Name: double in utero electroporation to target temporally and spatially separated cell populations
Uploaded: 2020-06-14T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Double In Utero Electroporation to Target Temporally and Spatially Separated Cell Populations at JoVE.com

המחברים מודים לכריסטינה אנדרס קרבונל ולחברי המכון לטיפול בבעלי חיים באוניברסידה ולנסיה לקבלת סיוע טכני. כמו כן, אנו רוצים להודות לאיזבל פריניאס ולסקרמנטו ר. פריון לריאגנטים ולשיתוף הציוד שלהם איתנו. אני ממומן על ידי חוזה Juvenil Garantía מתוך Conselleria דה ולנסיה (GJIDI/2018/A/221), D. dA ממומן על ידי Ministerio de Ciencia, חדשנות האוניברסיטה (MICINN) (FPI-PRE2018 086150). ג. גיל-צאנז מחזיק רמון מגרנט (RYC-2015-19058) מ Ministerio de Ciencia הספרדי, האוניברסיטה האנגלית (MICINN). עבודה זו ממומנת RYC-2015-19058 ו-SAF2017-82880-R (MICINN).

ההליך המתואר במסמך זה אושר על ידי הוועדה האתית האחראית על הניסויים, רווחת בעלי החיים של האוניברסידה ולנסיה והקונסליריה דה יוחדים, דסאררולו כפרי, אמגנסיה Climática y טראנסיטריון של Comunidad ולנסיה, ואת ההנחיות של המועצה הבינלאומית למדע בעלי חיים מעבדה (ICLAS) שנבדקו ב Decreto האמיתי 53/2013 של החקיקה הספרדי...

