Name: acyl-pegyl exchange gel shift assay for quantitative determination of palmitoylation of brain membrane proteins
Uploaded: 2020-03-29T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Acyl-PEGyl Exchange Gel Shift Assay for Quantitative Determination of Palmitoylation of Brain Membrane Proteins at JoVE.com

Författarna tackar K. Woolfrey för råd och input på APEGS-analysen. Dessa studier finansierades genom forskningsanslag till E.D. från Whitehall Foundation och NIH-NIMH (1R01MH119347).

Alla djurförsök följde riktlinjer som fastställts av National Institutes of Health (NIH) och har godkänts av institutionella Animal Care and Use Committee vid University of California, Davis.
1. Beredning av mushjärnmembran
<ol><li>Halshugga musen med hjälp av en giljotinapparat och dissekera hjärnan ut snabbt (i <1 min, om möjligt, för att minimera palmitoylering förändringar som kan uppstå under dissekering förfarande). Homogenisera omedelbart i 10 ml homogeniseringsbuffert (...

<ol>
	<li>Blaskovic, S., Blanc, M., van der Goot, F. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+does+S-palmitoylation+do+to+membrane+proteins?.">What does S-palmitoylation do to membrane proteins?.</a> FEBS Journal. 280, 2766-2774 (2013).</li><li>Fukata, Y., Fukata, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+palmitoylation+in+neuronal+development+and+synaptic+plasticity.">Protein palmitoylation in neuronal development and synaptic plasticity.</a> Nature Reviews Neuroscience. 11, 161-175 (2010).</li><li>Globa, A. K., Bamji, S. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+palmitoylation+in+the+development+and+plasticity+of+neuronal+connections.">Protein palmitoylation in the development and plasticity of neuronal connections.</a> Current Opinion in Neurobiology. 45, 210-220 (2017).</li><li>Thomas, G. M., Huganir, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Palmitoylation-dependent+regulation+of+glutamate+receptors+and+their+PDZ+domain-containing+partners.">Palmitoylation-dependent regulation of glutamate receptors and their PDZ domain-containing partners.</a> Biochemical Society Transactions. 41, 72-78 (2013).</li><li>Kalashnikova, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SynDIG1:+an+activity-regulated,+AMPA-+receptor-interacting+transmembrane+protein+that+regulates+excitatory+synapse+development.">SynDIG1: an activity-regulated, AMPA- receptor-interacting transmembrane protein that regulates excitatory synapse development.</a> Neuron. 65, 80-93 (2010).</li><li>Kaur, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity-Dependent+Palmitoylation+Controls+SynDIG1+Stability,+Localization,+and+Function.">Activity-Dependent Palmitoylation Controls SynDIG1 Stability, Localization, and Function.</a> Journal of Neuroscience. 36, 7562-7568 (2016).</li><li>Wan, J., Roth, A. F., Bailey, A. O., Davis, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Palmitoylated+proteins:+purification+and+identification.">Palmitoylated proteins: purification and identification.</a> Nature Protocols. 2, 1573-1584 (2007).</li><li>Howie, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Substrate+recognition+by+the+cell+surface+palmitoyl+transferase+DHHC5.">Substrate recognition by the cell surface palmitoyl transferase DHHC5.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111, 17534-17539 (2014).</li><li>Kanadome, T., Yokoi, N., Fukata, Y., Fukata, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+Screening+of+Depalmitoylating+Enzymes+and+Evaluation+of+Their+Activities+by+the+Acyl-PEGyl+Exchange+Gel-Shift+(APEGS)+Assay.">Systematic Screening of Depalmitoylating Enzymes and Evaluation of Their Activities by the Acyl-PEGyl Exchange Gel-Shift (APEGS) Assay.</a> Methods in Molecular Biology. 2009, 83-98 (2019).</li><li>Percher, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass-tag+labeling+reveals+site-specific+and+endogenous+levels+of+protein+S-fatty+acylation.">Mass-tag labeling reveals site-specific and endogenous levels of protein S-fatty acylation.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113, 4302-4307 (2016).</li><li>Percher, A., Thinon, E., Hang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mass-Tag+Labeling+Using+Acyl-PEG+Exchange+for+the+Determination+of+Endogenous+Protein+S-Fatty+Acylation.">Mass-Tag Labeling Using Acyl-PEG Exchange for the Determination of Endogenous Protein S-Fatty Acylation.</a> Current Protocols in Protein Science. 89, 14.17.1-14.17.11 (2017).</li><li>Yokoi, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+PSD-95+Depalmitoylating+Enzymes.">Identification of PSD-95 Depalmitoylating Enzymes.</a> Journal of Neuroscience. 36, 6431-6444 (2016).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=JoVE+Science+Education+Database.+Separating+Protein+with+SDS-PAGE.">JoVE Science Education Database. Separating Protein with SDS-PAGE.</a> Basic Methods in Cellular and Molecular Biology. , (2019).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Science+Education+Database.+The+Western+Blot.">Science Education Database. The Western Blot.</a> Basic Methods in Cellular and Molecular Biology. , (2019).</li><li>Chenaux, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loss+of+SynDIG1+Reduces+Excitatory+Synapse+Maturation+But+Not+Formation+In+Vivo.">Loss of SynDIG1 Reduces Excitatory Synapse Maturation But Not Formation In Vivo.</a> eNeuro. 3 (5), (2016).</li><li>Matt, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SynDIG4/Prrt1+Is+Required+for+Excitatory+Synapse+Development+and+Plasticity+Underlying+Cognitive+Function.">SynDIG4/Prrt1 Is Required for Excitatory Synapse Development and Plasticity Underlying Cognitive Function.</a> Cell Reports. 22, 2246-2253 (2018).</li><li>Purkey, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AKAP150+Palmitoylation+Regulates+Synaptic+Incorporation+of+Ca(2+)-Permeable+AMPA+Receptors+to+Control+LTP.">AKAP150 Palmitoylation Regulates Synaptic Incorporation of Ca(2+)-Permeable AMPA Receptors to Control LTP.</a> Cell Reports. 25, 974-987 (2018).</li><li>Woolfrey, K. M., Sanderson, J. L., Dell'Acqua, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+palmitoyl+acyltransferase+DHHC2+regulates+recycling+endosome+exocytosis+and+synaptic+potentiation+through+palmitoylation+of+AKAP79/150.">The palmitoyl acyltransferase DHHC2 regulates recycling endosome exocytosis and synaptic potentiation through palmitoylation of AKAP79/150.</a> Journal of Neuroscience. 35, 442-456 (2015).</li></ol>

