Name: high-frequency ultrasound echocardiography to assess zebrafish cardiac function
Uploaded: 2020-03-12T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about High-Frequency Ultrasound Echocardiography to Assess Zebrafish Cardiac Function at JoVE.com

אנו מודים לתמיכתו הטכנית של פרד רוברטס ולעדכון כתב היד.

כל ההליכים הכרוכים בדגים אושרו על ידי הוועדה המוסדית שלנו לטיפול בבעלי חיים ובהתאם לחוק הרווחה של משרד החקלאות.
1. הגדרת ניסיוני
<ol><li>
הגדרת הפלטפורמה לרכישת תמונה
	<ol>
<li>באמצעות מספריים קטנים או אזמל לעשות חתך על ספוג בעמדה 12 השעה להחזיק את הדג במהלך הסריקה. מניחים ...

<ol>
	<li>Santoriello, C., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hooked!+Modeling+human+disease+in+zebrafish.">Hooked! Modeling human disease in zebrafish.</a> Journal of Clinical Investigation. 122 (7), 2337-2343 (2012).</li><li>Verkerk, A. O., Remme, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish:+a+novel+research+tool+for+cardiac+(patho)electrophysiology+and+ion+channel+disorders.">Zebrafish: a novel research tool for cardiac (patho)electrophysiology and ion channel disorders.</a> Frontiers in Physiology. 3, 255 (2012).</li><li>Bakkers, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+as+a+model+to+study+cardiac+development+and+human+cardiac+disease.">Zebrafish as a model to study cardiac development and human cardiac disease.</a> Cardiovascular research. 91 (2), 279-288 (2011).</li><li>Poon, K. L., Brand, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zebrafish+model+system+in+cardiovascular+research:+A+tiny+fish+with+mighty+prospects.">The zebrafish model system in cardiovascular research: A tiny fish with mighty prospects.</a> Global Cardiology Science and Practise. 2013 (1), 9-28 (2013).</li><li>Jopling, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+heart+regeneration+occurs+by+cardiomyocyte+dedifferentiation+and+proliferation.">Zebrafish heart regeneration occurs by cardiomyocyte dedifferentiation and proliferation.</a> Nature. 464 (7288), 606-609 (2010).</li><li>Mishra, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+model+of+amyloid+light+chain+cardiotoxicity:+regeneration+versus+degeneration.">Zebrafish model of amyloid light chain cardiotoxicity: regeneration versus degeneration.</a> American Journal of Physiology Heart Circulatory Physiology. 316 (5), H1158-H1166 (2019).</li><li>Shin, J. T., Pomerantsev, E. V., Mably, J. D., MacRae, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+cardiovascular+function+confirms+functional+orthology+of+myocardial+contractility+pathways+in+zebrafish.">High-resolution cardiovascular function confirms functional orthology of myocardial contractility pathways in zebrafish.</a> Physiologycal Genomics. 42 (2), 300-309 (2010).</li><li>Mishra, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+amyloidogenic+light+chain+proteins+result+in+cardiac+dysfunction,+cell+death,+and+early+mortality+in+zebrafish.">Human amyloidogenic light chain proteins result in cardiac dysfunction, cell death, and early mortality in zebrafish.</a> American Journal of Physiology Heart Circulatory Physiology. 305 (1), H95-H103 (2013).