<ol>
	<li>Popovitchenko, T., Rasin, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptional+and+post-transcriptional+mechanisms+of+the+development+of+neocortical+lamination.">Transcriptional and post-transcriptional mechanisms of the development of neocortical lamination.</a> Frontiers in Neuroanatomy. 11, 102 (2017).</li><li>Mukhtar, T., Taylor, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Untangling+Cortical+Complexity+During+Development.">Untangling Cortical Complexity During Development.</a> Journal of Experimental Neuroscience. 12, (2018).</li><li>Saito, T., Nakatsuji, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+gene+transfer+into+the+embryonic+mouse+brain+using+in+vivo+electroporation.">Efficient gene transfer into the embryonic mouse brain using in vivo electroporation.</a> Developmental Biology. 240, 237-246 (2001).</li><li>Tabata, H., Nakajima, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+in+utero+gene+transfer+system+to+the+developing+mouse+brain+using+electroporation:+Visualization+of+neuronal+migration+in+the+developing+cortex.">Efficient in utero gene transfer system to the developing mouse brain using electroporation: Visualization of neuronal migration in the developing cortex.</a> Neuroscience. 103, 865-872 (2001).</li><li>Shimogori, T., Ogawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+application+with+in+utero+electroporation+in+mouse+embryonic+brain.">Gene application with in utero electroporation in mouse embryonic brain.</a> Development, Growth &amp; Differentiation. 50, 499-506 (2008).</li><li>Tabata, H., Nakajima, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Labeling+embryonic+mouse+central+nervous+system+cells+by+in+utero+electroporation.">Labeling embryonic mouse central nervous system cells by in utero electroporation.</a> Development, Growth &amp; Differentiation. 50, 507-511 (2008).</li><li>Franco, S. J., Martinez-Garay, I., Gil-Sanz, C., Harkins-Perry, S. R., M&#252;ller, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reelin+Regulates+Cadherin+Function+via+Dab1/Rap1+to+Control+Neuronal+Migration+and+Lamination+in+the+Neocortex.">Reelin Regulates Cadherin Function via Dab1/Rap1 to Control Neuronal Migration and Lamination in the Neocortex.</a> Neuron. 69, 482-497 (2011).</li><li>Gil-Sanz, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cajal-Retzius+cells+instruct+neuronal+migration+by+coincidence+signaling+between+secreted+and+contact-dependent+guidance+cues.">Cajal-Retzius cells instruct neuronal migration by coincidence signaling between secreted and contact-dependent guidance cues.</a> Neuron. 79, 461-477 (2013).</li><li>Martinez-Garay, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cadherin+2/4+signaling+via+PTP1B+and+catenins+is+crucial+for+nucleokinesis+during+radial+neuronal+migration+in+the+neocortex.">Cadherin 2/4 signaling via PTP1B and catenins is crucial for nucleokinesis during radial neuronal migration in the neocortex.</a> Development. 143, 2121-2134 (2016).</li><li>Popovitchenko, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+RNA+binding+protein+HuR+determines+the+differential+translation+of+autism-associated+FoxP+subfamily+members+in+the+developing+neocortex.">The RNA binding protein HuR determines the differential translation of autism-associated FoxP subfamily members in the developing neocortex.</a> Scientific Reports. 6, (2016).</li><li>Bultje, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mammalian+Par3+Regulates+Progenitor+Cell+Asymmetric+Division+via+Notch+Signaling+in+the+Developing+Neocortex.">Mammalian Par3 Regulates Progenitor Cell Asymmetric Division via Notch Signaling in the Developing Neocortex.</a> Neuron. 63, 189-202 (2009).</li><li>Rodr&#237;guez-Tornos, F. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cux1+Enables+Interhemispheric+Connections+of+Layer+II/III+Neurons+by+Regulating+Kv1-Dependent+Firing.">Cux1 Enables Interhemispheric Connections of Layer II/III Neurons by Regulating Kv1-Dependent Firing.</a> Neuron. 89, 494-506 (2016).</li><li>Borrell, V., Yoshimura, Y., Callaway, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+gene+delivery+to+telencephalic+inhibitory+neurons+by+directional+in+utero+electroporation.">Targeted gene delivery to telencephalic inhibitory neurons by directional in utero electroporation.</a> Journal of Neuroscience Methods. 143, 151-158 (2005).</li><li>Mire, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+activity+regulates+Robo1+transcription+to+mediate+a+switch+in+thalamocortical+axon+growth.">Spontaneous activity regulates Robo1 transcription to mediate a switch in thalamocortical axon growth.</a> Nature Neuroscience. 15, 1134-1143 (2012).</li><li>Kawauchi, D., Saito, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptional+cascade+from+Math1+to+Mbh1+and+Mbh2+is+required+for+cerebellar+granule+cell+differentiation.">Transcriptional cascade from Math1 to Mbh1 and Mbh2 is required for cerebellar granule cell differentiation.</a> Developmental Biology. 322, 345-354 (2008).</li><li>Briz, C. G., Navarrete, M., Esteban, J. A., Nieto, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+utero+electroporation+approaches+to+study+the+excitability+of+neuronal+subpopulations+and+single-cell+connectivity.">In utero electroporation approaches to study the excitability of neuronal subpopulations and single-cell connectivity.</a> Journal of Visualized Experiments. 120, e55139 (2017).</li><li>Bielle, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+origins+of+Cajal-Retzius+cells+at+the+borders+of+the+developing+pallium.">Multiple origins of Cajal-Retzius cells at the borders of the developing pallium.</a> Nature Neuroscience. 8, 1002-1012 (2005).</li><li>Meyer, G., Perez-Garcia, C. G., Abraham, H., Caput, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+p73+and+Reelin+in+the+Developing+Human+Cortex.">Expression of p73 and Reelin in the Developing Human Cortex.</a> Journal of Neuroscience. 22, 4973-4986 (2002).</li><li>Takiguchi-Hayashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+Reelin-Positive+Marginal+Zone+Cells+from+the+Caudomedial+Wall+of+Telencephalic+Vesicles.">Generation of Reelin-Positive Marginal Zone Cells from the Caudomedial Wall of Telencephalic Vesicles.</a> Journal of Neuroscience. 24, 2286-2295 (2004).</li><li>Berry, M., Rogers, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+migration+of+neuroblasts+in+the+developing+cerebral+cortex.">The migration of neuroblasts in the developing cerebral cortex.</a> Journal of Anatomy. 99, 691-709 (1965).</li><li>Alc&#225;ntara, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regional+and+cellular+patterns+of+reelin+mRNA+expression+in+the+forebrain+of+the+developing+and+adult+mouse.">Regional and cellular patterns of reelin mRNA expression in the forebrain of the developing and adult mouse.</a> Journal of Neuroscience. 18, 7779-7799 (1998).</li><li>Yoshida, M., Assimacopoulos, S., Jones, K. R., Grove, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Massive+loss+of+Cajal-Retzius+cells+does+not+disrupt+neocortical+layer+order.">Massive loss of Cajal-Retzius cells does not disrupt neocortical layer order.</a> Development. 133, 537-545 (2006).</li><li>Nadarajah, B., Brunstrom, J. E., Grutzendler, J., Wong, R. O. L., Pearlman, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+modes+of+radial+migration+in+early+development+of+the+cerebral+cortex.">Two modes of radial migration in early development of the cerebral cortex.</a> Nature Neuroscience. 4, 143-150 (2001).</li><li>Fame, R. M., MacDonald, J. L., Macklis, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development,+specification,+and+diversity+of+callosal+projection+neurons.">Development, specification, and diversity of callosal projection neurons.</a> Trends in Neurosciences. 34, 41-50 (2011).</li><li>Thomson, A. M., Bannister, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interlaminar+Connections+in+the+Neocortex.">Interlaminar Connections in the Neocortex.</a> Cerebral Cortex. 13, 5-14 (2003).</li><li>Zarrinpar, A., Callaway, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+connections+to+specific+types+of+layer+6+neurons+in+the+rat+visual+cortex.">Local connections to specific types of layer 6 neurons in the rat visual cortex.</a> Journal of Neurophysiology. 95, 1751-1761 (2006).</li><li>Chovsepian, A., Empl, L., Correa, D., Bareyre, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterotopic+Transcallosal+Projections+Are+Present+throughout+the+Mouse+Cortex.">Heterotopic Transcallosal Projections Are Present throughout the Mouse Cortex.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 11, 36 (2017).</li><li>DeFelipe, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+evolution+of+the+brain,+the+human+nature+of+cortical+circuits,+and+intellectual+creativity.">The evolution of the brain, the human nature of cortical circuits, and intellectual creativity.</a> Frontiers in Neuroanatomy. 5, 29 (2011).</li><li>Velmeshev, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+genomics+identifies+cell+type&#8211;specific+molecular+changes+in+autism.">Single-cell genomics identifies cell type&#8211;specific molecular changes in autism.</a> Science. 364, 685-689 (2019).</li></ol>

