Name: double in utero electroporation to target temporally and spatially separated cell populations
Uploaded: 2020-06-14T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Double In Utero Electroporation to Target Temporally and Spatially Separated Cell Populations at JoVE.com

يشكر المؤلفان كريستينا أندريس كاربونيل وأعضاء مرفق العناية بالحيوانات التابع جامعة فالنسيا على المساعدة التقنية. كما نود أن نشكر إيزابيل فارينايس وساكرامنتو ر. فيرون على الكواشف وتبادل معداتها معنا. يتم تمويل I.M.W من خلال عقد Garantía Juvenil من Conselleria de Educación de Valencia (GJIDI/2018/A/221) ، يتم تمويل D.dA.D من قبل وزير دي سيسيليا ، Innovación y Universidades (MICINN) (FPI-PRE2018-086150). C.Gil-Sanz حاصل على منحة رامون إي كاجل (RYC-2015-19058) من وزير الإسبانية دي سينسيا، Innovación y Universidades (MICINN). تم تمويل هذا العمل RYC-2015-19058 و SAF2017-82880-R (MICINN).

وقد وافقت على الإجراء الوارد في هذه الوثيقة من قبل اللجنة الأخلاقية المسؤولة عن التجارب، والرفاهية الحيوانية في جامعة فالنسيا و Conselleria de Agricultura، Desarrollo Rural, Emergencia Climática y Transición Ecológica من Comunidad فالنسيانا، وتلتزم المبادئ التوجيهية للمجلس الدولي لعلوم الحيوان المختبرات (ICLAS) استعرضت في 53/2013 ريا?...

