Name: characterization of amyloid structures in aging c. elegans using fluorescence lifetime imaging
Uploaded: 2020-03-27T15:00:00
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La cepa muscular-Q40-mRFP proporcionada por el CGC, que está financiado por la Oficina de Programas de Infraestructura de Investigación de la NIH (P40 OD010440). El neuronal-Q40-CFP fue un regalo amable del Laboratorio Morimoto. Reconocemos la beca DFG (KI-1988/5-1 a JK, NeuroCure PhD por el Clúster de Excelencia NeuroCure a MLP), EMBO (Beca a Corto Plazo a MLP) y la Compañía de Biólogos (becas de viaje a CG y MLP) para financiamiento. También reconocemos el centro de imágenes de microscopía de luz avanzada en el Centro de Medicina Molecular Max Delbrick, Berlín, por proporcionar la configuración para crear una imagen de las construcciones de YFP.

1. Sincronización de C. elegans
<ol><li>Sincronizar C. elegans ya sea a través de un tratamiento de solución de hipoclorito alcalino o mediante una simple puesta de huevos durante 4 h a 20 oC8.</li>
	<li>Cultivar y mantener nematodos a 20oC en placas de medio de crecimiento de nematodos (NGM) sembradas con OP50 E. coli según los procedimientos estándar9. Envejecer los nematodos hasta la etapa o día de desarrollo deseado. NOTA: En este p...

<ol>
	<li>Klaips, C. L., Jayaraj, G. G., Hartl, F. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathways+of+cellular+proteostasis+in+aging+and+disease.">Pathways of cellular proteostasis in aging and disease.</a> Journal of Cell Biology. 217 (1), 51-63 (2018).</li><li>Kikis, E. 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F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure-Specific+Intrinsic+Fluorescence+of+Protein+Amyloids+Used+to+Study+their+Kinetics+of+Aggregation.">Structure-Specific Intrinsic Fluorescence of Protein Amyloids Used to Study their Kinetics of Aggregation.</a> Bio-nanoimaging: Protein Misfolding and Aggregation. , 147-155 (2013).</li><li>Laine, R. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fast+Fluorescence+Lifetime+Imaging+Reveals+the+Aggregation+Processes+of+&#945;-Synuclein+and+Polyglutamine+in+Aging+Caenorhabditis+elegans.">Fast Fluorescence Lifetime Imaging Reveals the Aggregation Processes of &#945;-Synuclein and Polyglutamine in Aging Caenorhabditis elegans.</a> ACS Chemical Biology. 14 (7), 1628-1636 (2019).</li><li>Kelbauskas, L., Dietel, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Internalization+of+Aggregated+Photosensitizers+by+Tumor+Cells:+Subcellular+Time-resolved+Fluorescence+Spectroscopy+on+Derivatives+of+Pyropheophorbide-a+Ethers+and+Chlorin+e6+under+Femtosecond+One-+and+Two-photon+Excitation.">Internalization of Aggregated Photosensitizers by Tumor Cells: Subcellular Time-resolved Fluorescence Spectroscopy on Derivatives of Pyropheophorbide-a Ethers and Chlorin e6 under Femtosecond One- and Two-photon Excitation.</a> Photochemistry and Photobiology. 76 (6), 686-694 (2002).</li><li>Becker, W., Su, B., Holub, O., Weisshart, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FLIM+and+FCS+detection+in+laser-scanning+microscopes:+Increased+efficiency+by+GaAsP+hybrid+detectors.">FLIM and FCS detection in laser-scanning microscopes: Increased efficiency by GaAsP hybrid detectors.</a> Microscopy Research and Technique. 74 (9), 804-811 (2011).</li><li>Suhling, K., French, M. W., Phillips, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time-resolved+fluorescence+microscopy.">Time-resolved fluorescence microscopy.</a> Photochemical and Photobiological Sciences. 4 (1), 13-22 (2005).</li></ol>

El protocolo presentado aquí describe una técnica basada en microscopía para identificar especies agregadas en el sistema modelo C. elegans. FLIM puede caracterizar con precisión la presencia de especies agregadas y solubles fusionadas a un fluoróforo a través de la medición de sus desintegraciones de vida útil de fluorescencia. Cuando una proteína de fusión comienza a agregar su vida útil promedio registrada cambiará de un valor más alto a un valor más bajo16. La propensió...