I vårt tidigare arbete använde vi ABE-analysen för att visa att SynDIG1 är palmitoylerat vid två bevarade juxta-transmembrane Cys rester (finns i alla SynDIG-proteiner) på ett aktivitetsberoende sätt för att reglera stabilitet, lokalisering och funktion6. En begränsning är att ABE-analysen kräver affinitetsrening med agarose hartser konjugerade till avidin moieties som det sista steget i förfarandet, vilket resulterar i betydande förlust av signal som komplicerar kvantitativ analys. D...

S-palmitoylation är en reversibel post-translationell modifiering av målproteiner som reglerar stabil membranassociation, proteinhandel och protein-proteininteraktioner1. Det innebär tillsats av en 16-kol palmitat moiety till cystein rester via thioester länkage katalyseras av palmitoyl acyltransferase (PAT) enzymer. Många synaptiska proteiner i hjärnan är palmitoylerade, inklusive AMPA-Rs och PSD-95, på ett aktivitetsberoende sätt att reglera stabilitet, lokalisering och funktion2,3,4. Förändringar i nivåerna av synaptiska AMPARs i PSD via interaktion av hjälpfaktorer med synaptiska byggnadsställningar såsom PSD-95 ligger till grund för synaptisk plasticitet; Således ger metoder för att bestämma palmitoleriseringstillståndet hos synaptiska proteiner viktig insikt i mekanismer för synaptisk plasticitet.
Tidigare har vi identifierat SynDIG-familjen av fyra gener (SynDIG1-4) kodande hjärnspecifika transmembranproteiner som associerar med AMPARs5. Överuttryck eller knock-down av SynDIG1 i dissocierade råtta hippocampus nervceller ökar eller minskar, respektive, AMPA-R synaps storlek och antal med ~ 50% som detekteras med hjälp av immuncytokemi och elektrofysiologi5. Vi använde acyl-biotin utbyte (ABE) analys för att visa att SynDIG1 är palmitoylerade vid två bevarade juxta-transmembrane Cys rester (finns i alla SynDIG proteiner) på ett verksamhetsberoende sätt att reglera stabilitet, lokalisering och funktion6. ABE-analysen bygger på utbyte av biotin mot cysteiner som skyddas genom modifiering och efterföljande rening av affinitet7. Här beskriver vi en innovativ biokemisk metod, acyl-PEGyl utbyte gel skift (APEGS) analys8,9,10,11,12, som inte kräver affinitet rening och i stället använder förändringar i gel rörlighet för att bestämma antalet ändringar för ett protein av intresse. Protokollet beskrivs för undersökning av endogena membranproteiner från mushjärna för vilka lämpliga antikroppar finns tillgängliga.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Hydroxylamine (HAM)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>26103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methoxy-PEG-(CH2)3NHCO(CH2)2-MAL (mPEG)</td>
			<td>NOF</td>
			<td>ME-050MA</td>
			<td>MW ~5000 kDa</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microfuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5415R</td>
			<td>or equivalent equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-ethylmalemide (NEM)</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>34115</td>
			<td>Highly toxic.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optical imager for densitometry</td>
			<td>Azure Biosystems</td>
			<td>Sapphire Biomolecular Imager</td>
			<td>or equivalent equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polypropylene tubes with cap</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-956-1D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological pipets (glass)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-678-27D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Table top centrifuge</td>
			<td>Beckman</td>
			<td>Allegra X-15R</td>
			<td>or equivalent equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris(2-carboxyethyl) phosphine-hydrochloride (TCEP)</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>580560</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