<ol>
	<li>Popovitchenko, T., Rasin, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptional+and+post-transcriptional+mechanisms+of+the+development+of+neocortical+lamination.">Transcriptional and post-transcriptional mechanisms of the development of neocortical lamination.</a> Frontiers in Neuroanatomy. 11, 102 (2017).</li><li>Mukhtar, T., Taylor, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Untangling+Cortical+Complexity+During+Development.">Untangling Cortical Complexity During Development.</a> Journal of Experimental Neuroscience. 12, (2018).</li><li>Saito, T., Nakatsuji, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+gene+transfer+into+the+embryonic+mouse+brain+using+in+vivo+electroporation.">Efficient gene transfer into the embryonic mouse brain using in vivo electroporation.</a> Developmental Biology. 240, 237-246 (2001).</li><li>Tabata, H., Nakajima, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+in+utero+gene+transfer+system+to+the+developing+mouse+brain+using+electroporation:+Visualization+of+neuronal+migration+in+the+developing+cortex.">Efficient in utero gene transfer system to the developing mouse brain using electroporation: Visualization of neuronal migration in the developing cortex.</a> Neuroscience. 103, 865-872 (2001).</li><li>Shimogori, T., Ogawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+application+with+in+utero+electroporation+in+mouse+embryonic+brain.">Gene application with in utero electroporation in mouse embryonic brain.</a> Development, Growth &amp; Differentiation. 50, 499-506 (2008).</li><li>Tabata, H., Nakajima, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Labeling+embryonic+mouse+central+nervous+system+cells+by+in+utero+electroporation.">Labeling embryonic mouse central nervous system cells by in utero electroporation.</a> Development, Growth &amp; Differentiation. 50, 507-511 (2008).</li><li>Franco, S. J., Martinez-Garay, I., Gil-Sanz, C., Harkins-Perry, S. R., M&#252;ller, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reelin+Regulates+Cadherin+Function+via+Dab1/Rap1+to+Control+Neuronal+Migration+and+Lamination+in+the+Neocortex.">Reelin Regulates Cadherin Function via Dab1/Rap1 to Control Neuronal Migration and Lamination in the Neocortex.</a> Neuron. 69, 482-497 (2011).</li><li>Gil-Sanz, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cajal-Retzius+cells+instruct+neuronal+migration+by+coincidence+signaling+between+secreted+and+contact-dependent+guidance+cues.">Cajal-Retzius cells instruct neuronal migration by coincidence signaling between secreted and contact-dependent guidance cues.</a> Neuron. 79, 461-477 (2013).</li><li>Martinez-Garay, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cadherin+2/4+signaling+via+PTP1B+and+catenins+is+crucial+for+nucleokinesis+during+radial+neuronal+migration+in+the+neocortex.">Cadherin 2/4 signaling via PTP1B and catenins is crucial for nucleokinesis during radial neuronal migration in the neocortex.</a> Development. 143, 2121-2134 (2016).</li><li>Popovitchenko, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+RNA+binding+protein+HuR+determines+the+differential+translation+of+autism-associated+FoxP+subfamily+members+in+the+developing+neocortex.">The RNA binding protein HuR determines the differential translation of autism-associated FoxP subfamily members in the developing neocortex.</a> Scientific Reports. 6, (2016).</li><li>Bultje, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mammalian+Par3+Regulates+Progenitor+Cell+Asymmetric+Division+via+Notch+Signaling+in+the+Developing+Neocortex.">Mammalian Par3 Regulates Progenitor Cell Asymmetric Division via Notch Signaling in the Developing Neocortex.</a> Neuron. 63, 189-202 (2009).</li><li>Rodr&#237;guez-Tornos, F. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cux1+Enables+Interhemispheric+Connections+of+Layer+II/III+Neurons+by+Regulating+Kv1-Dependent+Firing.">Cux1 Enables Interhemispheric Connections of Layer II/III Neurons by Regulating Kv1-Dependent Firing.</a> Neuron. 89, 494-506 (2016).</li><li>Borrell, V., Yoshimura, Y., Callaway, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+gene+delivery+to+telencephalic+inhibitory+neurons+by+directional+in+utero+electroporation.">Targeted gene delivery to telencephalic inhibitory neurons by directional in utero electroporation.</a> Journal of Neuroscience Methods. 143, 151-158 (2005).</li><li>Mire, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+activity+regulates+Robo1+transcription+to+mediate+a+switch+in+thalamocortical+axon+growth.">Spontaneous activity regulates Robo1 transcription to mediate a switch in thalamocortical axon growth.</a> Nature Neuroscience. 15, 1134-1143 (2012).</li><li>Kawauchi, D., Saito, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptional+cascade+from+Math1+to+Mbh1+and+Mbh2+is+required+for+cerebellar+granule+cell+differentiation.">Transcriptional cascade from Math1 to Mbh1 and Mbh2 is required for cerebellar granule cell differentiation.</a> Developmental Biology. 322, 345-354 (2008).</li><li>Briz, C. G., Navarrete, M., Esteban, J. A., Nieto, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+utero+electroporation+approaches+to+study+the+excitability+of+neuronal+subpopulations+and+single-cell+connectivity.">In utero electroporation approaches to study the excitability of neuronal subpopulations and single-cell connectivity.</a> Journal of Visualized Experiments. 120, e55139 (2017).</li><li>Bielle, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+origins+of+Cajal-Retzius+cells+at+the+borders+of+the+developing+pallium.">Multiple origins of Cajal-Retzius cells at the borders of the developing pallium.</a> Nature Neuroscience. 8, 1002-1012 (2005).</li><li>Meyer, G., Perez-Garcia, C. G., Abraham, H., Caput, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+p73+and+Reelin+in+the+Developing+Human+Cortex.">Expression of p73 and Reelin in the Developing Human Cortex.</a> Journal of Neuroscience. 22, 4973-4986 (2002).</li><li>Takiguchi-Hayashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+Reelin-Positive+Marginal+Zone+Cells+from+the+Caudomedial+Wall+of+Telencephalic+Vesicles.">Generation of Reelin-Positive Marginal Zone Cells from the Caudomedial Wall of Telencephalic Vesicles.</a> Journal of Neuroscience. 24, 2286-2295 (2004).</li><li>Berry, M., Rogers, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+migration+of+neuroblasts+in+the+developing+cerebral+cortex.">The migration of neuroblasts in the developing cerebral cortex.</a> Journal of Anatomy. 99, 691-709 (1965).</li><li>Alc&#225;ntara, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regional+and+cellular+patterns+of+reelin+mRNA+expression+in+the+forebrain+of+the+developing+and+adult+mouse.">Regional and cellular patterns of reelin mRNA expression in the forebrain of the developing and adult mouse.</a> Journal of Neuroscience. 18, 7779-7799 (1998).</li><li>Yoshida, M., Assimacopoulos, S., Jones, K. R., Grove, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Massive+loss+of+Cajal-Retzius+cells+does+not+disrupt+neocortical+layer+order.">Massive loss of Cajal-Retzius cells does not disrupt neocortical layer order.</a> Development. 133, 537-545 (2006).</li><li>Nadarajah, B., Brunstrom, J. E., Grutzendler, J., Wong, R. O. L., Pearlman, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+modes+of+radial+migration+in+early+development+of+the+cerebral+cortex.">Two modes of radial migration in early development of the cerebral cortex.</a> Nature Neuroscience. 4, 143-150 (2001).</li><li>Fame, R. M., MacDonald, J. L., Macklis, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development,+specification,+and+diversity+of+callosal+projection+neurons.">Development, specification, and diversity of callosal projection neurons.</a> Trends in Neurosciences. 34, 41-50 (2011).</li><li>Thomson, A. M., Bannister, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interlaminar+Connections+in+the+Neocortex.">Interlaminar Connections in the Neocortex.</a> Cerebral Cortex. 13, 5-14 (2003).</li><li>Zarrinpar, A., Callaway, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+connections+to+specific+types+of+layer+6+neurons+in+the+rat+visual+cortex.">Local connections to specific types of layer 6 neurons in the rat visual cortex.</a> Journal of Neurophysiology. 95, 1751-1761 (2006).</li><li>Chovsepian, A., Empl, L., Correa, D., Bareyre, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterotopic+Transcallosal+Projections+Are+Present+throughout+the+Mouse+Cortex.">Heterotopic Transcallosal Projections Are Present throughout the Mouse Cortex.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 11, 36 (2017).</li><li>DeFelipe, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+evolution+of+the+brain,+the+human+nature+of+cortical+circuits,+and+intellectual+creativity.">The evolution of the brain, the human nature of cortical circuits, and intellectual creativity.</a> Frontiers in Neuroanatomy. 5, 29 (2011).</li><li>Velmeshev, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+genomics+identifies+cell+type&#8211;specific+molecular+changes+in+autism.">Single-cell genomics identifies cell type&#8211;specific molecular changes in autism.</a> Science. 364, 685-689 (2019).</li></ol>

دراسة التفاعلات الخلية الخلية في الجسم الحي في المناطق ذات الكثافة الخلوية العالية مثل قشرة الدماغ مهمة معقدة. النهج التقليدية بما في ذلك استخدام الأجسام المضادة لتسمية نيوريت ليست مناسبة بسبب عدم وجود علامات محددة للسكان الخلايا المختلفة. استخدام نماذج مورين المعدلة وراثيا، حيث نوع مع?...

