Name: an electrochemiluminescence-based assay for mecp2 protein variants
Uploaded: 2020-05-22T12:30:00
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हम ईसीएए साधन के साथ उनके समर्थन के लिए डॉ ब्रिजित स्टर्म के बहुत आभारी हैं ।

अनुसंधान प्रयोजनों के लिए त्वचा बायोप्सी खरीद के लिए अनुमोदन वेस्टमीड, ऑस्ट्रेलिया में बाल अस्पताल की मानव अनुसंधान नैतिकता समिति से प्राप्त किया गया था । पशु प्रयोगों के लिए सहमति ऑस्ट्रिया के संघी...

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एंडोजेन्सी MeCP2, recombinant MeCP2 और TAT-MeCP2 स्तरों को मापने के लिए, एक ९६-अच्छी तरह से थाली ECLIA विकसित किया गया था । यह दिखाया गया है कि MeCP2 प्रोटीन समारोह के नुकसान RTT सिंड्रोम6की ओर जाता है, जिसके लिए उपचार वर्तमान...

इलेक्ट्रोकेमिमिनसेंस इम्यूनोसे (ईसीलिया) एक प्रक्रिया पर आधारित है जो इलेक्ट्रोकेमिकल रूप से उत्तेजित होने पर ल्यूमिनेसेंस उत्सर्जित करने के लिए डिज़ाइन किए गए लेबल का उपयोग करती है। यह बुनियादी उद्योग और अकादमिक अनुसंधान, खाद्य उद्योग के साथ-साथ नैदानिक निदान1में जैविक एनालाइट्स का मात्रात्मक पता लगाने के लिए एक मोटे तौर पर लागू तकनीक है । आमतौर पर, कार्बन इंक इलेक्ट्रोड के साथ एक डिस्पोजेबल 96-अच्छी तरह से प्लेट का उपयोग किया जाता है। ये इलेक्ट्रोड इम्यूनोसेकेस के लिए ठोस चरण वाहक के रूप में कार्य करते हैं। एक माध्यमिक एंटीबॉडी को इलेक्ट्रोकेमिल्यूमिनेसेंट लेबल के लिए संयुग्मित किया जाता है और जब सिस्टम पर बिजली लागू होती है, तो रासायनिक लेबल का हल्का उत्सर्जन शुरू हो जाता है। एक अल्ट्रा-कम शोर चार्ज-युग्मित डिवाइस (सीसीडी) प्रकाश तीव्रता को रिकॉर्ड करता है जो सीधे एंटीजन के आनुपातिक है जो कैप्चर एंटीबॉडी से बंधे हैं जिसके परिणामस्वरूप नमूना2के लक्षित एनालाइट का परिमाणीकरण होता है। एंजाइम से जुड़े इम्यूनोसोरबेंट परख (एलिसा) की तुलना में, ईसीएए को लाभप्रद माना जाता है क्योंकि यह उच्च संवेदनशीलता और प्रजनन क्षमता के साथ-साथ बेहतर स्वचालन और स्थिरता3प्रदान करता है।
यहां हमने मानव और मूत्र मूल के नमूनों में मिथाइल-सीपीजी बाध्यकारी प्रोटीन 2 (MeCP2) के स्तर के साथ-साथ नए विकसित ईसीलिया सिस्टम का उपयोग करके रिकॉम्बिनेंट प्रोटीन के विभिन्न वेरिएंट का विश्लेषण किया। MecP2 एक एक्स-लिंक्ड न्यूक्लिक एसिड-बाध्यकारी प्रोटीन है जो मिथाइलेटेड डीएनए दृश्यों के साथ बातचीत करने के लिए जाना जाता है। इस प्रोटीन को जीन अभिव्यक्ति 44,5के नियमन में फंसाया गया है . जीन में मनोहारी उत्परिवर्तन जो इस प्रोटीन को एन्कोड करता है, मुख्य अपराधी हैं जो रेट सिंड्रोम (आरटीटी) का कारण हैं, जो एक गंभीर न्यूरोडेवलपमेंटल डिसऑर्डर6है। एक और MeCP2 से संबंधित विकार, MECP2 दोहराव सिंड्रोम, भी न्यूरोलॉजिकल लक्षण है कि RTT7के उन लोगों के साथ ओवरलैप कर सकते है की ओर जाता है । विशेष रूप से, महिलाएं ज्यादातर आरटीटी से प्रभावित होती हैं जबकि पुरुष ज्यादातर MECP2 दोहराव सिंड्रोम6,,7से पीड़ित होते हैं।
ये विकार केंद्रीय तंत्रिका तंत्र (सीएनएस) में क्रमशः अपर्याप्त या अतिरिक्त MeCP2 स्तरों से जुड़े होते हैं। इसलिए, आरटीटी के लिए उपचार विकल्प जिसमें सीएनएस में MeCP2 के स्तर में वृद्धि शामिल है, को MeCP27से अधिक से जुड़े हानिकारक प्रभावों से बचने की आवश्यकता होगी। इस तथ्य के कारण, ईसीपीएयू प्रणाली द्वारा प्रदान किए गए MeCP2 प्रोटीन स्तरों का अत्यधिक संवेदनशील और सटीक मात्रा, आरटीटी के साथ-साथ MECP2 दोहराव सिंड्रोम अनुसंधान की उन्नति के लिए महत्वपूर्ण है। मानव कोशिका रेखाओं और माउस ऊतक नमूनों से एंडोजेनस और एक्सोजेनस MeCP2 स्तरों के सटीक माप के साथ-साथ मानव MeCP2 आइसोफॉर्म बी (जिसे आइसोफॉर्म ई1 के रूप में भी जाना जाता है) से युक्त एक पुनर्संयोजन प्रोटीन, और एक न्यूनतम एन-टर्मिनल एचआईवी-टैट ट्रांसड्यूक्शन डोमेन (TAT-MeCP2) जो रक्त-मस्तिष्क-बाधा8,9 को पार करने की क्षमता रखताहै,इस काम में प्रस्तुत किया जाता है।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1,4-Dithiothreitol (DTT)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D9779</td>
			<td>Hypotonic lysis reagent, Extraction Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bio-Rad Protein Assay Dye Reagent Concentrate</td>
			<td>Bio-Rad Laboratories Inc.</td>
			<td>500-0006</td>
			<td>Sample preperation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Detection AB SULFO-TAG labeled anti-rabbit</td>
			<td>Meso Scale Diagnostics</td>
			<td>R32AB-1</td>
			<td>Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Discovery workbench 4.0</td>
			<td>Meso Scale Discovery</td>
			<td></td>
			<td>Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM (1X)</td>
			<td>gibco by Life Technologies</td>
			<td>41966-029</td>
			<td>Sample preperation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s PBS (sterile)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D8537-500ML</td>
			<td>Sample preperation, Washing solution, Coating solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>EDS</td>
			<td>Extraction Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F9665</td>
