&#34;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS BioWhittaker</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>17-512F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>Aesculap BD557R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>Aesculap BD313R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>Aesculap BD35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating mat</td>
			<td>Gaymar Industries</td>
			<td>&#34;T/Pump&#34;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostatic gauze</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>Tabotamp</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin-Natrium 25 000 I.E.</td>
			<td>Ratiopharm</td>
			<td>No Catalog Number available</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isofluran CP</td>
			<td>CP-Pharma</td>
			<td>No Catalog Number available</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large-pored sieve (stainless steel)</td>
			<td>Forschungswerkst&#228;tten Hannover Medical School</td>
			<td>No Catalog Number available</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lidocaine</td>
			<td>Astra Zeneca</td>
			<td>2 % Xylocain</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metamizol-Natrium</td>
			<td>Ratiopharma</td>
			<td>Novaminsulfon 500 mg/mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro forceps</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>Aesculap BD3361</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro needle holder</td>
			<td>Codman, Johnson &#38; Johnson Medical</td>
			<td>Codmann 80-2003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro needle holder</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>Aesculap BD336R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro needle holder</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>Aesculap FD241R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro scissors</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>Aesculap FD101R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro scissors</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>Aesculap FM471R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>Aesculap BM221R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin/Glutamine (100x)</td>
			<td>PAA</td>
			<td>P11-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peripheral venous catheter (18 G)</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>4268334B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peripheral venous catheter (22 G)</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>4268091B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Probe pointed scissors</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>Aesculap BC030R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Retractors</td>
			<td>Forschungswerkst&#228;tten Hannover Medical School</td>
			<td>No Catalog Number available</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI culture medium</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>BE12-702F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline solution (NaCl 0.9 %)</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>No Catalog Number available</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>Aesculap BC414</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical microscope</td>
			<td>Carl-Zeiss</td>
			<td>OPMI-MDM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures (anastomoses)</td>
			<td>Catgut</td>
			<td>Mariderm 8-0 monofil</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures (ligature)</td>
			<td>Resorba</td>
			<td>Silk 5-0 polyfil</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures (skin, fascia)</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>Mersilene 3-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe (1 mL)</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>9166017V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe (10 mL)</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>4606108V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe (20 mL)</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>4606205V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vascular clamp</td>
			<td>B. Braun</td>
			<td>Aesculap FB708R</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an immunological model for heterotopic heart and cardiac muscle cell transplantation in rats

ラットにおける異所性心臓移植は、50年以上にわたり多様な免疫学的研究のために一般的に使用されてきたモデルである。1964年の最初の説明以来、いくつかの変更が報告されています。ラットで30年間異所性心臓移植を行った後、我々は簡単に教えられ、さらなる外科的訓練や背景なしで行うことができる簡単な外科的アプローチを開発しました。
上頂大動脈の解剖および肺動脈の解剖および上および下および下の静脈および肺静脈の結紮の後、ドナー心臓は収穫され、その後ヘパリンを補った氷冷生理食水溶液で浸透する。レシピエント腹部血管をクランプして切開した後、ドナーの上が大動脈と肺動脈は、連続的な走り縫合糸を使用して、それぞれレシピエント腹部大動脈および下大静脈に吻合される。
異なるドナーとレシピエントの組み合わせに応じて、このモデルは、同種移植片の急性または慢性拒絶反応の分析を可能にする。このモデルの免疫学的意義は、重要な心筋細胞の耳内注射と子宮頸部リンパ組織の排液のその後の分析の新しいアプローチによってさらに高められる。

これまで、異なる免疫学的問題は、95%以上の生存率を持つ500以上の移植によって作業群で検証されたモデルに基づいて対処されてきました13,18,,19,,20,,21,,22,,23, 24.,24総?...

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An Immunological Model for Heterotopic Heart and Cardiac Muscle Cell Transplantation in Rats

我々は、ラットにおける異所性腹部心臓移植のモデルを記述し、現在の戦略の改変を暗示し、外科的アプローチを単純化する。さらに、重要な心筋細胞の耳内注射による新しい拒絶反応モデルを記述し、ラットにおける免疫学的分析をさらに可能にする。

ラットにおける異所性心臓と心筋細胞移植のための免疫学的モデル

Heterotopic heart transplantation in rats has been a commonly used model for diverse immunological studies for more than 50 years. Several modifications ...

