Name: in vitro model of human cutaneous hypertrophic scarring using macromolecular crowding
Uploaded: 2020-05-01T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vitro Model of Human Cutaneous Hypertrophic Scarring using Macromolecular Crowding at JoVE.com

تم دعم هذا العمل بتمويل من وكالة سنغافورة للعلوم والتكنولوجيا والبحوث "SPF 2013/004: بحوث بيولوجيا الجلد الأساسية" و "ابتكار رعاية الجروح للمناطق المدارية" IAF-PP/2017 H17/01/a0/009. ويعرب المؤلفان عن امتنانهما للمشورة والمساعدة المقدمة من الدكتورة بولا بيني والدكتور مايكل راغوناث.

1. ثقافة الخلية
<ol><li>الحفاظ على hHSFs والخلايا الليفية الجلدية العادية المستمدة من الأنسجة غير المرضية (hNSFs) في المتوسط جلبكو تعديل (DMEM) التي تحتوي على 10٪ مصل العجل الجنين (FCS) و 1٪ v / v البنسلين / محلول العقديات (P / S) في 37 درجة مئوية في حاضنة مع 5٪ CO2/ 95٪ الهواء.</li>
	<li>شراء فيكول 70، فيكول 400، وحمض...

<ol>
	<li>vander Veer, W. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+cellular+and+molecular+causes+of+hypertrophic+scar+formation.">Potential cellular and molecular causes of hypertrophic scar formation.</a> Burns. 35 (1), 15-29 (2009).</li><li>Linge, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypertrophic+Scar+Cells+Fail+to+Undergo+a+Form+of+Apoptosis+Specific+to+Contractile+Collagen[mdash]The+Role+of+Tissue+Transglutaminase.">Hypertrophic Scar Cells Fail to Undergo a Form of Apoptosis Specific to Contractile Collagen[mdash]The Role of Tissue Transglutaminase.</a> Journal of Investigative Dermatology. 125 (1), 72-82 (2005).</li><li>Penn, J. W., Grobbelaar, A. O., Rolfe, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+the+TGF-beta+family+in+wound+healing,+burns+and+scarring:+a+review.">The role of the TGF-beta family in wound healing, burns and scarring: a review.</a> International Journal of Burns and Trauma. 2 (1), 18-28 (2012).</li><li>Wang, X. Q., Kravchuk, O., Winterford, C., Kimble, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+correlation+of+in+vivo+burn+scar+contraction+with+the+level+of+alpha-smooth+muscle+actin+expression.">The correlation of in vivo burn scar contraction with the level of alpha-smooth muscle actin expression.</a> Burns. 37 (8), 1367-1377 (2011).</li><li>Eitan, E., Zhang, S., Witwer, K. W., Mattson, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+vesicle-depleted+fetal+bovine+and+human+sera+have+reduced+capacity+to+support+cell+growth.">Extracellular vesicle-depleted fetal bovine and human sera have reduced capacity to support cell growth.</a> Journal of Extracellular Vesicles. 4, 26373 (2015).</li><li>Pampaloni, F., Reynaud, E. G., Stelzer, E. H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+third+dimension+bridges+the+gap+between+cell+culture+and+live+tissue.">The third dimension bridges the gap between cell culture and live tissue.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 8 (10), 839-845 (2007).</li><li>Kapalczynska, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=2D+and+3D+cell+cultures+-+a+comparison+of+different+types+of+cancer+cell+cultures.">2D and 3D cell cultures - a comparison of different types of cancer cell cultures.</a> Archives of Medical Science. 14 (4), 910-919 (2018).</li><li>Lareu, R. R., Arsianti, I., Subramhanya, H. K., Yanxian, P., Raghunath, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+enhancement+of+collagen+matrix+formation+and+crosslinking+for+applications+in+tissue+engineering:+a+preliminary+study.">In vitro enhancement of collagen matrix formation and crosslinking for applications in tissue engineering: a preliminary study.</a> Tissue Engineering. 13 (2), 385-391 (2007).</li><li>Kuznetsova, I. M., Turoverov, K. K., Uversky, V. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+macromolecular+crowding+can+do+to+a+protein.">What macromolecular crowding can do to a protein.</a> International Journal of Molecular Sciences. 15 (12), 23090-23140 (2014).</li><li>Chen, C., Loe, F., Blocki, A., Peng, Y., Raghunath, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applying+macromolecular+crowding+to+enhance+extracellular+matrix+deposition+and+its+remodeling+in+vitro+for+tissue+engineering+and+cell-based+therapies.">Applying macromolecular crowding to enhance extracellular matrix deposition and its remodeling in vitro for tissue engineering and cell-based therapies.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 63 (4-5), 277-290 (2011).</li><li>Zeiger, A. S., Loe, F. C., Li, R., Raghunath, M., Van Vliet, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macromolecular+Crowding+Directs+Extracellular+Matrix+Organization+and+Mesenchymal+Stem+Cell+Behavior.">Macromolecular Crowding Directs Extracellular Matrix Organization and Mesenchymal Stem Cell Behavior.</a> PloS one. 7 (5), 37904 (2012).</li><li>Chen, C. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Scar-in-a-Jar:+studying+potential+antifibrotic+compounds+from+the+epigenetic+to+extracellular+level+in+a+single+well.">The Scar-in-a-Jar: studying potential antifibrotic compounds from the epigenetic to extracellular level in a single well.</a> British Journal of Pharmacology. 158 (5), 1196-1209 (2009).</li><li>Fan, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+"macromolecular+crowding"+in+vitro+to+investigate+the+naphthoquinones+shikonin,+naphthazarin+and+related+analogues+for+the+treatment+of+dermal+scars.">Application of "macromolecular crowding" in vitro to investigate the naphthoquinones shikonin, naphthazarin and related analogues for the treatment of dermal scars.