המחקר של אינטראקציות תא תא בvivo באזורים עם צפיפות תאית גבוהה כמו קליפת המוח היא משימה מורכבת. גישות מסורתיות כולל שימוש בנוגדנים לתווית neurites אינם מתאימים בגלל העדר סמנים ספציפיים עבור אוכלוסיות תאים שונות. השימוש במודלים מורגניים, כאשר סוג תא מסוים מבטא חלבון פלורסנט, הוא שימושי להמחיש את ...

קליפת המוח היא מבנה מורכב ומסודר מאוד. כדי להשיג מידה כזו של ארגון, נוירונים הקרנה בקליפת הגוף לעבור תהליכים התפתחותיים מורכבים הדורשים הדור הזמני שלהם, הגירה היעד הסופי שלהם לוחית הקליפה, והקמת חיבורים קצרים וארוכי טווח1,2. במשך זמן רב, הדרך הקלאסית ללמוד corticogenesis היה מבוסס על השימוש בנוקאאוט או מודלים מורטין של גנים של עניין. עם זאת, אסטרטגיה זו, ובעיקר השימוש בעכברים מותנים מותנה, הוא זמן רב ויקר, ולפעמים מציג בעיות נוספות לגבי קיומו של יתירות גנטית או היעדר מנהלי התקנים מסוימים של היצור, בין היתר. אחת הגישות שהתעוררו לנסות לטפל בבעיות אלה וכיום משמש באופן נרחב לחקר ההתפתחות הקורטיקלית היא בתוך הרחם3,4. באלקטרופורציה של הרחם היא טכניקה המשמשת לטרנסגנזה סומטית, המאפשרת התמקדות בvivo של תאי גזע עצביים וצאצהם. ניתן להשתמש בשיטה זו כדי לתייג תאים לפי ביטוי של חלבונים פלואורסצנטי5,6, עבור מניפולציה גנים ב vivo (כלומר, להרוויח או לאבד את הפונקציה assays)7,8,9, עבור בידוד אלקטרופורציה ממגורות בתאי מבחנה ו-culturing תאים8,10. יתר על כן, באמצעות אלקטרופורציה הרחם מאפשר בקרה הזמני והאזורי של האזור המיועד. טכניקה זו כוללת יישומים רבים ושימש רבות לחקר הגירה עצבית, חטיבת תאי גזע, קישוריות עצבית, ונושאים אחרים8,9,11,12.
כתב היד הנוכחי מתאר את השימוש במשתנה אלקטרופורציה של הרחם, הנקרא כפול באמצעות אלקטרופורציה של הרחם, כדי לנתח את האינטראקציות של תאים בקליפת המוח עם מקורות הזמן והמרחב השונים. מחקרים אלה הם מורכבים מאוד להשלים בעת העסקת מודלים murine כי הם דורשים שימוש משולב של מספר קווים טרנסגניים. חלק מהיישומים של הפרוטוקול המתואר במאמר זה כוללים את חקר האינטראקציות הקרובות בין התאים השכנים, כמו גם אינטראקציות בין תאים מרוחקים באמצעות תחזיות טווח ארוך. השיטה מחייבת ביצוע שני באופן עצמאי ניתוחי אלקטרופורציה ברחם, מופרדים באופן זמני ובצורה מהותית, על אותם עוברים למקד אוכלוסיות תאים שונות של עניין. היתרון של גישה זו הוא האפשרות של מניפולציה הפונקציה גנים באחד או בשני סוגים של נוירונים באמצעות חיות טיפוס פראי. בנוסף, ניסויים פונקציונליים אלה ניתן לשלב עם הביטוי של cytoplasmic או ממברנה מתויג חלבונים פלורסנט כדי להמחיש את המבנה המשובח של תאים ממוקדים, כולל דנדריטים ואקסונים, ולנתח הבדלים אפשריים אינטראקציה תאית בהשוואה עם פקד (כלומר, תאים המסומנים רק עם חלבון פלורסנט).
הפרוטוקול הנמצא כאן מתמקד בחקר האינטראקציות הסלולריות בתוך הקליפת המוח, אך ניתן להשתמש באסטרטגיה זו גם כדי לבחון אינטראקציות עם אזורים בעלי מוצא שיכולים להיות ממוקדים באמצעות אלקטרופורציה של הרחם, כגון תת-התלמוס או האינטראקציות של13,14או תאי תא במבנים אחרים, כגון המוח15. פילוח של אזורים שונים מבוסס על כיוון האלקטרודות ועל החדר שבו ה-DNA מוזרק (לרוחב, שלישי, או הרביעי). עם האסטרטגיה המתוארת כאן, אנו יכולים לתייג מספר משמעותי של תאים, אשר שימושי כדי להעריך שינויים כלליים בקישוריות/אינבציה בניסויים פונקציונליים. למרות זאת, כדי ללמוד שינויים עדינים בקישוריות, ניתן להשתמש בגרסאות ששונו של אלקטרופורציה ברחם כדי לקבל תיוג מספרנות ולזהות תאים בודדים16. לסיכום, כפול באמצעות אלקטרופורציה הרחם היא שיטה רב-תכליתית המאפשרת מיקוד באופן זמני והפרדה בין אוכלוסיות תאים ולימוד האינטראקציות שלהם בפירוט, בתנאי שליטה או בשילוב עם ניסויים פונקציונליים, צמצום משמעותי עלויות הזמני והכלכלי.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Ampicillin sodium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9518-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aspirator tube</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A5177-5EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Baby-mixter hemostat (perfusion)</td>
			<td>Fine Science Tools (FST)</td>
			<td>13013-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Borosilicate glass capillary</td>
			<td>WPI</td>
			<td>1B100-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine (BUPREX 0,3 mg/ml)</td>
			<td>Rb Pharmaceuticals Limited</td>
			<td>921425</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CAG-BFP plasmid</td>
			<td>Kindly provided by U.M&#252;ller Lab</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CAG-EGFP plasmid</td>
			<td>Kindly provided by U.M&#252;ller Lab</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CAG-mCherry plasmid</td>
			<td>Kindly provided by U.M&#252;ller Lab</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CAG-mtdTomato-2A-nGFP plasmid</td>
			<td>Kindly provided by U.M&#252;ller Lab</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>FV10i</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Swabs</td>
			<td>BFHCVDF</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyanoacrylate glue</td>
			<td>B. Braun Surgical</td>
			<td>1050044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting scope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>stemi 305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont Forceps #5 Fine Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools (FST)</td>
			<td>11254-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ECM830 Square Wave Electroporator</td>
			<td>BTX</td>
			<td>45-0052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric Razor</td>
			<td>Oster</td>
			<td>76998</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Endotoxin-free TE buffer</td>
			<td>QIAGEN</td>
