Name: reverse transcription loop-mediated isothermal amplification (rt-lamp) assay for the specific and rapid detection of tilapia lake virus
Uploaded: 2020-05-18T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Reverse Transcription Loop-Mediated Isothermal Amplification RT-LAMP Assay for the Specific and Rapid Detection of Tilapia Lake Virus at JoVE.com

이 프로젝트는 태국 연구 기금 (TRF) 교부금 번호 RDG6050078 및 고급 연구 센터, 고급 연구 연구소, 카세차르트 대학, 방콕, 태국 고등 교육 연구 진흥 및 태국 국립 연구 대학 프로젝트, 고등 교육위원회 사무실, 교육청, 태국에 의해 재정적으로 지원됩니다. 이 연구는 카세사르 대학 대학원의 대학원 프로그램 장학금에 의해 부분적으로 지원됩니다. 저자는 비디오의 이야기 말하기에 대한 박사 Kwanrawee 시리칸차나 감사하고 비디오를 편집 피야 와카라 시카린.

동물 조직의 사용을 관련시킨 이 실험은, 카세셋 대학, 방콕, 태국의 기관 동물 관리 및 사용 위원회에 의해 승인되었습니다 (프로토콜 번호 ACKU61-VET-009).
1. 조직 수집
<ol><li>정향 오일의 과다 복용을 사용하여 틸라피아 물고기를 안락사 (즉, 3 mL / L 이상). 트리카인 메탄설포네이트는 정향 오일의 대안으로 사용될 수 있습니다.</li>
	<li>멸균 마요네즈 가위와 집게를 사용하여 ?...

