Name: acyl-pegyl exchange gel shift assay for quantitative determination of palmitoylation of brain membrane proteins
Uploaded: 2020-03-29T14:00:00
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लेखक एपेग्स परख पर सलाह और इनपुट के लिए के वूल्फ्रे का शुक्रिया अदा करते हैं। इन अध्ययनों को व्हाइटहॉल फाउंडेशन और एनआईएच-एनआईएम (1R01MH119347) से ईस्वी को अनुसंधान अनुदान द्वारा वित्त पोषित किया गया था।

सभी पशु प्रक्रियाओं के स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थानों (NIH) द्वारा निर्धारित दिशा निर्देशों का पालन किया और कैलिफोर्निया विश्वविद्यालय, डेविस में संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित...

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	<li>Blaskovic, S., Blanc, M., van der Goot, F. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+does+S-palmitoylation+do+to+membrane+proteins?.">What does S-palmitoylation do to membrane proteins?.</a> FEBS Journal. 280, 2766-2774 (2013).</li><li>Fukata, Y., Fukata, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+palmitoylation+in+neuronal+development+and+synaptic+plasticity.">Protein palmitoylation in neuronal development and synaptic plasticity.</a> Nature Reviews Neuroscience. 11, 161-175 (2010).</li><li>Globa, A. K., Bamji, S. 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Separating Protein with SDS-PAGE.</a> Basic Methods in Cellular and Molecular Biology. , (2019).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Science+Education+Database.+The+Western+Blot.">Science Education Database. The Western Blot.</a> Basic Methods in Cellular and Molecular Biology. , (2019).</li><li>Chenaux, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+SynDIG1+Reduces+Excitatory+Synapse+Maturation+But+Not+Formation+In+Vivo.">Loss of SynDIG1 Reduces Excitatory Synapse Maturation But Not Formation In Vivo.</a> eNeuro. 3 (5), (2016).</li><li>Matt, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SynDIG4/Prrt1+Is+Required+for+Excitatory+Synapse+Development+and+Plasticity+Underlying+Cognitive+Function.">SynDIG4/Prrt1 Is Required for Excitatory Synapse Development and Plasticity Underlying Cognitive Function.</a> Cell Reports. 22, 2246-2253 (2018).</li><li>Purkey, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AKAP150+Palmitoylation+Regulates+Synaptic+Incorporation+of+Ca(2+)-Permeable+AMPA+Receptors+to+Control+LTP.">AKAP150 Palmitoylation Regulates Synaptic Incorporation of Ca(2+)-Permeable AMPA Receptors to Control LTP.</a> Cell Reports. 25, 974-987 (2018).</li><li>Woolfrey, K. M., Sanderson, J. L., Dell'Acqua, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+palmitoyl+acyltransferase+DHHC2+regulates+recycling+endosome+exocytosis+and+synaptic+potentiation+through+palmitoylation+of+AKAP79/150.">The palmitoyl acyltransferase DHHC2 regulates recycling endosome exocytosis and synaptic potentiation through palmitoylation of AKAP79/150.</a> Journal of Neuroscience. 35, 442-456 (2015).</li></ol>

हमारे पिछले काम में, हमने यह प्रदर्शित करने के लिए आबे परख का उपयोग किया कि SynDIG1 स्थिरता, स्थानीयकरण और कार्य6को विनियमित करने के लिए गतिविधि-निर्भर तरीके से दो संरक्षित मुक़ाबला-ट्रांसमेम्ब्र?...

