Name: detection of protein s-acylation using acyl-resin assisted capture
Uploaded: 2020-04-10T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Detection of Protein S-Acylation using Acyl-Resin Assisted Capture at JoVE.com

इस कार्य को राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान अनुदान 5R01GM115446 और 1R01GM130840 द्वारा समर्थित किया गया था।

इस प्रोटोकॉल में इस्तेमाल चूहों NIH दिशा निर्देशों के अनुसार इच्छामृत्यु थे । ह्यूस्टन में टेक्सास स्वास्थ्य विज्ञान केंद्र विश्वविद्यालय में पशु कल्याण समिति सभी पशु काम को मंजूरी दे दी ।
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यहां, हमने माउस ऊतक से प्राप्त सुसंस्कृत मानव कोशिकाओं और प्राथमिक कोशिकाओं दोनों में चयनित प्रोटीन के एस-acylation का पता लगाने के लिए acyl-RAC परख का सफलतापूर्वक उपयोग किया। यह विधि सरल, संवेदनशील है, और मानक जै?...

एस-एसिलेशन एक रिवर्सिबल पोस्ट-ट्रांसलेशनल संशोधन है जिसमें एक लेबिल थिओस्टर बॉन्ड1के माध्यम से एक लक्ष्य प्रोटीन पर एक आंतरिक साइस्टीन अवशेषों में फैटी एसिल श्रृंखला को जोड़ना शामिल है। यह पहली बार palmitate, एक संतृप्त 16 कार्बन फैटी एसिड2के साथ प्रोटीन के संशोधन के रूप में सूचित किया गया था, और इसलिए इस संशोधन अक्सर एस-palmitoylation के रूप में संदर्भित किया जाता है । पाजिटेट के अलावा, प्रोटीन को विभिन्न प्रकार के लंबे और छोटे संतृप्त (माइरिस्टेट और स्टीरेट), मोनोअनसैचुरेटेड (ओलेट) और पॉलीअनसैचुरेटेड (अराचिदान और आइकोसैपेंटानोएट) फैटी एसिड3,,4,,55,6,,7द्वारा प्रतिवर्तित रूप से संशोधित किया जा सकता है। यूकेरियोटिक कोशिकाओं में, एस-एसिलेशन को डीएचसी प्रोटीन एसिलट्रांसफरेस के नाम से जाने जाने वाले एंजाइमों के परिवार द्वारा उत्प्रेरित किया जाता है और साइस्टीन डीसिलेशन की रिवर्स प्रतिक्रिया प्रोटीन थिओस्टेरेनेस द्वारा उत्प्रेरित होती है, जिनमें से अधिकांश अभी भी रहस्यपूर्ण8रहते हैं।
थिओएस्टर बॉन्ड की लेबिलिटी इस लिपिड संशोधन को उलटा बनाती है, जिससे यह प्रोटीन क्लस्टरिंग, प्लाज्मा झिल्ली स्थानीयकरण, इंट्रासेलर ट्रैफिकिंग, प्रोटीन-प्रोटीन इंटरैक्शन और प्रोटीन स्थिरता9,,10को गतिशील रूप से विनियमित कर सकता है । नतीजतन, एस-acylation हंटिंगटन रोग, अल्जाइमर रोग और कैंसर के कई प्रकार (प्रोस्टेट, गैस्ट्रिक, मूत्राशय, फेफड़ों, कोलोरेक्टल) सहित कई विकारों से जोड़ा गया है, जो विश्वसनीय तरीकों के विकास के लिए इस के बाद अनुवाद प्रोटीन संशोधन11का पता लगाने की आवश्यकता है ।
रेडियोधर्मी([3एच],[14सी] या[125I]) के साथ मेटाबोलिक लेबलिंग प्रोटीन एस-एसिलेशन12,,13,,14परख के लिए विकसित पहले दृष्टिकोणों में से एक थी। हालांकि, रेडियोलेबलिंग आधारित तरीके स्वास्थ्य चिंताओं को पेश करते हैं, बहुत संवेदनशील नहीं हैं, समय लेने वाली हैं, और केवल अत्यधिक प्रचुर मात्रा में प्रोटीन15के लिपिडेशन का पता लगाते हैं। रेडियोलेबलिंग के लिए एक तेज और गैर रेडियोधर्मी विकल्प बायोऑर्थोगोनल फैटी एसिड जांच के साथ मेटाबोलिक लेबलिंग है, जिसका उपयोग नियमित रूप से प्रोटीन एस-एसिलेशन16की गतिशीलता को परख करने के लिए किया जाता है। इस विधि में, एक रासायनिक रिपोर्टर (एल्किन या अजाइड समूह) के साथ एक फैटी एसिड को प्रोटीन एसिलट्रांसफरेज द्वारा एस-एसाइटेड प्रोटीन में शामिल किया जाता है। अजाइड-अल्किन ह्यूज़न साइक्लोएडिक्शन रिएक्शन (क्लिक केमिस्ट्री) का उपयोग एक कार्यात्मक समूह को संलग्न करने के लिए किया जा सकता है, जैसे फ्लोरोफोर या बायोटिन, एकीकृत फैटी एसिड में, जो एस-एसाइटेड प्रोटीन17,,18,,19का पता लगाने की अनुमति देता है।