			<td>Sample preperation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G2025</td>
			<td>Extraction Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gold Read Buffer T (1x) with surfactant</td>
			<td>Meso Scale Diagnostics</td>
			<td>R92TG</td>
			<td>MeCP2 ECLIA protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H3375</td>
			<td>Hypotonic lysis reagent, Extraction Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KIMBLE Dounce tissue grinder set</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D8938</td>
			<td>Sample preperation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laboratory Shaker, rocking motion (low speed)</td>
			<td>GFL</td>
			<td>3014</td>
			<td>MeCP2 ECLIA protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium chloride hexahydrate (MgCl*6H20)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M2670</td>
			<td>Hypotonic lysis reagent, Extraction Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MeCP2 (Human) Recombinant Protein (P01)</td>
			<td>Abnova Corporation</td>
			<td>H00004204-P01</td>
			<td>Cell treatment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microseal B seal</td>
			<td>Bio-Rad Laboratories Inc.</td>
			<td>MSB1001</td>
			<td>for plate sealing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monoclonal Anti-MeCP2, produced in mouse, clone Mec-168, purified immunoglobulin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M6818-100UL; RRID:AB_262075</td>
			<td>Antibody, Coating solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MSD Blocker A</td>
			<td>Meso Scale Diagnostics</td>
			<td>R93BA-4</td>
			<td>Blocker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MSD SECTOR Imager 2400</td>
			<td>Meso Scale Diagnostics</td>
			<td>I30AA-0</td>
			<td>MeCP2 ECLIA protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi-Array 96-well Plate</td>
			<td>Meso Scale Diagnostics</td>
			<td>L15XB-3/L11BX-3</td>
			<td>MeCP2 ECLIA protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>gibco by Life Technologies</td>
			<td>15140122</td>
			<td>Sample preperation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyclonal Anti-MeCP2, produced in rabbit</td>
			<td>Eurogentec S.A.</td>
			<td>custom-designed</td>
			<td>Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride (KCl)</td>
			<td>Merck KGaA</td>
			<td>1049361000</td>
			<td>Hypotonic lysis reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primary AB Mouse, anti-MeCP2 (1B11)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>SAB1404063; RRID:AB_10737296</td>
			<td>Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primary AB Mouse, anti-MeCP2 (4B6)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>WH0004204M1; RRID:AB_1842411</td>
			<td>Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primary AB Mouse, anti-MeCP2 (Mec-168)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M6818; RRID:AB_262075</td>
			<td>Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primary AB Mouse, anti-MeCP2 (Men-8)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M7443; RRID:AB_477235</td>
			<td>Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primary AB Rabbit, anti-MeCP2 (D4F3)</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>3456S; RRID:AB_2143849</td>
			<td>Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protease Inhibitor Cocktail (100X)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>8340</td>
			<td>Hypotonic lysis reagent, Extraction Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Secondary AB, Rabbit, anti-MeCP2</td>
			<td>Eurogentec S.A.</td>
			<td>custom</td>
			<td>Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Secondary AB, Rabbit, anti-MeCP2</td>
			<td>Merck</td>
			<td>07-013</td>
			<td>Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride (NaCl)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S3014</td>
			<td>Extraction Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SULFO-TAG Labeled Anti-Rabbit Antibody (goat)</td>
			<td>Meso Scale Diagnostics</td>
			<td>W0015528S</td>
			<td>Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TAT-MeCP2 fusion protein</td>
			<td>in-house production</td>
			<td></td>
			<td>Cell treatment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin EDTA 0.25% (1X)</td>
			<td>gibco by Life Technologies</td>
			<td>25200-056</td>
			<td>Cell treatment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P9416</td>
			<td>Washing solution</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an electrochemiluminescence-based assay for mecp2 protein variants