La agregación de proteínas ocurre tanto en el envejecimiento como en la enfermedad. Los caminos que conducen a la formación y deposición de grandes amiloides o inclusiones amorfas son difíciles de seguir y su cinética es igualmente difícil de desentrañar. Las proteínas pueden doblarse en sí debido a mutaciones intrínsecas dentro de sus secuencias de codificación, como en el caso de las enfermedades genéticas. Las proteínas también se multiplican por error porque la red de proteostasis (PN) que las mantiene solubles y correctamente plegadas se deteriora, como sucede durante el envejecimiento. El PN incluye chaperones moleculares y maquinarias de degradación y es responsable de la biogénesis, plegado, tráfico y degradación de proteínas1.
C. elegans ha surgido como un modelo para estudiar el envejecimiento y la enfermedad debido a su corta vida útil, naturaleza isogénica y facilidad de manipulación genética. Se han creado varias cepas transgénicas de C. elegans que expresan proteínas causantes de enfermedades humanas en tejidos vulnerables. Es importante destacar que muchas de las cepas que contienen proteínas propensas a la agregación recapitulan el sello distintivo de los trastornos amiloide, la formación de grandes inclusiones. Gracias al cuerpo transparente de C. elegans, estos agregados se pueden visualizar in vivo, no invasiva y no destructivamente2. Generar cualquier proteína de interés (POI) en fusión con un fluoróforo permite investigar sus ubicaciones, tráfico, red de interacción y destino general.
Presentamos un protocolo para monitorear la agregación de proteínas causantes de enfermedades en C. elegans vivo y envejecimiento a través de la microscopía de imágenes de por vida de fluorescencia (FLIM). FLIM es una técnica poderosa basada en la vida útil de un fluoróforo, en lugar de sus espectros de emisión. La vida útil (tau, ) se define como el tiempo promedio requerido por un fotón para decaer desde su estado excitado hasta su estado de suelo. La vida útil de una molécula dada se calcula con la técnica de dominio del tiempo del recuento de fotones individuales correlacionados por el tiempo (TCSPC). En TCSPC-FLIM, la función de descomposición fluorescente se obtiene excitando el fluoróforo con pulsos láser cortos y de alta frecuencia y midiendo los tiempos de llegada del fotón emitido a un detector con respecto a los pulsos. Al escanear una muestra, se crea una matriz de datos tridimensional para cada píxel: la matriz incluye información sobre la distribución de los fotones en sus coordenadas espaciales x,y y su curva de decaimiento temporal. Por lo tanto, una muestra determinada se convierte en un mapa de vidas útiles que revela información sobre la estructura, la unión y el entornodela proteína3,4. Cada proteína fluorescente posee una vida útil intrínseca y definida con precisión, generalmente de unos pocos nanosegundos (ns), dependiendo de sus propiedades fisioquímicas. Es importante destacar que la vida útil de un fluoróforo es independiente de su concentración, intensidad fluorescente y de la metodología de imagen. Sin embargo, dentro de un sistema biológico, puede verse afectado por factores ambientales como el pH, la temperatura, las concentraciones ióndas, la saturación de oxígeno y sus socios de interacción. La vida útil también es sensible a los cambios estructurales internos y la orientación. La fusión de un fluoróforo en un PDI da lugar a un cambio en su vida útil y, en consecuencia, a información sobre el comportamiento de la proteína fusionada. Cuando un fluoróforo está rodeado o encapsulado en un entorno estrechamente unido, como las hojas beta antiparalelas de una estructura amiloide, pierde energía de forma no radiativa, un proceso conocido como temple5. El enfriamiento del fluoróforo da como resultado un acortamiento de su vida útil aparente. Cuando es soluble, la vida útil de una proteína se mantendrá más cerca de su valor original y más alto. Por el contrario, cuando una proteína comienza a acumularse, su vida útil inevitablemente cambiará a un valor más bajo6,7. Por lo tanto, se hace posible monitorear la propensión a la agregación de cualquier proteína formador de amiloide a diferentes edades en C. elegans vivos.