एस-पालिटोइलेशन लक्ष्य प्रोटीन का एक रिवर्सिबल पोस्ट-ट्रांसलेशनल संशोधन है जो स्थिर झिल्ली संघ, प्रोटीन तस्करी और प्रोटीन-प्रोटीन इंटरैक्शन को नियंत्रित करता है1। इसमें पालिटोइल एसिलट्रांसफरेज (पैट) एंजाइमों द्वारा उत्प्रेरक थिओस्टर लिंकेज के माध्यम से साइटीन अवशेषों के लिए 16 कार्बन पामिटेट मोईटी शामिल है। मस्तिष्क में कई सिनैप्टिक प्रोटीन को पामोलिटोयेटेड किया जाता है, जिसमें एम्पा-आरएस और पीएसडी-95 शामिल हैं, स्थिरता, स्थानीयकरण और कार्य2,3,3,4को विनियमित करने के लिए गतिविधि-निर्भर तरीके से। पीएसडी में सिनैप्टिक एएमपीआर के स्तर में परिवर्तन पीएसडी-95 अंडरलिटसिटिक प्लास्टिसिटी जैसे सिनैप्टिक मचानके के साथ सहायक कारकों की बातचीत के माध्यम से; इस प्रकार, सिनैप्टिक प्रोटीन की पापिटोइलेशन स्थिति निर्धारित करने के तरीके सिनैप्टिक प्लास्टिसिटी के तंत्र में महत्वपूर्ण अंतर्दृष्टि प्रदान करते हैं।
इससे पहले, हमने चार जीन (SynDIG1-4) के सिंडिग परिवार की पहचान की जो मस्तिष्क-विशिष्ट ट्रांसम्मेब्रेन प्रोटीन को एन्कोडिंग करता है जो AMPARs5के साथ संबद्ध होता है। अतिअभिव्यक्ति या असंबद्ध चूहा हिप्पोकैम्पल न्यूरॉन्स में SynDIG1 के नीचे क्रमशः बढ़ जाती है या कम हो जाती है, AMPA-R सिनैप्स आकार और संख्या ~ 50% के रूप में इम्यूनोसाइटोकेमिस्ट्री और इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी5का उपयोग कर का पता चला। हमने यह प्रदर्शित करने के लिए acyl-biotin एक्सचेंज (ABE) परख का उपयोग किया कि सिंडिग्गी 1 स्थिरता, स्थानीयकरण और कार्य6को विनियमित करने के लिए एक गतिविधि-निर्भर तरीके से दो संरक्षित मुक़ाबला-ट्रांसमेम्ब्रेन सीस अवशेषों (सभी सिंडिग प्रोटीन में पाया जाता है) पर पामोलिटोयेटेड है। अबे परख संशोधन और बाद में आत्मीयता शुद्धि7द्वारा संरक्षित साइस्टीन पर बायोटिन के आदान- प्रदान पर निर्भर करता है । यहां, हम एक अभिनव जैव रासायनिक दृष्टिकोण का वर्णन करते हैं, acyl-PEGyl एक्सचेंज जेल शिफ्ट (APEGS) परख8,,9,,10,,11,,12,जो आत्मीयता शुद्धि की आवश्यकता नहीं है और इसके बजाय जेल गतिशीलता में परिवर्तन का उपयोग करता है ब्याज की एक प्रोटीन के लिए संशोधनों की संख्या निर्धारित करते हैं । प्रोटोकॉल माउस मस्तिष्क से एंडोजेनस झिल्ली प्रोटीन की जांच के लिए वर्णित है जिसके लिए उपयुक्त एंटीबॉडी उपलब्ध हैं।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Hydroxylamine (HAM)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>26103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methoxy-PEG-(CH2)3NHCO(CH2)2-MAL (mPEG)</td>
			<td>NOF</td>
			<td>ME-050MA</td>
			<td>MW ~5000 kDa</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microfuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5415R</td>
			<td>or equivalent equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-ethylmalemide (NEM)</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>34115</td>
			<td>Highly toxic.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optical imager for densitometry</td>
			<td>Azure Biosystems</td>
			<td>Sapphire Biomolecular Imager</td>
			<td>or equivalent equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polypropylene tubes with cap</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-956-1D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological pipets (glass)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-678-27D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Table top centrifuge</td>
			<td>Beckman</td>
			<td>Allegra X-15R</td>
			<td>or equivalent equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris(2-carboxyethyl) phosphine-hydrochloride (TCEP)</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>580560</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

acyl-pegyl exchange gel shift assay for quantitative determination of palmitoylation of brain membrane proteins