			<td>1018499</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol wipes</td>
			<td>BFHCVDF</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extra Fine Graefe Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools (FST)</td>
			<td>11150-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eye ointment</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>682542.6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast Green dye</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F7252-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools (FST)</td>
			<td>14069-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence LEDs</td>
			<td>CoolLED</td>
			<td>pE-300-W</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Genopure Plasmid Maxi Kit</td>
			<td>Roche</td>
			<td>3143422001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Halsted-Mosquito Hemostats (suture)</td>
			<td>Fine Science Tools (FST)</td>
			<td>91308-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating Pad</td>
			<td>UFESA</td>
			<td>AL5514</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted epifluorescence microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Eclipse TE2000-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodine wipes</td>
			<td>Lorsoul</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isofluorane vaporizer</td>
			<td>Flow-Meter</td>
			<td>A15B5001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Karizoo</td>
			<td>586259</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine (Anastemine)</td>
			<td>Fatro Ib&#233;rica SL</td>
			<td>583889-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimtech precision wipes</td>
			<td>Kimberly-Clark</td>
			<td>7252</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB (Lennox) Agar GEN</td>
			<td>Labkem</td>
			<td>AGLB-00P-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB (Lennox) broth GEN</td>
			<td>Labkem</td>
			<td>LBBR-00P-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low-melting point agarose</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP165-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medetomidine (Sedator)</td>
			<td>Dechra</td>
			<td>573749.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope coverslips</td>
			<td>Menel-Gl&#228;ser</td>
			<td>15747592</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Slides</td>
			<td>Labbox</td>
			<td>SLIB-F10-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting medium</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>17984-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mutiwell plates (24)</td>
			<td>SPL Life Sciences</td>
			<td>32024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mutiwell plates (48)</td>
			<td>SPL Life Sciences</td>
			<td>32048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl (for saline solution)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10112640</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle 25 G (BD Microlance 3)</td>
			<td>Becton, Dickinson and Company</td>
			<td>300600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Orbital incubator S150</td>
			<td>Stuart Scientific</td>
			<td>5133</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P Selecta Incubator</td>
			<td>J. P. Selecta, s.a.</td>
			<td>0485472</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>PanReac AppliedChem</td>
			<td>A3813</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Sigma -Aldrich</td>
			<td>P4333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic perfusion pump</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>EW-07522-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Platinum Tweezertrode, 5 mm Diameter</td>
			<td>Btx</td>
			<td>45-0489</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reflex Skin Closure System - 7mm Clips, box of 100</td>
			<td>AgnThos</td>
			<td>203-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reflex Skin Closure System - Clip Applyer, 7mm</td>
			<td>AgnThos</td>
			<td>204-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ring Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools (FST)</td>
			<td>11103-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium azide</td>
			<td>PanReac AppliedChem</td>
			<td>122712-1608</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical absorbent pad (steryle)</td>
			<td>HK Surgical</td>
			<td>PD-M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture (Surgicryl PGA 6-0)</td>
			<td>SMI Suture Materials</td>
			<td>BYD11071512</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe 1ml (BD plastipak)</td>
			<td>Becton, Dickinson and Company</td>
			<td>303172</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Culture Dish 100 x 20 mm</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vertical Micropipette Puller</td>
			<td>Sutter Instrument Co</td>
			<td>P-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vertical microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Eclipse Ni</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vibratome</td>
			<td>Leica</td>
			<td>VT1200S</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

double in utero electroporation to target temporally and spatially separated cell populations