Aquí describimos un protocolo para analizar la agregación de una proteína de fusión que comprende diferentes estiramientos de poliglutamina (CAG, Q) (Q40, Q44 y Q85). Ilustramos cómo la técnica se puede aplicar por igual a diferentes fluoróforos, como la proteína fluorescente cian (CFP), la proteína fluorescente amarilla (YFP) y la proteína fluorescente roja monomérica (mRFP); y en todos los tejidos de C. elegans,incluyendo las neuronas, los músculos y el intestino. Además, en el contexto de la proteostasis, FLIM es una herramienta muy útil para observar los cambios en el agotamiento de los chaperones moleculares. Derribar uno de los chaperones moleculares clave, la proteína de choque térmico 1 (hsp-1), a través de la interferencia de ARN produce un desdoblamiento prematuro de las proteínas. El aumento de la carga de agregación como resultado del envejecimiento, la enfermedad o los chaperones deficientes, se mide entonces como una disminución en la vida útil de la fluorescencia.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Agar-Agar Kobe I</td>
			<td>Carl Roth GmbH + Co. KG</td>
			<td>5210.2</td>
			<td>NGM component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ahringer Library hsp-1 siRNA</td>
			<td>Source BioScience UK Limited</td>
			<td>F26D10.3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ampicillin</td>
			<td>Carl Roth GmbH + Co. KG</td>
			<td>K029.3</td>
			<td>Antibiotic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B&#38;H DCS-120 SPC-150</td>
			<td>Becker &#38; Hickl GmbH</td>
			<td></td>
			<td>FLIM Aquisition software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B&#38;H SPC830-SPC Image</td>
			<td>Becker &#38; Hickl GmbH</td>
			<td></td>
			<td>FLIM Aquisition software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Bacto Peptone</td>
			<td>BD-Bionsciences</td>
			<td>211677</td>
			<td>NGM component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C. elegans iQ44-YFP</td>
			<td>CAENORHABDITIS GENETICS CENTER (CGC)</td>
			<td>OG412</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C. elegans iQ85-YFP</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Kind gift from Morimoto Lab</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C. elegans mQ40-RFP</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Kind gift from Morimoto Lab</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C. elegans nQ40-CFP</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Kind gift from Morimoto Lab</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deckgl&#228;ser-18x18mm</td>
			<td>Carl Roth GmbH + Co. KG</td>
			<td>0657.2</td>
			<td>Cover slips</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropyl-&#946;-D-thiogalactopyranosid (IPTG)</td>
			<td>Carl Roth GmbH + Co. KG</td>
			<td>2316.4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica M165 FC</td>
			<td>Leica Camera AG</td>
			<td></td>
			<td>Mounting Stereomicroscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica TCS SP5</td>
			<td>Leica Camera AG</td>
			<td></td>
			<td>Confocal Microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Levamisole Hydrochloride</td>
			<td>AppliChem GmbH</td>
			<td>A4341</td>
			<td>Anesthetic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OP50 Escherichia coli</td>
			<td>CAENORHABDITIS GENETICS CENTER (CGC)</td>
			<td>OP50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PicoQuant PicoHarp300</td>
			<td>PicoQuant GmbH</td>
			<td></td>
			<td>FLIM Aquisition software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Azide</td>
			<td>Carl Roth GmbH + Co. KG</td>
			<td>K305.1</td>
			<td>Anesthetic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Carl Roth GmbH + Co. KG</td>
			<td>3957.2</td>
			<td>NGM component</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard-Objekttr&#228;ger</td>
			<td>Carl Roth GmbH + Co. KG</td>
			<td>0656.1</td>
			<td>Glass slides</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Universal Agarose</td>
			<td>Bio &#38; Sell GmbH</td>
			<td>BS20.46.500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss AxioObserver.Z1</td>
			<td>Carl Zeiss AG</td>
			<td></td>
			<td>Confocal Microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss LSM510-Meta NLO</td>
			<td>Carl Zeiss AG</td>
			<td></td>
			<td>Confocal Microscope</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