Acyl-biotin एक्सचेंज (ABE) एस-acylated प्रोटीन की कैप्चर और पहचान के लिए बड़े पैमाने पर उपयोग किए जाने वाले जैव रासायनिक तरीकों में से एक है जो ऊतक नमूनों के लिए अनुपयुक्तता जैसे मेटाबोलिक लेबलिंग की कुछ कमियों को दरकिनार करता है15। इस विधि को विभिन्न जैव नमूनों में एस-एसिलेशन के विश्लेषण के लिए लागू किया जा सकता है, जिसमें ऊतक और जमे हुए सेल नमूने शामिल हैं,जिनमें 20,,21 शामिलहैं। यह विधि एसिल समूह और तटस्थ हाइड्रोक्सिलमाइन द्वारा साइस्टीन अवशेषों के बीच थिओस्टर बांड के चयनात्मक दरार पर आधारित है। इसके बाद मुक्त थिओल समूहों को थिओल-रिएक्टिव बायोटिन डेरिवेटिव के साथ कैप्चर किया जाता है । उत्पन्न बायोटिनी प्रोटीन तब स्ट्रेप्टाविडिन अगारोज का उपयोग करके आत्मीयता-शुद्ध होते हैं और इम्यूनोलोटिंग द्वारा विश्लेषण किया जाता है।
बाद में एक वैकल्पिक दृष्टिकोण को एक थिओल-रिएक्टिव रिसिन22,,23द्वारा मुफ्त साइस्टीन के प्रत्यक्ष संयोजन के साथ बायोटिनीलेशन कदम को बदलने के लिए शुरू किया गया था । इस विधि में आबे की तुलना में कम कदम हैं और इसी तरह नमूनों की एक विस्तृत श्रृंखला में प्रोटीन एस-एसिलेशन का पता लगाने के लिए उपयोग किया जा सकता है1।
Acyl-आरएसी 4 मुख्य चरणों के होते हैं(चित्रा 1), 1. मुक्त थिओल समूहों को अवरुद्ध करना; 2. साइस्टीन थिओल माइन (एचएच) के साथ साइस्टीन-एसिल थिओस्टर बॉन्ड का चयनात्मक दरार साइस्टीन थिओल समूहों को बेनकाब करने के लिए; 3. थिओल-रिएक्टिव रिसिज़न के साथ लिपिडाय साइस्टीन ्स पर कब्जा; 4. बफर को कम करने के साथ एल्यूशन के बाद एस-एसाइटेड प्रोटीन का चयनात्मक संवर्धन।
इसके बाद पकड़े गए प्रोटीन का विश्लेषण इम्यूनोब्लोटिंग द्वारा किया जा सकता है या बड़े पैमाने पर स्पेक्ट्रोमेट्री (एमएस) आधारित प्रोटेओमिक्स के अधीन किया जा सकता है ताकि विभिन्न प्रजातियों और ऊतकों में एस-एसाइटेटेड प्रोटेम का आकलन किया जा सके22,24,25। व्यक्तिगत एस-एसिलेशन साइटों को कैप्चर किए गए प्रोटीन के ट्राइप्सिन पाचन और एलसी-एमएस/एमएस22द्वारा परिणामी पेप्टाइड्स के विश्लेषण द्वारा भी पहचाना जा सकता है। यहां, हम प्रदर्शित करते हैं कि कोशिका रेखा और ऊतक नमूने दोनों में कई प्रोटीन के एस-acyation का एक साथ पता लगाने के लिए acyl-RAC का उपयोग कैसे किया जा सकता है।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:745px;" width="746">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">cOmplete Protease Inhibitor Cocktail tablets</td>
			<td style="width:244px;">Sigma</td>
			<td align="right" style="width:119px;">11836170001</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Eppendorf Centrifuge 5424</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td align="right" style="width:119px;">22620444</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hydroxylamine (HAM)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td align="right" style="width:119px;">159417</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Methyl methanethiosulfonate (MMTS)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td align="right" style="width:119px;">64306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mini tube rotator</td>
			<td>LabForce</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ML211</td>
			<td>Cayman</td>
			<td align="right" style="width:119px;">17630</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Multi-Therm Cool-Heat-Shake</td>
			<td>Benchmark Scientific</td>
			<td style="width:119px;">H5000-HC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">n-Dodecyl &#946;-D-maltoside (DDM)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td style="width:119px;">D641</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phosphatase Inhibitor Cocktail 2</td>
			<td>Sigma</td>
			<td style="width:119px;">P5726</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Thiopropyl-Sepharose 6B (TS)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td style="width:119px;">T8387</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ultrasonics Quantrex Sonicator</td>
			<td>L &#38; R</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