القشرة الدماغية هي بنية معقدة جدا ومنظمة بشكل معقد. لتحقيق هذه الدرجة من التنظيم، الخلايا العصبية إسقاط القشرية تمر العمليات التنموية المعقدة التي تتطلب جيلها الزمني، والهجرة إلى وجهتها النهائية في لوحة القشرية، وإنشاء اتصالات قصيرة وطويلة المدى1،,2. لفترة طويلة، كانت الطريقة الكلاسيكية لدراسة الكورتيوجينسيس على أساس استخدام نماذج الميرين بالضربة القاضية أو الروبوت في الجينات ذات الأهمية. ومع ذلك، هذه الاستراتيجية، وخاصة استخدام الفئران خروج المغلوب المشروطة، هو مضيعة للوقت ومكلفة، وأحيانا يطرح مشاكل إضافية بشأن وجود التكرار الوراثي أو عدم وجود برامج محددة CRE، من بين أمور أخرى. واحدة من النهج التي نشأت في محاولة لمعالجة تلك المشاكل ، وهذا يستخدم في الوقت الحاضر على نطاق واسع لدراسة التنمية القشرية هو في التيار الكهربائي الرحمي3،4. في الإلكتروبور الرحمي هو تقنية تستخدم في التنظير الجسدي، مما يسمح في الجسم الحي استهداف الخلايا الجذعية العصبية وذريتها. يمكن استخدام هذه الطريقة لتسمية الخلايا من خلال التعبير عن البروتينات الفلورية5،6، للتلاعب الجيني في الجسم الحي (أي كسب أو فقدان مقايسات الدالة)7،8،9، لعزل الكورتيسيسات الكهربائية في المختبر وخلايا الاستزراع8،10. وعلاوة على ذلك، يسمح الإكتروليت في الرحم بالسيطرة الزمنية والإقليمية على المنطقة المستهدفة. هذه التقنية لديها العديد من التطبيقات، وقد استخدمت على نطاق واسع لدراسة الهجرة العصبية, تقسيم الخلايا الجذعية, اتصال الخلايا العصبية, وغيرها من المواضيع8,,9,,11,,12.
تصف المخطوطة الحالية استخدام متغير كهربائي في الرحم، يُطلق عليه مضاعفة في الإلكتروبور الرحمي، لتحليل تفاعلات الخلايا في قشرة الدماغ ذات الأصول الزمانية والمكانية المختلفة. هذه الدراسات معقدة للغاية لإكمال عند استخدام نماذج المورين لأنها تتطلب الاستخدام المشترك لعدة خطوط محورة وراثيا. وتشمل بعض تطبيقات البروتوكول الموصوفة في هذه الورقة دراسة التفاعلات الوثيقة بين الخلايا المجاورة، فضلا عن التفاعلات بين الخلايا البعيدة من خلال الإسقاطات بعيدة المدى. تتطلب الطريقة إجراء اثنين مستقلين في عمليات الجراحة الكهربائية الرحمية ، مفصولة زمنيًا ومكانيًا ، على نفس الأجنة لاستهداف مجموعات الخلايا المختلفة ذات الاهتمام. وميزة هذا النهج هو إمكانية التلاعب وظيفة الجينات في واحد أو كلا النوعين من الخلايا العصبية باستخدام الحيوانات من النوع البرية. وبالإضافة إلى ذلك، يمكن الجمع بين هذه التجارب الوظيفية مع التعبير عن البروتينات الفلورية السيتوبلازمية أو الغشاء الموسومة لتصور مورفولوجيا الدقيقة للخلايا المستهدفة، بما في ذلك dendrites والمحارب، وتحليل الاختلافات المحتملة في التفاعلات الخلوية بالمقارنة مع السيطرة (أي الخلايا التي تحمل اسم البروتين الفلوري فقط).
ويركز البروتوكول المحدد هنا على دراسة التفاعلات الخلوية داخل القشرة الجديدة، ولكن هذه الاستراتيجية يمكن أن تستخدم أيضا لدراسة التفاعلات مع المناطق الخارجة عن القشرية التي يمكن استهدافها باستخدام في الإلكتروبورات الرحمية، مثل الزبالة الفرعية أو المهاد13،,14،أو تفاعلات الخلايا في الهياكل الأخرى، مثل المخيخ15. ويستند استهداف مناطق مختلفة على اتجاه الأقطاب وعلى البطين حيث يتم حقن الحمض النووي (الجانبي، الثالث، أو الرابع). مع الاستراتيجية المذكورة هنا ، يمكننا تسمية عدد كبير من الخلايا ، وهو أمر مفيد لتقييم التغييرات العامة في الاتصال / التداخل في التجارب الوظيفية. ومع ذلك، لدراسة التغيرات الدقيقة في الاتصال، يمكن للمرء استخدام الإصدارات المعدلة من في الكهربائي الرحم للحصول على وضع العلامات sparser وتحديد خلايا واحدة16. وباختصار، فإن ضعف القدرة الكهربائية الرحمية هو طريقة متعددة الاستخدامات تسمح باستهداف مجموعات الخلايا المنفصلة زمانياً ومكانياً ودراسة تفاعلاتها بالتفصيل، إما في ظروف التحكم أو في ظروف مقترنة بتجارب وظيفية، مما يقلل إلى حد كبير من التكاليف الزمنية والاقتصادية.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Ampicillin sodium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9518-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aspirator tube</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A5177-5EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Baby-mixter hemostat (perfusion)</td>
			<td>Fine Science Tools (FST)</td>
			<td>13013-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Borosilicate glass capillary</td>
			<td>WPI</td>
			<td>1B100-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine (BUPREX 0,3 mg/ml)</td>
			<td>Rb Pharmaceuticals Limited</td>
			<td>921425</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CAG-BFP plasmid</td>
			<td>Kindly provided by U.M&#252;ller Lab</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CAG-EGFP plasmid</td>
			<td>Kindly provided by U.M&#252;ller Lab</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CAG-mCherry plasmid</td>
			<td>Kindly provided by U.M&#252;ller Lab</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CAG-mtdTomato-2A-nGFP plasmid</td>
			<td>Kindly provided by U.M&#252;ller Lab</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>FV10i</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Swabs</td>
			<td>BFHCVDF</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyanoacrylate glue</td>
			<td>B. Braun Surgical</td>
			<td>1050044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting scope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>stemi 305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont Forceps #5 Fine Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools (FST)</td>
			<td>11254-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ECM830 Square Wave Electroporator</td>
			<td>BTX</td>
			<td>45-0052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric Razor</td>
			<td>Oster</td>