characterization of amyloid structures in aging c. elegans using fluorescence lifetime imaging

Las fibrillas amiloideas están asociadas con una serie de enfermedades neurodegenerativas como la enfermedad de Huntington, Parkinson o la enfermedad de Alzheimer. Estas fibrillas amiloideas pueden secuestrar proteínas metasógenas endógenas, así como componentes de la red de proteostasis (PN) y así exacerbar el desdoblamiento de proteínas en la célula. Hay un número limitado de herramientas disponibles para evaluar el proceso de agregación de proteínas amiloideas dentro de un animal. Presentamos un protocolo para la microscopía de por vida fluorescencia (FLIM) que permite la monitorización, así como la cuantificación de la fibrilización amiloide en células específicas, como las neuronas, de manera no invasiva y con la progresión del envejecimiento y la perturbación de el PN. FLIM es independiente de los niveles de expresión del fluoróforo y permite un análisis del proceso de agregación sin más tinción o blanqueo. Los fluoróforos se calman cuando se encuentran cerca de estructuras amiloide, lo que resulta en una disminución de la vida útil de la fluorescencia. El temple se correlaciona directamente con la agregación de la proteína amiloide. FLIM es una técnica versátil que se puede aplicar para comparar el proceso de fibrilización de diferentes proteínas amiloideas, estímulos ambientales o fondos genéticos in vivo de una manera no invasiva.

El protocolo muestra cómo monitorear con precisión la formación de especies agregadas en C. elegans vivos,tanto durante su envejecimiento natural como cuando se somete al estrés. Seleccionamos cuatro cepas diferentes de nematodos transgénicos que expresan proteínas de poliglutamina de repeticiones 40Q, 44Q o 85Q. Estas proteínas se sintetizan en diferentes tejidos y se fusionaron a diferentes fluoróforos. Las cepas de C. elegans expresaron Q40-mRFP en los múscul...

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Characterization of Amyloid Structures in Aging C. Elegans Using Fluorescence Lifetime Imaging

La fluorescencia de por vida de los monitores de imágenes, cuantifica y distingue las tendencias de agregación de las proteínas en los modelos de enfermedad de C. elegans, vivos, envejecidos y estresados.

Caracterización de estructuras amiloideas en el envejecimiento C. Elegans usando imágenes de por vida de fluorescencia

Amyloid fibrils are associated with a number of neurodegenerative diseases such as Huntington&#39;s, Parkinson&#39;s, or Alzheimer&#39;s disease. These ...