पोस्टसिनैप्टिक घनत्व (पीएसडी) के भीतर सिनैप्टिक एम्पा रिसेप्टर्स (AMPARs) के स्तर में गतिविधि-निर्भर परिवर्तन सीखने और स्मृति के लिए एक सेलुलर तंत्र का प्रतिनिधित्व करने के लिए सोचा जाता है। पलमिटोइलेशन स्थानीयकरण और एम्पा-रुपये, सहायक कारकों और सिनैप्टिक मचान ों सहित कई सिनैप्टिक प्रोटीन के कार्य को गतिविधि-निर्भर तरीके से नियंत्रित करता है। हमने चार जीन (सिंडिजी 1-4) के सिनेप्स विभेदन प्रेरित जीन (सिंडिग) परिवार की पहचान की जो मस्तिष्क-विशिष्ट ट्रांसमेम्ब्रेन प्रोटीन को एन्कोडिंग करता है जो एम्प्रर्स के साथ संबद्ध होते हैं और सिनैप्स शक्ति को विनियमित करते हैं। सिंडिजी1 गतिविधि पर निर्भर उत्तेजक सिनेप्स विकास के लिए महत्वपूर्ण मुक़ाबला-ट्रांसझिल्ली क्षेत्र में 1 9 1 और 1 9 2 की स्थिति में स्थित दो साइटीन अवशेषों पर पामिटोयेटेड है। यहां, हम एक अभिनव जैव रासायनिक दृष्टिकोण का वर्णन करते हैं, acyl-PEGyl एक्सचेंज जेल शिफ्ट (APEGS) परख, ब्याज के किसी भी प्रोटीन के palmitoylation राज्य की जांच करने के लिए और माउस मस्तिष्क lysates में प्रोटीन के SynDIG परिवार के साथ अपनी उपयोगिता का प्रदर्शन ।

ब्याज के प्रोटीन के खिलाफ एंटीबॉडी के साथ इम्यूनोलोटिंग माउस मस्तिष्क lysates में palmitoylated राज्य (गैर, singly, दोगुना, आदि) के रूप में नमूनों जिसमें हैम शामिल नहीं किया गया था की तुलना में गतिशीलता बदला?...

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Acyl-PEGyl Exchange Gel Shift Assay for Quantitative Determination of Palmitoylation of Brain Membrane Proteins

पलमिटोइलेशन में 16 कार्बन पामिटेट मोईटी को रिवर्सिबल तरीके से लक्षित प्रोटीन के अवशेषों को शामिल करने पर जोर दिया जाता है। यहां, हम माउस मस्तिष्क lysates में रुचि के किसी भी प्रोटीन के palmitoylation स्थिति की जांच करने के लिए, एक जैव रासायनिक दृष्टिकोण, acyl-PEGyl एक्सचेंज जेल शिफ्ट (APEGS) परख का वर्णन करते हैं ।

मस्तिष्क झिल्ली प्रोटीन के Palmitoylation के मात्रात्मक निर्धारण के लिए Acyl-PEGyl एक्सचेंज जेल शिफ्ट परख

Activity-dependent alterations in the levels of synaptic AMPA receptors (AMPARs) within the postsynaptic density (PSD) is thought to represent a cellular ...