			<td>76998</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Endotoxin-free TE buffer</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>1018499</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol wipes</td>
			<td>BFHCVDF</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extra Fine Graefe Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools (FST)</td>
			<td>11150-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye ointment</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>682542.6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast Green dye</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F7252-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools (FST)</td>
			<td>14069-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence LEDs</td>
			<td>CoolLED</td>
			<td>pE-300-W</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Genopure Plasmid Maxi Kit</td>
			<td>Roche</td>
			<td>3143422001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Halsted-Mosquito Hemostats (suture)</td>
			<td>Fine Science Tools (FST)</td>
			<td>91308-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating Pad</td>
			<td>UFESA</td>
			<td>AL5514</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted epifluorescence microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Eclipse TE2000-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodine wipes</td>
			<td>Lorsoul</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isofluorane vaporizer</td>
			<td>Flow-Meter</td>
			<td>A15B5001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Karizoo</td>
			<td>586259</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine (Anastemine)</td>
			<td>Fatro Ib&#233;rica SL</td>
			<td>583889-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimtech precision wipes</td>
			<td>Kimberly-Clark</td>
			<td>7252</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB (Lennox) Agar GEN</td>
			<td>Labkem</td>
			<td>AGLB-00P-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB (Lennox) broth GEN</td>
			<td>Labkem</td>
			<td>LBBR-00P-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low-melting point agarose</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP165-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medetomidine (Sedator)</td>
			<td>Dechra</td>
			<td>573749.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope coverslips</td>
			<td>Menel-Gl&#228;ser</td>
			<td>15747592</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Slides</td>
			<td>Labbox</td>
			<td>SLIB-F10-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting medium</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>17984-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mutiwell plates (24)</td>
			<td>SPL Life Sciences</td>
			<td>32024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mutiwell plates (48)</td>
			<td>SPL Life Sciences</td>
			<td>32048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl (for saline solution)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10112640</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle 25 G (BD Microlance 3)</td>
			<td>Becton, Dickinson and Company</td>
			<td>300600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Orbital incubator S150</td>
			<td>Stuart Scientific</td>
			<td>5133</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P Selecta Incubator</td>
			<td>J. P. Selecta, s.a.</td>
			<td>0485472</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>PanReac AppliedChem</td>
			<td>A3813</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Sigma -Aldrich</td>
			<td>P4333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic perfusion pump</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>EW-07522-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Platinum Tweezertrode, 5 mm Diameter</td>
			<td>Btx</td>
			<td>45-0489</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reflex Skin Closure System - 7mm Clips, box of 100</td>
			<td>AgnThos</td>
			<td>203-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reflex Skin Closure System - Clip Applyer, 7mm</td>
			<td>AgnThos</td>
			<td>204-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ring Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools (FST)</td>
			<td>11103-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium azide</td>
			<td>PanReac AppliedChem</td>
			<td>122712-1608</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical absorbent pad (steryle)</td>
			<td>HK Surgical</td>
			<td>PD-M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture (Surgicryl PGA 6-0)</td>
			<td>SMI Suture Materials</td>
			<td>BYD11071512</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 1ml (BD plastipak)</td>
			<td>Becton, Dickinson and Company</td>
			<td>303172</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Culture Dish 100 x 20 mm</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vertical Micropipette Puller</td>
			<td>Sutter Instrument Co</td>
			<td>P-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vertical microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Eclipse Ni</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vibratome</td>
			<td>Leica</td>
			<td>VT1200S</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