El método nos permite distinguir claramente las estructuras integradas de proteína amiloide de las contrapartes solubles e incluso acumuladas. La técnica se realiza in vivo de manera no invasiva con pocos o ningún efecto secundario tóxico. Como depende de las propiedades fluorescentes del propio fluoróforo, es altamente robusto y reproducible con el tiempo.FLIM se ha utilizado en el campo del diagnóstico de cáncer. Sin embargo, lo empleamos para estudiar los mecanismos básicos de agregación de proteínas que son realmente relevantes para las enfermedades neurodegenerativas. La metodología se puede utilizar en el campo de la agregación de proteínas.Siempre y cuando la proteína asociada a la enfermedad se etiquete con una sonda fluorescente, se puede rastrear y monitorear con el tiempo. Los compuestos y estrategias que promueven o impiden la agregación se pueden estudiar con éxito. Cualquier sistema biológico que permita ser visualizado por microscopía de luz es adecuado para FLIM ya sea in vivo o ex vivo, por ejemplo en cultivo celular, en muestras fijadas o permeabilizadas y en cualquier medio necesario.Asegúrese de probar las propiedades del fluoróforo seleccionado dentro del nematodo antes de obtener datos experimentales y de probar que la configuración es completamente funcional antes de adquirir mediciones. Para empezar, crecer y mantener los nematodos a 20 grados centígrados en las placas NGM. Envejece los nematodos hasta el cuarto día de vida como los adultos jóvenes y el día ocho de la vida como los adultos mayores.El día de la toma de imágenes, comience preparando las diapositivas de imágenes. Coloque la agarosa y el agua destilada doble a una concentración de 3% de peso en volumen. Transfiéralo a un microondas para derretirlo y luego déjalo enfriar ligeramente.Cortar la punta de una punta de pipeta de un mililitro y tomar aproximadamente 200 microlitros de la agarosa derretida. Pipetear la agarosa sobre un tobogán de vidrio limpio e inmediatamente colocar una segunda en la parte superior evitando la formación de burbujas. Deje que las diapositivas se sequen y retire suavemente el portaobjetos de vidrio superior.El resultado es un portaobjetos de vidrio con una superficie de agarosa uniforme donde se colocarán los nematodos. Una vez que la configuración de imágenes esté lista para usar, trabajando bajo un microscopio estéreo, coloque una gota de 10 microlitrotro de compuesto anestésico en una almohadilla de agarosa y transfiera suavemente de cinco a 10 nematodos a ella. Use una punta para pestañas para separar los nematodos.Manténgalos juntos pero sin tocarlos para facilitar la localización de los nematodos durante la adquisición de la imagen. Superponga cuidadosamente los nematodos con un cubreobjetos. Dentro de una hora después del montaje, tome las medidas.Asegúrese de que los nematodos estén completamente inmóviles. Abra el software de adquisición FLIM. Busque el botón de pestaña y pulse Habilitar salidas.Coloque la corredera con los C.elegans montados en el escenario y utilizando una lente de aumento 10X en modo de transmisión, localice la posición de los nematodos en la diapositiva. Retire la corredera, cambie el objetivo a una lente de aumento 63X y aplique el medio de inmersión requerido. Coloque la diapositiva en el escenario y localice los nematodos.Comience a escanear la muestra. Seleccione una región de interés y céntrese en su plano de proyección máximo. En la interfaz del software FLIM, previsualice el número de fotones detectados.El valor de ADC debe estar entre uno por 10 y el cuarto y uno por 10 y el quinto. Si es necesario, cambie el enfoque en un plano diferente o aumente la potencia del láser para recoger más fotones. Asegúrese de evitar el amontonamiento de fotones, pero recopile una cantidad suficiente de fotones para crear un buen ajuste y medición de por vida.En la barra de menús, seleccione la pestaña para establecer los parámetros de adquisición. Seleccione la sincronización de escaneado para permitir la detección de un solo fotón. Establezca la adquisición en una cantidad fija de tiempo o un número fijo de fotones.Pulse Start para comenzar la adquisición. Abra el software e importe archivos de datos FLIM a través de un archivo, cargue los datos de