</li><li>Ernens, I., Lumley, A. I., Devaux, Y., Wagner, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+Coronary+Ultrasound+Imaging+to+Evaluate+Ventricular+Function+in+Adult+Zebrafish.">Use of Coronary Ultrasound Imaging to Evaluate Ventricular Function in Adult Zebrafish.</a> Zebrafish. 13 (6), 477-480 (2016).</li><li>Gonz&#225;lez-Rosa, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+Echocardiography+Reveals+Reestablishment+of+Ventricular+Pumping+Efficiency+and+Partial+Ventricular+Wall+Motion+Recovery+upon+Ventricular+Cryoinjury+in+the+Zebrafish.">Use of Echocardiography Reveals Reestablishment of Ventricular Pumping Efficiency and Partial Ventricular Wall Motion Recovery upon Ventricular Cryoinjury in the Zebrafish.</a> PLoS One. 9 (12), (2014).</li><li>Huang, C. C., Su, T. H., Shih, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+tissue+Doppler+imaging+of+the+zebrafish+heart+during+its+regeneration.">High-resolution tissue Doppler imaging of the zebrafish heart during its regeneration.</a> Zebrafish. 12 (1), 48-57 (2015).</li><li>Kang, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-frequency+dual+mode+pulsed+wave+Doppler+imaging+for+monitoring+the+functional+regeneration+of+adult+zebrafish+hearts.">High-frequency dual mode pulsed wave Doppler imaging for monitoring the functional regeneration of adult zebrafish hearts.</a> Journal of the Royal Society Interface. 12 (103), (2015).</li><li>Lee, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemodynamics+and+ventricular+function+in+a+zebrafish+model+of+injury+and+repair.">Hemodynamics and ventricular function in a zebrafish model of injury and repair.</a> Zebrafish. 11 (5), 447-454 (2014).</li><li>Sun, L., Lien, C. L., Xu, X., Shung, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Vivo+Cardiac+Imaging+of+Adult+Zebrafish+Using+High+Frequency+Ultrasound+(45-75+MHz).">In Vivo Cardiac Imaging of Adult Zebrafish Using High Frequency Ultrasound (45-75 MHz).</a> Ultrasound in Medicine and Biology. 34 (1), 31-39 (2008).</li><li>Wang, L. W., Kesteven, S. H., Huttner, I. G., Feneley, M. P., Fatkin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-Frequency+Echocardiography-+Transformative+Clinical+and+Research+Applications+in+Humans,+Mice,+and+Zebrafish.">High-Frequency Echocardiography- Transformative Clinical and Research Applications in Humans, Mice, and Zebrafish.</a> Circulation Journal. 82 (3), 620-628 (2018).</li><li>Wang, L. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardized+echocardiographic+assessment+of+cardiac+function+in+normal+adult+zebrafish+and+heart+disease+models.">Standardized echocardiographic assessment of cardiac function in normal adult zebrafish and heart disease models.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 10 (1), 63 (2017).</li><li>Lee, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+Assessment+of+Cardiac+Responses+of+Adult+Zebrafish+(Danio+rerio)+to+Acute+and+Chronic+Temperature+Change+Using+High-Resolution+Echocardiography.">Functional Assessment of Cardiac Responses of Adult Zebrafish (Danio rerio) to Acute and Chronic Temperature Change Using High-Resolution Echocardiography.</a> PLOS ONE. 11 (1), e0145163 (2016).</li><li>Genge, C. E., et al., Nilius, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Reviews of Physiology, Biochemistry and Pharmacology. 171, 99-136 (2016).</li></ol>