detection of protein s-acylation using acyl-resin assisted capture

प्रोटीन एस-एसिलेशन, जिसे एस-पामिटोइलेशन भी कहा जाता है, एक लेबिल थिओस्टर बॉन्ड के माध्यम से लंबी श्रृंखला फैटी एसिड के साथ साइस्टीन अवशेषों का एक रिवर्सिबल पोस्ट-ट्रांसलेशनल संशोधन है। एस-acylation, जो एक व्यापक नियामक तंत्र के रूप में उभर रहा है, प्रोटीन की जैविक गतिविधि के लगभग सभी पहलुओं को मिलाना कर सकते हैं, जटिल गठन से प्रोटीन तस्करी और प्रोटीन स्थिरता के लिए । प्रोटीन एस-एसिलेशन के जैविक कार्य की समझ में हाल की प्रगति मुख्यतः उपन्यास जैव रासायनिक उपकरणों के विकास के कारण हासिल की गई थी, जिससे विभिन्न प्रकार के जैविक नमूनों में प्रोटीन एस-एसिलेशन का मजबूत और संवेदनशील पता लगाया जा सकता है। यहां, हम एसिल रेसिन-असिस्टेड कैप्चर (Acyl-आरएसी) का वर्णन करते हैं, जो हाल ही में विकसित विधि है जो थिओल-प्रतिक्रियाशील सेफलोस मोतियों द्वारा एंडोजेन्सी एस-एसाइटेड प्रोटीन के चयनात्मक कैप्चर पर आधारित है। मौजूदा दृष्टिकोणों की तुलना में, Acyl-RAC कम कदम की आवश्यकता है और अधिक विश्वसनीय परिणाम उपज जब उपन्यास एस-acylation लक्ष्यों की पहचान के लिए बड़े पैमाने पर स्पेक्ट्रोमेट्री के साथ मिलकर कर सकते हैं । इस तकनीक में एक प्रमुख सीमा एक ही thioester बांड के माध्यम से cysteines से जुड़ी फैटी एसिड प्रजातियों के बीच भेदभाव करने की क्षमता की कमी है ।