<ol>
	<li>Surachetpong, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Outbreaks+of+Tilapia+Lake+Virus+Infection,+Thailand,+2015-2016.">Outbreaks of Tilapia Lake Virus Infection, Thailand, 2015-2016.</a> Emerging Infectious Diseases. 23 (6), 1031-1033 (2017).</li><li>Eyngor, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+novel+RNA+virus+lethal+to+tilapia.">Identification of a novel RNA virus lethal to tilapia.</a> Journal of Clinical Microbiology. 52 (12), 4137-4146 (2014).</li><li>Adams, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+to+taxonomy+and+the+International+Code+of+Virus+Classification+and+Nomenclature+ratified+by+the+International+Committee+on+Taxonomy+of+Viruses+(2017).">Changes to taxonomy and the International Code of Virus Classification and Nomenclature ratified by the International Committee on Taxonomy of Viruses (2017).</a> Archives of Virology. 162 (8), 2505-2538 (2017).</li><li>Bacharach, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+a+Novel+Orthomyxo-like+Virus+Causing+Mass+Die-Offs+of+Tilapia.">Characterization of a Novel Orthomyxo-like Virus Causing Mass Die-Offs of Tilapia.</a> MBio. 7 (2), 00431 (2016).</li><li>Jaemwimol, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Susceptibility+of+important+warm+water+fish+species+to+tilapia+lake+virus+(TiLV)+infection.">Susceptibility of important warm water fish species to tilapia lake virus (TiLV) infection.</a> Aquaculture. 497, 462-468 (2018).</li><li>Giews, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+Information+and+Early+Warning+System+On+Food+And+Agriculture.">Global Information and Early Warning System On Food And Agriculture.</a> Food and Agriculture Organization of the United Nations. , (2017).</li><li>Al-Hussinee, L., Subramaniam, K., Ahasan, M. S., Keleher, B., Waltzek, T. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complete+Genome+Sequence+of+a+Tilapia+Lake+Virus+Isolate+Obtained+from+Nile+Tilapia+(Oreochromis+niloticus).">Complete Genome Sequence of a Tilapia Lake Virus Isolate Obtained from Nile Tilapia (Oreochromis niloticus).</a> Genome Announcements. 6 (26), (2018).</li><li>Thammatorn, W., Rawiwan, P., Surachetpong, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimal+risk+of+tilapia+lake+virus+transmission+via+frozen+tilapia+fillets.">Minimal risk of tilapia lake virus transmission via frozen tilapia fillets.</a> Journal of Fish Diseases. 42 (1), 3-9 (2019).</li><li>Fathi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+Tilapia+Lake+Virus+in+Egypt+in+Nile+tilapia+affected+by+'summer+mortality'+syndrome.">Identification of Tilapia Lake Virus in Egypt in Nile tilapia affected by 'summer mortality' syndrome.</a> Aquaculture. 473, 430-432 (2017).</li><li>Tattiyapong, P., Sirikanchana, K., Surachetpong, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+validation+of+a+reverse+transcription+quantitative+polymerase+chain+reaction+for+tilapia+lake+virus+detection+in+clinical+samples+and+experimentally+challenged+fish.">Development and validation of a reverse transcription quantitative polymerase chain reaction for tilapia lake virus detection in clinical samples and experimentally challenged fish.</a> Journal of Fish Diseases. 41 (2), 255-261 (2018).</li><li>Waiyamitra, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+TaqMan+RT-qPCR+assay+for+tilapia+lake+virus+(TiLV)+detection+in+tilapia.">A TaqMan RT-qPCR assay for tilapia lake virus (TiLV) detection in tilapia.</a> Aquaculture. 497, 184-188 (2018).</li><li>Kembou Tsofack, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+Tilapia+Lake+Virus+in+Clinical+Samples+by+Culturing+and+Nested+Reverse+Transcription-PCR.">Detection of Tilapia Lake Virus in Clinical Samples by Culturing and Nested Reverse Transcription-PCR.</a> Journal of Clinical Microbiology. 55 (3), 759-767 (2017).</li><li>Dong, H. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emergence+of+tilapia+lake+virus+in+Thailand+and+an+alternative+semi-nested+RT-PCR+for+detection.">Emergence of tilapia lake virus in Thailand and an alternative semi-nested RT-PCR for detection.</a> Aquaculture. 476, 111-118 (2017).</li><li>Notomi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loop-mediated+isothermal+amplification+of+DNA.">Loop-mediated isothermal amplification of DNA.</a> Nucleic Acids Research. 28 (12), 63 (2000).</li><li>Mori, Y., Notomi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loop-mediated+isothermal+amplification+(LAMP):+a+rapid,+accurate,+and+cost-effective+diagnostic+method+for+infectious+diseases.">Loop-mediated isothermal amplification (LAMP): a rapid, accurate, and cost-effective diagnostic method for infectious diseases.</a> Journal of Infection and Chemotherapy. 15 (2), 62-69 (2009).</li><li>Mori, Y., Nagamine, K., Tomita, N., Notomi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+loop-mediated+isothermal+amplification+reaction+by+turbidity+derived+from+magnesium+pyrophosphate+formation.">Detection of loop-mediated isothermal amplification reaction by turbidity derived from magnesium pyrophosphate formation.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 289 (1), 150-154 (2001).</li><li>Caipang, C. M., Haraguchi, I., Ohira, T., Hirono, I., Aoki, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+detection+of+a+fish+iridovirus+using+loop-mediated+isothermal+amplification+(LAMP).">Rapid detection of a fish iridovirus using loop-mediated isothermal amplification (LAMP).</a> Journal of Virological Methods. 121 (2), 155-161 (2004).</li><li>Soliman, H., El-Matbouli, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+inexpensive+and+rapid+diagnostic+method+of+Koi+Herpesvirus+(KHV)+infection+by+loop-mediated+isothermal+amplification.">An inexpensive and rapid diagnostic method of Koi Herpesvirus (KHV) infection by loop-mediated isothermal amplification.</a> Virology Journal. 2, 83 (2005).</li><li>Gunimaladevi, I., Kono, T., Venugopal, M. N., Sakai, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+koi+herpesvirus+in+common+carp,+Cyprinus+carpio+L.,+by+loop-mediated+isothermal+amplification.">Detection of koi herpesvirus in common carp, Cyprinus carpio L., by loop-mediated isothermal amplification.</a> Journal of Fish Diseases. 27 (10), 583-589 (2004).</li><li>Gunimaladevi, I., Kono, T., Lapatra, S. E., Sakai, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+loop+mediated+isothermal+amplification+(LAMP)+method+for+detection+of+infectious+hematopoietic+necrosis+virus+(IHNV)+in+rainbow+trout+(Oncorhynchus+mykiss).">A loop mediated isothermal amplification (LAMP) method for detection of infectious hematopoietic necrosis virus (IHNV) in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss).</a> Archives of Virology. 150 (5), 899-909 (2005).</li><li>Kono, T., Savan, R., Sakai, M., Itami, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+white+spot+syndrome+virus+in+shrimp+by+loop-mediated+isothermal+amplification.">Detection of white spot syndrome virus in shrimp by loop-mediated isothermal amplification.