Name: acyl-pegyl exchange gel shift assay for quantitative determination of palmitoylation of brain membrane proteins
Uploaded: 2020-03-29T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Acyl-PEGyl Exchange Gel Shift Assay for Quantitative Determination of Palmitoylation of Brain Membrane Proteins at JoVE.com

Forfatterne takker K. Woolfrey for rådgivning og input på APEGS assay. Disse undersøgelser blev finansieret af forskningsbevillinger til E.D. fra Whitehall Foundation og NIH-NIMH (1R01MH119347).

Alle dyreforsøg fulgte retningslinjer fastsat af National Institutes of Health (NIH) og er blevet godkendt af Institutional Animal Care and Use Committee ved University of California, Davis.
1. Forberedelse af musehjernemembraner
<ol><li>Halshugning mus ved hjælp af en guillotine apparat og dissekere hjernen ud hurtigt (i <1 min, hvis det er muligt, for at minimere palmitotastering ændringer, der kan opstå under dissektion procedure). Homogeniser straks i 10 ml homogeniseringsbuffer (<st...

<ol>
	<li>Blaskovic, S., Blanc, M., van der Goot, F. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+does+S-palmitoylation+do+to+membrane+proteins?.">What does S-palmitoylation do to membrane proteins?.</a> FEBS Journal. 280, 2766-2774 (2013).</li><li>Fukata, Y., Fukata, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+palmitoylation+in+neuronal+development+and+synaptic+plasticity.">Protein palmitoylation in neuronal development and synaptic plasticity.</a> Nature Reviews Neuroscience. 11, 161-175 (2010).</li><li>Globa, A. K., Bamji, S. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+palmitoylation+in+the+development+and+plasticity+of+neuronal+connections.">Protein palmitoylation in the development and plasticity of neuronal connections.</a> Current Opinion in Neurobiology. 45, 210-220 (2017).</li><li>Thomas, G. M., Huganir, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Palmitoylation-dependent+regulation+of+glutamate+receptors+and+their+PDZ+domain-containing+partners.">Palmitoylation-dependent regulation of glutamate receptors and their PDZ domain-containing partners.</a> Biochemical Society Transactions. 41, 72-78 (2013).</li><li>Kalashnikova, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SynDIG1:+an+activity-regulated,+AMPA-+receptor-interacting+transmembrane+protein+that+regulates+excitatory+synapse+development.">SynDIG1: an activity-regulated, AMPA- receptor-interacting transmembrane protein that regulates excitatory synapse development.</a> Neuron. 65, 80-93 (2010).</li><li>Kaur, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity-Dependent+Palmitoylation+Controls+SynDIG1+Stability,+Localization,+and+Function.">Activity-Dependent Palmitoylation Controls SynDIG1 Stability, Localization, and Function.</a> Journal of Neuroscience. 36, 7562-7568 (2016).</li><li>Wan, J., Roth, A. F., Bailey, A. O., Davis, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Palmitoylated+proteins:+purification+and+identification.">Palmitoylated proteins: purification and identification.</a> Nature Protocols. 2, 1573-1584 (2007).</li><li>Howie, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Substrate+recognition+by+the+cell+surface+palmitoyl+transferase+DHHC5.">Substrate recognition by the cell surface palmitoyl transferase DHHC5.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111, 17534-17539 (2014).</li><li>Kanadome, T., Yokoi, N., Fukata, Y., Fukata, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+Screening+of+Depalmitoylating+Enzymes+and+Evaluation+of+Their+Activities+by+the+Acyl-PEGyl+Exchange+Gel-Shift+(APEGS)+Assay.">Systematic Screening of Depalmitoylating Enzymes and Evaluation of Their Activities by the Acyl-PEGyl Exchange Gel-Shift (APEGS) Assay.</a> Methods in Molecular Biology. 2009, 83-98 (2019).</li><li>Percher, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass-tag+labeling+reveals+site-specific+and+endogenous+levels+of+protein+S-fatty+acylation.">Mass-tag labeling reveals site-specific and endogenous levels of protein S-fatty acylation.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113, 4302-4307 (2016).</li><li>Percher, A., Thinon, E., Hang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass-Tag+Labeling+Using+Acyl-PEG+Exchange+for+the+Determination+of+Endogenous+Protein+S-Fatty+Acylation.">Mass-Tag Labeling Using Acyl-PEG Exchange for the Determination of Endogenous Protein S-Fatty Acylation.</a> Current Protocols in Protein Science. 89, 14.17.1-14.17.11 (2017).</li><li>Yokoi, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+PSD-95+Depalmitoylating+Enzymes.">Identification of PSD-95 Depalmitoylating Enzymes.</a> Journal of Neuroscience. 36, 6431-6444 (2016).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=JoVE+Science+Education+Database.+Separating+Protein+with+SDS-PAGE.">JoVE Science Education Database. Separating Protein with SDS-PAGE.</a> Basic Methods in Cellular and Molecular Biology. , (2019).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Science+Education+Database.+The+Western+Blot.">Science Education Database. The Western Blot.</a> Basic Methods in Cellular and Molecular Biology. , (2019).</li><li>Chenaux, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+SynDIG1+Reduces+Excitatory+Synapse+Maturation+But+Not+Formation+In+Vivo.">Loss of SynDIG1 Reduces Excitatory Synapse Maturation But Not Formation In Vivo.</a> eNeuro. 3 (5), (2016).</li><li>Matt, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SynDIG4/Prrt1+Is+Required+for+Excitatory+Synapse+Development+and+Plasticity+Underlying+Cognitive+Function.">SynDIG4/Prrt1 Is Required for Excitatory Synapse Development and Plasticity Underlying Cognitive Function.</a> Cell Reports. 22, 2246-2253 (2018).</li><li>Purkey, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AKAP150+Palmitoylation+Regulates+Synaptic+Incorporation+of+Ca(2+)-Permeable+AMPA+Receptors+to+Control+LTP.">AKAP150 Palmitoylation Regulates Synaptic Incorporation of Ca(2+)-Permeable AMPA Receptors to Control LTP.</a> Cell Reports. 25, 974-987 (2018).</li><li>Woolfrey, K. M., Sanderson, J. L., Dell'Acqua, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+palmitoyl+acyltransferase+DHHC2+regulates+recycling+endosome+exocytosis+and+synaptic+potentiation+through+palmitoylation+of+AKAP79/150.">The palmitoyl acyltransferase DHHC2 regulates recycling endosome exocytosis and synaptic potentiation through palmitoylation of AKAP79/150.</a> Journal of Neuroscience. 35, 442-456 (2015).</li></ol>