ऊपर वर्णित प्रोटोकॉल का पालन करते हुए, हमने पहले न्यायक कोशिकाओं में कई प्रोटीनों के एस-acylation का पता लगाने के लिए acyl-RAC का उपयोग किया, जो मूल रूप से टी सेल ल्यूकेमिया रोगी27के परिधीय रक्त से प्राप्त ?...

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Detection of Protein S-Acylation using Acyl-Resin Assisted Capture

Acyl-आरएसी (Acyl-Resin असिस्टेड कैप्चर) विभिन्न प्रकार के जैविक नमूनों में साइस्टीन अवशेषों (एस-एसिलेशन) के रिवर्सिबल लिपिड संशोधन का पता लगाने के लिए विधि करने के लिए एक अत्यधिक संवेदनशील, विश्वसनीय और आसान है।

Acyl-राल सहायता प्राप्त कब्जा का उपयोग कर प्रोटीन एस-Acylation का पता लगाने

Protein S-acylation, also referred to as S-palmitoylation, is a reversible post-translational modification of cysteine residues with long-chain fatty ...

एसील-राल असिस्टेड कैप्चर या एसील-आरएसी एक संवेदनशील और विश्वसनीय तरीका है जिसका उपयोग विभिन्न प्रकार के जैविक नमूनों में प्रोटीन एस-एकिलेशन का पता लगाने के लिए किया जा सकता है। यह प्रोटोकॉल मेटाबोलिक लेबलिंग और रेडियो लेबलिंग की कुछ सीमाओं को नजरअंदाज करता है, और कई प्रोटीन के एस-एकिलेशन का एक साथ पता लगाने की अनुमति देता है। न केवल जीवित कोशिकाओं बल्कि प्राथमिक ऊतकों और जमे हुए नमूनों को भी।एस-एकिलेशन प्रोटीन तस्करी, प्लाज्मा झिल्ली लक्ष्यीकरण, सिग्नल ट्रांसडक्शन, आयरन ट्रांसपोर्ट और प्रोटीन-प्रोटीन इंटरैक्शन जैसी विभिन्न सेलुलर प्रक्रियाओं को विनियमित कर सकता है। थिओस्टर बॉन्ड के कुशल और विशिष्ट दरार को सुनिश्चित करने के लिए प्रत्येक प्रयोग के लिए सावधानीपूर्वक समायोजित पीएच के साथ ताजा तैयार हाइड्रोक्सीलमाइन समाधान का उपयोग करना महत्वपूर्ण है। इस विधि के प्रदर्शन के साथ यह क्लोरोफॉर्म, मेथनॉल वर्षा जैसे चरणों के लिए महत्वपूर्ण है।इस चरण के दौरान प्राप्त पैनकेक आकार गोली को बहुत सावधानी से संभालना चाहिए। यह नाजुक हो सकता है और कदम के दौरान नमूने का आंशिक नुकसान असमान नमूना वसूली का कारण बन सकता है। प्रक्रिया का प्रदर्शन सवाना पश्चिम, हमारी प्रयोगशाला से एक स्नातक छात्र होगा ।सेल lysates प्राप्त करने के लिए, ब्याज की कोशिकाओं को एक शंकुकेंद्री ट्यूब में इकट्ठा करें। और अपकेंद्रित्र द्वारा किसी भी सेल मलबे को हटा दें। पीबीएस के 5 मिलीलीटर में गोली धो लें।और तुरंत ताजा तैयार लाइसिस बफर के 600 माइक्रोलीटर में कोशिकाओं को फिर से खर्च करें। चार डिग्री सेल्सियस पर 30 मिनट के लिए एक थर्मो शेखर में प्रति मिनट 1, ५०० क्रांतियों पर नमूना आंदोलन । lysates को साफ़ करने से पहले, पेलेट डिटर्जेंट और घुलनशील सामग्री अपकेंद्रित्र द्वारा।