</a> Chemico-Biological Interactions. 310, 108747 (2019).</li><li>Canty, E. G., Kadler, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Procollagen+trafficking,+processing+and+fibrillogenesis.">Procollagen trafficking, processing and fibrillogenesis.</a> Journal of Cell Science. 118, 1341-1353 (2005).</li><li>Minton, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+for+Excluded+Volume+Interaction+between+an+Unfolded+Protein+and+Rigid+Macromolecular+Cosolutes:+Macromolecular+Crowding+and+Protein+Stability+Revisited.">Models for Excluded Volume Interaction between an Unfolded Protein and Rigid Macromolecular Cosolutes: Macromolecular Crowding and Protein Stability Revisited.</a> Biophysical Journal. 88 (2), 971-985 (2005).</li><li>Ernst, O., Zor, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Linearization+of+the+bradford+protein+assay.">Linearization of the bradford protein assay.</a> Journal of Visualized Experiments. (38), e1918 (2010).</li><li>Beltrame, C. O., Cortes, M. F., Bandeira, P. T., Figueiredo, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+the+RNeasy+Mini+Kit+to+obtain+high-quality+total+RNA+from+sessile+cells+of+Staphylococcus+aureus.">Optimization of the RNeasy Mini Kit to obtain high-quality total RNA from sessile cells of Staphylococcus aureus.</a> Brazilian Journal of Medical and Biological Research. 48 (12), 1071-1076 (2015).</li><li>Xue, M., Jackson, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+Matrix+Reorganization+During+Wound+Healing+and+Its+Impact+on+Abnormal+Scarring.">Extracellular Matrix Reorganization During Wound Healing and Its Impact on Abnormal Scarring.</a> Advances in wound care (New Rochelle). 4 (3), 119-136 (2015).</li><li>Rohani, M. G., Parks, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrix+remodeling+by+MMPs+during+wound+repair.">Matrix remodeling by MMPs during wound repair.</a> Matrix Biology. 44-46, 113-121 (2015).</li><li>Ulrich, D., Ulrich, F., Unglaub, F., Piatkowski, A., Pallua, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrix+metalloproteinases+and+tissue+inhibitors+of+metalloproteinases+in+patients+with+different+types+of+scars+and+keloids.">Matrix metalloproteinases and tissue inhibitors of metalloproteinases in patients with different types of scars and keloids.</a> Journal of Plastic, Reconstructive &amp; Aesthetic Surgery. 63 (6), 1015-1021 (2010).</li><li>Ghazizadeh, M., Tosa, M., Shimizu, H., Hyakusoku, H., Kawanami, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+Implications+of+the+IL-6+Signaling+Pathway+in+Keloid+Pathogenesis.">Functional Implications of the IL-6 Signaling Pathway in Keloid Pathogenesis.</a> Journal of Investigative Dermatology. 127 (1), 98-105 (2007).</li><li>Wilgus, T. A., Ferreira, A. M., Oberyszyn, T. M., Bergdall, V. K., Dipietro, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+scar+formation+by+vascular+endothelial+growth+factor.">Regulation of scar formation by vascular endothelial growth factor.</a> Laboratory Investigation. 88 (6), 579-590 (2008).</li><li>Rashid, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+use+for+polyvinylpyrrolidone+as+a+macromolecular+crowder+for+enhanced+extracellular+matrix+deposition+and+cell+proliferation.">Novel use for polyvinylpyrrolidone as a macromolecular crowder for enhanced extracellular matrix deposition and cell proliferation.</a> Tissue Engineering Part C: Methods. 20 (12), 994-1002 (2014).</li><li>Lago, J. C., Puzzi, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+aging+in+primary+human+dermal+fibroblasts.">The effect of aging in primary human dermal fibroblasts.</a> PloS one. 14 (7), 0219165 (2019).</li><li>Cigognini, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macromolecular+crowding+meets+oxygen+tension+in+human+mesenchymal+stem+cell+culture+-+A+step+closer+to+physiologically+relevant+in+vitro+organogenesis.">Macromolecular crowding meets oxygen tension in human mesenchymal stem cell culture - A step closer to physiologically relevant in vitro organogenesis.</a> Scientific Reports. 6, 30746 (2016).</li><li>Cuttle, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+porcine+deep+dermal+partial+thickness+burn+model+with+hypertrophic+scarring.">A porcine deep dermal partial thickness burn model with hypertrophic scarring.</a> Burns. 32 (7), 806-820 (2006).</li><li>Fan, C., Xie, Y., Dong, Y., Su, Y., Upton, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigating+the+potential+of+Shikonin+as+a+novel+hypertrophic+scar+treatment.">Investigating the potential of Shikonin as a novel hypertrophic scar treatment.</a> Journal of Biomedical Science. 22, 70 (2015).</li><li>Fan, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shikonin+reduces+TGF-beta1-induced+collagen+production+and+contraction+in+hypertrophic+scar-derived+human+skin+fibroblasts.">Shikonin reduces TGF-beta1-induced collagen production and contraction in hypertrophic scar-derived human skin fibroblasts.</a> International Journal of Molecular Medicine. 36 (4), 985-991 (2015).</li><li>Werner, S., Krieg, T., Smola, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Keratinocyte-Fibroblast+Interactions+in+Wound+Healing.">Keratinocyte-Fibroblast Interactions in Wound Healing.</a> Journal of Investigative Dermatology. 127 (5), 998-1008 (2007).</li></ol>