acyl-pegyl exchange gel shift assay for quantitative determination of palmitoylation of brain membrane proteins

Aktivitetsberoende förändringar i nivåerna av synaptiska AMPA-receptorer (AMPARs) inom den postsynaptiska densiteten (PSD) tros representera en cellulär mekanism för inlärning och minne. Palmitolering reglerar lokalisering och funktion av många synaptiska proteiner inklusive AMPA-Rs, hjälpfaktorer och synaptiska byggnadsställningar på ett aktivitetsberoende sätt. Vi identifierade synaps differentiering inducerad gen (SynDIG) familj av fyra gener (SynDIG1-4) kodning hjärnan-specifika transmembrane proteiner som associerar med AMPARs och reglera synaps styrka. SynDIG1 är palmitoylerad vid två cysteinrester belägna vid positionerna 191 och 192 i regionen juxta-transmembrane som är viktig för verksamhetsberoende excitatorisk synapsutveckling. Här beskriver vi en innovativ biokemisk metod, acyl-PEGyl exchange gel shift (APEGS) analys, att undersöka palmitolering tillstånd av något protein av intresse och visa dess nytta med SynDIG familj av proteiner i mus hjärnan lysates.

Immunoblotting med antikroppar mot protein av intresse avslöjar palmitoylerat tillstånd (icke, singly, dubbelt, etc.) i mus hjärnan lysates som bestäms av rörlighet skift jämfört med prover där HAM inte ingick. Tidigare hade vi visat att SynDIG1 var palmitoylerade på två platser med HJÄLP av ABE-analysen6; Vi kunde dock inte avgöra om båda platserna har modifierats i hjärnvävnad. Här visar vi att SynDIG1, SynDIG4/Prrt1 och Prrt2 är palmitoylerade i...

Watch this Scientific Journal Video about Acyl-PEGyl Exchange Gel Shift Assay for Quantitative Determination of Palmitoylation of Brain Membrane Proteins at JoVE.com

Acyl-PEGyl Exchange Gel Shift Assay for Quantitative Determination of Palmitoylation of Brain Membrane Proteins

Palmitolerisering innebär införlivande av en 16-karbon palmitat moiety till cysteinrester av målproteiner på ett reversibelt sätt. Här beskriver vi en biokemisk metod, acyl-PEGyl utbyte gel skift (APEGS) analys, att undersöka palmitoylering tillstånd av något protein av intresse för mus hjärnan lysates.

Acyl-PEGyl Exchange Gel Shift Analys för kvantitativ bestämning av palmitolerisering av hjärnans membranproteiner

Activity-dependent alterations in the levels of synaptic AMPA receptors (AMPARs) within the postsynaptic density (PSD) is thought to represent a cellular ...