अपकेंद्रित्र के अंत में, बर्फ पर एक पूर्व ठंडा 1.5 मिलीलीटर माइक्रोसेंट्रफ्यूज ट्यूब में स्वीकृत lysate इकट्ठा करें। और मानक प्रोटोकॉल के अनुसार प्रोटीन एकाग्रता का अनुमान लगाने के लिए ब्रैडफोर्ड या बिसिनकोनिक एसिड परख करें। 2:1 अनुपात पर lysate करने के लिए मेथनॉल और क्लोरोफॉर्म जोड़ें।जलीय और कार्बनिक चरणों के बीच इंटरफेस पर एक प्रोटीन गोली इकट्ठा करने के लिए एक समरूप निलंबन और अपकेंद्रित्र नमूना बनाने के लिए कड़ाई से हिलाएं। ट्यूब को झुकाना, जितना संभव हो उतना सॉल्वेंट करने के लिए सुई या जेल लोडिंग टिप का उपयोग करें। हवा प्रोटीन गोली को कुछ मिनटों के लिए सुखा देती है।धीरे-धीरे मेथनॉल के 600 माइक्रोलीटर के साथ ट्यूब सामग्री मिश्रण करने से पहले, गोली को तोड़ने के लिए नहीं ध्यान रखते हुए। मेथनॉल धोने को ध्यान से हटाने के बाद, प्रोटीन पेलेट को लगभग पांच मिनट के लिए बेंच टॉप पर सुखा लें। इसके बाद, प्रोटीन पेलेट को 2एसबी बफर के 200 माइक्रोलीटर में फिर से खर्च करें।और एक थर्मो शेकर में 42 डिग्री सेल्सियस और प्रति मिनट 1, 500 क्रांतियों पर भंवर। जब गोली भंग हो जाती है, तो नमूने में 2SHB में 0.2% एमएमटीएस के 200 माइक्रोलीटर जोड़ें। और एक थर्मो शेकर में 15 मिनट के लिए 42 डिग्री सेल्सियस और प्रति मिनट 1, 500 क्रांतियों पर प्रोटीन को इनक्यूबेट करें।इनक्यूबेशन के अंत में, प्रदर्शन के रूप में 3:4 क्लोरोफॉर्म-मेथनॉल वर्षा प्रदर्शन करते हैं। एमएमटीएस को हटाने के लिए, पेट को भंवर के साथ ताजा 2SHB बफर के 100 माइक्रोलीटर में भंग करें। और प्रत्येक वर्षा के बाद बफर ए के 300 माइक्रोलीटर के साथ नमूना पतला करें।अंतिम वर्षा के बाद, 2SHB बफर के 200 माइक्रोलीटर में नमूनों को भंग करें और बफर ए के 240 माइक्रोलीटर के साथ प्रोटीन एकाग्रता को फिर से मापें और इनपुट नियंत्रण के रूप में प्रत्येक नमूने से 40 माइक्रोलीटर अलग करें। नमूनों को 200 माइक्रोलीटर के दो बराबर मात्रा में विभाजित करें। और ट्यूबों को प्लस हाइड्रोक्सिलामाइन और माइनस हाइड्रोक्सिलमाइन के रूप में चिह्नित करें।प्लस हाइड्रोक्सीलामाइन ट्यूब के लिए 400 मिलीमोलर की अंतिम एकाग्रता के लिए हौसले से तैयार तटस्थ दो मोलर हाइड्रोक्सिलामाइन के 50 माइक्रोलीटर जोड़ें। और तटस्थ दो मोलर सोडियम क्लोराइड के ५० माइक्रोलीटर नकारात्मक नियंत्रण के लिए, एक माइनस हाइड्रोक्सीलामाइन ट्यूब । फिर प्रत्येक ट्यूब में टीएस मनका घोल के 30 माइक्रोलीटर जोड़ें।