Name: acyl-pegyl exchange gel shift assay for quantitative determination of palmitoylation of brain membrane proteins
Uploaded: 2020-03-29T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Acyl-PEGyl Exchange Gel Shift Assay for Quantitative Determination of Palmitoylation of Brain Membrane Proteins at JoVE.com

Les auteurs remercient K. Woolfrey pour ses conseils et leurs commentaires sur l’analyse APEGS. Ces études ont été financées par des subventions de recherche à E.D. de la Whitehall Foundation et du NIH-NIMH (1R01MH119347).

Toutes les procédures animales ont suivi les lignes directrices établies par les National Institutes of Health (NIH) et ont été approuvées par le Comité institutionnel de soins et d’utilisation des animaux de l’Université de Californie à Davis.
1. Préparation des membranes cérébrales de souris
<ol><li>Décapiter la souris à l’aide d’un appareil de guillotine et disséquer le cerveau rapidement (en lt;1 min, si possible, pour minimiser les changements de palmitoylation qui...

<ol>
	<li>Blaskovic, S., Blanc, M., van der Goot, F. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+does+S-palmitoylation+do+to+membrane+proteins?.">What does S-palmitoylation do to membrane proteins?.</a> FEBS Journal. 280, 2766-2774 (2013).</li><li>Fukata, Y., Fukata, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+palmitoylation+in+neuronal+development+and+synaptic+plasticity.">Protein palmitoylation in neuronal development and synaptic plasticity.</a> Nature Reviews Neuroscience. 11, 161-175 (2010).</li><li>Globa, A. K., Bamji, S. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+palmitoylation+in+the+development+and+plasticity+of+neuronal+connections.">Protein palmitoylation in the development and plasticity of neuronal connections.</a> Current Opinion in Neurobiology. 45, 210-220 (2017).</li><li>Thomas, G. M., Huganir, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Palmitoylation-dependent+regulation+of+glutamate+receptors+and+their+PDZ+domain-containing+partners.">Palmitoylation-dependent regulation of glutamate receptors and their PDZ domain-containing partners.</a> Biochemical Society Transactions. 41, 72-78 (2013).</li><li>Kalashnikova, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SynDIG1:+an+activity-regulated,+AMPA-+receptor-interacting+transmembrane+protein+that+regulates+excitatory+synapse+development.">SynDIG1: an activity-regulated, AMPA- receptor-interacting transmembrane protein that regulates excitatory synapse development.</a> Neuron. 65, 80-93 (2010).</li><li>Kaur, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity-Dependent+Palmitoylation+Controls+SynDIG1+Stability,+Localization,+and+Function.">Activity-Dependent Palmitoylation Controls SynDIG1 Stability, Localization, and Function.</a> Journal of Neuroscience. 36, 7562-7568 (2016).</li><li>Wan, J., Roth, A. F., Bailey, A. O., Davis, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Palmitoylated+proteins:+purification+and+identification.">Palmitoylated proteins: purification and identification.</a> Nature Protocols. 2, 1573-1584 (2007).</li><li>Howie, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Substrate+recognition+by+the+cell+surface+palmitoyl+transferase+DHHC5.">Substrate recognition by the cell surface palmitoyl transferase DHHC5.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111, 17534-17539 (2014).</li><li>Kanadome, T., Yokoi, N., Fukata, Y., Fukata, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+Screening+of+Depalmitoylating+Enzymes+and+Evaluation+of+Their+Activities+by+the+Acyl-PEGyl+Exchange+Gel-Shift+(APEGS)+Assay.">Systematic Screening of Depalmitoylating Enzymes and Evaluation of Their Activities by the Acyl-PEGyl Exchange Gel-Shift (APEGS) Assay.</a> Methods in Molecular Biology. 2009, 83-98 (2019).</li><li>Percher, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass-tag+labeling+reveals+site-specific+and+endogenous+levels+of+protein+S-fatty+acylation.">Mass-tag labeling reveals site-specific and endogenous levels of protein S-fatty acylation.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113, 4302-4307 (2016).</li><li>Percher, A., Thinon, E., Hang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass-Tag+Labeling+Using+Acyl-PEG+Exchange+for+the+Determination+of+Endogenous+Protein+S-Fatty+Acylation.">Mass-Tag Labeling Using Acyl-PEG Exchange for the Determination of Endogenous Protein S-Fatty Acylation.</a> Current Protocols in Protein Science. 89, 14.17.1-14.17.11 (2017).</li><li>Yokoi, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+PSD-95+Depalmitoylating+Enzymes.">Identification of PSD-95 Depalmitoylating Enzymes.</a> Journal of Neuroscience. 36, 6431-6444 (2016).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=JoVE+Science+Education+Database.+Separating+Protein+with+SDS-PAGE.">JoVE Science Education Database. Separating Protein with SDS-PAGE.</a> Basic Methods in Cellular and Molecular Biology. , (2019).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Science+Education+Database.+The+Western+Blot.">Science Education Database. The Western Blot.</a> Basic Methods in Cellular and Molecular Biology. , (2019).</li><li>Chenaux, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+SynDIG1+Reduces+Excitatory+Synapse+Maturation+But+Not+Formation+In+Vivo.">Loss of SynDIG1 Reduces Excitatory Synapse Maturation But Not Formation In Vivo.</a> eNeuro. 3 (5), (2016).</li><li>Matt, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SynDIG4/Prrt1+Is+Required+for+Excitatory+Synapse+Development+and+Plasticity+Underlying+Cognitive+Function.">SynDIG4/Prrt1 Is Required for Excitatory Synapse Development and Plasticity Underlying Cognitive Function.</a> Cell Reports. 22, 2246-2253 (2018).</li><li>Purkey, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AKAP150+Palmitoylation+Regulates+Synaptic+Incorporation+of+Ca(2+)-Permeable+AMPA+Receptors+to+Control+LTP.">AKAP150 Palmitoylation Regulates Synaptic Incorporation of Ca(2+)-Permeable AMPA Receptors to Control LTP.</a> Cell Reports. 25, 974-987 (2018).</li><li>Woolfrey, K. M., Sanderson, J. L., Dell'Acqua, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+palmitoyl+acyltransferase+DHHC2+regulates+recycling+endosome+exocytosis+and+synaptic+potentiation+through+palmitoylation+of+AKAP79/150.">The palmitoyl acyltransferase DHHC2 regulates recycling endosome exocytosis and synaptic potentiation through palmitoylation of AKAP79/150.</a> Journal of Neuroscience. 35, 442-456 (2015).</li></ol>