אנו מתארים שיטה שיטתית לדימות אקו-קרדיוגרפי והערכה של תפקוד לב בדגי מבוגרים. אקוקרדיוגרפיה היא השיטה היחידה שאינה פולשנית ואיתנה ביותר עבור הדמיה למבוגרים בלבד דגים לב וניתוח פונקציונלי, והוא הופך פופולרי יותר ויותר במחקר וכלי דם בדגים דג זברה. כמות הזמן הנדרשת היא קצרה ומאפשר לימודי תפו...

הדגים (danio rerio) הוא מודל בעלי חוליות מבוסס היטב למחקרים של תהליכים התפתחותיים ומחלות אדם1. Zebrafish יש דמיון גנטי גבוה לבני אדם (70%), היכולת הגנטית, פוריות גבוהה, ושקיפות אופטית במהלך פיתוח עובריים, אשר מאפשר ניתוח חזותי ישיר של איברים ורקמות, כולל הלב. למרות שיש רק אטריום אחד וחדר השינה אחד, לב דג זברה (איור 1) הוא דומה באופן מבחינה פיזיולוגית לבבות ארבעה הצ. חשוב מכך, קצב פעימות הלב, מורפולוגיה חשמלית וצורה פוטנציאלית לפעולה דומים לאלה של בני האדם יותר מאשר מיניםמורניים 2. תכונות אלה הפכו דג זברה מודל מצוין עבור מחקר לב וכלי דם סיפקו תובנות מרכזיות להתפתחות הלב3,4, התחדשות5, התנאים הפתולוגית1,3,4, כולל טרשת עורקים, cardiomyopathies, הפרעות בקצב הלב, מחלות לב מולדות, ו-עמילואיד שרשרת האור קרדיולוגית1,4,6. הערכה של תפקוד לב אפשרי במהלך השלב העובריים (1-ימים הפריה פוסט) באמצעות ניתוח וידאו ישירה באמצעות מיקרוסקופ וידאו במהירות גבוהה7,8. עם זאת, דגים מאבדים את השקיפות שלהם מעבר לשלב העובריים, הגבלת הערכות פונקציונליות של לבבות בוגרים נורמליים ומצבי לב התפרצות מאוחרת. כדי להתגבר על מגבלה זו, אקו קרדיוגרפיה מועסק בהצלחה כמו ברזולוציה גבוהה, בזמן אמת חלופה הדמיה לא פולשנית כדי להעריך את פונקציית הלב הבוגרת דג זברה9,10,11,12,13,14,15.
ב-zebrafish, הלב ממוקם ventrally בחלל החזה מיד אחורי הזימים עם האטריום ממוקם על החדר. האטריום אוספת דם ורידי מתוך venosus הסינוס ומעבירה אותו אל החדר שבו הוא נשאב עוד יותר בולבוס הריוסוס (איור 1). כאן, אנו מתארים פיסיולוגי, מתחת למים, פרוטוקול להערכת תפקוד לב בוגרים דג זברה על-ידי אקו שאינו פולשני באמצעות מערך ליניארי בדיקה אולטרסאונד עם תדר מרכז של 50 MHz עבור הדמיה במצב B ברזולוציה של 30 μm. מאז גלי אולטרסאונד יכול בקלות לנסוע דרך המים, שמירה על קירבה בין הדג ואת בדיקה סריקה מתחת למים מספק מספיק משטח מגע לאיתור לב ללא צורך ג'ל אולטרסאונד והוא הכולל פחות מלחיץ את הדג. למרות שמערכות האקו-לב החלופיות דווחו על-ידי מספר סופרים9,12,13, כאן אנו מציגים את ההתקנה הכללית והנפוצה ביותר החלה על אולטרסאונד בתדר גבוה בבעלי חיים.
השיטה מאפשרת דימות ברזולוציה גבוהה של לב דג זברה מבוגרים, מעקב אחר מבנים לב, ו כימות של מהירויות שיא מדידות זרימת דם דופלר. אנו מראים אמין בvivo פיקציה של הפרמטרים הסיסטולי החשוב הדיאסטולי, כגון שבריר הפליטה (EF), שינוי באזור החלקי (FAC), תזרים הזרימה החדרית ומהירויות זרימה, קצב הלב (HR), ופלט לב (CO). אנו תורמים להקמת מגוון אמין של רגיל מבוגר בריא הפרמטרים של לב פונקציונלי ומימדי לאפשר הערכה מדויקת יותר של מדינות הפתולוגית. בסך הכל, אנו מספקים שיטה איתנה כדי להעריך את תפקוד הלב ב-דג זברה, אשר הוכיחה שימושי מאוד בהקמת ואימות דג זברה מחלת לב מודלים6,16, פגיעה בהלב והתאוששות10,13, ו התחדשות11,12, וניתן להשתמש בנוסף כדי להעריך תרופות פוטנציאליות.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Double sided tape</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fish net</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass container - 100 inch high</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High frequency transducer</td>
			<td>Fujifilm/VisualSonics</td>
			<td>MX700</td>
			<td>Band width 29-71 MHz, Centre transmit 50 MHz, Axial resolution 30 &#181;m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic teaspoon</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel or scissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small fish tanks</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sponge (kitchen sponge)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer pipets (graduated 3 mL)</td>
			<td>Samco Scientific</td>
			<td>212</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tricaine (MS-222)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A5040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo 3100 Imaging system and imaging station</td>
			<td>Fujifilm/VisualSonics</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo LAB sofware v 1.7.1</td>
			<td>Fujifilm/VisualSonics</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