double in utero electroporation to target temporally and spatially separated cell populations

في الإلكتروبور الرحمي هو في تقنية نقل الحمض النووي في الجسم الحي تستخدم على نطاق واسع لدراسة الآليات الجزيئية والخلوية الكامنة في الثدييات corticogenesis. يستفيد هذا الإجراء من بطين الدماغ للسماح بإدخال الحمض النووي ذات الاهتمام ويستخدم زوجًا من الأقطاب لتوجيه مدخل المادة الوراثية إلى الخلايا المبطنة للبطين ، وهي الخلايا الجذعية العصبية. هذه الطريقة تسمح للباحثين لتسمية الخلايا المطلوبة و / أو التلاعب في التعبير عن الجينات من الاهتمام في تلك الخلايا. لديها تطبيقات متعددة، بما في ذلك المقايسات التي تستهدف الهجرة العصبية، وتتبع النسب، ومحور عصبي المسار. ومن السمات الهامة لهذه الطريقة هي سيطرتها الزمنية والإقليمية، مما يسمح بالتحايل على المشاكل المحتملة المتعلقة بالفتاكة الجنينية أو عدم وجود فئران محددة من فئران سائق CRE. جانب آخر ذو صلة من هذه التقنية هو أنه يساعد على الحد إلى حد كبير من القيود الاقتصادية والزمنية التي تنطوي على توليد خطوط الماوس الجديدة ، والتي تصبح ذات أهمية خاصة في دراسة التفاعلات بين أنواع الخلايا التي تنشأ في مناطق بعيدة من الدماغ في مختلف الأعمار التنموية. هنا نحن وصف استراتيجية مزدوجة الكهربائي التي تمكن من استهداف مجموعات الخلايا التي يتم فصل مكاني وزمنيا. مع هذا النهج يمكننا تسمية أنواع فرعية مختلفة من الخلايا في مواقع مختلفة مع البروتينات الفلورية المختارة لتصور لهم، و / أو يمكننا التعامل مع الجينات من الفائدة التي تعبر عنها هذه الخلايا المختلفة في الأوقات المناسبة. هذه الاستراتيجية تعزز إمكانات في الصعق الكهربائي الرحمي وتوفر أداة قوية لدراسة سلوك مجموعات الخلايا المنفصلة زمانياً ومكانياً التي تهاجر لإقامة اتصالات وثيقة، فضلاً عن التفاعلات طويلة المدى من خلال الإسقاطات المحورية، مما يقلل من التكاليف الزمنية والاقتصادية.

نشأت التفاعلات بين الخلايا المجاورة في أماكن وفي أوقات مختلفة: خلايا Cajal-Retzius (خلايا CR) والخلايا العصبية الإسقاط القشرية المهاجرة المبكرة (الاستراتيجية أ)
وقد سبق وصف التفاعل بين الخلايا CR-cells والخلايا العصبية الإسقاط القشرية المبكرة بأنها ضرورية لتنظيم نقل سومال ع...

Watch this Scientific Journal Video about Double In Utero Electroporation to Target Temporally and Spatially Separated Cell Populations at JoVE.com

Double In Utero Electroporation to Target Temporally and Spatially Separated Cell Populations

مضاعفة في الكهربائي الرحم يسمح استهداف مجموعات الخلايا التي يتم فصل مكاني وزمنيا. هذه التقنية مفيدة لتصور التفاعلات بين تلك الخلايا التي تستخدم البروتينات الفلورية في الظروف العادية ولكن أيضا بعد التجارب الوظيفية ل الجينات التي تثير الاهتمام.

مضاعفة في Electroporation الرحمية لاستهداف مجموعات الخلايا المنفصلة زمانياً ومكانياً

In utero electroporation is an in vivo DNA transfer technique extensively used to study the molecular and cellular mechanisms underlying mammalian ...