يهدف هذا البروتوكول إلى تحسين وتوثيق الندبة في جرة محسنة" في نموذج المختبر للأنسجة الندبة الجلدية البشرية. وقد ذكرت الدراسات السابقة تطبيق تقنية MMC على الخلايا الليفية الرئة البشرية12,الخلايا الجذعية نخاع العظم البشري mesenchymal23,والخلايا الليفية الجلد الإنسان<sup class...

الأنسجة ندبة يمثل نقطة النهاية لإصلاح الأنسجة. ومع ذلك ، في العديد من الأفراد ، وخاصة أولئك الذين يعانون من حروق أو صدمة1، يمكن أن تكون الندوب مفرطة وتفرض آثارًا غير مرغوب فيها على مورفولوجيا وعمل الجلد الشفاء. على الرغم من أن الآليات الدقيقة للإصابة المرضية (الندوب الضخامية والقناق) هي تشكيل ندبة غير مفهومة تماما، وقد ثبت ترسب مفرط من الكولاجين أثناء التئام الجروح لتكون مساهمة أساسية2.
ومن الثابت أن تحويل عامل النمو بيتا 1 (TGF-α1) وألفا العضلات الملساء actin (αSMA) تلعب أدوارا رئيسية في تشكيل ندوب تضخمي. تشير الأدلة إلى أن ارتفاع TGF-α1 يحفز مباشرة الترسب المفرط للكولاجين عن طريق تنظيم مسار إشارة SMAD3. بالإضافة إلى ذلك ، تم العثور على αSMA للمساهمة في تكوين ندبة تضخمية من خلال تنظيم تقلص الخلايا وreepithelialization في عملية التئام الجروح4. عدم وجود مناسبة في المختبر وفي نماذج على الجسم الحي هو عائق رئيسي أمام تطوير وتقييم التدخلات والعلاجات لمعالجة ندبة. والهدف من هذه الدراسة هو استخدام تقنية MMC القائمة لبناء نموذج ندبة تضخمية "تشبه الجسم الحي" مناسبة لتقييم التدخلات الجديدة والناشئة المتعلقة بالندبة.
كان استنساخ الأنسجة الحية خارج الجسم هدفًا لسنوات في المجتمع العلمي. وقد حقق تطوير التقنيات المختبرية في أوائل القرن العشرين هذا الهدف جزئياً. وقد تطورت حاليا في تقنيات المختبر قليلا من عرض رو الأصلي أن الخلايا الجنينية يمكن البقاء على قيد الحياة على قيد الحياة على سبيل الكيفو لعدة أيام في الملاخطالدافئ5. ومع ذلك ، تقتصر في المنهجيات المختبرية في الغالب على أنواع الخلايا المفردة المزروعة في 2-D ولا تُلخص الأنسجة بدقة في الجسم الحي. في حين مفيدة لفحص الكيمياء الحيوية للخلايا، وعلم وظائف الأعضاء، وعلم الوراثة، والأنسجة الأصلية هي 3-D ودمج أنواع متعددة من الخلايا. بسيطة 2-D في أنظمة المختبر تخضع خلايا الثدييات لبيئات اصطناعية للغاية حيث يتم فقدان العمارة الخاصة بالأنسجة الأصلية6. بدوره، وهذا يؤثر على الأحداث داخل الخلايا وخارج الخلية، مما أدى إلى مورفولوجيا الخلايا غير طبيعية، علم وظائف الأعضاء، والسلوك7.
يكمن الاهتمام وراء هذا البروتوكول في تطوير وإدارة السريرية للندوب الضخامية والنُكُر. في حين أنه من الثابت أن الخلايا الليفية الجلدية هي المسؤولة إلى حد كبير عن إنتاج وفيرة من الكولاجين الموجودة في الأنسجة ندبا، وزراعة الخلايا الليفية الجلدية باستخدام 2-D في النظم المختبرية فشل في استنساخ دوران الكولاجين لوحظ في الجسم الحي8. المعاصرة في أساليب المختبر لا تزال تستخدم أساسا "المالحة الدافئة"، بيئة مختلفة تماما عن تلك الموجودة في الأنسجة الحية. الأنسجة في الجسم الحي مزدحمة للغاية، مع البروتينات والأحماض النووية، والبروتينات الريبونوكليو، والسكريات، وتحتل 5٪-40٪ من الحجم الإجمالي. كما لا يوجد جزيئين يمكن أن تشغل نفس المساحة في نفس الوقت، وهناك مساحة حرة قليلة المتاحة وغياب كامل تقريبا من الماء الحر9.