high-frequency ultrasound echocardiography to assess zebrafish cardiac function

הדגים (danio rerio) הפך לאורגניזם מודל פופולרי מאוד במחקר לב וכלי דם, כולל מחלות לב האדם, בעיקר בשל השקיפות העובריות שלה, מעקב גנטי, ו הנועם כדי מהיר, תפוקה גבוהה לימודים. עם זאת, הפסד של שקיפות מגביל ניתוח תפקודי לב בשלב המבוגר, אשר מסבך את הדוגמנות של מצבי לב הקשורים לגיל. כדי להתגבר על מגבלות כאלה, אולטרסאונד בתדר גבוה האקו בדגים הוא מתגלה כאופציה מעשית. כאן, אנו מציגים פרוטוקול מפורט כדי להעריך את תפקוד הלב ב דג זברה מבוגרים על ידי האקו לא פולשנית באמצעות אולטרסאונד בתדר גבוה. השיטה מאפשרת הדמיה וניתוח של מימד לב הדגים וככמת של פרמטרים פונקציונליים חשובים, כולל קצב הלב, עוצמת שבץ, פלט לב, ושבריר פליטה. בשיטה זו, הדג מורדם ונשמר מתחת למים וניתן לשחזר לאחר ההליך. למרות שאולטרסאונד בתדר גבוה היא טכנולוגיה יקרה, אותה פלטפורמת הדמיה ניתן להשתמש עבור מינים שונים (למשל, מורצין ו zebrafish) על ידי התאמת התמרה שונים. האקו הוא שיטה איתנה עבור פנוטיפים לב, שימושי באימות ואפיון של דגמי מחלות, בעיקר מחלות מאוחרות; מסכי התרופות; ומחקרים של פציעת לב, החלמה ויכולת התחדשות.

הפרוטוקול המתואר מאפשר מדידה של פרמטרים חשובים של לב מימדי ופונקציונלי, מקבילה לטכניקה המשמשת האקו אדם ובעלי חיים. התמונות במצב B לאפשר מעקב של הקיר הפנימי חדרית ב סיסטולה ו דיאמטים (איור 5) וקבלת נתונים ממדיים, כגון מידות קאמרית וקיר, ונתונים פונקציונליים...

Watch this Scientific Journal Video about High-Frequency Ultrasound Echocardiography to Assess Zebrafish Cardiac Function at JoVE.com

High-Frequency Ultrasound Echocardiography to Assess Zebrafish Cardiac Function

אנו מתארים פרוטוקול להערכת מורפולוגיה לב ותפקוד של בוגרים בדגים באמצעות אקו בתדר גבוה. השיטה מאפשרת ויזואליזציה של הלב והקוונפיקציה הבאים של פרמטרים פונקציונליים, כגון קצב הלב (HR), פלט לב (CO), שינוי באזור החלקי (FAC), הוצאה לפליטה (EF), וזרימה ומהירויות זרימה.

אולטרסאונד בתדירות גבוהה אקו קרדיוגרפיה כדי להעריך Zebrafish תפקוד הלב

The zebrafish (Danio rerio) has become a very popular model organism in cardiovascular research, including human cardiac diseases, largely due to its ...