यह जैव रासायनिक विधि मस्तिष्क में व्यक्त किसी भी झिल्ली प्रोटीन की पामिटोइलेशन स्थिति के निर्धारण के लिए अनुमति देती है जिसके लिए एक उपयुक्त एंटीबॉडी उपलब्ध है। इस तकनीक का मुख्य लाभ यह है कि इसमें आत्मीयता शुद्धि की आवश्यकता नहीं है और इसके बजाय ब्याज के प्रोटीन के संशोधनों की संख्या निर्धारित करने के लिए जेल गतिशीलता में परिवर्तन का उपयोग करता है। मस्तिष्क को विच्छेदन करने के बाद, इसे तुरंत बर्फ पर एक ग्लास समरूप में समरूप बफर के 10 मिलीलीटर में समरूप करें।लगभग 12 स्ट्रोक का उपयोग करके, 1400 बार जी, और चार डिग्री सेल्सियस पर 15 मिनट के लिए lysates अपकेंद्रित्र। बर्फ पर एक नई ट्यूब के लिए सुपरनैंट स्थानांतरित करें। एकरूपनीकरण बफर के 10 मिलीलीटर में गोली को फिर से खर्च करें।लगभग छह स्ट्रोक का उपयोग करके इसे समरूप करें। 710 बार जी और चार डिग्री सेल्सियस पर 10 मिनट के लिए निलंबन अपकेंद्रित्र। सुपरनेटेंट्स को मिलाएं और उन्हें 40, 000 बार जी और चार डिग्री सेल्सियस पर 20 मिनट के लिए मिलाएं।सुपरनेट को त्यागें और पैलेट टिप के साथ गोली को तोड़कर एक एकरूपता बफर में पैलेट झिल्ली के अंश को फिर से खर्च करें और ऊपर और नीचे पाइपिंग करें। प्रोटीन के स्तर को मात्रा निर्धारित करने के लिए एबीसीए परख करें। एपीईजीएस परख करने के लिए, 1.5 मिलीलीटर ट्यूब में बफर ए के 470 माइक्रोलीटर रखें और लगभग 100 से 200 मिलीग्राम प्रोटीन जोड़ें।ट्यूब को सोनिकेट करें और फिर ट्यूब को 25 डिग्री सेल्सियस पर और न्यूनतम 13, 000 बार जी को 10 मिनट के लिए अपकेंद्री करके अघुलनशील प्रोटीन को अलग करें। घुलनीय प्रोटीन को एक नई 1.5 मिलीलीटर ट्यूब में स्थानांतरित करें। सबसे पहले, टीसीईपी के 25 माइक्रोलीटर में घुलनीय प्रोटीन को 55 डिग्री सेल्सियस पर 60 मिनट के लिए इनक्यूबेटिंग करके डिसल्फाइड बांड को बाधित करें।फिर, कमरे के तापमान पर तीन घंटे के लिए एनईएम के स्टॉक समाधान के 12.5 माइक्रोलीटर के साथ समाधान को इनक्यूबेटिंग करके मुफ्त साइस्टीन को ब्लॉक करें। इसके बाद, क्लोरोफॉर्म मेथनॉल वर्षा की प्रक्रिया शुरू करें। प्रोटीन समाधान को 1.5 मिलीलीटर ट्यूब से पॉलीप्रोपाइलीन या ग्लास ट्यूब में स्थानांतरित करें जिसे मामूली गति से झूलने वाली बाल्टी रोटर में अपकेंद्री किया जा सकता है।मेथनॉल और भंवर के दो मिलीलीटर संक्षेप में जोड़ें। क्लोरोफॉर्म और भंवर का एक मिलीलीटर संक्षेप में जोड़ें। फिर 1.5 मिलीलीटर डिओनाइज्ड वॉटर और भंवर को फिर से संक्षेप में जोड़ें।यदि आवश्यक हो, तो पूरी तरह से मिश्रण सुनिश्चित करने के लिए ट्यूब को उलटा दें। एक झूल बाल्टी रोटर में 30 मिनट के लिए ३००० बार जी और 25 डिग्री सेल्सियस पर नमूनों अपकेंद्रित्र । समाधान के ऊपरी चरण को एक ट्यूब में सावधानी से हटा दें और त्यागें।मेथनॉल के 1.5 मिलीलीटर जोड़ें। धीरे लेकिन अच्छी तरह से ट्यूब के कोमल उलटा द्वारा मिलाएं, सावधान किया जा रहा अपारदर्शी प्रोटीन पैनकेक टुकड़ा करने के लिए नहीं । एक झूल बाल्टी रोटर में 10 मिनट के लिए 3000 बार जी और 25 डिग्री सेल्सियस पर नमूना अपकेंद्रित्र।