I vores tidligere arbejde, vi udnyttede ABE analyse til at vise, at SynDIG1 er palmitoyleret på to bevarede sammenstilling-transmembrane Cys rester (findes i alle SynDIG proteiner) i en aktivitetsafhængig måde at regulere stabilitet, lokalisering, og funktion6. En begrænsning er, at ABE-analysen kræver affinitetsrensning med agaroseharpikser, der er konjugeret til avidin moieties som det sidste trin i proceduren, hvilket resulterer i et betydeligt tab af signal, der komplicerer den kvantitati...

S-palmitovlation er en reversibel posttranslationel ændring af målproteiner, der regulerer stabil membranforening, proteinhandel og proteinproteininteraktioner1. Det indebærer tilsætning af en 16-carbon palmitatmoiety til cysteinrester via thioester kobling katalyseret af palmitoyl acyltransferase (PAT) enzymer. Mange synaptiske proteiner i hjernen er palmitolaated, herunder AMPA-Rs og PSD-95, i en aktivitetsafhængig måde at regulere stabilitet, lokalisering, og funktion2,3,4. Ændringer i niveauet af synaptiske AMPARs i PSD via interaktion mellem hjælpefaktorer med synaptiske stilladser såsom PSD-95 ligger til grund for synaptisk plasticitet; således giver metoder til bestemmelse af synaptiske proteiners palmitotolationstilstand vigtig indsigt i mekanismer for synaptisk plasticitet.
Tidligere identificerede vi SynDIG-familien på fire gener (SynDIG1-4), der koder hjernespecifikke transmembranproteiner, der forbinder med AMPARs5. Overekspression eller knock-down af SynDIG1 i dissociated rotte hippocampal neuroner stiger eller falder, henholdsvis AMPA-R synapse størrelse og antal med ~ 50% som opdaget ved hjælp af immuncytokemi og elektrofysiologi5. Vi udnyttede acyl-biotin-vekslingen (ABE) til at vise, at SynDIG1 palmitoladeres ved to bevarede sammentædningscycycysrester (findes i alle SynDIG-proteiner) på en aktivitetsafhængig måde for at regulere stabilitet, lokalisering og funktion6. ABE-analysen er baseret på udveksling af biotin på cysteiner, der er beskyttet af ændringer og efterfølgende affinitetsrensning7. Her beskriver vi en innovativ biokemisk tilgang, acyl-PEGyl udveksling gel shift (APEGS) assay8,9,10,11,12, som ikke kræver affinitet rensning og i stedet udnytter ændringer i gel mobilitet til at bestemme antallet af ændringer for et protein af interesse. Protokollen er beskrevet til undersøgelse af endogene membranproteiner fra musehjernen, for hvilke der findes egnede antistoffer.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Hydroxylamine (HAM)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>26103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methoxy-PEG-(CH2)3NHCO(CH2)2-MAL (mPEG)</td>
			<td>NOF</td>
			<td>ME-050MA</td>
			<td>MW ~5000 kDa</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microfuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5415R</td>
			<td>or equivalent equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-ethylmalemide (NEM)</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>34115</td>
			<td>Highly toxic.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optical imager for densitometry</td>
			<td>Azure Biosystems</td>
			<td>Sapphire Biomolecular Imager</td>
			<td>or equivalent equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polypropylene tubes with cap</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-956-1D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological pipets (glass)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-678-27D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Table top centrifuge</td>
			<td>Beckman</td>
			<td>Allegra X-15R</td>
			<td>or equivalent equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris(2-carboxyethyl) phosphine-hydrochloride (TCEP)</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>580560</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