הפרוטוקול מאפשר ייצוג וניתוח לא פולשניים ברזולוציה גבוהה של תפקוד הלב של דגי הזברה הבוגרים. שיטה זו יכולה לשמש לאימות מודלים של מחלות לב למבוגרים ומסכי תרופות פוטנציאליים. טכניקה זו מאפשרת מיקום מהיר של הדגים להדמיה נכונה המספקת תוצאות מדויקות ותרבותיות.זה לא פולשני ומבוצע מתחת למים המאפשר התאוששות מהירה של הדגים. כדי להגדיר את הפלטפורמה לרכישת תמונה, השתמש במספריים קטנים או באזמל כדי לבצע חתך על ספוג בתדרך השעה 12. מניחים את הספוג במיכל זכוכית.באמצעות סרט הדבקה דו-צדדי, הדבק את מיכל הזכוכית המכיל את הספוג בפלטפורמת האולטרסאונד. ודא שמכל הזכוכית נמצא במרכז הרציף ומצורף היטב. הטה את הפלטפורמה קדימה כ-30 מעלות באמצעות הידית בצד שמאל של מחזיק הפלטפורמה.ממלאים את מיכל הזכוכית בכ-200 מיליליטר של מי מערכת דגים המכילים 0.2 מיליגרם למיליליטר טריקאין מתנסולפונט. הכנס את מתמר בתוך מחזיק micromanipulator בתחנת הרכבת העובדת מפנה את הרץ של מתמר לכיוון המפעיל. שמור את המערך במקביל לקרקע עם הצד העובד אורך ביחס לבמה.השאירו מספיק מקום על 10 ס"מ משני הצדדים עבור מערכת הרכבת מתמר מחובר עכשיו לנוע לאורך x ו y-צירים. היכנס לתוכנה הבקרה ובחר עכבר כלי דם קטנים. צור מחקר חדש, כמו גם סדרה חדשה עבור כל בעל חיים המושרה במחקר.לחץ על לחצן המחקר החדש הממוקם בצד הימני התחתון של המסך בדף הדפדפן. התצוגה מתחילה במצב B. באמצעות רשת דגים, להעביר את הדג לתוך מיכל קטן המכיל מי מערכת עם 0.2 מיליגרם למיליליטר של tricaine.המתן עד שהדגים יהיו מרודמה לחלוטין ללא תנועה או ללא תגובה למגע. בעדינות ובמהירות להעביר את הדגים לתוך מיכל הזכוכית עם הספוג לתוך החתך עשה בעבר עם הצד הגחוני של הדג פונה כלפי מעלה. בעדינות להוריד את מתמר באמצעות הידית על מערכת הרכבת הצבת אותו אורך ולסגור את הצד הגחוני של הדג עם רץ של מתמר מול המפעיל.השאירו שניים עד שלושה מילימטרים של אישור מהדגים. התאימו את הפלטפורמה ביחס מתמר באמצעות micromanipulator בכל שלושת הצירים עד לב הדג הוא דמיינו. מיד לאחר לוקליזציה של הלב, בחר או הישאר במצב B וצמצם את השדה על-ידי התקרבות כדי להשיג מבט מקרוב על הלב.במידת הצורך, שפר את האיכות או הניגודיות של התמונה על-ידי הגדרת הטווח הדינמי ל- 45 עד 50 דציבלים. עבור אל פקדי מצב B באפשרות פקדים נוספים ולאחר מכן שמור את השינוי בהגדרות מוגדרות מראש של מצב. הקישו על קביעות מצב מוגדרות מראש לבחירת הגדרת רכישת התמונה הממוטבת בכל פעם לפני שתתחילו דימוי סדרה חדשה.לצלם תמונות רבות ככל הרצוי במישור הציר הארוך. לאחר מכן, עבור אל דופלר צבע לגילוי זרימת הדם ורכישה. באמצעות מסך המגע, למקם את הרביע על גבי שסתום atrioventricular ולהפוך את הזרימה אשר נבדל על ידי אות צבע אדום.צמצם את שטח הרביע ככל האפשר כדי להגדיל את קצב הפריימים. הפעל את גל הדופק דופלר לנוע כדי לדגום מהירות זרימת דם חדרית. מקם את שער נפח המדגם במרכז השסתום atrioventricular כדי לזהות את מהירות הזרימה המרבית.