ईसीलिया एक बहुमुखी विधि है जो 96-अच्छी तरह से प्रारूप में एंडोजेनस और पुनः संयोजन प्रोटीन मात्रा की मात्रा निर्धारित करने में सक्षम है। ईसीएए दक्षता प्रदर्शित करने के लिए, इस परख का उपयोग माउस मस्तिष्क ऊतक में MeCP2 के आंतरिक स्तर और मानव डर्मल फाइब्रोब्लास्ट में TAT-MeCP2 के तेज का विश्लेषण करने के लिए किया गया था। MeCP2-ECLIA कम अंतर और अंतर परख त्रुटि के साथ अत्यधिक सटीक और प्रजनन माप पैदा करता है । सारांश में, हमने MeCP2 प्रोटीन वेरिएंट के मूल्यांकन के लिए एक मात्रात्मक विधि विकसित की है जिसका उपयोग उच्च-थ्रूपुट स्क्रीन में किया जा सकता है।

ईसीलिया प्रणाली का सिद्धांत चित्र 1में वर्णित है। दो MeCP2 वेरिएंट के लिए मानक घटता चित्र ा 2में दिखाया गया है । सांद्रता की एक विस्तृत श्रृंखला (1−1,800 एनजी/एमएल) पर सटीक मात्रा संभव थी।...