FLIM. Cargue todas las muestras de una condición incluso si se obtienen en diferentes sesiones y de diferentes repeticiones biológicas.Si es necesario, segmente para señalar nematodos para muchas imágenes FLIM a través de segmentación, gestor de segmentación. Arrastre la herramienta de recorte alrededor del área de interés hasta que se resalte. Una vez completado, pulse OK. Seleccione una región pequeña donde aparezca la imagen basada en intensidad de un C.elegans.La curva de descomposición de esa región aparece en la gran ventana de descomposición en el lado derecho de la interfaz. Para extrapolar la duración, en la pestaña de datos, establezca un valor mínimo integrado arbitrario entre 40 y 300 para excluir los píxeles que son demasiado tenues para producir un buen ajuste. Seleccione un mínimo de tiempo y un número máximo de tiempo para limitar la señal FLIM a estos valores.No cambie los recuentos preestablecidos de fotón de uno. Introduzca la tasa de repetición en los megahercios del láser utilizado durante la adquisición. Introduzca un valor máximo de puerta para excluir todos los píxeles saturados.En la pestaña Duración, seleccione un empalme global que desee utilizar. No cambie ningún otro parámetro excepto el número de selección exponencial si se sabe que la decadencia de fluorescencia elegida es multi exponencial y muestra más de una sola vida útil. Cargue el IRF vía el menú IRF.Para estimar el desplazamiento IRF, seleccione IRF, calcule el desplazamiento IRF. Un conjunto de valores aparece automáticamente en la ficha IRF. Una vez establecido esto, no cambie ningún otro parámetro de esta pestaña.Una vez establecidos todos los parámetros, pulse el conjunto de datos de ajuste. El ajuste resultante resaltado en una línea azul debe superponerse con todos los eventos. Un buen ajuste se obtiene cuando todos los eventos están alineados a lo largo del ajuste.Haga clic en la pestaña de parámetros situada en los menús superiores derecho de la interfaz del software y seleccione estadística, media ponderada y compruebe que el valor del cuadrado chi está lo más cerca posible de uno. El valor de vida útil de la imagen seleccionada se revela así como tau uno. Exportar cualquier información de interés a través de archivo, exportar imágenes de intensidad, ajustar tabla de resultados, imágenes, histogramas.Aquí se muestran mapas representativos de C.elegans que expresan el musculoso Q40 RFP el día cuatro o el octavo día de la vida. El tramo Q más largo del IQ85 era más propenso a la agregación y mostraba un cambio de vida de fluorescencia en el histograma ya en el cuarto día de la vida. De hecho, en el cuarto día, se observó formación de focos para IQ85 mientras todavía estaba ausente en IQ44.Al envejecer, sin embargo, IQ44 también exhibió formación de focos y por lo tanto una vida útil de fluorescencia reducida. Por último, no se detectó la formación de focos ni se disminuyó la vida útil de la fluorescencia en la cepa NQ40CFP. Para esta cepa, sólo hubo cambios sutiles no significativos en la vida media de la fluorescencia al envejecer.Una vez establecido el modelo de nematodo, la cantidad de fotón recogido es primordial para obtener un buen ajuste de por vida. El método se puede unir aún más con diferentes técnicas como la transferencia de energía por resonancia Forster, FRET, recuperación de fluorescencia después de la fotoblancada, FRAP o medición. Todas estas adaptaciones proporcionan información adicional sobre las propiedades de los estudios proteicos y su forma agregada.Dentro del campo de la agregación de proteínas y la homeostasis proteica, la técnica permitió investigar cualquier perturbación impuesta al sistema, la distribución de diferentes especies de proteínas, y el tráfico y en general la diferencia y importancia de las fracciones de proteínas solubles e insolubles dentro del organismo vivo. El azida sódica anestésica es tóxica y debe manipularse con guantes y gafas y diluirse bajo una campana de humo. Debido a que la técnica está basada en microscopía, es importante seguir todas las advertencias relacionadas con el trabajo con láseres.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Characterization of Amyloid Structures in Aging C. Elegans Using Fluorescence Lifetime Imaging