Dans nos travaux précédents, nous avons utilisé l’essai ABE pour démontrer que SynDIG1 est palmitoylated à deux résidus conservés juxta-transmembrane Cys (trouvés dans toutes les protéines SynDIG) d’une manière dépendante de l’activité pour réguler la stabilité, la localisation, et la fonction6. Une limitation est que l’essai ABE nécessite la purification d’affinité avec des résines agarose conjuguées à des moieties avides comme dernière étape dans la procédure, aya...

S-palmitoylation est une modification post-translationnelle réversible des protéines cibles qui régule l’association stable de membrane, le trafic de protéine, et les interactions protéine-protéine1. Il s’agit de l’ajout d’une meety palmitate de 16 carbone aux résidus de cystéine via le lien thioester catalysé par les enzymes palmitoyl acyltransferase (PAT). Beaucoup de protéines synaptiques dans le cerveau sont palmitoylated, y compris AMPA-Rs et PSD-95, d’une manière dépendante de l’activité pour réguler la stabilité, la localisation, et la fonction2,3,4. Les modifications dans les niveaux des AMPARs synaptiques dans le PSD par l’interaction des facteurs auxiliaires avec des échafaudages synaptiques tels que PSD-95 sous-tend la plasticité synaptique ; ainsi, les méthodes pour déterminer l’état de palmitoylation des protéines synaptiques fournit un aperçu important des mécanismes de plasticité synaptique.
Auparavant, nous avons identifié la famille SynDIG de quatre gènes (SynDIG1-4) codant des protéines transmémbranes spécifiques au cerveau qui s’associent à DES AMPAR5. La surexpression ou la chute de SynDIG1 dans les neurones hippocampal de rat dissociés augmente ou diminue, respectivement, la taille et le nombre de synapse d’AMPA-R de 50 % détectés à l’aide de l’immunocytochimie et de l’électrophysiologie5. Nous avons utilisé l’essai d’échange d’acyl-biotine (ABE) pour démontrer que SynDIG1 est palmitoylated à deux résidus conservés juxta-transmembrane Cys (trouvés dans toutes les protéines SynDIG) d’une manière dépendante de l’activité pour réguler la stabilité, la localisation, et la fonction6. L’essai ABE repose sur l’échange de biotine sur les cystéines protégées par la modification et la purification d’affinité ultérieure7. Ici, nous décrivons une approche biochimique innovante, le changement de gel d’échange d’acyl-PEGyl (APEGS) assay8,9,10,11,12, qui ne nécessite pas de purification d’affinité et utilise plutôt des changements dans la mobilité de gel pour déterminer le nombre de modifications pour une protéine d’intérêt. Le protocole est décrit pour l’étude des protéines endogènes de membrane du cerveau de souris pour lesquelles des anticorps appropriés sont disponibles.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Hydroxylamine (HAM)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>26103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methoxy-PEG-(CH2)3NHCO(CH2)2-MAL (mPEG)</td>
			<td>NOF</td>
			<td>ME-050MA</td>
			<td>MW ~5000 kDa</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microfuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5415R</td>
			<td>or equivalent equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-ethylmalemide (NEM)</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>34115</td>
			<td>Highly toxic.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optical imager for densitometry</td>
			<td>Azure Biosystems</td>
			<td>Sapphire Biomolecular Imager</td>
			<td>or equivalent equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polypropylene tubes with cap</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-956-1D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological pipets (glass)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-678-27D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Table top centrifuge</td>
			<td>Beckman</td>
			<td>Allegra X-15R</td>
			<td>or equivalent equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris(2-carboxyethyl) phosphine-hydrochloride (TCEP)</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>580560</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