تفرض تقنية MMC قيودًا تؤثر على الخصائص الحرارية للسيتوسول والسوائل الخلالية. التفاعلات الجزيئية، مستقبلات ligand إشارات المجمعات، والإنزيمات، والعضيات تقتصر على التفاعل بحرية9. كما أن التفاعلات داخل البيئة المحيطة بالخلية (أي الإنترستيوم) مقيدة أيضاً. تؤكد الأدلة الحديثة أن التركيزات العالية من الجزيئات الكلية الخاملة في حلول مزدحمة تعكر الانتشار، والارتباط المادي، واللزوجة والخصائص الهيدروديناميكية10.
ومن المثير للاهتمام، العديد من وكلاء الحشد شعبية (أي فيكول، dextran، polyvinylpyrrolidone [PVP]، والصوديوم 4-styrenesulfonate [PSS]) ليست متساوية عند تطبيقها على أنواع مختلفة من الخلايا وفي إعدادات مختلفة. في دراسة سابقة واحدة، أفيد فيكول أن تكون أقل سمية للخلايا الخلايا الجذعية mesenchymal بالمقارنة مع PVP. وقد فسرت هذه النتائج على أنها نتيجة لشحنتها المحايدة ونصف قطرها الهيدروديناميكي الصغيرنسبياً 11. في المقابل، وجدت دراسة ثانية أن dextran هو أكثر فعالية في تحفيز الكولاجين الأول ترسب من الخلايا الليفية الرئة البشرية مقارنة مع فيكول12. تشير البيانات الواردة من دراستنا الخاصة إلى أن فيكول يعزز ترسب الكولاجين بواسطة الخلايا الليفية المشتقة من الندبة الضخامية ، في حين أن PVP سام لهذه الخلايا13.
وقد ثبت أن تحويل procollagen إلى الكولاجين هو أسرع في بيئة مزدحمة للغاية في الجسم الحي14، في حين يتم تأخير معدل التفاعلات البيولوجية في نظام الثقافة المخفف 2 -D15. لقد قمنا بتحسين بروتوكول المختبر هنا ، ودمج MMC لإظهار زراعة الخلايا الليفية الجلدية بمثابة نموذج أكثر "في الجسم الحي" للتليف الجلدي وتشكيل الندبة. على النقيض من نظام الثقافة المشتركة 2-D، زراعة hHSFs مع MMC يحفز التمثيل الحيوي وترسب الكولاجين بشكل ملحوظ13. وتجدر الإشارة إلى أن الخصائص الأخرى للتليف (أي زيادة التعبير عن مصفوفة المعادن [MMPs] والسيتوكينات البرولية) واضحة أيضاً في إطار هذا البروتوكول الأمثل MMC13. عند زراعتها باستخدام هذه الطريقة ، يظهر أن الخلايا الجلدية تُلخص المعلمات الفسيولوجية والبيوكيميائية والوظيفية التي تقاس في الجسم الحي.
وقد استخدمت MMC الأمثل في بروتوكول المختبر لتقييم التعبير عن الكولاجين والبروتينات ECM الأخرى بواسطة الخلايا الليفية الجلدية معزولة عن الأدمة ندبة تضخم يفرط في التأثر والأدمة المجاورة غير المعنية. عندما تزرع في بيئات MMC في المختبر، وقد لوحظ أن hHSFs التعبير عن خصائص معينة (مثل، مرنا، الكيمياء الحيوية، علم وظائف الأعضاء، والنمط الظاهري) مماثلة لأنسجة ندبة فرط التغذية الجلدية في الجسم الحي. وتشير الأدلة إلى أن الخصائص الفيزيائية والكيميائية هي اعتبارات هامة عند اختيار الزحام وتحسين ظروف MMC للزراعة في المختبر.
لإثبات المبدأ ، يتم تطبيق بروتوكول MMC هنا لتقييم نوعي وكمي لقدرة شيكونين ونظائرها على الحث على الخلايا المبرمجة. وهذا يسمح بتقييم التطبيقات المحتملة لهذه المركبات الطبية الصينية التقليدية المشتقة بشكل طبيعي (TCM) لإدارة ندبات الجلد13. وعلى الرغم من ذلك، فإن بساطة هذا البروتوكول في المختبر وفعاليته من حيث التكلفة وحسن توقيته يفي أيضاً باللوائح الحديثة للقضاء على التجارب في الثدييات بموجب توجيه الاتحاد الأوروبي 2010/63/EU ووكالة حماية البيئة الأمريكية( EPA).