</a> Journal of Virological Methods. 115 (1), 59-65 (2004).</li><li>Soliman, H., El-Matbouli, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reverse+transcription+loop-mediated+isothermal+amplification+(RT-LAMP)+for+rapid+detection+of+viral+hemorrhagic+septicaemia+virus+(VHS).">Reverse transcription loop-mediated isothermal amplification (RT-LAMP) for rapid detection of viral hemorrhagic septicaemia virus (VHS).</a> Veterinary Microbiology. 114 (3-4), 205-213 (2006).</li><li>Yeh, H. Y., Shoemaker, C. A., Klesius, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+a+loop-mediated+isothermal+amplification+method+for+rapid+detection+of+channel+catfish+Ictalurus+punctatus+important+bacterial+pathogen+Edwardsiella+ictaluri.">Evaluation of a loop-mediated isothermal amplification method for rapid detection of channel catfish Ictalurus punctatus important bacterial pathogen Edwardsiella ictaluri.</a> Journal of Microbiological Methods. 63 (1), 36-44 (2005).</li><li>Yeh, H. Y., Shoemaker, C. A., Klesius, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitive+and+rapid+detection+of+Flavobacterium+columnare+in+channel+catfish+Ictalurus+punctatus+by+a+loop-mediated+isothermal+amplification+method.">Sensitive and rapid detection of Flavobacterium columnare in channel catfish Ictalurus punctatus by a loop-mediated isothermal amplification method.</a> Journal of Applied Microbiology. 100 (5), 919-925 (2006).</li><li>Sun, Z. F., Hu, C. Q., Ren, C. H., Shen, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitive+and+rapid+detection+of+infectious+hypodermal+and+hematopoietic+necrosis+virus+(IHHNV)+in+shrimps+by+loop-mediated+isothermal+amplification.">Sensitive and rapid detection of infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus (IHHNV) in shrimps by loop-mediated isothermal amplification.</a> Journal of Virological Methods. 131 (1), 41-46 (2006).</li><li>Shivappa, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+spring+viraemia+of+carp+virus+(SVCV)+by+loop-mediated+isothermal+amplification+(LAMP)+in+koi+carp,+Cyprinus+carpio+L.">Detection of spring viraemia of carp virus (SVCV) by loop-mediated isothermal amplification (LAMP) in koi carp, Cyprinus carpio L.</a> Journal of Fish Diseases. 31 (4), 249-258 (2004).</li><li>Wei, X. N., Zheng, Z. J., Zhang, L. H., Qu, F., Huang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitive+and+rapid+detection+of+Aeromonas+caviae+in+stool+samples+by+loop-mediated+isothermal+amplification.">Sensitive and rapid detection of Aeromonas caviae in stool samples by loop-mediated isothermal amplification.</a> Diagnostic Microbiology and Infectious Disease. 60 (1), 113-116 (2008).</li><li>Chinabut, S., Puttinaowarat, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+choice+of+disease+control+strategies+to+secure+international+market+access+for+aquaculture+products.">The choice of disease control strategies to secure international market access for aquaculture products.</a> Developmental Biology. 121, 255-261 (2005).</li><li>Soto, E., Yun, S., Surachetpong, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Susceptibility+of+Tilapia+Lake+Virus+to+buffered+Povidone-iodine+complex+and+chlorine.">Susceptibility of Tilapia Lake Virus to buffered Povidone-iodine complex and chlorine.</a> Aquaculture. 512, 734342 (2019).</li><li>Jaemwimol, P., Sirikanchana, K., Tattiyapong, P., Mongkolsuk, S., Surachetpong, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virucidal+effects+of+common+disinfectants+against+tilapia+lake+virus.">Virucidal effects of common disinfectants against tilapia lake virus.</a> Journal of Fish Diseases. 42 (10), 1383-1389 (2019).</li><li>Jansen, M. D., Dong, H. T., Mohan, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tilapia+lake+virus:+a+threat+to+the+global+tilapia+industry.">Tilapia lake virus: a threat to the global tilapia industry.</a> Reviews in Aquaculture. 11 (3), 725-739 (2019).</li><li>Yin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+simple+and+rapid+reverse+transcription-loopmediated+isothermal+amplification+(RT-LAMP)+assay+for+sensitive+detection+of+tilapia+lake+virus.">Development of a simple and rapid reverse transcription-loopmediated isothermal amplification (RT-LAMP) assay for sensitive detection of tilapia lake virus.</a> Journal of Fish Diseases. 42 (6), 817-824 (2019).</li><li>Savan, R., Kono, T., Itami, T., Sakai, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Loop-mediated+isothermal+amplification:+an+emerging+technology+for+detection+of+fish+and+shellfish+pathogens.">Loop-mediated isothermal amplification: an emerging technology for detection of fish and shellfish pathogens.</a> Journal of Fish Diseases. 28 (10), 573-581 (2005).</li><li>Phusantisampan, T., Tattiyapong, P., Mutrakulcharoen, P., Sriariyanun, M., Surachetpong, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+detection+of+tilapia+lake+virus+using+a+one-step+reverse+transcription+loop-mediated+isothermal+amplification+assay.">Rapid detection of tilapia lake virus using a one-step reverse transcription loop-mediated isothermal amplification assay.</a> Aquaculture. 507, 35-39 (2019).</li><li>Liamnimitr, P., Thammatorn, W., U-thoomporn, S., Tattiyapong, P., Surachetpong, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-lethal+sampling+for+Tilapia+Lake+Virus+detection+by+RT-qPCR+and+cell+culture.">Non-lethal sampling for Tilapia Lake Virus detection by RT-qPCR and cell culture.</a> Aquaculture. 486, 75-80 (2018).</li><li>Yin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+simple+and+rapid+reverse+transcription-loopmediated+isothermal+amplification+(RT-LAMP)+assay+for+sensitive+detection+of+tilapia+lake+virus.">Development of a simple and rapid reverse transcription-loopmediated isothermal amplification (RT-LAMP) assay for sensitive detection of tilapia lake virus.</a> Journal of Fish Diseases. 42 (6), 817-824 (2019).</li><li>Khan, R. S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+detection+of+infectious+bursal+disease+by+loop-mediated+isothermal+amplification+for+field+analysis.">Rapid detection of infectious bursal disease by loop-mediated isothermal amplification for field analysis.</a> Iranian Journal of Veterinary Research. 19 (2), 101-107 (2018).</li><li>Nagamine, K., Hase, T., Notomi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+reaction+by+loop-mediated+isothermal+amplification+using+loop+primers.">Accelerated reaction by loop-mediated isothermal amplification using loop primers.</a> Molecular and Cellular Probes. 16 (3), 223-229 (2002).</li><li>Debode, F., Marien, A., Janssen, E., Bragard, C., Berben, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+amplicon+length+on+real-time+PCR+results.">The influence of amplicon length on real-time PCR results.</a> Biotechnology, Agronomy, Society and Environment. 21 (1), 3-11 (2017).</li></ol>