Imaging Amyloid Tissues Stained with Luminescent Conjugated Oligothiophenes by Hyperspectral Confocal Microscopy and Fluorescence Lifetime Imaging

Imagen tejidos amiloides manchado con Oligothiophenes conjugado luminiscente por hiperespectral Confocal la microscopia y la proyección de imagen de toda la vida de la fluorescencia

Proteins that deposit as amyloid in tissues throughout the body can be the cause or consequence of a large number of diseases. Among these we find ...

Investigación

Bioquímica

Structural Characterization of Mannan Cell Wall Polysaccharides in Plants Using PACE

Caracterización estructural de polisacáridos de pared celular mananos en plantas con ritmo

Plant cell wall polysaccharides are notoriously difficult to analyze, and most methods require expensive equipment, skilled operators, and large amounts ...

A Simple Method for High Throughput Chemical Screening in Caenorhabditis Elegans

A Simple Method for High Throughput Chemical Screening in Caenorhabditis Elegans

Un método Simple para la detección química de alto rendimiento en Caenorhabditis Elegans

Caenorhabditis elegans is a useful organism for testing chemical effects on physiology. Whole organism small molecule screens offer significant advantages ...

Growing Protein Crystals with Distinct Dimensions Using Automated Crystallization Coupled with In Situ Dynamic Light Scattering

Growing Protein Crystals with Distinct Dimensions Using Automated Crystallization Coupled with In Situ Dynamic Light Scattering

Cristales de proteína creciente con distintas dimensiones usando automatizado de cristalización juntada con In Situ dispersión ligera dinámica

The automated crystallization device is a patented technique1 especially developed for monitoring protein crystallization experiments with the aim to ...

Use of Two Dimensional Semi-denaturing Detergent Agarose Gel Electrophoresis to Confirm Size Heterogeneity of Amyloid or Amyloid-like Fibers

Uso de dos electroforesis del Gel de la agarosa detergente semi desnaturalización Dimensional para confirmar la heterogeneidad de tamaño de las fibras amiloides o amiloide-como

Amyloid or amyloid-like fibers have been associated with many human diseases, and are now being discovered to be important for many signaling pathways. ...

Calibration-free In Vitro Quantification of Protein Homo-oligomerization Using Commercial Instrumentation and Free, Open Source Brightness Analysis Software

Calibration-free In Vitro Quantification of Protein Homo-oligomerization Using Commercial Instrumentation and Free, Open Source Brightness Analysis Software

Calibración-libre In Vitro cuantificación de proteína Homo-Oligomerización utilizando instrumentación comercial y Software de análisis de brillo libre de código abierto

Number and brightness is a calibration-free fluorescence fluctuation spectroscopy (FFS) technique for detecting protein homo-oligomerization. It can be ...

Rapid Fluorescence-based Characterization of Single Extracellular Vesicles in Human Blood with Nanoparticle-tracking Analysis

Caracterización basada en fluorescencia rápida de solo vesículas extracelulares en la sangre humana con el análisis de seguimiento de nanopartículas

Extracellular vesicles (EVs), including exosomes, are specialized membranous nano-sized vesicles found in bodily fluids that are constitutively released ...

In Vivo Calcium Imaging in C. elegans Body Wall Muscles

In Vivo Calcium Imaging in C. elegans Body Wall Muscles

In Vivo Calcium Imaging en C. elegans Body Wall Muscles

The model organism C. elegans provides an excellent system to perform in vivo calcium imaging. Its transparent body and genetic manipulability allow for ...

Interactions with and Membrane Permeabilization of Brain Mitochondria by Amyloid Fibrils

Interacciones con y la permeabilización de membrana de las mitocondrias cerebrales por Amiloide Fibrils

A growing body of evidence indicates that membrane permeabilization, including internal membranes such as mitochondria, is a common feature and primary ...

SUMO-Binding Entities (SUBEs) as Tools for the Enrichment, Isolation, Identification, and Characterization of the SUMO Proteome in Liver Cancer

SUMO-Binding Entities SUBEs as Tools for the Enrichment, Isolation, Identification, and Characterization of the SUMO Proteome in Liver Cancer

Entidades de unión SUMO (SUBE) como herramientas para el enriquecimiento, aislamiento, identificación y caracterización del proteome SUMO en cáncer de hígado

Post-translational modification is a key mechanism regulating protein homeostasis and function in eukaryotic cells. Among all ubiquitin-like proteins in ...