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An Electrochemiluminescence-Based Assay for MeCP2 Protein Variants

इलेक्ट्रोकेमिल्यूमिनेसेंस इम्यूनोसे (ईसीलिया) एंडोजेनस और एक्सोजेनसरूप से लागू मेसीपी2 प्रोटीन वेरिएंट का मात्रात्मक पता लगाने के लिए एक उपन्यास दृष्टिकोण है, जो एक विस्तृत कार्य श्रृंखला में कम अंतर और अंतर-परख त्रुटि के साथ अत्यधिक मात्रात्मक, सटीक और प्रजनन योग्य माप पैदा करता है। यहां, 96-अच्छी तरह से प्रारूप में MeCP2-ECLIA के लिए प्रोटोकॉल वर्णित है।

MeCP2 प्रोटीन वेरिएंट के लिए एक इलेक्ट्रोकेमिल्यूमिनेसेंस-आधारित परख

The ECLIA is a versatile method which is able to quantify endogenous and recombinant protein amounts in a 96-well format. To demonstrate ECLIA efficiency, ...

ECLIA MeCP2 के सेलुलर स्तरों की मात्रा निर्धारित करने के लिए एक सरल अभी तक कुशल तरीका है। ECLIA तेजी से, अधिक संवेदनशील है, और इस तरह के पश्चिमी दाग और एलिसा के रूप में अंय मात्राकरण तरीकों की तुलना में संभाल करने के लिए आसान है । वॉशिंग सॉल्यूशन तैयार करने के लिए, जो पीबीएस में 0.5% ट्वीन 20 है, 500 माइक्रोलीटर ट्वीन 20 से एक लीटर पीबीएस जोड़ें और सख्ती से मिलाएं।3% अवरोधक ए और पीबीएस का अवरुद्ध समाधान तैयार करें और धीरे-धीरे हिलाएं। छानने का काम करके अवरुद्ध समाधान को निष्फल करें। परख मंद समाधान, 1% अवरोधक ए, और पीबीएस तैयार करने के लिए, पीबीएस के 10 मिलीलीटर के लिए अवरुद्ध समाधान के पांच मिलीलीटर जोड़ें ।अगले बर्फ पर मोनोक्लोनल माउस एंटी-MeCP2 एंटीबॉडी गल। पीबीएस के चार मिलीलीटर के साथ एंटीबॉडी के 0.67 माइक्रोलीटर मिलाएं, फिर समाधान को भंवर दें। समाधान कोट करने के लिए 96-अच्छी तरह से उच्च बांध प्लेट, ध्यान से एक मल्टीचैनल पिपर का उपयोग करके, प्रत्येक कुएं के नीचे कोने में कोटिंग समाधान के 25 माइक्रोलीटर वितरित करें।96-अच्छी तरह से थाली धीरे प्रत्येक पक्ष पर यह सुनिश्चित करने के लिए कि कोटिंग समाधान प्रत्येक अच्छी तरह से नीचे शामिल है । चिपकने वाली पन्नी के साथ थाली सील, और चार डिग्री सेल्सियस पर रात भर इनक्यूबेट । फ्रिज से 96-वेल प्लेट को पुनः प्राप्त करें और पन्नी को हटा दें।कुओं में एंटीबॉडी कोटिंग समाधान को अपशिष्ट कंटेनर में फ्लिक करके हटा दें। फिर किसी भी शेष समाधान को हटाने के लिए एक कागज तौलिया पर प्लेट टैप करें। इसके बाद, प्रत्येक कुएं में अवरुद्ध समाधान के 125 माइक्रोलीटर जोड़ें।फिर चिपकने वाली पन्नी के साथ फिर से थाली सील। प्लेट को एक कक्षीय माइक्रोप्लेट शेकर पर रखें, 800 आरपीएम पर सेट करें, और इसे कमरे के तापमान पर 90 मिनट के लिए इनक्यूबेट करें। MeCP2 या Tat-MeCP2 प्रोटीन स्टॉक समाधान, माउस मस्तिष्क lysates, और HDF lysates की बर्फ एक शीशी पर गल ।