양식 산업은 지속적으로 상당한 경제적 손실을 일으키는 바이러스 감염에 의해위협9,,,23,28. 예를 들어, 신흥 TiLV는 세계1,,6,,9의많은 지역에서 틸라피아 생산 국가에 큰 위협을 제기한다. 지금까지, TiLVD를 방지 하기 위해 사용할 수 있는 특정 치료 되었습니?...

틸라피아 호수 바이러스 질환(TiLVD)은 아시아1,2,2아프리카 및 미국을 포함한 세계의 많은 지역에서 틸라피아 사망을 유발하는 틸라피아(Oreochromis spp.)의 바이러스 성 질환이다. 이 질병은 2009년 이스라엘에서 틸라피아의 대량 사망률에서 처음 인식되었으며, 키너렛 호수의 야생 틸라피아 수는 연간 257톤에서8톤으로급격히 감소했습니다 2. 이 질병은 틸라피아 호수 바이러스(TiLV)에 의해 발생하며, 이는 새로운 종인 틸라핀바이러스와 새로운 종틸라피네바이러스3로 가족암누온비리대에 할당되었다. TiLV의 유전적 특성은 바이러스가 10개의 단백질을11,2,,4를인코딩하는 10개의 세그먼트를 가지는 새로운 포위, 음성 감각, 단일 가닥 RNA 바이러스임을 보여주었다. 사로테오돈, 오레오로미스, 틸라핀 및 기타 따뜻한 물 물고기(예를 들어, 거대 가라미(Osphronemusgoramy))의다양한 종은 TiLV2,,5에취약한 것으로 나타났습니다. 현재, 이 바이러스는 감염된 살아있는 물고기의 움직임을 통해 아마도 전 세계적으로 확산계속6,,7,냉동 틸라피아 또는 그 제품을 통해 바이러스 전송의 위험이 제한되는 동안8. TiLV 감염으로 인한 실질적인 사망률은 틸라피아 산업에 상당한 해로운 경제적 영향을 미칠 가능성이 있다. 예를 들어, TiLV 감염과 관련된 이집트의 여름 사망 증후군의 경제적 영향은 미화 1억 달러9로계산되었습니다. 따라서, 어류 양식장에서 이 질병의 통제를 용이하게 하기 위해 신속하고 적절한 진단 방법을 개발하는 것이 중요하다.
지금까지 TiLVD의 진단은 분자 분석, 바이러스 격리 및 조직 병리학에 기반을 두고 있습니다. 다른 PCR 프로토콜 및 프라이머는 TiLV 진단10,,11을위해 개발되었습니다. 예를 들어, 바이러스의 2개의 사본/μL만큼 적은 수의 검출을 위한 민감성을 가진 SYBR 녹색 기반 역전사 정량적 PCR(RT-qPCR) 방법은 TiLV 검출을 위해 개발 및 검증되었다10. TiLV 검출을 위한 다른 PCR 방법은 TaqMan 양적 PCR11,RT-PCR2,중첩 된 RT-PCR12및 반 중첩 된 RT-PCR13을포함한다. 그러나 이러한 방법은 반응의 복잡성으로 인해 결과를 산출하기 위해 정교한 실험실 장비와 비교적 오랜 시간이 필요하므로 현장 적용에 적합하지 않습니다.
루프 매개 등등 증폭(LAMP) 분석은 신속하고 간단하며 실용적인 현장 용 어플리케이션14,,15이다. 이 기술은 가닥 변위 반응의 원리를 채택하고 증폭 반응은 정교하고 고가의 열 사이클러(14,,15)없이등온 조건하에서 실행됩니다. 따라서 증폭된 LAMP 제품 또는 RT-LAMP 제품은 DNA 또는 RNA14의 안전한 시각화를 위해 형광 얼룩을 가진 아가로즈 겔 전기영동을 이용한 사다리형 밴드로 분석되거나 탁도 또는 백색 침전물의 존재에 대한 육안으로관찰16,,17,,18. 이러한 이유로, 이 기술은 상이한 어류 병원체17, 18,,19,,20,,19,21,,22,,23,24,,,25,,26,,27의현장 검출에 사용되어 왔다. 이 연구의 목적은 TiLV 검출을 위한 신속하고 민감하며 정확한 RT-LAMP 분석방법을 확립하는 것이었습니다. RT-LAMP 분석기는 30분 이내에 물고기 샘플에서 TiLV에 대한 스크리닝을 제공합니다. 이 기술은 TiLVD의 진단 및 감시를 위해 적용될 수 있다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:961px;" width="961">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Tissue collection:</td>
			<td style="width:224px;"></td>
			<td style="width:188px;"></td>
			<td style="width:295px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Clove oil</td>
			<td style="width:224px;">Better Pharma</td>
			<td style="width:188px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:255px;">Tricaine methanesulfonate</td>
			<td style="width:224px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:188px;">E10521</td>
			<td>An alternative option to clove oil</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:255px;">RNA extraction:</td>
			<td style="width:224px;"></td>
			<td style="width:188px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">Acid guanidinium-phenol based reagent (TRIzol reagent)</td>
			<td style="width:224px;">ThermoFisher Scientific Corp.</td>
			<td style="width:188px;">15596026</td>
			<td style="width:295px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">Acid guanidinium-phenol based reagent (GENEzol reagent)</td>
			<td style="width:224px;">Geneaid</td>
			<td style="width:188px;">GZR100</td>
			<td style="width:295px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Direct-zol RNA Kit:</td>
			<td style="width:224px;">Zymo Research</td>
			<td style="width:188px;">R2071</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">- Direct-zol RNA PreWash</td>
			<td style="width:224px;"></td>
			<td style="width:188px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">- RNA Wash Buffer</td>
			<td style="width:224px;"></td>
			<td style="width:188px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">- DNase/RNase-free water</td>
			<td style="width:224px;"></td>
			<td style="width:188px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">- Zymo-spin IIICG columns</td>
			<td style="width:224px;"></td>
			<td style="width:188px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:255px;">- Collection Tubes</td>
			<td style="width:224px;"></td>
			<td style="width:188px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:255px;">RT-LAMP:</td>
			<td style="width:224px;"></td>
			<td style="width:188px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">1x SD II reaction buffer</td>
			<td style="width:224px;">Biotechrabbit</td>
			<td style="width:188px;">BR1101301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:255px;">Magnesium sulfate (MgSO4)</td>
			<td style="width:224px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:188px;">7487-88-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">dNTP set</td>
			<td style="width:224px;">Bioline</td>
			<td style="width:188px;">BIO-39053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Betaine</td>
			<td style="width:224px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:188px;">B2629</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:255px;">Calcein mixture</td>
			<td style="width:224px;">Merck</td>
			<td style="width:188px;">1461-15-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Bst DNA polymerase</td>
			<td style="width:224px;">Biotechrabbit</td>
			<td style="width:188px;">BR1101301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">AMV reverse transcriptase</td>
			<td style="width:224px;">Promega</td>
			<td style="width:188px;">M510A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Nuclease-free water</td>
			<td style="width:224px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:188px;">10320995</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:255px;">Elite dry bath incubator, single unit</td>
			<td style="width:224px;">Major Science</td>
			<td style="width:188px;">EL-01-220</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:255px;">Gel electrophoresis:</td>
			<td style="width:224px;"></td>
			<td style="width:188px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Agarose</td>
			<td style="width:224px;">Vivantis Technologies</td>