באלקטרופורציה הרחם היא בטכניקת העברת ה-DNA vivo שימוש נרחב כדי ללמוד את המנגנונים המולקולריים והסלולריים הבסיסיים corticogenesis. הליך זה מנצל את חללי המוח כדי לאפשר את המבוא של ה-DNA של עניין ומשתמש בזוג אלקטרודות כדי לכוון את הכניסה של החומר הגנטי לתוך התאים רירית החדר, תאי גזע עצביים. שיטה זו מאפשרת לחוקרים לתייג את התאים הרצויים ו/או לטפל בביטוי של גנים המעניינים בתאים אלה. יש לו מספר יישומים, כולל מיקוד העברת הגירה עצבית, מעקב אחר שושלת היוחסין, ומציאת האקונאליות. תכונה חשובה של שיטה זו היא בקרה הזמני והאזורי שלה, המאפשר לעקוף את הבעיות הפוטנציאליות הקשורות השפעה עובריים או העדר עכברים ספציפיים מנהל התקן. היבט רלוונטי נוסף של טכניקה זו הוא שהוא מסייע לצמצם במידה ניכרת את המגבלות הכלכליות והטמפורלית הכרוכות ביצירת קווי עכבר חדשים, הנעשים חשובים במיוחד בחקר האינטראקציות בין סוגי התאים הנובעים מאזורים רחוקים במוח בגילאים התפתחותיים שונים. כאן אנו מתארים אסטרטגיית אלקטרופורציה כפולה המאפשרת פילוח של אוכלוסיות תאים המופרדות באופן זמני ומופרדות. עם גישה זו אנו יכולים לתייג תת סוגים שונים של תאים במיקומים שונים עם חלבונים שנבחרו הפלורסנט כדי להמחיש אותם, ו/או אנחנו יכולים לטפל בגנים של ריבית המתבטאת על ידי אלה תאים שונים בזמנים המתאימים. אסטרטגיה זו מגבירה את הפוטנציאל באלקטרופורציה של הרחם ומספקת כלי רב-עוצמה לחקר ההתנהגות של אוכלוסיות תאים המופרדות באופן זמני ומופרדות, העוברות להקמת קשרים קרובים, כמו גם אינטראקציות ארוכות טווח באמצעות התחזיות האקאליות, הפחתת עלויות זמניות וכלכליות.

אינטראקציות בין תאים שכנים מקורו במקומות האלה ובזמנים שונים: תאים Cajal-רטינוס (CR-תאים) ו הגירה מוקדם הקרנה נוירונים (אסטרטגיה A)
האינטראקציה של ה-CR-תאים ונוירונים הקרנה מוקדם ההטלה תוארה בעבר כנדרש כדי להסדיר את הטרנסלוקציה הזומבית באמצעות nectin ומולקולות הדבקה של קדר?...

Watch this Scientific Journal Video about Double In Utero Electroporation to Target Temporally and Spatially Separated Cell Populations at JoVE.com

Double In Utero Electroporation to Target Temporally and Spatially Separated Cell Populations

כפול בתוך הרחם מאפשר מיקוד אוכלוסיות תאים כי הם מופרדים באופן זמני. טכניקה זו שימושית כדי להמחיש אינטראקציות בין אוכלוסיות תאים אלה באמצעות חלבונים פלורסנט בתנאים נורמליים, אך גם לאחר ניסויים פונקציונליים כדי perturb גנים של עניין.

כפול ברחם באמצעות אלקטרופורציה ועד לאוכלוסיית היעד באופן זמני ולאוכלוסיות שאינן מופרדות

In utero electroporation is an in vivo DNA transfer technique extensively used to study the molecular and cellular mechanisms underlying mammalian ...