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1337px;" width="1336">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:487px;">0.2 &#956;m filter</td>
			<td style="width:195px;">Sartorius</td>
			<td style="width:119px;">16534</td>
			<td style="width:537px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:487px;">2-Mercaptoethanol</td>
			<td style="width:195px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">M6250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:487px;">4&#8217;,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)</td>
			<td style="width:195px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">P36962</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:487px;">Alexa Fluor 680</td>
			<td style="width:195px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">A-21076</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:487px;">Alexa Fluor 800</td>
			<td style="width:195px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">A-11371</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:487px;">alpha smooth muscle actin (&#945;SMA) primary antibody</td>
			<td style="width:195px;">Abcam</td>
			<td style="width:119px;">ab5694</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:487px;">Applied Biosystems 7500 Fast Real-Time PCR System (thermal cycler )</td>
			<td style="width:195px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">4351106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:487px;">Ascorbic acid</td>
			<td style="width:195px;">Wako</td>
			<td style="width:119px;">#013-12061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:487px;">Bovine serum albumin</td>
			<td style="width:195px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">#A2153</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:487px;">Bradford protein assay</td>
			<td style="width:195px;">Bio-Rad</td>
			<td style="width:119px;">500-0006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:487px;">Collagen I primary antibody (for immunostaining)</td>
			<td style="width:195px;">Abcam</td>
			<td style="width:119px;">6308</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:487px;">Collagen I primary antibody (for western blot)</td>
			<td style="width:195px;">Abcam</td>
			<td style="width:119px;">ab21286</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:487px;">Collagen III primary antibody</td>
			<td style="width:195px;">Abcam</td>
			<td style="width:119px;">ab7778</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:487px;">Collagen IV primary antibody</td>
			<td style="width:195px;">Abcam</td>
			<td style="width:119px;">ab6586</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:487px;">Direct Red 80</td>
			<td style="width:195px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>2610108</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:487px;">Dulbecco&#39;s Modified Eagle&#39;s Medium (DMEM)</td>
			<td style="width:195px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">11996-065</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:487px;">Fetal calf serum (FCS)</td>
			<td style="width:195px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">6000-044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:487px;">Ficoll 400</td>
			<td style="width:195px;">GE HealthCare</td>
			<td style="width:119px;">#17-0300-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:487px;">Ficoll 70</td>
			<td style="width:195px;">GE HealthCare</td>
			<td style="width:119px;">#17-0310-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:487px;">GAPDH primary antibody</td>
			<td style="width:195px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">G8795</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:487px;">Goat Anti-Rabbit secondary antibody</td>
			<td style="width:195px;">Abcam</td>
			<td style="width:119px;">ab97050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:487px;">Human hypertrophic scar/normal fibroblasts (hHSF/hNSF)</td>
			<td style="width:195px;">Cell Research Corporation</td>
			<td style="width:119px;">106, 107, 108</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:487px;">iScript cDNA Synthesis Kit</td>
			<td style="width:195px;">Bio-Rad</td>
			<td style="width:119px;">#1708890</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:487px;">MMP-1 primary antibody</td>
			<td style="width:195px;">Abcam</td>
			<td style="width:119px;">ab38929</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:487px;">MMP-13 primary antibody</td>
			<td style="width:195px;">Abcam</td>
			<td style="width:119px;">ab39012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:487px;">MMP-2 primary antibody</td>
			<td style="width:195px;">Abcam</td>
			<td style="width:119px;">ab37150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:487px;">MMP-9 primary antibody</td>
			<td style="width:195px;">Abcam</td>
			<td style="width:119px;">ab38898</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:487px;">NanoDrop Microvolume Spectrophotometers</td>
			<td style="width:195px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:487px;">Nitrocellulose membrane</td>
			<td style="width:195px;">Bio-Rad</td>
			<td style="width:119px;">10484060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:487px;">NuPAGE 4-12% Bis-Tris Protein Gels</td>
			<td style="width:195px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:119px;">NP0321BOX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:487px;">Odyssey blocking buffer</td>
			<td style="width:195px;">LI-COR Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">927&#8211;40000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:487px;">Odyssey Fc Imaging System</td>
			<td style="width:195px;">LI-COR Biosciences</td>
			<td style="width:119px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:487px;">Olympus IX-81 HCS microscope (for immunostaining)</td>
			<td style="width:195px;">Olympus</td>
			<td style="width:119px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:487px;">Penicillin/streptomycin solution (P/S)</td>
			<td style="width:195px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:119px;">15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:487px;">PrimePCR Assays</td>
			<td style="width:195px;">Bio-Rad</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Customized primers pre-coated in 96-well plates based on requirement</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:487px;">Protease inhibitor cocktail (PIC)</td>
			<td style="width:195px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">11697498001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:487px;">PVP 360</td>
			<td style="width:195px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">#PVP360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:487px;">PVP 40</td>
			<td style="width:195px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">#PVP40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:487px;">RIPA buffer</td>
			<td style="width:195px;">Merck</td>
			<td style="width:119px;">R0278</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:487px;">RNeasy Plus Mini Kit</td>
			<td style="width:195px;">QIAGEN</td>
			<td style="width:119px;">#74134</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:487px;">Sodium vanadate</td>
			<td style="width:195px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">450022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:487px;">Sodium vanadate</td>
			<td style="width:195px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">450243</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:487px;">SpectraMax M5 Multi-Mode microplate reader</td>
			<td style="width:195px;">Molecular Devices</td>
			<td style="width:119px;">N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:487px;">SsoAdvanced universal SYBR green supermix</td>
			<td style="width:195px;">Bio-Rad</td>
			<td style="width:119px;">#172-5270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:487px;">Tween 20</td>
			<td style="width:195px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P9416</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vitro model of human cutaneous hypertrophic scarring using macromolecular crowding