			<td style="width:188px;">PC0701-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Tris-borate-EDTA (TBE) buffer</td>
			<td style="width:224px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:188px;">SRE0062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Tris-acetic-EDTA (TAE) buffer:</td>
			<td style="width:224px;"></td>
			<td style="width:188px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">- Tris</td>
			<td style="width:224px;">Vivantis Technologies</td>
			<td style="width:188px;">PR0612-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">- Acetic acid (glacial), EMSURE</td>
			<td style="width:224px;">Merck Millipore</td>
			<td style="width:188px;">1000632500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:255px;">- Disodium Ethylenediaminetetraacetate dihydrate (EDTA), Vetec</td>
			<td style="width:224px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:188px;">V800170-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Neogreen</td>
			<td style="width:224px;">NeoScience Co., Ltd.</td>
			<td style="width:188px;">GR107</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">DNA gel loading dye (6X)</td>
			<td style="width:224px;">ThermoFisher Scientific Corp.</td>
			<td style="width:188px;">R0611</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">DNA ladder and markers</td>
			<td style="width:224px;">Vivantis Technologies</td>
			<td style="width:188px;">PC701-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">Mini Ready Sub-Cell GT (Horizontal electrophoresis system)</td>
			<td style="width:224px;">Bio-Rad</td>
			<td style="width:188px;">1704487</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">PowerPac HC power supply</td>
			<td style="width:224px;">Bio-Rad</td>
			<td style="width:188px;">1645052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Gel Doc EZ System</td>
			<td style="width:224px;">Bio-Rad</td>
			<td style="width:188px;">1708270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">UV sample tray</td>
			<td style="width:224px;">Bio-Rad</td>
			<td style="width:188px;">1708271</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:255px;">N&#945;BI imager</td>
			<td style="width:224px;">Neogene Science</td>
			<td style="width:188px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:255px;">cDNA synthesis:</td>
			<td style="width:224px;"></td>
			<td style="width:188px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">ReverTra Ace qPCR RT Kit</td>
			<td style="width:224px;">Toyobo</td>
			<td style="width:188px;">FSQ-101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Viva cDNA Synthesis Kit</td>
			<td style="width:224px;">Vivantis Technologies</td>
			<td style="width:188px;">cDSK01</td>
			<td>An alternative option for cDNA synthesis</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:255px;">NanoDrop2000 (microvolume spectrophotometer)</td>
			<td style="width:224px;">ThermoFisher Scientific Corp.</td>
			<td style="width:188px;">ND-2000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:255px;">T100 Thermal Cycler</td>
			<td style="width:224px;">Bio-Rad</td>
			<td style="width:188px;">1861096</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:255px;">RT-qPCR:</td>
			<td style="width:224px;"></td>
			<td style="width:188px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">iTaq Universal SYBR Green Supermix</td>
			<td style="width:224px;">Bio-Rad</td>
			<td style="width:188px;">1725120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Nuclease-free water, sterile water</td>
			<td style="width:224px;">MultiCell</td>
			<td style="width:188px;">809-115-CL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">8-tube PCR strips, white</td>
			<td style="width:224px;">Bio-Rad</td>
			<td style="width:188px;">TLS0851</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Flat PCR tube 8-cap strips, optical</td>
			<td style="width:224px;">Bio-Rad</td>
			<td style="width:188px;">TCS0803</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:255px;">CFX96 Touch Thermal Cycler</td>
			<td style="width:224px;">Bio-Rad</td>
			<td style="width:188px;">1855196</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:255px;">General equipment and materials:</td>
			<td style="width:224px;"></td>
			<td style="width:188px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Mayo scissors</td>
			<td style="width:224px;"></td>
			<td style="width:188px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Forceps</td>
			<td style="width:224px;"></td>
			<td style="width:188px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Vortex Genie 2 (vortex mixer)</td>
			<td style="width:224px;">Scientific Industries</td>
			<td style="width:188px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Microcentrifuge LM-60</td>
			<td style="width:224px;">LioFuge</td>
			<td style="width:188px;">CM610</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Corning LSE mini microcentrifuge</td>
			<td style="width:224px;">Corning</td>
			<td style="width:188px;">6765</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Pipettes</td>
			<td style="width:224px;">Rainin</td>
			<td style="width:188px;">Pipete-Lite XLS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">QSP filtered pipette tips</td>
			<td style="width:224px;">Quality Scientific Plastics</td>
			<td style="width:188px;">TF series</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:255px;">Corning Isotip filtered tips</td>
			<td style="width:224px;">Merck</td>
			<td style="width:188px;">CLS series</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:255px;">Nuclease-free 1.5 mL microcentrifuge tubes, NEST</td>
			<td style="width:224px;">Wuxi NEST Biotechnology</td>
			<td style="width:188px;">615601</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