पांडुलिपि के तालिका दो में वर्णित स्वच्छ ट्यूबों में प्रोटीन स्टॉक समाधान को पतला करें। इसके बाद lysate नमूनों को पतला करें। माउस ब्रेन लाइसेट्स के लिए लाइसिस बफर के एक से 20 माइक्रोग्राम प्रति 25 माइक्रोलीटर का इस्तेमाल करें।एचडीएफ लाइसेट के लिए लाइसिस बफर के 0.25 से एक माइक्रोग्राम प्रति 25 माइक्रोलीटर जोड़ें। 96-वेल प्लेट के 90 मिनट के लिए इनक्यूबेटिंग होने के बाद, इसे अपशिष्ट कंटेनर में फ़्लिक करके कुओं से अवरुद्ध समाधान को हटा दें। फिर किसी भी शेष समाधान को हटाने के लिए एक कागज तौलिया पर प्लेट टैप करें।इसके बाद प्लेट को वॉशिंग सॉल्यूशन के 150 माइक्रोलीटर से तीन बार धोएं, वॉशिंग सॉल्यूशन डालकर तुरंत हटा दें। ९६-वेल प्लेट के कुओं में मानकों और नमूनों के 25 माइक्रोलीटर जोड़ें । थाली सील और लगातार ८०० आरपीएम मिलाते हुए के साथ कमरे के तापमान पर एक और चार घंटे के लिए यह इनक्यूबेट ।बर्फ पर अवेलेबल डिटेक्शन एंटीबॉडी, पॉलीक्लोनल खरगोश एंटी-MeCP2 को पिघला दें। परख मंद समाधान का उपयोग करना, एंटीबॉडी को एक से 6, 000 के अनुपात में पतला करें। जब ९६-अच्छी थाली शेखर पर इनक्यूबेटिंग समाप्त हो गया है, एक बेकार कंटेनर में थाली flicking द्वारा मानकों और नमूनों को हटा दें ।फिर किसी भी शेष समाधान को हटाने के लिए एक कागज तौलिया पर प्लेट टैप करें। प्लेट को धुलाई के घोल को जोड़कर धोने के घोल के 150 माइक्रोलीटर से तीन बार धोएं और उसे तुरंत हटा दें। मल्टीचैनल पिपर के साथ प्रत्येक कुएं में अवेलेबल डिटेक्शन एंटीबॉडी सॉल्यूशन के 25 माइक्रोलीटर जोड़ें।प्लेट को सील करें और 800 आरपीएम पर लगातार मिलाते हुए कमरे के तापमान पर एक घंटे के लिए इसे इनक्यूबेट करें। रेफ्रिजरेटर से विशिष्ट माध्यमिक एंटीबॉडी प्राप्त करें और इसे एक बर्फ रखें। परख पतला समाधान में माध्यमिक शरीर पतला और धीरे मिश्रण।९६-अच्छी थाली से मुक्त अवेलेबल डिटेक्शन एंटीबॉडी को हटाने के लिए, अपशिष्ट कंटेनर में झटका और फिर एक कागज तौलिया पर थाली नल । प्लेट को तीन बार धोने के बाद, मल्टीचैनल पिपर के साथ प्रत्येक कुएं में माध्यमिक एंटीबॉडी के 25 माइक्रोलीटर जोड़ें। प्लेट को सील करें और 800 आरपीएम पर लगातार मिलाते हुए कमरे के तापमान पर एक घंटे के लिए इसे इनक्यूबेट करें।अपशिष्ट कंटेनर में फ्लिकिंग करके मुफ्त माध्यमिक एंटीबॉडी को हटा दें और प्लेट को एक पेपर तौलिया पर टैप करें और फिर प्लेट को तीन बार धोएं, जैसा कि पहले वर्णित है। प्लेट के प्रत्येक कुएं में, 1X ट्रिस बेस गोल्ड के 150 माइक्रोलीटर जोड़ें सर्फेक्टेंट के साथ बफर पढ़ें, जिसमें प्रकाश पीढ़ी के लिए एक कोरेक्टेंट के रूप में ट्राइप्रोपिलमाइन होता है। हवा के बुलबुले के उत्पादन से बचने के लिए, रिवर्स पाइपिंग तकनीकों का उपयोग करें।