مضاعفة في كهربائي الرحم هو وسيلة قوية لدراسة الجوانب الهامة من الثدييات الكورتيوجينية مثل التفاعل بين الخلايا العصبية، ولدت في مواقع مختلفة والأعمار التنموية. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي القدرة على دراسة التفاعلات غير المُزاجَمة بين مجموعات الخلايا المختلفة هذه بطريقة سريعة ومفصلة وغير مكلفة. واحد الآثار اللافتة للنظر من طريقتنا هو أنه يسهل فهم أفضل لكيفية تغيير الأسلاك لدينا مماثلة في اضطرابات الخلايا العصبية مثل التوحد والفصام.لا تقتصر هذه الدراسة على القشرة الجديدة ولكن يمكن استخدامها أيضًا لتحليل تفاعلات الخلايا إلى الخلية ، في مناطق exocortico مثل الـ sepalium أو المخيخ. واحدة من الخطوات الأكثر تحديا هو حقن الحمض النووي في البطينين الجانبي من الأجنة المبكرة. استخدام مصدر الضوء الساطع ضروري للحقن الناجح.لكل عملية جراحية أولا إعداد 10 ميكرولتر حل يحتوي على ميكرولتر واحد من صبغة خضراء سريعة، واحد ميكروغرام لكل ميكرولتر حل الحمض النووي plasmid من الفائدة لكل plasmid، وحجم المناسبة على Endotoxin الحرة TE العازلة. وتحمّل مسبقًا ماصة زجاجية صغيرة مع محلول الحمض النووي المُعد المناسب. لأول مرة في جراحة الإلكترو الكهربائية الرحمية، ضعي مرهم على عيون فأرة الحمل المُخدرة في الوقت المناسب، واستخدمي شفرة حلاقة لحلاقة البطن.تطهير الجلد المكشوف مرتين مع 70٪ مناديل الإيثانول واليود متسلسلة قبل المضي قدما مع شق على الجانب الأيمن من البطن. مرة واحدة في الرحم يمكن الوصول إليها استخدام ملقط الحلقية لاستخراج بعناية الجهاز. باستخدام أنبوب التعرق الذي يتم التحكم فيه في الفم، يحقن ما يقرب من 0.5 ميكرولترات من المحلول في البطين الجانبي لنصف الكرة الأيسر من أجنة E11.5 للاستراتيجية A.Or في البطين الجانبي لنصف الكرة الأيمن من الأجنة E13.5 للاستراتيجية B، حتى تظهر الصبغة الخضراء السريعة داخل البطين.عندما تم حقن كل من الحل، مكان ملقط نوع الأقطاب البلاتينية حول الجانب الجانبي من رأس الأجنة حقن، مع القطب إيجابية موجهة إلى الجدار وسط لاستهداف تنح تنحدر القشرية للاستراتيجية A، أو موجهة إلى القشرة الجانبي للاستراتيجية باء، مع الحرص على تجنب القلب والمشيمة. استخدم أقطاب كهربائية على الموجة المربعة لتطبيق التسلسل المناسب من النبضات الكهربائية لكل عمر جنيني، كما هو مبين في الجدول. عندما تم حقن جميع الأجنة وكهربائها، استخدم ملقط لإعادة الرحم بعناية إلى تجويف البطن، وملء البطن مع المالحة الدافئة.باستخدام إبرة خياطة 6-0، أغلق جدار البطن، وغلق بعناية شق الجلد. ثم العودة إلى قفص الحيوان المنزل مع رصد حتى الشفاء التام. بعد يومين من الجراحة الأولية، تأكد من أن الماوس يظهر سلوكًا طبيعيًا، ولا يظهر أي علامات على الألم أو الضيق.قبل إعداد الحيوان للثاني في الكهربائي الرحمي كما أظهرت للتو. حقن 0.5 ميكرولترات من محلول الحمض النووي المطلوب في بطين الدماغ الجانبي الأيسر من الأجنة E13.5 للاستراتيجية A، وفي البطين الدماغ الجانبي الأيسر من الأجنة E15.5 لاستراتيجية B.After كل حقن، وضع الأقطاب مع القطب الإيجابي الموجه إلى القشرة الجانبية لنصف الكرة الأرضية حقن للاستراتيجية A واستراتيجية B.and electroporate embryos aseded in the table. عند الانتهاء من الإلكتروبور، قم بإعادة الرحم إلى تجويف البطن، وأكمل الجراحة والعناية بعد الجراحة كما هو موضح.عند تنفيذ الاستراتيجية A، بعد أربعة أيام من الكهربة الثانية، حصاد الرحم من اليوم الجنيني 17.5 فأر أنثى حامل في طبق بتري من برنامج تلفزيوني على الجليد. واستخدام الملاقط لنقل الأجنة إلى طبق جديد من برنامج تلفزيوني تحت مجهر تشريح. باستخدام ملقط، فهم بعناية رأس كل جنين لتسهيل إزالة الجلد على الرأس والجمجمة.استخدام ملقط أو ملعقة لرفع العقول المكشوفة. ثم استخدام ملعقة لنقل كل الدماغ إلى آبار فردية من 48 لوحة بئر تحتوي على حوالي 600 ميكرولترات من محلول المثبت في البئر. عندما تم جمع كل من العقول، إصلاح العقول في أربع درجات مئوية بين عشية وضحاها على شاكر المدارية، تليها ثلاثة يغسل عشر دقائق في برنامج تلفزيوني.بعد الغسيل الأخير، تضمين العقول في 4٪ نقطة انصهار منخفضة agarose في برنامج تلفزيوني لمدة عشر دقائق تقريبا. بعد أن تتوطد agarose، استخدم الغراء سيانوكريلات لتأمين كل دماغ إلى جانب لمبة الشم حامل الأنسجة الهزاز حتى. ضع الحامل داخل حاوية الاهتزاز، وملء الحاوية مع برنامج تلفزيوني.