وقد ثبت أن في أنسجة الجسم الحي مزدحمة للغاية من البروتينات والأحماض النووية، والبروتينات الريبونوكليو، السكريات، الخ. البروتوكول التالي يطبق تقنية الزحام الجزيئي الكلي (MMC) لمحاكاة هذا الازدحام الفسيولوجي من خلال إضافة البوليمرات المحايدة (الزاحمة) إلى ثقافات الخلايا في المختبر. الدراسات السابقة باستخدام Ficoll أو dextran كما crowders تثبت أن التعبير عن الكولاجين الأول وfibronectin في خطوط الخلايا WI38 و WS-1 يتم تعزيزها بشكل كبير باستخدام تقنية MMC. ومع ذلك، لم يتم التحقق من صحة هذه التقنية في الخلايا الليفية البشرية المشتقة من الندبة الأولية المشتقة من الندبة (hHSFs). كما تندب تضخم ينشأ من الترسب المفرط للكولاجين, يهدف هذا البروتوكول إلى بناء الكولاجين الغنية في نموذج ندبة فرط الترو عن طريق تطبيق تقنية MMC مع hHSFs. وقد ثبت هذا النموذج الأمثل MMC لامتلاك المزيد من أوجه التشابه مع في ندبا في الجسم الحي مقارنة مع التقليدية 2 الأبعاد (2-D) أنظمة زراعة الخلايا. وبالإضافة إلى ذلك، فإنه فعال من حيث التكلفة، وموفر للوقت، ومرغوب فيه أخلاقيا ً مقارنة بالنماذج الحيوانية. ولذلك, النموذج الأمثل ذكرت هنا يقدم متقدمة "في الجسم الحي مثل" نموذج للدراسات ذات الصلة ندبة تضخم.

تم إجراء عينات ثلاثية في كل تجربة ، وتكررت كل تجربة 3x باستخدام خلايا من ثلاثة مرضى فرديين. يتم التعبير عن البيانات كنسب مئوية من مجموعة التحكم. تم تطبيق اختبار ANOVA وTukey في اتجاه واحد لتحليل الاختلافات الإحصائية (*p - 0.05).
MMC باستخدام Ficoll في 9٪ FVO (إشغال حجم كسور) يعزز الكمية ال...

Watch this Scientific Journal Video about In Vitro Model of Human Cutaneous Hypertrophic Scarring using Macromolecular Crowding at JoVE.com

In Vitro Model of Human Cutaneous Hypertrophic Scarring using Macromolecular Crowding

يصف هذا البروتوكول استخدام الزحام الجزيئي الكلي لإنشاء نموذج ندبة تضخمية في المختبر يشبه في ظروف الجسم الحي. عندما تزرع في بيئة جزيئات ية كبيرة مزدحمة، الخلايا الليفية الجلد الإنسان عرض الأنماط الظاهرية، والكيمياء الحيوية، وعلم وظائف الأعضاء، وخصائص وظيفية تشبه ندبا.

في النموذج الفيترو من الإنسان التشعب التشعبي تندب باستخدام الزحام الجزيئي الكلي

It has been shown that in vivo tissues are highly crowded by proteins, nucleic acids, ribonucleoproteins, polysaccharides, etc. The following protocol ...