acyl-pegyl exchange gel shift assay for quantitative determination of palmitoylation of brain membrane proteins

Les altérations dépendantes de l’activité dans les niveaux des récepteurs synaptiques d’AMPA (AMPA) dans la densité postsynaptique (PSD) sont pensés pour représenter un mécanisme cellulaire pour l’apprentissage et la mémoire. La palmitoylation régule la localisation et la fonction de nombreuses protéines synaptiques, y compris les AMPA-R, les facteurs auxiliaires et les échafaudages synaptiques d’une manière dépendante de l’activité. Nous avons identifié la famille induite par la différenciation synapse (SynDIG) de quatre gènes (SynDIG1-4) codant des protéines transmémbranées spécifiques au cerveau qui s’associent aux AMPARs et régulent la force synapse. SynDIG1 est palmitoylated à deux résidus de cystéine situés aux positions 191 et 192 dans la région de juxta-transmembrane importante pour le développement de synapse excitatrice activité-dépendante. Ici, nous décrivons une approche biochimique innovante, l’essai de changement de gel d’échange d’acyl-PEGyl (APEGS), pour étudier l’état de palmitoylation de toute protéine d’intérêt et démontrer son utilité avec la famille SynDIG des protéines dans les lysates de cerveau de souris.

L’immunoblotting avec des anticorps contre la protéine d’intérêt révèle l’état palmitoylated (non, individuellement, doublement, etc.) dans les lysates de cerveau de souris comme déterminé par décalage de mobilité comparé aux échantillons dans lesquels HAM n’a pas été inclus. Auparavant, nous avions démontré que SynDIG1 était palmitoylated à deux sites en utilisant l’essai ABE6; cependant, nous n’avons pas pu déterminer si les deux si...

Watch this Scientific Journal Video about Acyl-PEGyl Exchange Gel Shift Assay for Quantitative Determination of Palmitoylation of Brain Membrane Proteins at JoVE.com

Acyl-PEGyl Exchange Gel Shift Assay for Quantitative Determination of Palmitoylation of Brain Membrane Proteins

La palmitoylation implique l’incorporation d’une noisette palmitate de 16 carbone aux résidus de cystéine des protéines cibles d’une manière réversible. Ici, nous décrivons une approche biochimique, l’essai de gel d’échange d’acyl-PEGyl (APEGS), pour étudier l’état de palmitoylation de toute protéine d’intérêt pour les lysates de cerveau de souris.

Acyl-PEGyl Exchange Gel Shift Assay pour détermination quantitative de la palmitoylation des protéines de membrane cérébrale

Activity-dependent alterations in the levels of synaptic AMPA receptors (AMPARs) within the postsynaptic density (PSD) is thought to represent a cellular ...