移植モデルは、しばしば外科の専門知識を必要とする免疫学的研究のための貴重なツールです。ここでは、ラットにおける異所性心臓および心筋細胞移植のための実行可能なアプローチを提示する。私たちのモデルのすべての重要なステップを強調し、簡素化することによって、外科的背景を持たない研究者は、合理的な時間でこのモデルを習得できるはずです。両方の移植モデルは、寛容と拒絶反応のメカニズムに貴重な洞察を提供し、様々な種に適用することができます。私たちは、事前の外科訓練なしで個人にこのモデルを教える多くの経験を持っています。重要なステップを学んだ後、私たちは、死んだ動物との忍耐と十分な練習をアドバイスします。ドナー心臓排泄のために、7〜22週齢ラットドナー動物の麻酔でペダル反射への応答の欠如を確認した後、眼潤滑剤を塗布し、腹部および胸部の毛皮を除去するために機械的なバリカンを使用する。ラットを熱ベースの上のサイン位置に置き、手術テーブルの基部に弾性バンドで手足を固定します。70%エタノールで露出した皮膚を消毒し、中央値の腹腔内術を行う。切開部にレトラクタを挿入し、殺菌綿棒を使用して腸をドナーの左側に動員し、下の大静脈を露出させる。次に、下の静脈を穿刺して、500の国際単位のヘパリンを1ミリリットルの氷冷同位塩基塩水溶液に溶解させた静脈注射を可能にする。綿棒を使用して軽い圧縮によって針の引き込み後に穿刺された部位で出血を止める。横隔膜を切開し、ドナーの両側に側胸部切開術を行い、胸郭壁をピンで留める。2つのマイクロニードルホルダーを使用して鈍い調製によって心膜と迷走神経を取り除きます。排泄のために、腹部血管をトランセクトし、プローブ尖ったはさみの鈍い枝を横方向心膜のシヌスに挿入する。心臓の軽い尾筋の牽引の下でできるだけ遠位に上昇大動脈および肺動脈を解剖するために圧縮を使用する。上方および下の大静脈と肺静脈の周りに単一の5-0合字を配置し、可能な限り後ろ向きに合字を段階的に締めます。合字に組織の後ろを切断し、心臓を抽出します。植えられた心臓を浸透させるために、静脈内カテーテルから18ゲージカニューレを使用して、氷冷、同等張生理食塩水の30ミリリットルを洗浄し、上昇大動脈と肺動脈を通して1000国際単位のヘパリンを補った。ちょうど実証したように10〜14週齢のレシピエントラットを準備した後、レシピエントの左上側に腸を暖かく湿潤した圧縮に動員する。そして、手術顕微鏡または十分な代替手段を調整します。十二指腸と近位性の全角を動員した後、それぞれ5〜7倍の完全な倍率を使用して、綿棒と鈍い解剖を使用して腹部大動脈および下大静脈を露出させる。腰部静脈を傷つけずに2つのマイクロ針ホルダーを使用して腹部を高め、クーリー血管クランプを血管に置きます。腹部の血管を穿刺するために30〜45度アーチ型27ゲージカニューレを使用してください。そして、ポッツはさみを使用して、穿刺部位をドナー容器の内腔の大きさに一致する縦切開に拡大する。血栓を除去し、術後血栓症を防ぐために、生理的な血管を浸透させ、移植片を腹に置く。2つの単純な中断8-0を使用してモノフィラメント非再ソーブル縫合糸は、ドナー上昇大動脈を、縦切開の頭蓋および尾口角でレシピエント腹部大動脈に固定する。レシピエントの腹部大動脈を持つドナーの上昇大動脈を吻合するには、8-0を実行して吻合の前半を行いながら、レシピエント血管の右側に移植片を置くモノフィラメント縫合。次に、移植片をレシピエント血管の左側に置き、吻着の後半を行う。ドナー肺動脈を下脳静脈に、頭蓋と尾角の2つの角の結び目と同様の方法で固定します。各コーナーでドナー容器を結び目で固定した後、外側から容器の内側にステッチを置き、吻合の前半に対して内アルミナル吻合を実行します。縫合糸を結ぶ前に、内側から外側に別のステッチを置きます。吻合の後半を終えた後に末梢塞栓症を防ぐために、吻合の後半の結び目を締める前に、生理症を生理的に洗い流します。両方のアナストモーゼの周りに止血性ガーゼを置き、慎重にグラフト再灌流を可能にするためにクーリー血管クランプを解放します。軽い圧縮および殺菌された綿棒の出血を管理する。約60秒後、心臓は鼓動を開始する必要があります。慎重に腸を交換し、別の連続した3-0ポリフィラメントを実行縫合線で腹部筋膜と皮膚を閉じます。適切な実験時点で、示されているようにドナーラットの心臓を収穫し、無菌メスまたは無菌はさみを使用して心臓を3ミリメートルの断片で3つに細断する。コラゲターゼ1ミリリットル当たり0.5ミリグラムのコラゲターゼを37°Cで30分間補った20ミリリットルの培養培地で、30分消化します。消化の終わりに、培養培地を取り除きながら、大きな毛穴のふるいに組織を加える。5~10ミリリットルの等張生理食塩水を加え、ふるいを通して組織スラリーをひずみます。そして、細胞懸濁液を2回遠心した後、40マイクロメートルの細胞ストレーナーを通してそれを濾過する。5~10ミリリットルの等張生理食塩水でストレーナーをすすいで、残りの細胞を採取します。そして遠心分離後、1ミリリットル当たり5倍の5細胞の濃度で生理食塩水中の単離されたラット心臓細胞を再懸濁する。細胞溶液を1ミリリットルのシリンジに積み込み、麻酔を受けたレシピエント動物をターゲットの耳を上に向けた横位置に置きます。指と両面テープで耳を固定し、27ゲージカニューレを使用して、視覚毛細血管に近い20マイクロリットルの心筋細胞溶液をレシピエントの耳に皮下注入します。適切な実験観察期間の後、排液性子宮頸部リンパ節を抽出し、目的の適切な下流分析を行う。シンジェニック移植は、移植片の故障の兆候なしに最大100日間生存した。特定のドナーとレシピエントの組み合わせは、異所性心臓移植拒絶反応の異なる速度をもたらす可能性があります。拒絶された心臓のクライオスタットセクションは免疫エフェクター細胞の浸潤の増加を明らかにするが、シンジェニック移植片は免疫細胞をほとんど含まない。心筋細胞注射後のリンパ節細胞の排液に関する子宮頸リンパ節切法および再刺激アッセイは、同種移植レシピエントにおける異所性心臓組織に対する特異的な菌株特異的免疫応答を明らかにし、サイトカインプロファイリングなどのさらなる免疫学的分析を保証する。針を挿入して抽出する際は、容器を注意深く扱ってください。狭窄を防ぐために縫合糸にあまり注意を払わないでください。各吻合のためにあまりにも多くのステッチを配置しないでください。