أنشأنا نموذجًا غنيًا بالكولاجين الفردي لمحاكاة البيئة التي تعاني منها الخلايا في الجسم الحي باستخدام تقنية الازدحام الضاوي. الجلد هو بيئة مزدحمة، على عكس البيئة السائلة التي نستخدمها بالفعل لزراعة الخلايا في المختبر. بالمقارنة مع نظام ثقافة الخلية الأحادية التقليدية، وهذا النموذج يعيد البيئة الجزيئية المزدحمة التي تواجه الخلايا في الجسم الحي، وخاصة في الأنسجة ندبة حيث مصفوفة غزيرة خارج الخلية يزيحم المياه السائلة.إلى جانب الندوب الضخالية، يمكن استخدام تقنية الاكتظاظ الجزيئية هذه للدراسات حيث تكون المصفوفة خارج الخلية وفيرة، مثل التليف الرئوي. تنمو ندبة مشتقة و الليفية العادية وفقا لاتجاهات المخطوطات. ثم البذور لهم في 24 لوحات جيدا في 50،000 الخلايا في بئر في ملليلتر واحد من المتوسط.احتضان لوحة بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون. إعداد الزحم الجزيئات أو وسائل الإعلام MMC عن طريق خلط فيكول 70, فيكول 400 وحمض الاسكوربيك في 10٪ FCS DMEM. احتضان وسائل الإعلام في حمام مائي لتفريق الجماهير في الحل.ثم تعقيمه مع مرشح 0.2 ميكرومتر. استلهم الوسائط المستهلكة من الخلايا الليفية واستبدلها بوسائط MMC التي تم إجراؤها حديثًا. احتضان الخلايا في 37 درجة مئوية لمدة ستة أيام، وتغيير وسائل الإعلام MMC كل ثلاثة أيام.إعداد حل سيريوس الأحمر عن طريق حل 0.2 غرام من مسحوق 80 الأحمر المباشر في 200 ملليلتر من الماء المقطر مع ملليلتر واحد من حمض الخليك. التعرق وسائل الإعلام MMC من الخلايا وإضافة 300 ميكرولترات من حل سيريوس الأحمر لكل بئر. ثم ارجع الخلايا إلى الحاضنة لمدة 90 دقيقة.بعد الحضانة، شطف بلطف حل سيريوس الأحمر مع مياه الصنبور والسماح لصفيح الهواء الجافة بين عشية وضحاها. في اليوم التالي، استخراج الأحمر سيريوس بإضافة 200 ميكرولترات من هيدروكسيد الصوديوم 0.1 الضرس في كل بئر وهز لوحة لمدة خمس إلى 10 دقائق. نقل 100 ميكرولترات من وصمة عار المستخرجة في لوحة 96 جيدا شفافة وقياس الامتصاص في 620 نانومتر مع قارئ لوحة صغيرة.اغسل كل منها بشكل جيد مع 200 ميكرولترات من برنامج تلفزيوني وإصلاح الخلايا مع الميثانول عند أربع درجات مئوية لمدة 10 دقائق. ثم أضف 3٪ BSA إلى الآبار وحضن الطبق لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. استلهم محلول الحجب وأضف 200 ميكرولترات من الأجسام المضادة المضادة للكولاجين إلى كل بئر.احتضان لوحة لمدة 90 دقيقة. ثم استلهم الجسم المضاد وغسل الآبار ثلاث مرات مع برنامج تلفزيوني لمدة خمس دقائق لكل غسل. أضف 200 ميكرولتر من الماعز المضادة للأرنب فيت سي الأجسام المضادة الثانوية وDAPI لكل بئر.غطي الطبق بورق الألومنيوم ويحضنه لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. تجاهل الأجسام المضادة الثانوية وDAPI وكرر يغسل مع برنامج تلفزيوني. ثم تصور الفلوريسنس مباشرة تحت المجهر.بعد غسل الخلايا مرتين مع برنامج تلفزيوني، إضافة 40 ميكرولترات من العازلة تحلل في كل بئر وكشط طبقة الخلية مع طرف ماصة. ثم نقل البروتين إلى أنابيب أجهزة الطرد المركزي الصغيرة لقياس تركيز البروتين. تحميل 10 ميكروغرام من البروتين في كل بئر من أربعة إلى 12٪ البيس تريس هلام البروتين وتنفيذ SDS-PAGE في 200 فولت لمدة 30 دقيقة.عند الانتهاء ، قم بنقل البروتين إلى غشاء نيتروسيلولوز عن طريق تشغيل لطخة غربية عند 90 فولت لمدة 90 دقيقة ، مع الحرص على تجنب تكوين الفقاعة بين الجل والغشاء. كتلة الغشاء مع 10 ملليلتر من العازلة حظر. ثم احتضانه مع الأجسام المضادة الأولية في أربع درجات مئوية بين عشية وضحاها.في اليوم التالي، اغسل الغشاء خمس مرات مع 0.1 في المئة TBS توين 20 لمدة خمس دقائق لكل غسل. ثم احتضان الغشاء مع جسم مضاد ثانوي مناسب للأنواع لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة. كرر الغسلات وتصور الفلوريسنس مع نظام التصوير.بعد تنقية RNA الكلي مع طقم استخراج الحمض النووي الريبي التجاري، وقياس تركيز الحمض النووي الريبي باستخدام مقياس الطيف الصغير الحجم. ثم استخدام مجموعة التوليف cDNA لتنفيذ أول تخليق الحمض النووي حبلا. مزيج من cDNA مع 10 ميكرولترات من سوبر ميكس الخضراء SYBR ونقل العينات إلى العرف 96 لوحة جيدا المغلفة مسبقا مع أوليغنوكليد التمهيدية.اضبط الحجم الإجمالي إلى 20 ميكروليتر لكل بئر مع الماء واضبط RT-PCR وفقًا لتوجيهات المخطوطات. كثافة الخلية من الليفي الجلد البشري الخافتة التورّادة المستمدة من الندبة زاد بشكل ملحوظ بعد زراعة مع فيكول مقارنة باستخدام PVP أو التحكم. الزحمة الجزيئات مع فيكول في 9٪ كسور حجم شغل عزز بشكل كبير ترسب الكولاجين، بما في ذلك الكولاجين واحد، بالمقارنة مع غيرها من التركيبات.وقد تجلى ذلك أيضا في التحليل الكمي. تم العثور على الخلايا الليفية المشتقة من الندبة والأبلوستات الجلدية الطبيعية المزروعة في بيئات MMC لتنظيم التعبير عن أنواع ECM بالإضافة إلى الكولاجين. وتجدر الإشارة إلى أن التعبير عن مصفوفة ميتاللوبروتيناسات أو MMPs قد وجد أنه يتراكم في أنسجة ندبه الضخام مقارنة بالأنسجة المحلية.ولوحظ أن التعبير عن MMP2 و 9 و 13 كان منظما بشكل كبير في كل من الثقافات الخلية المزروعة في ظروف الاكتظاظ الجزيئية. MMPs تلعب دورا هاما أثناء التئام الجروح وتشكيل ندبة، وتنظيم الجمعية ECM وإعادة عرض. وكان تركيب عامل النمو البطانية الوعائية بين الخلايا الستة والأوعية الدموية غير قابل للكشف في لطخة غربية.ولكن تحليل RT-PCR كشف أن التعبير عن إنترلوكين ستة كان منظمًا بشكل كبير ، في حين أن التعبير عن عامل النمو البطانية الوعائية كان منظمًا لأسفل في الخلايا الليفية المزروعة في ظروف MMC. عند محاولة هذا البروتوكول، من المهم جداً اختيار الخلايا الليفية الجلدية التي تحتوي على عدد قليل جداً من مسببات الأمراض CO. علينا أيضا أن نضع في اعتبارنا أن حمض الاسكوربيك هو عنصر أساسي في المتوسطة MMC.نحن مهتمون بشكل خاص في مزيد من الكشف عن ترسب الكولاجين والمحاذاة في هذا النموذج MMC. ونحن نخطط لاستخدام تقنيات مجهرية متقدمة لمقارنة هذا النموذج في المختبر مع الأنسجة ندبة الأصلية في الجسم الحي. ونحن نشجع الآخرين على استخدام هذه التقنية الزحمة الجزيئات لتحسين أصالة في المختبر من الأنسجة مشروط المساعدة.بالطبع، يمكن أيضا أن تستخدم الزحم الجزيئات لإعادة حساب نماذج من الأمراض والأمراض في المختبر.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Visualizing Proteins and Macromolecular Complexes by Negative Stain EM: from Grid Preparation to Image Acquisition