reverse transcription loop-mediated isothermal amplification (rt-lamp) assay for the specific and rapid detection of tilapia lake virus

틸라피아 호수 바이러스(TiLVD)는 틸라피아 호수 바이러스(TiLV)에 의한 틸라피아의 새로운 바이러스 질환으로, 전 세계 많은 지역에서 틸라피아의 대량 이환율과 사망률을 초래한 양식 산업에서 지속적인 과제입니다. 따라서 TiLV 감염에 대한 효과적이고 신속하며 정확한 진단 분석법은 초기 감염을 감지하고 양식 농업에서 질병의 확산을 방지하는 데 필요합니다. 본 연구에서, 매우 민감하고 실용적인 역전사 루프 매개 등온 증폭(RT-LAMP) 방법은 어류 조직에서 틸라피아 호수 바이러스를 검출하기 위해 제시된다. 감염된 샘플의 RT-qPCR 및 RT-LAMP 검문 결과를 비교한 결과 63개(100%)에서 긍정적인 결과가 나타났습니다. 51 (80.95%) 각각 샘플을 채취한다. 더욱이, 감염되지 않은 견본의 분석은 모든 63의 감염되지 않은 조직이 RT-qPCR 및 RT-LAMP 분석결과 둘 다에 대한 부정적인 결과를 산출한다는 것을 보여주었습니다. 틸라피아에 있는 5개의 병원체를 가진 교차 반응성은 RT-LAMP를 사용하여 평가되고, 모든 시험은 부정적인 결과를 보여주었습니다. 감염된 물고기에게서 얻은 간 및 점액 견본 둘 다 RT-LAMP 방법을 사용하여 비교 결과를 보여주었습니다, 점액이 물고기를 죽이는 것을 피하기 위하여 비치명적인 분석으로 RT-LAMP에서 사용될 수 있다는 것을 건의합니다. 결론적으로, 제시된 RT-LAMP 분석법은 1시간 이내에 틸라피아 조직에서 TiLV 검출을 위한 효과적인 방법을 제공한다는 것을 입증하였다. 이 방법은 따라서 TiLV의 신속한 진단을 위한 농장에서 검열 공구로 추천됩니다.