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Murine Model of CD40-activation of B cells

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Research on B cells has shown that CD40 activation improves their antigen presentation capacity. When stimulated with interleukin-4 and CD40 ligand ...

Orthotopic Hind-Limb Transplantation in Rats

ラット同所性後肢移植

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An Ex vivo Model of an Oligodendrocyte-directed T-Cell Attack in Acute Brain Slices

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アン<em&gt;エクスビボ</em急性脳スライスにおけるオリゴデンドロサイト指向T細胞攻撃の&gt;モデル

Death of oligodendrocytes accompanied by destruction of neurons and axons are typical histopathological findings in cortical and subcortical grey matter ...

Assessing Bacterial Invasion of Cardiac Cells in Culture and Heart Colonization in Infected Mice Using Listeria monocytogenes

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リステリア単球遺伝子を用いた感染マウスにおける培養および心臓コロニー形成における心臓細胞の細菌浸潤の評価

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Normal and Malignant Muscle Cell Transplantation into Immune Compromised Adult Zebrafish

免疫低下アダルトゼブラフィッシュへの正常および悪性筋細胞移植

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An Endothelial Planar Cell Model for Imaging Immunological Synapse Dynamics

イメージング免疫学的シナプスダイナミクス内皮平面内細胞モデル

Adaptive immunity is regulated by dynamic interactions between T cells and antigen presenting cells (&#39;APCs&#39;) referred to as &#39;immunological ...

Establishment of a High-throughput Setup for Screening Small Molecules That Modulate c-di-GMP Signaling in Pseudomonas aeruginosa

Establishment of a High-throughput Setup for Screening Small Molecules That Modulate c-di-GMP Signaling in Pseudomonas aeruginosa

調節するc-ジ-GMPシグナリングで、小さな分子をスクリーニングするためのハイスループットセットアップの確立<em&gt;緑膿菌</em

Bacterial resistance to traditional antibiotics has driven research attempts to identify new drug targets in recently discovered regulatory pathways. ...

Isolation and Identification of Extravascular Immune Cells of the Heart

心の血管外免疫細胞の分離と同定

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Optimization of the Cuff Technique for Murine Heart Transplantation

マウスの心臓移植のためのカフ技術の最適化

Murine cardiac transplantation has been performed for more than 40 years. With advancements in microsurgery, certain new techniques have been used to ...

Visualization of SARS-CoV-2 using Immuno RNA-Fluorescence In Situ Hybridization

SITUハイブリダイゼーションにおける免疫RNA-蛍光を用いたSARS-CoV-2の可視化

This manuscript provides a protocol for in situ hybridization chain reaction (HCR) coupled with immunofluorescence to visualize severe acute respiratory ...