ग्लास सीरोलॉजिकल पिपेट का उपयोग करके, प्रोटीन पैनकेक को परेशान किए बिना जितना संभव हो समाधान के शीर्ष चरण को हटा दें। ध्यान से मेथनॉल के एक मिलीलीटर के साथ गोली कुल्ला और यह कम से कम 10 मिनट के लिए सूखी हवा के लिए अनुमति देते हैं। क्लोरोफॉर्म मेथनॉल वर्षा पूर्ण होने के साथ, बफर ए ट्रांसफर के 125 माइक्रोलीटर में प्रोटीन को फिर से खर्च करके पामिटोइल थिओस्टर लिंकेज के दरार को एक नई 1.5 मिलीलीटर ट्यूब में शुरू करें।ट्यूब को संक्षेप में सोनिकेट करें और फिर अघुलनशील सामग्री को हटाने के लिए 13, 000 गुना जी या उससे अधिक और 10 मिनट के लिए 25 डिग्री सेल्सियस पर इसे अपकेंद्री करें। घुलनीय प्रोटीन को नई 1.5 मिलीलीटर ट्यूबों में स्थानांतरित करें और कमरे के तापमान पर 60 मिनट के लिए नमूनों को इनक्यूबेटिंग करने के बाद बफर एच या बफर टी के 375 माइक्रोलीटर जोड़ें, क्लोरोफॉर्म मेथनॉल वर्षा दोहराएं। असुरक्षित साइस्टीन में एम-खूंटी जोड़ने के लिए, बफर ए के 100 माइक्रोलीटर में गोली को फिर से खर्च करके शुरू करें जिसमें 10 लाख या अधिक टीएमईपी होता है।फिर निलंबन को 1.5 मिलीलीटर ट्यूब पर स्थानांतरित करें। स्टॉक एम-खूंटी 5K समाधान के 25 माइक्रोलीटर जोड़ें और पाइपिंग द्वारा मिलाएं। अंत रोटेशन के अंत के साथ कमरे के तापमान पर इनक्यूबेट।इनक्यूबेशन के 60 मिनट के बाद, क्लोरोफॉर्म मेथनॉल वर्षा फिर से प्रदर्शन करके अनिगमित एम-खूंटी 5K को हटा दें। 13, 000 गुना से अधिक जी और 10 मिनट के लिए 25 डिग्री सेल्सियस पर सेंट्रलाइज । मोटी, फ्लेस्कुलेंट पैनकेक से परहेज करते हुए पहले की तरह ऊपरी चरण को ध्यान से हटा दें।मेथनॉल का एक मिलीलीटर जोड़ें और धीरे-धीरे लेकिन अच्छी तरह से मिलाएं। 13, 000 गुना से अधिक जी और 10 मिनट के लिए 25 डिग्री सेल्सियस पर सेंट्रलाइज । ध्यान से सुपरनेट निकालें और मेथनॉल के एक मिलीलीटर के साथ गोली कुल्ला।फिर, 13, 000 बार जी और 10 मिनट के लिए 25 डिग्री सेल्सियस से अधिक पर अपकेंद्रित्र । गोली सुखाने वाली हवा के बाद, इसे बफर ए के 50 माइक्रोलीटर में टीएमईपी या किसी भी कम करने वाले एजेंट के बिना फिर से खर्च करें। बीसीए प्रोटीन क्वांटिटेशन के लिए समाधान के 5 माइक्रोलीटर आरक्षित करें।क्वांटिटेशन के बाद, 4x लेम्मली नमूना बफर की उचित मात्रा जोड़ें। नमूना को एसडीएस पेज जेल पर लोड करें। पश्चिमी ब्लॉटिंग के लिए मानक पृथक्करण हस्तांतरण और डिटेक्शन प्रोटोकॉल का उपयोग करें।सिंडिग प्रोटीन की पामिटोइलेशन स्थिति की जांच करने के लिए, समरूप माउस दिमाग से पी 2 झिल्ली अंश एपीईजीएस परख के अधीन थे। एंटीबॉडी के साथ पृथक्करण और जांच से पता चला कि सिंकिग 1, सिंडिग 4 प्रर्ट1 और प्रर्ट 2 माउस मस्तिष्क में पामीटोइलेटेड हैं। क्लोरोफॉर्म मेथनॉल वर्षा का उद्देश्य एक रसायन को रोकना है, जैसे एनईएम, प्रोटोकॉल के अगले चरण में हस्तक्षेप करना।एक उचित क्लोरोफॉर्म मेथनॉल वर्षा प्रोटीन हानि को कम करते हुए अवांछनीय रसायनों को हटा देगी। इस विधि को विभिन्न उम्र के चूहों से या विभिन्न मस्तिष्क क्षेत्रों से मस्तिष्क के ल्युट्स पर लागू किया जा सकता है ताकि पामिटोइलेशन के स्थानिक-लौकिक नियमों की जांच की जा सके।