כפול אלקטרופורציה ברחם היא שיטה רבת עוצמה לחקר ההיבטים החשובים של קורטיקוגניזה יונקים כגון האינטראקציה בין תאי נוירון, שנוצר במקומות שונים וגילאים התפתחותיים. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא היכולת לבחון אינטראקציות ללא הפרעה בין אוכלוסיות תאים שונות אלה באופן מהיר, מפורט וזול. אחת ההשלכות הבולטות של השיטה שלנו היא שהיא מאפשרת הבנה טובה יותר של האופן שבו החיווט שלנו דומה בהפרעות עצביות כמו אוטיזם וסכיזופרניה.מחקר זה אינו מוגבל neocortex אבל זה יכול להיות מועסק גם כדי לנתח תאים לתא אינטראקציות, באזורים exocortico כגון sepalium או המוח הקטן. אחד הצעדים המאתגרים ביותר הוא הזרקת דנ"א לחדרים האובריים של עוברים מוקדמים. השימוש במקור אור בהיר חיוני לזריקות מוצלחות.עבור כל ניתוח להכין תחילה פתרון 10 microliter המכיל מיקרוליטר אחד של צבע ירוק מהיר, מיקרוגרם אחד לכל פתרון DNA פלסמיד microliter מעניין עבור כל פלסמיד, ואת הנפח המתאים על מאגר TE חינם אנדוטוקסין. ותטען מראש פיפטה מיקרו-אקפילרית מזכוכית עם תמיסת הדנ"א המוכנה המתאימה. לראשונה בניתוח אלקטרופורציה ברחם, יש למרוח משחה על עיניו של עכבר הרדמה מתוזמן כראוי, ולהשתמש בתער כדי לגלח את הבטן.לחטא את העור החשוף פעמיים עם רציף 70% אתנול ומגבוני יוד לפני שתמשיך עם החתך בצד ימין של הבטן. לאחר הרחם נגיש להשתמש מטחני טבעת כדי לחלץ בזהירות את האיבר. באמצעות צינור שאספירטור מבוקר בפה, להזריק כ 0.5 microliters של פתרון לתוך החדר הרוחבי של חצי הכדור השמאלי של E11.5 עוברים לאסטרטגיה A.Or לתוך החדר הרוחבי של חצי הכדור הימני של E13.5 עוברים לאסטרטגיה B, עד הצבע הירוק המהיר גלוי בתוך החדר.כאשר כל הפתרון הוזרק, מניחים מלקחי סוג אלקטרודות פלטינה באופן צידי סביב ראש העוברים המוזרקים, כאשר המוט החיובי מכוון לקיר המדיאלי כדי למקד את מכפלת קליפת המוח לאסטרטגיה A, או מכוון לקליפת המוח הצדדית לאסטרטגיה B, דואג להימנע מהלב והשליה. השתמש אלקטרופורטר גל מרובע כדי להחיל את הרצף המתאים של פולסים חשמליים עבור כל גיל עוברי, כפי שצוין בטבלה. כאשר כל העוברים הוזרקו ואלקטרופולדו, השתמש במלקיחות כדי להחזיר בזהירות את הרחם לחלל הבטן, ולמלא את הבטן עם מלוחים חמים.באמצעות תפר מחט 6-0, לסגור את דופן הבטן, ולסגור בזהירות את חתך העור. ואז להחזיר את החיה לכלוב הבית שלה עם ניטור עד החלמה מלאה. יומיים לאחר הניתוח הראשוני, ודאו שהעכבר מפגין התנהגות תקינה, ולא מציג סימנים לכאב או מצוקה.לפני הכנת החיה לשניה באלקטרופוריה ברחם כפי שהוכח זה הרגע. להזריק 0.5 microliters של פתרון ה-DNA הרצוי לתוך החדר המוחי בצד שמאל של E13.5 עוברים לאסטרטגיה A, ולתוך החדר המוח הרוחבי השמאלי של E15.5 עוברים לאסטרטגיה B.After כל זריקה, למקם את האלקטרודות עם מוט חיובי מכוון קליפת המוח הרוחבית של חצי הכדור מוזרק לאסטרטגיה A ואסטרטגיה B.And אלקטרופורת עוברים כפי שצוין בטבלה. כאשר האלקטרופוריה הסתיימה, להחזיר את הרחם לחלל הבטן, ולהשלים את הניתוח ואת הטיפול שלאחר הניתוח כפי שהוכח.בעת יישום אסטרטגיה A, ארבעה ימים לאחר האלקטרופוריה השנייה, לקצור את הרחם של היום העוברי 17.5 עכבר נקבה בהריון לתוך צלחת פטרי של PBS על קרח. ולהשתמש פינצטה כדי להעביר את העוברים לתוך צלחת חדשה של PBS תחת מיקרוסקופ ניתוח. באמצעות מדחס, בזהירות לתפוס את הראש של כל עובר כדי להקל על הסרת העור מעל הראש והגולגולת.השתמש במפולות או מרית כדי להרים את המוחות החשופים. לאחר מכן השתמש בכפית כדי להעביר כל מוח לתוך בארות בודדות של צלחת 48 באר המכיל סביב 600 microliters של פתרון קיבוע לגם. כאשר כל המוחות נאספו, לתקן את המוח בארבע מעלות צלזיוס לילה על שייקר מסלולית, ואחריו שלוש עשר דקות שטיפות PBS.לאחר הכביסה האחרונה, להטמיע את המוח ב 4% נקודת התכה נמוכה התעוררה PBS במשך כעשר דקות. לאחר שהתעוררות התגבשה, השתמש בדבק ציאנואקרילאט כדי לאבטח כל מוח למחזיק רקמת רטט בצד הנורה חוש הריח למעלה. מניחים את המחזיק בתוך מיכל הרטט, וממלאים את המיכל ב- PBS.