और ट्यूबों को कमरे के तापमान पर एक से दो घंटे तक घुमाएं। इनक्यूबेशन के अंत में किसी भी अवशिष्ट हाइड्रोक्सीलमाइन को हटाने के लिए बफर ए में 1% एसडीएस के साथ चार बार मोतियों को धोएं। अंतिम धोने के बाद, तीन कोमल एक मिनट माइक्रोसेंट्रफ्यूगेशन के साथ मनका के नमूनों के सभी धोएं।सुपरनेटेंट्स को सावधानीपूर्वक एस्पिर करना और प्रत्येक वॉश में बफर ए में 1% एसडीएस के 500 माइक्रोलीटर में मोतियों को फिर से खर्च करना। अंतिम धोने के बाद, प्रदर्शन के रूप में धीरे से मोतियों को स्पिन करें। और मोतियों को परेशान किए बिना जितना संभव हो उतना ही सुपरनेट करें।मोतियों से प्रोटीन को ठीक करने के लिए, प्रत्येक ट्यूब में 4% एसडीएस नमूना बफर के 50 माइक्रोलीटर जोड़ें और एक थर्मो शेकर में 15 मिनट के लिए 80 डिग्री सेल्सियस और 1, 500 क्रांतियों प्रति मिनट पर नमूनों को इनक्यूबेट करें। इनक्यूबेशन के अंत में, नमूनों को पूरी तरह से मोतियों को गोली मारने के लिए अपकेंद्री से पहले ठंडा होने दें। फिर एल्यूटेड प्रोटीन को नए 1.5 मिलीलीटर ट्यूबों में स्थानांतरित करने के लिए जेल लोडिंग टिप का उपयोग करें।और पश्चिमी ब्लॉटिंग द्वारा ब्याज के प्रोटीन के एस-acylation का विश्लेषण करने के लिए एक एसडीएस-पेज जेल पर नमूने चलाएं। न्यूट्रल दो मोलर हाइड्रोक्सिलमाइन के साथ इलाज किए गए लिसेट में टायरोसिन किनेज एलसी का पता लगाया जा सकता है। सिस्टीन अवशेषों और फैटी एसिड मोइटी के बीच थिओएस्टर बंधन को क्लीव करने के लिए।प्रोटीन Fyn और LAT के खिलाफ एंटीबॉडी के साथ अलग करना और पुनर्प्राण यह प्रदर्शित करता है कि एक ही समय में कई प्रोटीन के एस-acylation का विश्लेषण करने के लिए acyl-राल सहायता प्राप्त कैप्चर परख का उपयोग किया जा सकता है। इसके अलावा, प्राथमिक माउस स्प्लीनोसाइट्स में एलके, फिन और लैट के एस-एकिलेशन का आसानी से पता लगाया जा सकता है। यह दर्शाता है कि यह संशोधन दो प्रजातियों के बीच संरक्षित है।उपन्यास एस-एस-एसीलेटेड प्रोटीन की पहचान के अलावा, इस विधि का उपयोग विभिन्न जैविक परिस्थितियों में प्रोटीन एस-एकिलेशन में परिवर्तन का आकलन करने के लिए भी किया जा सकता है। नए पहचाने गए एस-acylated प्रोटीन की संख्या में काफी वृद्धि हुई है के बाद डबल अप एक तेजी से मतलब है, और इस तरह के Acyl-आरएसी के रूप में विश्वसनीय तकनीक । उपन्यास एस-एस-एसीलेटेड प्रोटीन की पहचान के अलावा, इस विधि का उपयोग विभिन्न जैविक परिस्थितियों में प्रोटीन एस-एकिलेशन में परिवर्तन का आकलन करने के लिए भी किया जा सकता है।