Research

JoVE Journal

Biochemistry

An Optimized Protocol for Electrophoretic Mobility Shift Assay Using Infrared Fluorescent Dye-labeled Oligonucleotides

Electrophoretic गतिशीलता शिफ्ट परख इन्फ्रारेड फ्लोरोसेंट रंजक लेबल oligonucleotides उपयोग करने के लिए एक अनुकूलित प्रोटोकॉल

Electrophoretic Mobility Shift Assays (EMSA) are an instrumental tool to characterize the interactions between proteins and their target DNA sequences. ...

High Precision FRET at Single-molecule Level for Biomolecule Structure Determination

बायोमोलेस्क्यू संरचना निर्धारण के लिए एकल अणु स्तर पर उच्च शुद्धता FRET

A protocol on how to perform high-precision interdye distance measurements using F&#246;rster resonance energy transfer (FRET) at the single-molecule ...

Oligopeptide Competition Assay for Phosphorylation Site Determination

फास्फोरिलेशन साइट निर्धारण के लिए ओलिगोपेप्टाइड प्रतियोगिता परख

Protein phosphorylation at specific sites determines its conformation and interaction with other molecules. Thus, protein phosphorylation affects ...

Detection of Detergent-sensitive Interactions Between Membrane Proteins

झिल्ली प्रोटीन के बीच डिटर्जेंट-संवेदनशील बातचीत का पता लगाने

Our ability to explore protein-protein interactions is the key to understanding regulatory connections in the cell. However, detection of protein-protein ...

Analysis of Thylakoid Membrane Protein Complexes by Blue Native Gel Electrophoresis

ब्लू देशी जेल ट्रो द्वारा Thylakoid झिल्ली प्रोटीन परिसरों का विश्लेषण

Photosynthetic electron transfer chain (ETC) converts solar energy to chemical energy in the form of NADPH and ATP. Four large protein complexes embedded ...

A Fluorescence Fluctuation Spectroscopy Assay of Protein-Protein Interactions at Cell-Cell Contacts

सेल-सेल संपर्कों में प्रोटीन-प्रोटीन इंटरैक्शन की एक प्रतिदीप्ति अस्थिरता स्पेक्ट्रोस्कोपी परख

A variety of biological processes involves cell-cell interactions, typically mediated by proteins that interact at the interface between neighboring ...

Use of Recombinant Fusion Proteins in a Fluorescent Protease Assay Platform and Their In-gel Renaturation

एक फ्लोरोसेंट चिढ़ा परख मंच में रिकॉमबिनेंट फ्यूजन प्रोटीन का उपयोग करें और उनके जेल Renaturation

Proteases are intensively studied enzymes due to their essential roles in several biological pathways of living organisms and in pathogenesis; therefore, ...

Robust Comparison of Protein Levels Across Tissues and Throughout Development Using Standardized Quantitative Western Blotting

ऊतकों में प्रोटीन के स्तर की मजबूत तुलना और विकास के दौरान मानकीकृत मात्रात्मक पश्चिमी Blotting का उपयोग

Western blotting is a technique that is commonly used to detect and quantify protein expression. Over the years, this technique has led to many advances ...

Interactions with and Membrane Permeabilization of Brain Mitochondria by Amyloid Fibrils

एमीलॉयड फाइब्रिल्स द्वारा मस्तिष्क माइटोकोंड्रिया के साथ और झिल्ली permeabilization के साथ बातचीत

A growing body of evidence indicates that membrane permeabilization, including internal membranes such as mitochondria, is a common feature and primary ...

Transverse Sectioning of Mature Rice (Oryza sativa L.) Kernels for Scanning Electron Microscopy Imaging Using Pipette Tips as Immobilization Support

Transverse Sectioning of Mature Rice Oryza sativa L. Kernels for Scanning Electron Microscopy Imaging Using Pipette Tips as Immobilization Support

परिपक्व चावल के अनुप्रस्थ विभाजन(Oryza sativa एल.) स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी इमेजिंग के लिए कर्नेल्स स्थिरीकरण समर्थन के रूप में पिपेट युक्तियाँ का उपयोग कर