تصور البروتينات والمجمعات ضخم الجزيئات التي كتبها EM اللطخة السلبية : من إعداد الشبكة إلى الحصول على الصور

Single particle electron microscopy (EM), of both negative stained or frozen hydrated biological samples, has become a versatile tool in structural ...

Anatomical Reconstructions of the Human Cardiac Venous System using Contrast-computed Tomography of Perfusion-fixed Specimens

إعادة بناء تشريحية من الجهاز الوريدي للقلب البشري باستخدام التباين-المقطعي العينات الإرواء ثابت

A detailed  understanding of the complexity and relative variability within the human  cardiac venous system is crucial for the development of cardiac ...

Cell Co-culture Patterning Using Aqueous Two-phase Systems

خلية المشارك الثقافة الزخرفة باستخدام مائي مرحلتين أنظمة

Cell patterning  technologies that are fast, easy to use and affordable will be required for the  future development of high throughput cell assays, ...

Tissue Engineering of a Human 3D in vitro Tumor Test System

Tissue Engineering of a Human 3D in vitro Tumor Test System

هندسة الأنسجة ل3D الإنسان<em&gt; في المختبر</em&gt; نظام ورم اختبار

Cancer is one of the leading causes of death worldwide.  Current therapeutic strategies are predominantly developed in 2D culture  systems, which ...

In vitro Cell Culture Model for Toxic Inhaled Chemical Testing

In vitro Cell Culture Model for Toxic Inhaled Chemical Testing

في المختبر خلية الثقافة نموذج لاستنشاق الفحوصات الكيميائية السامة

Cell cultures are indispensable to develop and study efficacy of therapeutic agents, prior to their use in animal models. We have the unique ability to ...

Production, Characterization and Potential Uses of a 3D Tissue-engineered Human Esophageal Mucosal Model

إنتاج وتوصيف والمحتملة استخدامات الأنسجة المهندسة-3D الإنسان المريء المخاطي نموذج

The incidence of both esophageal adenocarcinoma and its precursor, Barrett&#8217;s Metaplasia, are rising rapidly in the western world. Furthermore ...

Eye Irritation Test (EIT) for Hazard Identification of Eye Irritating Chemicals using Reconstructed Human Cornea-like Epithelial (RhCE) Tissue Model

Eye Irritation Test EIT for Hazard Identification of Eye Irritating Chemicals using Reconstructed Human Cornea-like Epithelial RhCE Tissue Model

العين تهيج اختبار (EIT) لتحديد مخاطر العين مهيج للمواد الكيميائية باستخدام يعيد الإنسان القرنية مثل الظهارية (RHCE) الأنسجة نموذج

To comply with the Seventh Amendment to the EU Cosmetics Directive and EU REACH legislation, validated non-animal alternative methods for reliable and ...

Improving 2D and 3D Skin In Vitro Models Using Macromolecular Crowding

Improving 2D and 3D Skin In Vitro Models Using Macromolecular Crowding

تحسين 2D و 3D الجلد<em&gt; في المختبر</em&gt; نماذج عن طريق الجزيئات الازدحام

The glycoprotein family of collagens represents the main structural proteins in the human body, and are key components of biomaterials used in modern ...

Microfluidic Flow Chambers Using Reconstituted Blood to Model Hemostasis and Platelet Transfusion In Vitro

Microfluidic Flow Chambers Using Reconstituted Blood to Model Hemostasis and Platelet Transfusion In Vitro

ميكروفلويديك تدفق الدوائر عن طريق الدم تم اعادة تشكيل لنموذج الإرقاء وصفائح الدم نقل<em&gt; في المختبر</em

Blood platelets prepared for transfusion gradually lose hemostatic function during storage. Platelet function can be investigated using a variety of ...

An In Vitro Organ Culture Model of the Murine Intervertebral Disc

An In Vitro Organ Culture Model of the Murine Intervertebral Disc

ل<em&gt; في المختبر</em&gt; نموذج الثقافة الجهاز من الفئران فقرات القرص

Intervertebral disc (IVD) degeneration is a significant contributor to low back pain. The IVD is a fibrocartilaginous joint that serves to transmit and ...