acyl-pegyl exchange gel shift assay for quantitative determination of palmitoylation of brain membrane proteins

Aktivitetsafhængige ændringer i niveauet af synaptiske AMPA-receptorer (AMPARs) inden for postsynaptisk tæthed (PSD) menes at repræsentere en cellulær mekanisme til læring og hukommelse. Palmitoplation regulerer lokalisering og funktion af mange synaptiske proteiner, herunder AMPA-R'er, hjælpefaktorer og synaptiske stilladser på en aktivitetsafhængig måde. Vi identificerede synapse differentiering induceret gen (SynDIG) familie af fire gener (SynDIG1-4) kodning hjerne-specifikke transmembranproteiner, der forbinder med AMPARs og regulere synapse styrke. SynDIG1 palmitoladeres ved to cysteinrester på position 191 og 192 i den sideløbende transmembrane-region, der er vigtig for aktivitetsafhængig ekstuponitory synapseudvikling. Her beskriver vi en innovativ biokemisk tilgang, acyl-PEGyl udveksling gel shift (APEGS) assay, at undersøge palmitoylering tilstand af ethvert protein af interesse og demonstrere dens nytte med SynDIG familie af proteiner i musehjerne lysates.

Immunblotting med antistoffer mod det protein af interesse afslører palmitoladet tilstand (ikke, singly, dobbelt, osv.) i musehjernelysater som bestemt af mobilitetsskift sammenlignet med prøver, hvor HAM ikke var inkluderet. Tidligere havde vi vist, at SynDIG1 blev palmitoladet på to steder ved hjælp af ABE-analysen6; Vi kunne dog ikke afgøre, om begge steder blev ændret i hjernevæv. Her viser vi, at SynDIG1, SynDIG4/Prrt1 og Prrt2 palmitoyleres i musehjern...

Watch this Scientific Journal Video about Acyl-PEGyl Exchange Gel Shift Assay for Quantitative Determination of Palmitoylation of Brain Membrane Proteins at JoVE.com

Acyl-PEGyl Exchange Gel Shift Assay for Quantitative Determination of Palmitoylation of Brain Membrane Proteins

Palmitovlation indebærer inkorporering af en 16-carbon palmitat moiety til cysteinrester af målproteiner på en reversibel måde. Her beskriver vi en biokemisk tilgang, acyl-PEGyl udveksling gel shift (APEGS) assay, at undersøge palmitoylering tilstand af ethvert protein af interesse i mus hjerne lysates.

Acyl-PEGyl Exchange Gel Shift Assay for kvantitativ bestemmelse af palmitoyllation af hjernemembranproteiner

Activity-dependent alterations in the levels of synaptic AMPA receptors (AMPARs) within the postsynaptic density (PSD) is thought to represent a cellular ...