이 연구에서는, 틸라피아에서 TiLV 감염을 검출하기 위해 RT-LAMP 분석이 개발되었다. 테스트된 샘플은 2015년과 2016년 사이에 태국의 다른 지역에 위치한 14개의 농장에서 수집되었습니다. 감염되고 감염되지 않은 물고기는 주로 물리적 인 진단과 증상 TiLVD의 출현에 따라 그룹화되었습니다. TiLV 감염은 수집 과정 후 RT-PCR을 사용하여 이후에 확인되었다. 아가로즈 겔 전기동동및 발광 녹색의 검출은 LAM...

Watch this Scientific Journal Video about Reverse Transcription Loop-Mediated Isothermal Amplification RT-LAMP Assay for the Specific and Rapid Detection of Tilapia Lake Virus at JoVE.com

Reverse Transcription Loop-Mediated Isothermal Amplification RT-LAMP Assay for the Specific and Rapid Detection of Tilapia Lake Virus

우리는 기존의 RT-PCR 기술에 비해 상대적으로 짧은 기간 동안 간단한 악기를 사용하여 틸라피아 물고기에서 TiLV의 검출을위한 RT-LAMP 분석법을 제시한다. 이 프로토콜은 특히 개발도상국에서 TiLVD의 전염병 확산을 제어하는 데 도움이 될 수 있습니다.

틸라피아 호수 바이러스의 특이적이고 신속한 검출을 위한 역전사 루프 매개 등온 증폭(RT-LAMP) 분석

Tilapia lake virus disease (TiLVD), an emerging viral disease in tilapia caused by the tilapia lake virus (TiLV), is a persistent challenge in the ...