Cette méthode biochimique permet de déterminer l’état de palmitoylation de toute protéine membranaire exprimée dans le cerveau pour laquelle un anticorps approprié est disponible. Le principal avantage de cette technique est qu’elle ne nécessite pas de purification par affinité et utilise plutôt des changements dans la mobilité du gel pour déterminer le nombre de modifications d’une protéine d’intérêt. Après avoir disséqué le cerveau, homogénéisez-le immédiatement en 10 millilitres de tampon d’homogénéisation dans un homogénéisateur de verre sur la glace.À l’aide d’environ 12 coups, centrifuger les lysates pendant 15 minutes à 1400 fois G et quatre degrés Celsius. Transférer le surnatant dans un nouveau tube sur glace. Resuspendez la pastille en 10 millilitres de tampon d’homogénéisation.Homogénéisez-le à l’aide d’environ six coups. Centrifuger la suspension à 710 fois G et quatre degrés Celsius pendant 10 minutes. Combinez les supernatants et centrifugez-les à 40 000 fois G et quatre degrés Celsius pendant 20 minutes.Jetez le supernatant et resuspendez la fraction de membrane granulée dans un tampon d’homogénéisation en brisant la pastille avec une pointe de pipette et pipetting de haut en bas. Effectuez un test ABCA pour quantifier les niveaux de protéines. Pour effectuer l’analyse APEGS, placez 470 microlitres de tampon A dans un tube de 1,5 millilitre et ajoutez environ 100 à 200 milligrammes de protéines.Sonicate le tube, puis séparer la protéine insoluble en centrifugant le tube à 25 degrés Celsius et un minimum de 13.000 fois G pendant 10 minutes. Transférer la protéine solubalisée dans un nouveau tube de 1,5 millilitre. Tout d’abord, perturber les liaisons disulphide en incubant la protéine solubalisée dans 25 microlitres de TCEP pendant 60 minutes à 55 degrés Celsius.Ensuite, bloquez les cystéines libres en incubant la solution avec 12,5 microlitres de la solution de stock de NEM pendant trois heures à température ambiante. Ensuite, commencer le processus de précipitations de méthanol chloroforme. Transférez la solution protéique du tube de 1,5 millilitre à un tube en polypropylène ou en verre qui peut être centrifugé dans un rotor balançant à une vitesse modeste.Ajouter brièvement deux millilitres de méthanol et de vortex. Ajouter brièvement un millilitre de chloroforme et de vortex. Ajouter ensuite 1,5 millilitres d’eau déionisée et vortex brièvement à nouveau.Si nécessaire, inverser le tube pour assurer un mélange complet. Centrifuger les échantillons à 3000 fois G et 25 degrés Celsius pendant 30 minutes dans un rotor balançant seau. Retirer soigneusement et jeter la phase supérieure de la solution dans un tube.Ajouter 1,5 millilitres de méthanol. Mélanger délicatement mais soigneusement par une inversion douce du tube, en prenant soin de ne pas fragmenter la crêpe protéinée opaque. Centrifuger l’échantillon à 3000 fois G et 25 degrés Celsius pendant 10 minutes dans un rotor balançant seau.À l’aide d’une pipette sérologique en verre, retirer le plus possible la phase supérieure de la solution sans perturber la crêpe protéique. Rincez soigneusement la pastille avec un millilitre de méthanol et laissez-la sécher à l’air libre pendant au moins 10 minutes. Une fois les précipitations de méthanol chloroforme terminées, commencez le clivage des liaisons palmitoyl thioester en résusant le précipité protéique dans 125 microlitres de tampon A.Transfer vers un nouveau tube de 1,5 millilitre.Soniquez brièvement le tube, puis centrifugez-le à 13 000 fois G ou plus et 25 degrés Celsius pendant 10 minutes pour enlever les matières insolubles. Transférer la protéine solubalisée dans de nouveaux tubes de 1,5 millilitre et ajouter 375 microlitres de tampon H ou tampon T.Après avoir incubé les échantillons pendant 60 minutes à température ambiante, répéter les précipitations de méthanol chloroforme. Pour ajouter m-PEG aux cystéines non protégées, commencez par résuser la pastille dans 100 microlitres de tampon A contenant 10 mil ou plus de TCEP.Ensuite, transférez la suspension dans un tube de 1,5 millilitre. Ajouter 25 microlitres de solution m-PEG 5K de stock et mélanger par pipetting. Incuber à température ambiante avec la rotation de bout en bout.Après 60 minutes d’incubation, retirer le m-PEG 5K non incorporé en effectuant à nouveau des précipitations de méthanol chloroforme. Centrifugeuse à plus de 13 000 fois G et 25 degrés Celsius pendant 10 minutes. Retirez soigneusement la phase supérieure comme avant, en évitant la crêpe épaisse et flocculente.Ajouter un millilitre de méthanol et mélanger délicatement mais bien. Centrifugeuse à plus de 13 000 fois G et 25 degrés Celsius pendant 10 minutes. Retirer délicatement le surnatant et rincer la pastille avec un millilitre de méthanol.Encore une fois, centrifugeuse à plus de 13 000 fois G et 25 degrés Celsius pendant 10 minutes. Après séchage à l’air de la pastille, la resuspendre en 50 microlitres de tampon A sans TCEP ni agent réducteur. Réservez 5 microlitres de la solution pour la quantitation des protéines BCA.Après la quantitation, ajouter une quantité appropriée de tampon échantillon 4x Laemmli. Chargez l’échantillon sur un gel de page SDS. Utilisez des protocoles standard de transfert et de détection de séparation pour les ballonnements occidentaux.Pour étudier l’état de palmitoylation des protéines SynDIG, des fractions de membrane P2 provenant de cerveaux de souris homogénéisés ont été soumises à l’analyse APEGS. La séparation et l’enquête avec des anticorps ont démontré que SynDIG1, SynDIG4 Prrt1, et Prrt2 sont palmitoylated dans le cerveau de souris. Le but des précipitations de méthanol chloroforme est d’empêcher un produit chimique, tel que nem, interférer avec la prochaine étape du protocole.Une bonne précipitation de méthanol chloroforme éliminera les produits chimiques indésirables tout en minimisant la perte de protéines. Cette méthode peut être appliquée aux lysates cérébraux de souris de différents âges ou de différentes régions du cerveau pour étudier les règlements spatio-temporels de la palmitoylation.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