אות הצבע האדום הופך צהבהב יותר. כוונן את זווית גל הדופק על המסך באמצעות אצבעות כך שהוא יתיישר עם כיוון זרימת הדם. לחץ להתחיל או לעדכן כדי להתחיל לדגום את המהירות של דם זורם לתוך החדר.לקבוע את מהירות הזרימה על ידי הצבת צבע רביע דופלר בצומת בין החדר ואת bulbus ולהפוך את הזרימה. זה נבדל על ידי אות צבע כחול. מקם את שער נפח המדגם ממש לפני צומת בולבוס החדר ולהתאים את קו תיקון הזווית כדי להתאים את כיוון זרימת הדם.התאימו את קו הבסיס להעלאתו בלוח מהירות הזרימה כדי לזהות לחלוטין את פסגות האות ולעקוב אחריהן. ברגע רכישת התמונה הושלמה, להשתמש בכפית ולהעביר את הדגים לתוך מערכת קבועה aerated מים ללא tricaine ולתת לדגים להתאושש. כדי לעזור להתאוששות, להשפריץ מים שוב ושוב על הזימים באמצעות פיפטה העברה כדי לקדם aeration של העברת מים וחמצן.בדרך כלל לוקח 30 שניות עד שתי דקות לחדש את תנועת הזימים ואת השחייה. פתח את תוכנת ניתוח התמונות. בחרו תמונה ולחצו על סמל עיבוד התמונה.התאימו את הבהירות והניגודיות של התמונה כדי לאפשר הדמיה ברורה של קירות חדריים או תבנית זרימת דם. בעזרת התמונה במצב B, פתחו את הרשימה הנפתחת מהאפשרות של הציר הארוך הצנחני במדידות חבילת הלב. בחר מעקב LV ולעקוב אחר הקיר הפנימי חדרית ב systole ו diastole כדי להשיג את האזור חדרית systole ו diastole ונפח דיאסטולי ונפח סיסטולי סוף.במחקר זה, תמונות במצב B אפשרו מעקב אחר הקיר הפנימי בחדרים ב- systole ו diastole וקבלת נתונים ממדיים כגון ממדים תא וקיר. נתונים פונקציונליים הושגו גם כגון קצב לב, נפח שבץ, תפוקת לב, כמו גם פרמטרים של פונקציה סיסטולית חדרית כולל שינוי אזור שבר ושבר פליטה. מדידות ברמה של שסתום atrioventricular באמצעות תמונות מצב דופלר צבע סיפק גם זרימה חדרית ומהירות דם זרימה.בהתבסס על תמונת דופלר גל הדופק, ערך קצב הלב נוצר על ידי מעקב אחר שלוש פסגות זרימה אורטיות רצופות. הדבר החשוב ביותר הוא למקם את פלטפורמת אולטרסאונד ואת הדגים כראוי עבור הדמיה מדויקת כדי למזער את החשיפה דגים tricaine. שיטות נוספות לתמיכה בהליך זה כוללות אלקטרוקרדיוגרמה דגים לגילוי מהיר של תפקוד לקוי של הלב כמו הפרעות קצב או שיטות היסטולוגיה להערכת מבנה רקמת הלב או מוות של תאים.טכניקות אלה מאפשרות הערכה של תפקוד הלב של דגי הזברה ולהקים פנוטיפ לב במודלים למחלות לב זברה. זה גם מאפשר לבדוק תרופות חדשות, ללמוד פגיעה בלב ויכולת התחדשות. טריקאין MS-222 הוא גירוי בעור, בעין ובנשימה.בעת הכנת פתרון tricaine, ציוד מגן צריך לכלול מסכת אבק, מגן עיניים וכפפות.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Generation of Murine Cardiac Pacemaker Cell Aggregates Based on ES-Cell-Programming in Combination with Myh6-Promoter-Selection