Denna biokemiska metod möjliggör bestämning av palmitoylationtillståndet av något membranprotein uttryckt i hjärnan för vilken en lämplig antikropp finns tillgänglig. Den största fördelen med denna teknik är att det inte kräver affinitet rening och istället utnyttjar förändringar i gel rörlighet för att bestämma antalet ändringar av ett protein av intresse. Efter dissekera ut hjärnan, homogenisera den omedelbart i 10 milliliter homogenisering buffert i ett glas homogenisator på is.Med hjälp av cirka 12 slag, centrifuger lysates i 15 minuter vid 1400 gånger G, och fyra grader Celsius. Överför supernatanten till ett nytt rör på is. Resuspend pelleten i 10 milliliter av homogeniseringsbuffert.Homogenisera den med hjälp av ungefär sex slag. Centrifugera upphängningen vid 710 gånger G och fyra grader Celsius i 10 minuter. Kombinera supernatanterna och centrifugera dem på 40 000 gånger G och fyra grader Celsius i 20 minuter.Kassera supernatanten och resuspend den pelleterade membranfraktionen i en homogeniseringsbuffert genom att bryta upp pelleten med pipettspets och pipettering upp och ner. Utför ABCA-analys för att kvanttifiera proteinnivåer. För att utföra APEGS-analysen placerar du 470 mikroliter av buffert A i ett 1,5 milliliterrör och lägger till cirka 100 till 200 milligram protein.Sonikera röret och sedan separera olösliga proteinet genom centrifugering röret vid 25 grader Celsius och minst 13, 000 gånger G i 10 minuter. Överför det solubaliserade proteinet till ett nytt 1,5 milliliterrör. Först störa disulfid bindningarna genom att inkubera det solubaliserade proteinet i 25 mikroliter TCEP i 60 minuter vid 55 grader Celsius.Därefter, blockera fria cysteiner genom att inkubera lösningen med 12,5 mikroliter av stamlösningen av NEM i tre timmar vid rumstemperatur. Därefter börjar processen med kloroform metanol nederbörd. Överför proteinlösningen från 1,5 milliliterröret till ett polypropylen- eller glasrör som kan centrifugeras i en svängig skopanrotor med blygsam hastighet.Tillsätt två milliliter metanol och virvel kort. Tillsätt en milliliter kloroform och virvel kort. Tillsätt sedan 1,5 milliliter av avjoniserat vatten och virvel en kort stund igen.Om det behövs, invertera röret för att säkerställa grundlig blandning. Centrifugera proverna vid 3000 gånger G och 25 grader Celsius i 30 minuter i en svängande hink rotor. Ta försiktigt bort och kassera den övre fasen av lösningen i ett rör.Tillsätt 1,5 milliliter metanol. Blanda försiktigt men grundligt genom mild inversion av röret, var noga med att inte fragmentera den ogenomskinliga proteinpannkaka. Centrifugera provet vid 3000 gånger G och 25 grader Celsius i 10 minuter i en svängande hinkrotor.Med hjälp av en glas serologisk pipett, ta bort så mycket av den översta fasen av lösningen som möjligt utan att störa proteinpannkakan. Skölj försiktigt pelleten med en milliliter metanol och låt den lufttorka i minst 10 minuter. Med kloroformen metanol nederbörd klar, börja klyvning av palmitoyl tioceterlänkages genom att återutvärdera proteinet fällningen i 125 mikroliter av buffert A.Transfer till en ny 1,5 milliliter rör.Sonikera röret kort och sedan centrifug det på 13, 000 gånger G eller högre och 25 grader Celsius i 10 minuter för att ta bort olösligt material. Överför det solubaliserade proteinet till nya 1,5 milliliterrör och tillsätt 375 mikroliter av buffert H eller buffert T.Efter inkuberingen av proverna under 60 minuter vid rumstemperatur, upprepa utfällningen av kloroformen metanol. För att lägga m-PEG till oskyddade cysteiner, börja med att återutgöra pelleten i 100 mikroliter av buffert A som innehåller 10 mil eller mer TCEP.Överför sedan suspensionen till ett 1,5 milliliterrör. Tillsätt 25 mikroliter av lager m-PEG 5K lösning och blanda genom pipettering. Inkubera i rumstemperatur med ände över ändrotation.Efter 60 minuters inkubation, avlägsna oinkorporerad m-PEG 5K genom att utföra kloroform metanol nederbörd igen. Centrifugera vid större än 13, 000 gånger G och 25 grader Celsius i 10 minuter. Ta försiktigt bort den övre fasen som tidigare, undvika den tjocka, flocculenta pannkakan.Tillsätt en milliliter metanol och blanda försiktigt men noggrant. Centrifugera vid större än 13, 000 gånger G och 25 grader Celsius i 10 minuter. Ta försiktigt bort supernatanten och skölj pelleten med en milliliter metanol.Återigen centrifug vid större än 13, 000 gånger G och 25 grader Celsius i 10 minuter. Efter lufttorkning av pelleten, resuspend det i 50 mikroliter av buffert A utan TCEP eller något reduktionsmedel. Reserv 5 mikroliter av lösningen för BCA proteinkvantitation.Tillsätt en lämplig mängd 4x Laemmli provbuffert efter kvantisering. Fyll på provet på en SDS-sidagel. Använd standardprotokoll för separationsöverföring och detektion för västra blotting.För att undersöka palmitoyleringstillståndet hos SynDIG-proteiner utsattes P2-membranfraktioner från homogeniserade mushjärnor för APEGS-analysen. Separation och sondering med antikroppar visade att SynDIG1, SynDIG4 Prrt1 och Prrt2 är palmitoylerade i mushjärnan. Syftet med den kloroform metanol nederbörden är att förhindra en kemikalie, såsom NEM, störa nästa steg i protokollet.En ordentlig kloroform metanol nederbörd kommer att ta bort oönskade kemikalier samtidigt minimera proteinförlust. Denna metod kan tillämpas på hjärnan lysates från möss i olika åldrar eller från olika regioner hjärnan att undersöka den rumsliga-tidsmässiga förordningar palmitoylering.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