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Protein Complex Affinity Capture from Cryomilled Mammalian Cells

Cryomilled स्तनधारी कोशिकाओं से प्रोटीन जटिल संबंध कब्जा

Affinity capture is an effective technique for isolating endogenous protein complexes for further study. When used in conjunction with an antibody, this ...

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

Using Scaffold Liposomes to Reconstitute Lipid-proximal Protein-protein Interactions In Vitro

पाड़ Liposomes का उपयोग लिपिड-समीपस्थ प्रोटीन, प्रोटीन बातचीत पुनर्गठित करने<em&gt; इन विट्रो</em

Studies of integral membrane proteins in vitro are frequently complicated by the presence of a hydrophobic transmembrane domain. Further complicating ...

Detection and Visualization of DNA Damage-induced Protein Complexes in Suspension Cell Cultures Using the Proximity Ligation Assay

निलंबन सेल संस्कृतियों में डीएनए नुकसान-प्रेरित प्रोटीन परिसरों का पता लगाने और विज़ुअलाइज़ेशन निकटता के बंधन परख का उपयोग करना

The DNA damage response orchestrates the repair of DNA lesions that occur spontaneously, are caused by genotoxic stress, or appear in the context of ...

mRNA Interactome Capture from Plant Protoplasts

MRNA संयंत्र Protoplasts से इंटरैक्टियम कैद

RNA-binding proteins (RBPs) determine the fates of RNAs. They participate in all RNA biogenesis pathways and especially contribute to post-transcriptional ...

Horizontal Gel Electrophoresis for Enhanced Detection of Protein-RNA Complexes

प्रोटीन-आरएनए परिसरों की बढ़ी हुई जांच के लिए क्षैतिज जेल वैद्युतकणसंचलन

Native polyacrylamide gel electrophoresis is a fundamental tool of molecular biology that has been used extensively for the biochemical analysis of ...

Detection of Heterodimerization of Protein Isoforms Using an in Situ Proximity Ligation Assay

Detection of Heterodimerization of Protein Isoforms Using an in Situ Proximity Ligation Assay

प्रोटीन Isoforms के Heterodimerization का पता लगाने में एक का उपयोग कर सीटू निकटता बंधाव परख

Regulated protein-protein interactions are a guiding principle for many signaling events, and the detection of such events is an important element in ...

Studying Protein Import into Chloroplasts Using Protoplasts

Protoplasts का उपयोग Chloroplasts में प्रोटीन आयात का अध्ययन

The chloroplast is an essential organelle that is responsible for various cellular processes in plants, such as photosynthesis and the production of many ...

Extracellular Protein Microarray Technology for High Throughput Detection of Low Affinity Receptor-Ligand Interactions

Extracellular प्रोटीन Microarray कम संबध रिसेप्टर का उच्च प्रवाह का पता लगाने के लिए प्रौद्योगिकी-Ligand बातचीत

Secreted factors, membrane-tethered receptors, and their interacting partners are main regulators of cellular communication and initiation of signaling ...

Capture and Identification of RNA-binding Proteins by Using Click Chemistry-assisted RNA-interactome Capture (CARIC) Strategy

Capture and Identification of RNA-binding Proteins by Using Click Chemistry-assisted RNA-interactome Capture CARIC Strategy

पर कब्जा और क्लिक करें रसायन-सहायता प्राप्त आरएनए-interactome कैप्चर (CARIC) रणनीति का उपयोग करके आरएनए बाइंडिंग प्रोटीन की पहचान

A comprehensive identification of RNA-binding proteins (RBPs) is key to understanding the posttranscriptional regulatory network in cells. A widely used ...

High Sensitivity Measurement of Transcription Factor-DNA Binding Affinities by Competitive Titration Using Fluorescence Microscopy

प्रतिलेखन फैक्टर के उच्च संवेदनशीलता माप-प्रतिस्पर्धी अनुमापन द्वारा डीएनए बाध्यकारी समानताएं प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी का उपयोग

Accurate quantification of transcription factor (TF)-DNA interactions is essential for understanding the regulation of gene expression. Since existing ...