틸라피아 호수 바이러스는 틸라피아와 그 하이브리드 종에서 높은 사망률을 일으키는 신흥 바이러스및 전염성 병원체입니다. 틸라피아는 많은 개발도상국의 주요 단백질 공급원이기 때문에, 새로운 바이러스 감염은 틸라피아 양식에 큰 영향을 미치고, 또한 세계 식량 안보를 위협합니다. 물고기 조직에서 바이러스를 검출하는 빠르고 정확하며 민감한 방법의 개발은 질병 조절에 도움이되며 바이러스의 영향을 줄일 수 있습니다.이 비디오에서는 물고기 샘플에서 틸라피아 호수 바이러스를 신속하게 검출하기 위해 역전사 루프 매개 이더스말 증폭 또는 RT-LAMP 분석방법을 보여줍니다. 2부, RNA 추출. 첫째, 멸균 1.5 밀리리터 미세 원심 분리튜브에 간 조직의 3250 밀리그램을 추가, 포함 600 받는 르 1000 마이크로 리터 산 guanidinium-phenol 베이스 시약, 그리고 균질까지 다진.원심분리기는 10, 000 RCF에서 30초 동안 새로운 튜브로 상전자를 전송합니다. 튜브에 95%에탄올의 동일한 볼륨을 추가하고 철저히 섞습니다. 솔루션을 스핀 컬럼으로 옮기고 수집 튜브에 배치한 다음 원심분리기를 10, 000 RCF로 30초 간 전송합니다.흐름을 버리고 컬럼을 새 수집 튜브로 옮습니다. RNA PreWash 400 마이크로리터를 컬럼에 넣고 원심분리기를 10, 000 RCF에서 30초 간 추가합니다. 흐름을 버리고 이 단계를 반복합니다.700 마이크로리터 RNA 워시 버퍼를 컬럼에 넣고 원심분리기를 10, 000 RCF에서 2분간 추가합니다. 그 후, 컬럼을 멸균 1.5 밀리리터 미세원심분리기 튜브로 옮기다. 마지막으로, RNA를 100 마이크로리터, 뉴클레아제 없는 물 및 원심분리기를 30초 동안 10, 000 RCF로 컬럼 매트릭스로 내다보고 있다.3 부, 프라이머 디자인. 프라이머익스플로러 버전 4는 효율적인 LAMP 또는 RT-LAMP 프라이머를 설계하기 위한 가장 일반적인 생물정보학 도구로, 소프트웨어에 대한 좋은 매뉴얼을 웹 사이트에서 사용할 수 있습니다. 여기서, 네 개의 특정 프라이머, 두 개의 내부와 두 개의 외부 프라이머로 구성, TiLV의 세그먼트 3에서 여섯 개의 별개의 영역을 인식하도록 설계되었습니다, 태국에서 유래.링크가 비디오에 표시되는 웹 사이트를 입력한 후 PrimerExplorer V4를 클릭합니다. TiLV의 세그먼트 3의 시퀀스를 포함하는 파일을 선택, FASTA 형식으로, GenBank 액세스 번호에서 검색, KX631923, 또는 틸라피아 호수 바이러스 TV1 세그먼트 3, 다음 프라이머 디자인 버튼을 클릭합니다. 생성 버튼을 클릭하면 소프트웨어가 처리되고 결과가 표시됩니다. LAMP 증폭을 위한 서열을 최적화한 후, 총 1쌍의 외부 프라이머와 두 쌍의 내부 프라이머가 TiLV 감염을 검출하기 위해 선택되었다.프라이머의이 세트는 여기에 표시됩니다. 4부, RT-LAMP 시연. 틸라피아 호수 바이러스에 특이적인 RT-LAMP용 마스터 믹스는 다음 화학 물질로 구성된다.테이블에 표시된 화학 물질을 사용하여 마스터 믹스를 준비합니다. 멸균 1.5 밀리리터 미세 원심 분리튜브에 마스터 믹스 22 마이크로리터를 분배합니다. 그런 다음 반응 튜브에 RNA 템플릿의 3 마이크로 리터를 추가합니다.음의 조절을 위해 RNA 재료 대신 증류수를 사용하고 잘 섞습니다. 60분 동안 65도의 반응에 따라 10분 동안 섭씨 80도가 됩니다. 30 분 동안 잠복 후, 칼로리 변화는 육안으로 시각적으로 관찰됩니다.적절한 경우, 우리는 1.5%의 아가로즈 겔에 겔 전기전도를 수행하여 100볼트 상수로 40분 동안 겔 전기전도를 수행하여 1킬로베이스 쌍 분자 크기의 DNA 사다리가 마커로 적재되어 단편 크기를 결정할 수 있도록 RT-LAMP 분석 결과를 확인할 수 있습니다. 5부, 대표적인 결과 및 해석. 30분 동안 잠복한 후, 물고기 조직에서 TiLV의 양성 증폭을 시사하는 곡물 형광 반응은 365 나노미터의 파장에서 UV 빛 하에서 감염된 샘플에서 명백히 관찰되었으며, 음의 대조군은 명확하고 약간 무색적인 용액을 가졌다.이에 상응하여, RT-LAMP 제품의 증폭은 아가로즈 겔 전기포고에서 확인되었으며, 반전된 DNA 반복의 다중 증폭의 다양한 크기를 나타내고, TiLV-감염된 샘플의 UV 램프 아래에 줄기 루프 구조를 형성하는 반면, 그 결과는 RT-LAMP의 결과에 따라 부정적인 대조군의 우물에 밴드가 표시되지 않았다. 따라서 틸라피아 호수 바이러스의 확산을 줄이기 위해 이러한 감염된 물고기의 즉각적인 검사는 효과적으로 진단 방법을 사용하여 중요한 열쇠 중 하나입니다. 따라서 새로 개발된 RT-LAMP 분석은 생물 보안 측정 과정에서 적용될 신속하고 민감한 진단 도구를 제공해야 합니다.분석은 실험실 또는 현장 시설에서 사용할 수 있습니다. 우리는 틸라피아 호수 바이러스의 확산의 감소로 이어질 수있는 감염된 물고기 인구를 선별하는 방법이 구현되기를 바랍니다.

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Zika Virus Specific Diagnostic Epitope Discovery

Zika 바이러스 특정 진단 Epitope 발견

High-density peptide microarrays allow screening of more than six thousand peptides on a single standard microscopy slide. This method can be applied for ...