Denne biokemiske metode gør det muligt at bestemme palmitoylationstilstanden for ethvert membranprotein udtrykt i hjernen, for hvilket der findes et egnet antistof. Den største fordel ved denne teknik er, at det ikke kræver affinitet rensning og i stedet udnytter ændringer i gel mobilitet til at bestemme antallet af ændringer af et protein af interesse. Efter dissekere ud hjernen, homogenisere det straks i 10 milliliter homogenisering buffer i et glas homogenis på is.Ved hjælp af ca. 12 slag centrifuger lysatet i 15 minutter ved 1400 gange G og fire grader Celsius. Overfør supernatanten til et nyt rør på is. Pelletsuspendrer pelletet op i 10 milliliter homogeniseringsbuffer.Homogeniser det ved hjælp af cirka seks slag. Centrifuge suspensionen ved 710 gange G og fire grader Celsius i 10 minutter. Kombiner supernatanterne og centrifuge dem ved 40, 000 gange G og fire grader Celsius i 20 minutter.Kassér supernatanten og opslæm pelleteret membranfraktionen i en homogeniseringsbuffer ved at bryde pellet med en pipettespids og pipettering op og ned. Udfør ABCA-analysen for at gradanere proteinniveauer. For at udføre APEGS-analysen skal du placere 470 mikroliter buffer A i et 1,5 milliliterrør og tilsætte ca. 100 til 200 mg protein.Sonikere røret og derefter adskille det uopløselige protein ved centrifugering af røret ved 25 grader Celsius og mindst 13.000 gange G i 10 minutter. Det opløselige protein overføres til et nyt 1,5 milliliterrør. For det første forstyrre disulphid obligationer ved at inkubere det opløselige protein i 25 mikroliter af TCEP i 60 minutter ved 55 grader Celsius.Derefter blokeres frie cysteiner ved at inkubere opløsningen med 12,5 mikroliter af stockopløsningen af NEM i tre timer ved stuetemperatur. Dernæst begynder processen med chloroform methanol nedbør. Proteinopløsningen overføres fra 1,5 milliliterrøret til et polypropylen- eller glasrør, der kan centrifugeres i en svingende skovrotor med beskeden hastighed.Tilsæt to milliliter methanol og vortex kort. Tilsæt en milliliter chloroform og vortex kort. Derefter tilsættes 1,5 milliliter deioniseret vand og vortex kort igen.Om nødvendigt vendes røret for at sikre grundig blanding. Centrifuge prøverne ved 3000 gange G og 25 grader Celsius i 30 minutter i en svingende spand rotor. Fjern og kassér forsigtigt opløsningens øverste fase i et rør.Der tilsættes 1,5 milliliter methanol. Bland forsigtigt, men grundigt ved blid inversion af røret, passe på ikke at fragmentere den uigennemsigtige protein pandekage. Centrifuge prøven ved 3000 gange G og 25 grader Celsius i 10 minutter i en svingende spand rotor.Ved hjælp af en glassperologisk pipette fjernes så meget af opløsningens øverste fase som muligt uden at forstyrre proteinpandekagen. Skyl forsigtigt pellet med en milliliter methanol og lad den lufttørre i mindst 10 minutter. Når chloroform methanolfældningen er afsluttet, påbegyndes spaltningen af palmitoyl thioester-forbindelser ved at opslænne proteinekcipitatet i 125 mikroliter af buffer A.Overfør til et nyt 1,5 milliliterrør.Sonikere røret kort og derefter centrifuge det ved 13, 000 gange G eller højere og 25 grader Celsius i 10 minutter for at fjerne uopløseligt materiale. Det opløselige protein overføres til nye 1,5 milliliterrør, og der tilsættes 375 mikroliter buffer H eller buffer T.Efter inkubering af prøverne i 60 minutter ved stuetemperatur gentages chloroform methanoludfældningen. Hvis du vil tilføje m-PEG til ubeskyttede cystein, skal du begynde med at opslænke pellet i 100 mikroliter buffer A indeholdende 10 mil eller mere TCEP.Suspensionen overføres derefter til et 1,5 milliliterrør. Tilføj 25 mikroliter af lager m-PEG 5K opløsning og bland ved pipettering. Inkubere ved stuetemperatur med ende over ende rotation.Efter 60 minutters inkubation fjernes personligt m-PEG 5K ved at udføre chloroform methanoludfældning igen. Centrifuge ved større end 13, 000 gange G og 25 grader Celsius i 10 minutter. Fjern forsigtigt den øverste fase som før, undgå den tykke, flocculent pandekage.Tilsæt en milliliter methanol og bland forsigtigt, men grundigt. Centrifuge ved større end 13, 000 gange G og 25 grader Celsius i 10 minutter. Fjern forsigtigt supernatanten og skyl forsigtigt pellet med en milliliter methanol.Igen centrifuge på mere end 13, 000 gange G og 25 grader Celsius i 10 minutter. Efter lufttørring af pellet, resuspend det i 50 mikroliter buffer A uden TCEP eller nogen reduktionsmiddel. Reserve 5 mikroliter af opløsningen til BCA-proteinmængde.Efter kvantitet skal der tilsættes en passende mængde 4x Laemmli-prøvebuffer. Læg prøven på en SDS-sidegel. Brug standardadskillelses- og registreringsprotokoller til vestlig blotting.For at undersøge syndig-proteinernes palmitoylationstilstand blev P2-membranfraktioner fra homogeniserede musehjerner udsat for APEGS-analysen. Adskillelse og sondering med antistoffer viste, at SynDIG1, SynDIG4 Prrt1 og Prrt2 er palmitoyleret i musehjernen. Formålet med chloroform methanoludfældning er at forhindre, at et kemikalie, såsom NEM, forstyrrer protokollens næste trin.En ordentlig chloroform methanol nedbør vil fjerne uønskede kemikalier og samtidig minimere proteintab. Denne metode kan anvendes til hjernen lysater fra mus i forskellige aldre eller fra forskellige hjerneregioner til at undersøge de rumlige-tidsmæssige regler for palmitoylation.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