ثم استخدم الاهتزاز وفرشاة للحصول على 100 ميكرومتر سميكة أقسام تسلسلية التاجية. نقل ما يصل إلى سبعة أقسام في البئر وستة آبار لكل جنين، في لوحة جديدة 48 بئر تحتوي على 600 ميكرولترات لكل بئر من PBS الطازجة، وتستكمل مع المواد الحافظة المضادة للفطريات كما يتم جمعها. عندما تم الحصول على جميع المقاطع، استخدم فرشاة دقيقة لتركيب كل قسم على شريحة مجهر زجاجي، وتغطيتها بغطاء زجاجي لتقييم فعالية الكهربة على مجهر epifluorescence تستقيم.عند تنفيذ الاستراتيجية B، في اليوم التالي للولادة 15، بعد التأكد من عدم الاستجابة لـ topinch، قم بتأمين الفأر في وضعية الوبين، واستخدم المقص لإجراء شق جلدي في منتصف الخط لفضح القفص الصدري والحجاب الحاجز، وقطع الحجاب الحاجز للوصول إلى القلب. باستخدام مقص غرامة، وجعل شق في الأذين الأيمن، واستخدام إبرة 25 غيج متصلة أنبوب مرنة لمضخة النزف ال peristaltic لاختراق البطين الأيسر. عندما تكون الإبرة في مكانها، تقدم ما لا يقل عن 25 ملليلتر من 4٪ شبه شكلي بواسطة التسريب عبر القلب، في تدفق مستمر عند 5.5 ملليلتر في الدقيقة.بعد ما يقرب من خمس دقائق، ووقف الضخ، واستخدام مقص لإزالة الجلد على رأسه. إزالة الجمجمة، واستخدام ملعقة لإزالة أنسجة الدماغ. وضع الدماغ في بئر واحدة من 24 لوحة بئر تحتوي على 1.5 ملليلتر من 4٪ paraformaldehyde الطازجة, لاحتضان بين عشية وضحاها في أربع درجات مئوية على شاكر المدارية.ثم الحصول على 40 أقسام ميكرومتر من أدمغة ما بعد الولادة كما هو موضح للتو. بالنسبة لتصوير شريحة الدماغ الجنينية وما بعد الولادة، ضع الشرائح التي تحتوي على أقسام الدماغ المثبتة ذات الاهتمام على حامل شريحة المجهر. إدخال حامل المنزلق في المجهر confocal، واختيار القناة المناسبة لفلوروفلورس المستخدمة في التجربة.قم بإجراء مسح عينة للحصول على صور الخريطة لكل قسم في الدماغ في أطوال موجية مختلفة للحصول على عرض عام لإخراج الإلكتروبورات المزدوجة. بمجرد الانتهاء، حدد عدسة 10x، في وضع مراقبة انقضاء الوقت Z-المكدس متعدد المساحة. في كل من مناطق XY المحددة، قم بتعيين محيطات التصوير المناسبة وكذلك عمق المسح الضوئي على طول محور Z وفقًا ل طائرات العينة، التي يكون فيها الفلوريسين مرئيًا.الحصول على صور التكبير منخفضة من جميع المناطق المختارة، وتصدير الصور من تنسيق المنظمة الدولية للIF إلى TIFF في برنامج عارض المجهر. ثم حدد عدسة 60x، والتقاط صور التكبير عالية كما هو موضح للتو، لمراقبة التفاعلات من خلية إلى خلية على مستوى أكثر تفصيلا. الفجوة الزمنية بين مزدوجة في عمليات جراحية القطب الرحم يسمح الخلايا CAG إلى الخلايا المستهدفة في اليوم الجنيني 11.5 في أحد أماكن المنشأ للوصول إلى المنطقة الهامشية من القشرة الجديدة الجانبي بما في ذلك منطقة somatosensory، في الوقت المناسب لإقامة اتصالات مع الخلايا العصبية الإسقاط القشرية، وصفت في اليوم الجنيني 13.5.العمليات الرائدة في الخلايا العصبية الإسقاط التعبير عن تعزيز GFP uprise بغزارة في المنطقة الهامشية من القشرة، والاختلاط مع عمليات M-الكرز التعبير عن الخلايا الكاتاريزية. في الكهربائي الرحمي في يوم الجنين 13.5، وذلك باستخدام BFP التعبير عن البلازميد يسهل وضع العلامات من الخلايا العصبية الإسقاط عبر طبقات القشرية المختلفة. والكهرباء الثانية في الجانب اللاتيني من اليوم الجنيني 15.5 يستهدف الطبقة العليا إسقاط الخلايا العصبية الفرعية، ولكن ليس الخلايا العصبية إسقاط الطبقة السفلى التي تتطور في مراحل سابقة.الطبقة العليا الخلايا العصبية المستهدفة توسيع محاورها إلى نصف الكرة الأرضية contralateral، مع نمط ال arborization مميزة. التكبير عالية يسمح تصور أكثر تفصيلا من محور محور المحور callosal innervation من الخلايا العصبية الإسقاط المستهدفة داخل نصف الكرة الأرضية contralateral. عند محاولة هذا البروتوكول، من المهم أن تخطط توقيت الكهربائي، ونصف الكرة لحقن، وموقف الأقطاب الكهربائية وفقا للسكان الخلية التي سيتم استهدافها.بعد هذا إجراء كلّ الطرق, مثل كهربائيّة واحدة ممتعة. يمكن القيام به لكلا النوعين من الخلايا لدراسة التعديلات الدائرة ممكن في الجسم الحي. باستخدام هذه التقنية، من الممكن دراسة التفاعلات الدقيقة بين خليتين مستهدفتين مختلفتين.بما في ذلك المعلومات العلمية الجديدة في الجسم الحي، عن طريق كهربائي من البروتينات متشابك الفلورسنت.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Ultrasound-Guided Microinjection into the Mouse Forebrain In Utero at E9.5