דור של אגרגטים תא Murine לב קוצב לב בהתבסס על ES-Cell-תכנות בשילוב עם Myh6-יזם-בחירה

Treatment of the &#8220;sick sinus syndrome&#8221; is based on artificial pacemakers. These bear hazards such as battery failure and infections. Moreover, ...

Contrast Imaging in Mouse Embryos Using High-frequency Ultrasound

הדמיה ניגודיות בעכבר עוברים באמצעות תדר גבוהים אולטראסאונד

Ultrasound contrast-enhanced imaging can convey essential quantitative information regarding tissue vascularity and perfusion and, in targeted ...

Using Touch-evoked Response and Locomotion Assays to Assess Muscle Performance and Function in Zebrafish

באמצעות תגובת מגע עוררת ו תנועת מבחנים להעריך שריר ביצועים ופונקציות של דג זברה

Zebrafish muscle development is highly conserved with mammalian systems making them an excellent model to study muscle function and disease. Many ...

Building Finite Element Models to Investigate Zebrafish Jaw Biomechanics

בניית מודלים אלמנטים סופיים לחקור ביומכניקה לסת דג הזברה

Skeletal morphogenesis occurs through tightly regulated cell behaviors during development; many cell types alter their behavior in response to mechanical ...

Acute and Chronic Models of Hyperglycemia in Zebrafish: A Method to Assess the Impact of Hyperglycemia on Neurogenesis and the Biodistribution of Radiolabeled Molecules

מודלים חריפים כרוניים של היפרגליקמיה דג הזברה: שיטה להעריך את ההשפעה של היפרגליקמיה על נוירוגנזה ועל ביודיסטריבוצי של מולקולות Radiolabeled

Hyperglycemia is a major health issue that leads to cardiovascular and cerebral dysfunction. For instance, it is associated with increased neurological ...

A Novel Use of Three-dimensional High-frequency Ultrasonography for Early Pregnancy Characterization in the Mouse

שימוש הרומן של בדיקת אולטרה סאונד בתדירות גבוהה תלת מימדי אפיון בתחילת ההריון העכבר

High-frequency ultrasonography (HFUS) is a common method to non-invasively monitor the real-time development of the human fetus in utero. The mouse is ...

Fetal Mouse Cardiovascular Imaging Using a High-frequency Ultrasound (30/45MHZ) System

Fetal Mouse Cardiovascular Imaging Using a High-frequency Ultrasound 30/45MHZ System

הדמיה באמצעות מערכת סאונד בתדירות גבוהה (30 / 45MHZ) וכלי דם עוברי העכבר

Congenital heart defects (CHDs) are the most common cause of childhood morbidity and early mortality. Prenatal detection&#160;of the underlying molecular ...

High Frequency Ultrasound for the Analysis of Fetal and Placental Development In Vivo

High Frequency Ultrasound for the Analysis of Fetal and Placental Development In Vivo

אולטרסאונד בתדירות גבוהה לניתוח של התפתחות עוברית היפרדות In Vivo

Ultrasound imaging is a widespread method used to detect organ anomalies and tumors in human and animal tissues. The method is non-invasive, harmless, and ...

A Direct and Simple Method to Assess Drosophila melanogaster's Viability from Embryo to Adult

A Direct and Simple Method to Assess Drosophila melanogaster's Viability from Embryo to Adult

שיטה ישירה ופשוטה להערכת דרוזופילה מלאנוגסטרהכדאיות מעובר למבוגר

In Drosophila melanogaster, viability assays are used to determine the fitness of certain genetic backgrounds. Allelic variations can result in partial or ...

Whole-Mount In Situ Hybridization in Zebrafish Embryos and Tube Formation Assay in iPSC-ECs to Study the Role of Endoglin in Vascular Development

הר שלם בתוך היברידיזציה ב-Zebrafish עוברים ושיטת היווצרות צינור ב-iPSC-ECs ללמוד את התפקיד של אנגלין בפיתוח כלי דם

Vascular development is determined by the sequential expression of specific genes, which can be studied by performing in situ hybridization assays in ...