An Optimized Protocol for Electrophoretic Mobility Shift Assay Using Infrared Fluorescent Dye-labeled Oligonucleotides

En optimeret protokol for elektroforetisk mobilitet Shift Assay brug af infrarød fluorescerende farvestof-mærkede oligonukleotider

Electrophoretic Mobility Shift Assays (EMSA) are an instrumental tool to characterize the interactions between proteins and their target DNA sequences. ...

High Precision FRET at Single-molecule Level for Biomolecule Structure Determination

High Precision FRET på enkeltmolekyliveau for biomolekylstrukturbestemmelse

A protocol on how to perform high-precision interdye distance measurements using F&#246;rster resonance energy transfer (FRET) at the single-molecule ...

Oligopeptide Competition Assay for Phosphorylation Site Determination

Oligopeptidkonkurrenceanalyse for phosphoryleringsstedbestemmelse

Protein phosphorylation at specific sites determines its conformation and interaction with other molecules. Thus, protein phosphorylation affects ...

Detection of Detergent-sensitive Interactions Between Membrane Proteins

Påvisning af vaskemiddel-følsomme interaktioner mellem Membranproteiner

Our ability to explore protein-protein interactions is the key to understanding regulatory connections in the cell. However, detection of protein-protein ...

Analysis of Thylakoid Membrane Protein Complexes by Blue Native Gel Electrophoresis

Analyse af tylakoid membran proteinkomplekser af blå indfødte gelelektroforese

Photosynthetic electron transfer chain (ETC) converts solar energy to chemical energy in the form of NADPH and ATP. Four large protein complexes embedded ...

A Fluorescence Fluctuation Spectroscopy Assay of Protein-Protein Interactions at Cell-Cell Contacts

Et fluorescens udsving spektroskopi Assay af Protein-Protein interaktioner på celle-celle kontakter

A variety of biological processes involves cell-cell interactions, typically mediated by proteins that interact at the interface between neighboring ...

Use of Recombinant Fusion Proteins in a Fluorescent Protease Assay Platform and Their In-gel Renaturation

Brug af rekombinant Fusion proteiner i et fluorescerende Protease Assay Platform og deres i-gel genopretning

Proteases are intensively studied enzymes due to their essential roles in several biological pathways of living organisms and in pathogenesis; therefore, ...

Robust Comparison of Protein Levels Across Tissues and Throughout Development Using Standardized Quantitative Western Blotting

Robust sammenligning af Protein niveauer på tværs af væv og udvikling ved hjælp af standardiserede kvantitative Western Blotting

Western blotting is a technique that is commonly used to detect and quantify protein expression. Over the years, this technique has led to many advances ...

Interactions with and Membrane Permeabilization of Brain Mitochondria by Amyloid Fibrils

Interaktioner med og membran Permeabilisering af hjernen mitochondrier af amyloid Fibrils

A growing body of evidence indicates that membrane permeabilization, including internal membranes such as mitochondria, is a common feature and primary ...

Transverse Sectioning of Mature Rice (Oryza sativa L.) Kernels for Scanning Electron Microscopy Imaging Using Pipette Tips as Immobilization Support

Transverse Sectioning of Mature Rice Oryza sativa L. Kernels for Scanning Electron Microscopy Imaging Using Pipette Tips as Immobilization Support

Tværgående 2000 af ældre ris(Oryza sativa L.) Kerner til scanning elektronmikroskopi imaging ved hjælp af pipette tips som immobilisering Support