Ultrasound-Guided Microinjection into the Mouse Forebrain In Utero at E9.5

الموجات فوق الصوتية ، إذ تسترشد Microinjection في الدماغ المقدم ماوس في الرحم في E9.5

In utero survival surgery in mice permits the molecular manipulation of gene expression during development.  However, because the uterine wall is opaque ...

In utero Electroporation followed by Primary Neuronal Culture for Studying Gene Function in Subset of Cortical Neurons

In utero Electroporation followed by Primary Neuronal Culture for Studying Gene Function in Subset of Cortical Neurons

في الرحم بعد Electroporation للثقافة متعلق بالخلايا العصبية الأولية لدراسة وظائف الجينات في مجموعة فرعية من العصبونات القشرية

In vitro study of primary neuronal cultures allows for quantitative analyses of neurite outgrowth. In order to study how genetic alterations affect ...

Efficient Gene Delivery into Multiple CNS Territories Using In Utero Electroporation

Efficient Gene Delivery into Multiple CNS Territories Using In Utero Electroporation

كفاءة توصيل الجينات في الجهاز العصبي المركزي متعددة باستخدام الأراضي في الرحم Electroporation

The ability to manipulate gene expression is the cornerstone of modern day experimental embryology, leading to the elucidation of multiple developmental ...

Mouse in Utero Electroporation: Controlled Spatiotemporal Gene Transfection

Mouse in Utero Electroporation: Controlled Spatiotemporal Gene Transfection

فأر في الرحم Electroporation : الشواهد ترنسفكأيشن جين Spatiotemporal

In order to understand the function of genes expressed in specific region of the developing brain, including signaling molecules and axon guidance ...

Expansion of Embryonic and Adult Neural Stem Cells by In Utero Electroporation or Viral Stereotaxic Injection

Expansion of Embryonic and Adult Neural Stem Cells by In Utero Electroporation or Viral Stereotaxic Injection

توسيع الجنينية والكبار الخلايا الجذعية العصبية من قبل<em&gt; في الرحم</em&gt; الصعق الكهربائي أو حقن التجسيمي الفيروسية

Somatic stem cells can divide to generate additional stem cells (expansion) or more differentiated cell types (differentiation), which is fundamental for ...

Visualization and Genetic Manipulation of Dendrites and Spines in the Mouse Cerebral Cortex and Hippocampus using In utero Electroporation

Visualization and Genetic Manipulation of Dendrites and Spines in the Mouse Cerebral Cortex and Hippocampus using In utero Electroporation

التصور والتلاعب الجيني من التشعبات والاعمده الفقريه في قشرة الدماغ والحصين ماوس باستخدام<em&gt; في الرحم</em&gt; Electroporation

In utero electroporation (IUE) has become a powerful technique to study the development of different regions of the embryonic nervous system 1-5. To date ...

Generation of Topically Transgenic Rats by In utero Electroporation and In vivo Bioluminescence Screening

Generation of Topically Transgenic Rats by In utero Electroporation and In vivo Bioluminescence Screening

جيل من الفئران المعدلة وراثيا من قبل موضعيا<em&gt; في الرحم</em&gt; التثقيب الكهربائي و<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; ضوء بارد الفرز

 In utero electroporation (IUE) is a technique which allows genetic modification of cells in the brain for investigating neuronal development. So far, the ...

Genetic Manipulation of the Mouse Developing Hypothalamus through In utero Electroporation

Genetic Manipulation of the Mouse Developing Hypothalamus through In utero Electroporation

التلاعب الجيني من الفأرة النامية من خلال المهاد<em&gt; في الرحم</em&gt; Electroporation

Genetic  modification of specific regions of the developing mammalian brain is a very  powerful experimental approach. However, generating novel mouse ...

Cortex-, Hippocampus-, Thalamus-, Hypothalamus-, Lateral Septal Nucleus- and Striatum-specific In Utero Electroporation in the C57BL/6 Mouse

Cortex-, Hippocampus-, Thalamus-, Hypothalamus-, Lateral Septal Nucleus- and Striatum-specific In Utero Electroporation in the C57BL/6 Mouse

Cortex-، Hippocampus-، Thalamus-، Hypothalamus-، الجانبي الحاجزي Nucleus- والمخطط محددة<em&gt; في الرحم</em&gt; Electroporation للفي C57BL / 6 الماوس

In utero electroporation is a widely used technique for fast and efficient spatiotemporal manipulation of various genes in the rodent central nervous ...

A Novel Strategy Combining Array-CGH, Whole-exome Sequencing and In Utero Electroporation in Rodents to Identify Causative Genes for Brain Malformations

A Novel Strategy Combining Array-CGH, Whole-exome Sequencing and In Utero Electroporation in Rodents to Identify Causative Genes for Brain Malformations