An Optimized Protocol for Electrophoretic Mobility Shift Assay Using Infrared Fluorescent Dye-labeled Oligonucleotides

Un protocole optimisé pour la mobilité électrophorétique Maj Assay utilisant Oligonucleotides infrarouge Fluorescent Dye marqués

Electrophoretic Mobility Shift Assays (EMSA) are an instrumental tool to characterize the interactions between proteins and their target DNA sequences. ...

Recherche

Biochimie

High Precision FRET at Single-molecule Level for Biomolecule Structure Determination

FRET de haute précision au niveau d&#39;une molécule pour la détermination de la structure biomoléculaire

A protocol on how to perform high-precision interdye distance measurements using F&#246;rster resonance energy transfer (FRET) at the single-molecule ...

Oligopeptide Competition Assay for Phosphorylation Site Determination

Test de compétition Oligopeptide pour la détermination du site de phosphorylation

Protein phosphorylation at specific sites determines its conformation and interaction with other molecules. Thus, protein phosphorylation affects ...

Detection of Detergent-sensitive Interactions Between Membrane Proteins

Détection de détergent-sensibles aux Interactions entre les protéines membranaires

Our ability to explore protein-protein interactions is the key to understanding regulatory connections in the cell. However, detection of protein-protein ...

Analysis of Thylakoid Membrane Protein Complexes by Blue Native Gel Electrophoresis

Analyse des Complexes de protéine de Membrane de Thylakoid par électrophorèse sur Gel natif bleu

Photosynthetic electron transfer chain (ETC) converts solar energy to chemical energy in the form of NADPH and ATP. Four large protein complexes embedded ...

A Fluorescence Fluctuation Spectroscopy Assay of Protein-Protein Interactions at Cell-Cell Contacts

Un dosage de spectroscopie par Fluorescence Fluctuation d’Interactions protéine-protéine à Contacts cellule-cellule

A variety of biological processes involves cell-cell interactions, typically mediated by proteins that interact at the interface between neighboring ...

Use of Recombinant Fusion Proteins in a Fluorescent Protease Assay Platform and Their In-gel Renaturation

Utilisation des protéines de Fusion recombinantes dans une plate-forme de test de protéase Fluorescent et leur Renaturation en gel

Proteases are intensively studied enzymes due to their essential roles in several biological pathways of living organisms and in pathogenesis; therefore, ...

Robust Comparison of Protein Levels Across Tissues and Throughout Development Using Standardized Quantitative Western Blotting

Robuste comparaison des niveaux de protéine tissus et partout ailleurs au développement aide à éponger occidental quantitatives standardisées

Western blotting is a technique that is commonly used to detect and quantify protein expression. Over the years, this technique has led to many advances ...

Interactions with and Membrane Permeabilization of Brain Mitochondria by Amyloid Fibrils

Interactions avec et perméabilisation des membranes des mitochondries cérébrales par amyloïde Fibrils

A growing body of evidence indicates that membrane permeabilization, including internal membranes such as mitochondria, is a common feature and primary ...

Transverse Sectioning of Mature Rice (Oryza sativa L.) Kernels for Scanning Electron Microscopy Imaging Using Pipette Tips as Immobilization Support

Transverse Sectioning of Mature Rice Oryza sativa L. Kernels for Scanning Electron Microscopy Imaging Using Pipette Tips as Immobilization Support

Sectionnement transversal du riz mature (Oryza sativa L.) Noyaux pour l’imagerie par microscopie électronique à balayage à l’aide d’embouts de pipette comme support d’immobilisation