לאחר מכן השתמש ברטט ומברשת כדי להשיג 100 חלקים טוריים קורונדל עבה מיקרומטר. העברה של עד שבעה חלקים לבירה ושש בארות לעובר, בצלחת חדשה של 48 בארות המכילה 600 מיקרוליטרים לבירה של PBS טרי, בתוספת חומרים משמרים אנטי פטרייתיים כפי שהם נאספים. כאשר כל החלקים נרכשו, השתמש במברשת עדינה כדי להרכיב כל קטע על מגלשת מיקרוסקופ זכוכית, ולכסות אותם עם כיסוי זכוכית להערכת יעילות האלקטרופוזיה על מיקרוסקופ אפיפלואורסצנטי זקוף.בעת יישום אסטרטגיה B, ביום שלאחר הלידה 15, לאחר אישור חוסר תגובה topinch, לאבטח את העכבר במצב supine, ולהשתמש מספריים לעשות חתך בעור קו האמצע לחשוף את הצלעות ואת הסרעפת, לחתוך את הסרעפת כדי לקבל גישה ללב. באמצעות מספריים עדין, לעשות חתך ב אטריום הימני, ולהשתמש מחט 25 gage מחובר צינור גמיש משאבת זלוף peristaltic לחדור החדר השמאלי. כאשר המחט נמצאת במקום, לספק לפחות 25 מיליליטר של 4% paraformaldehyde על ידי זלוק transcardial, בשטף קבוע ב 5.5 מיליליטר לדקה.לאחר כחמש דקות, לעצור את תדלוק, ולהשתמש מספריים כדי להסיר את העור מעל הראש. הסר את הגולגולת, ולהשתמש מרית כדי להסיר את רקמת המוח. מניחים את המוח לתוך באר אחת של צלחת 24 באר המכיל 1.5 מיליליטר של טרי 4% paraformaldehyde, עבור דגירה לילה בארבע מעלות צלזיוס על שייקר מסלולית.לאחר מכן לרכוש 40 חלקים מיקרומטר של המוח לאחר הלידה כפי שהוכח רק. להדמיית פרוסת מוח עוברית ולאחר לידה, מקם את השקופיות המכילות את חלקי המוח המותקנים של עניין על מחזיק שקופית מיקרוסקופ. הציגו את מחזיק המחוון במיקרוסקופ הקונפוקל ובחרו את הערוץ המתאים לפלואורופורים המשמשים בניסוי.בצע סריקה לדוגמה כדי להשיג תמונות מפה של כל קטע במוח בשני אורכי גל שונים לתצוגה כללית של פלט האלקטרופולציה הכפולה. לאחר שתסיים, בחר את העדשה 10x, במצב תצפית לשגות זמן מחסנית Z מרובה שטחים. בכל אחד מאזורי ה- XY הנבחרים, הגדר את היקפי ההדמיה המתאימים וכן את עומק הסריקה לאורך ציר Z בהתאם למישורי המדגם, שבהם הפלואורסצנטיות גלויה.השג תמונות הגדלה נמוכה של כל האזורים שנבחרו, וייצא את התמונות מ- OIF לפורמט TIFF בתוכנת מציג המיקרוסקופ. לאחר מכן בחר את עדשת 60x, וללכוד תמונות הגדלה גבוהה כפי שהודגם זה בלבד, כדי לבחון את האינטראקציות בין תא לתא ברמה מפורטת יותר. הפער הזמני בין הכפול בניתוחי אלקטרופורציה ברחם מאפשר לתאי טורסיאליים CAG הממוקדים ביום העוברי 11.5 באחד ממקומות המוצא שלו להגיע לאזור השולי של הניאוקורטקס הצדדי כולל האזור סומטוסנסורי, בזמן כדי ליצור קשרים עם נוירונים הקרנה קליפת המוח, שכותרתו ביום העוברי 13.5.התהליכים המובילים של נוירוני הקרנה המבטאים עליות GFP משופרות בשפע באזור השולי של קליפת המוח, ומתמזגים עם התהליכים של M-דובדבן המבטאים תאים קטרציאליים. ב אלקטרופורציה ברחם ביום עוברי 13.5, באמצעות BFP המביע פלסמיד מקל על תיוג של נוירוני הקרנה על פני שכבות קליפת המוח שונות. אלקטרופורציה שנייה בצד ההפוכה של היום העוברי 15.5 מכוונת תת-התת-תפוקה של השכבה העליונה של ההקרנה, אך לא לנוירונים של הקרנה בשכבה התחתונה המתפתחים בשלבים מוקדמים יותר.השכבה העליונה ממוקדת נוירונים להרחיב את האקסונים שלהם אל חצי הכדור ההפוך, עם דפוס arborization אופייני. הגדלה גבוהה מאפשרת הדמיה מפורטת יותר של פנימיות אקסון קליוסאלית של נוירוני ההקרנה הממוקדים בתוך חצי הכדור ההפוכה. בעת ניסיון פרוטוקול זה, חשוב לתכנן תזמון אלקטרופורציה, חצי הכדור להזריק, ואת המיקום של האלקטרודות על פי אוכלוסיות התא להיות ממוקד.בעקבות הליך זה כל השיטות, כגון אלקטרופורציה היא מעניינת. עבור שני סוגי התאים ניתן לבצע כדי ללמוד שינויים אפשריים במעגל vivo. באמצעות טכניקה זו, ניתן ללמוד אינטראקציות בסדר בין שני תאים ממוקדים שונים.כולל מידע מדעי חדש ב-vivo, על ידי אלקטרופוזיה של חלבונים סינפטיים פלואורסצנטיים.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Ultrasound-Guided Microinjection into the Mouse Forebrain In Utero at E9.5