An Optimized Protocol for Electrophoretic Mobility Shift Assay Using Infrared Fluorescent Dye-labeled Oligonucleotides

Ett optimerat protokoll för elektroforetisk mobilitetsförskjutningsanalys med användning av infraröda fluorescerande färgämnesmärkta oligonukleotider

Electrophoretic Mobility Shift Assays (EMSA) are an instrumental tool to characterize the interactions between proteins and their target DNA sequences. ...

High Precision FRET at Single-molecule Level for Biomolecule Structure Determination

Hög precision FRET vid en-molekylnivå för biomolekylstrukturbestämning

A protocol on how to perform high-precision interdye distance measurements using F&#246;rster resonance energy transfer (FRET) at the single-molecule ...

Oligopeptide Competition Assay for Phosphorylation Site Determination

Oligopeptidkompetitionsanalys för fosforyleringsställningsbestämning

Protein phosphorylation at specific sites determines its conformation and interaction with other molecules. Thus, protein phosphorylation affects ...

Detection of Detergent-sensitive Interactions Between Membrane Proteins

Påvisande av tvättmedel-känsliga samspelet mellan membranproteiner

Our ability to explore protein-protein interactions is the key to understanding regulatory connections in the cell. However, detection of protein-protein ...

Analysis of Thylakoid Membrane Protein Complexes by Blue Native Gel Electrophoresis

Analys av Thylakoid membran proteinkomplex med blå infödda gelelektrofores

Photosynthetic electron transfer chain (ETC) converts solar energy to chemical energy in the form of NADPH and ATP. Four large protein complexes embedded ...

A Fluorescence Fluctuation Spectroscopy Assay of Protein-Protein Interactions at Cell-Cell Contacts

En fluorescens fluktuation spektroskopi haltbestämning av Protein-Protein interaktioner på Cell-Cell kontakter

A variety of biological processes involves cell-cell interactions, typically mediated by proteins that interact at the interface between neighboring ...

Use of Recombinant Fusion Proteins in a Fluorescent Protease Assay Platform and Their In-gel Renaturation

Användning av rekombinanta fusionsproteinerna i en fluorescerande proteas Assay plattform och deras i-gel utvinningsarbete

Proteases are intensively studied enzymes due to their essential roles in several biological pathways of living organisms and in pathogenesis; therefore, ...

Robust Comparison of Protein Levels Across Tissues and Throughout Development Using Standardized Quantitative Western Blotting

Robust jämförelse av proteinnivåer över vävnader och hela utveckling med hjälp av standardiserade kvantitativa Western Blotting

Western blotting is a technique that is commonly used to detect and quantify protein expression. Over the years, this technique has led to many advances ...

Interactions with and Membrane Permeabilization of Brain Mitochondria by Amyloid Fibrils

Interaktioner med och membran permeabilisering av hjärnans Mitokona av amyloid fibriller

A growing body of evidence indicates that membrane permeabilization, including internal membranes such as mitochondria, is a common feature and primary ...

Transverse Sectioning of Mature Rice (Oryza sativa L.) Kernels for Scanning Electron Microscopy Imaging Using Pipette Tips as Immobilization Support

Transverse Sectioning of Mature Rice Oryza sativa L. Kernels for Scanning Electron Microscopy Imaging Using Pipette Tips as Immobilization Support

Tvärgående sektionering av moget ris (Oryza sativa L.) Kärnor för skanning av elektronmikroskopiavbildning med pipettespetsar som immobiliseringsstöd