Ultrasound-Guided Microinjection into the Mouse Forebrain In Utero at E9.5

אולטרסאונד מונחה Microinjection לתוך forebrain העכבר בתוך הרחם ב E9.5

In utero survival surgery in mice permits the molecular manipulation of gene expression during development.  However, because the uterine wall is opaque ...

In utero Electroporation followed by Primary Neuronal Culture for Studying Gene Function in Subset of Cortical Neurons

In utero Electroporation followed by Primary Neuronal Culture for Studying Gene Function in Subset of Cortical Neurons

ברחם electroporation ואחריו תרבות עצבית ראשונית ללימוד פונקציה ג&#39;ין בתת קבוצה של נוירונים קליפתיים

In vitro study of primary neuronal cultures allows for quantitative analyses of neurite outgrowth. In order to study how genetic alterations affect ...

Efficient Gene Delivery into Multiple CNS Territories Using In Utero Electroporation

Efficient Gene Delivery into Multiple CNS Territories Using In Utero Electroporation

ג&#39;ין אספקה ​​יעילה לתוך השטחים CNS מרובים באמצעות בתוך הרחם Electroporation

The ability to manipulate gene expression is the cornerstone of modern day experimental embryology, leading to the elucidation of multiple developmental ...

Mouse in Utero Electroporation: Controlled Spatiotemporal Gene Transfection

Mouse in Utero Electroporation: Controlled Spatiotemporal Gene Transfection

עכבר בתוך הרחם Electroporation: ג&#39;ין מבוקרת transfection Spatiotemporal

In order to understand the function of genes expressed in specific region of the developing brain, including signaling molecules and axon guidance ...

Expansion of Embryonic and Adult Neural Stem Cells by In Utero Electroporation or Viral Stereotaxic Injection

Expansion of Embryonic and Adult Neural Stem Cells by In Utero Electroporation or Viral Stereotaxic Injection

התרחבות של תאי גזע עצביים עובריים ומבוגרים על ידי<em&gt; ברחם</em&gt; Electroporation או הזרקת Stereotaxic ויראלי

Somatic stem cells can divide to generate additional stem cells (expansion) or more differentiated cell types (differentiation), which is fundamental for ...

Visualization and Genetic Manipulation of Dendrites and Spines in the Mouse Cerebral Cortex and Hippocampus using In utero Electroporation

Visualization and Genetic Manipulation of Dendrites and Spines in the Mouse Cerebral Cortex and Hippocampus using In utero Electroporation

להדמיה מניפולציה גנטית של דנדריטים עם קוצים בקליפת עכבר היפוקמפוס מוחין באמצעות<em&gt; ברחם</em&gt; Electroporation

In utero electroporation (IUE) has become a powerful technique to study the development of different regions of the embryonic nervous system 1-5. To date ...

Generation of Topically Transgenic Rats by In utero Electroporation and In vivo Bioluminescence Screening

Generation of Topically Transgenic Rats by In utero Electroporation and In vivo Bioluminescence Screening

דור של חולדות למריחה מהונדסים על ידי<em&gt; ברחם</em&gt; Electroporation ו<em&gt; בvivo</em&gt; הקרנת פליטת אור

 In utero electroporation (IUE) is a technique which allows genetic modification of cells in the brain for investigating neuronal development. So far, the ...

Genetic Manipulation of the Mouse Developing Hypothalamus through In utero Electroporation

Genetic Manipulation of the Mouse Developing Hypothalamus through In utero Electroporation

מניפולציה גנטית של העכבר באמצעות פיתוח היפותלמוס<em&gt; ברחם</em&gt; Electroporation

Genetic  modification of specific regions of the developing mammalian brain is a very  powerful experimental approach. However, generating novel mouse ...

Cortex-, Hippocampus-, Thalamus-, Hypothalamus-, Lateral Septal Nucleus- and Striatum-specific In Utero Electroporation in the C57BL/6 Mouse

Cortex-, Hippocampus-, Thalamus-, Hypothalamus-, Lateral Septal Nucleus- and Striatum-specific In Utero Electroporation in the C57BL/6 Mouse

Cortex-, Hippocampus-, Thalamus-, Hypothalamus-, רוחב מחיצת גרעין, וסטריאטום ספציפי<em&gt; ברחם</em&gt; Electroporation בC57BL / 6 העכבר

In utero electroporation is a widely used technique for fast and efficient spatiotemporal manipulation of various genes in the rodent central nervous ...

A Novel Strategy Combining Array-CGH, Whole-exome Sequencing and In Utero Electroporation in Rodents to Identify Causative Genes for Brain Malformations

A Novel Strategy Combining Array-CGH, Whole-exome Sequencing and In Utero Electroporation in Rodents to Identify Causative Genes for Brain Malformations