माइक्रोप्लेट प्लेटफॉर्म पर 96-वेल प्लेट को इलेक्ट्रोकेमेमिनेसेंस डिटेक्शन सिस्टम के साथ रखें। सीसीडी कैमरे में निर्मित का उपयोग करके, तुरंत डेटा कैप्चर करना शुरू करें। रिकॉर्ड सिग्नल मायने रखता है जो सापेक्ष प्रकाश इकाइयों के अनुरूप होता है और सीधे प्रकाश की तीव्रता के आनुपातिक होते हैं।MeCP2 मानक घटता कई माप में मानव MeCP2 से उत्पन्न किया गया। ECLIA सही एक नैनोग्राम प्रति मिलीलीटर से १८०० नैनोग्राम प्रति मिलीलीटर के लिए एक सीमा पर recombinant मानव MeCP2 मात्राबद्ध कर सकते हैं । ECLIA का उपयोग करना, MeCP2 प्रोटीन का स्तर मस्तिष्क परमाणु lysates में विषम और महिला जंगली प्रकार चूहों से और एक MeCP2 नॉकआउट माउस से मापा गया ।ECLIA एक स्वस्थ नियंत्रण से सेल lysates पर आयोजित किया गया था और सी 806delG सेल लाइन से Rett सिंड्रोम के लिए एक मॉडल के रूप में इस्तेमाल किया । ECLIA द्वारा या इम्यूनोफ्लोरेसेंस द्वारा उत्परिवर्ती कोशिका लाइनों में कोई MeCP2 प्रोटीन का पता नहीं चला था।ECLIA भी MeCP2 कमी सेल लाइन ओवरटाइम द्वारा Tat-MeCP2 के तेज की जांच करने के लिए इस्तेमाल किया गया था । ECLIA इंटर और इंट्रा परख परिशुद्धता लगातार तीन दिनों में निर्धारित किया गया था । भविष्य में प्रोटीन रिप्लेसमेंट थेरेपी के लिए, ECLIA द्वारा प्रोटीन स्तर के आकलन के बाद MeCP2 डिलीवरी को बार-बार अनुकूलित किया जा सकता है।

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Brain Membrane Fractionation: An Ex Vivo Approach to Assess Subsynaptic Protein Localization

Brain Membrane Fractionation: An Ex Vivo Approach to Assess Subsynaptic Protein Localization

मस्तिष्क झिल्ली फलन: एक<em&gt; पूर्व विवो</em&gt; सबसिनेप्टिक प्रोटीन स्थानीयकरण का आकलन करने के लिए दृष्टिकोण

Assessing the synaptic protein composition and function constitutes an important challenge in neuroscience. However, it is not easy to evaluate ...

Capturing the Interaction Kinetics of an Ion Channel Protein with Small Molecules by the Bio-layer Interferometry Assay

जैव परत Interferometry परख द्वारा छोटे अणुओं के साथ एक आयन चैनल प्रोटीन के संपर्क कैनेटीक्स पर कब्जा

The bio-layer interferometry (BLI) assay is a valuable tool for measuring protein-protein and protein-small molecule interactions. Here, we first describe ...

Detection of Heterodimerization of Protein Isoforms Using an in Situ Proximity Ligation Assay

Detection of Heterodimerization of Protein Isoforms Using an in Situ Proximity Ligation Assay

प्रोटीन Isoforms के Heterodimerization का पता लगाने में एक का उपयोग कर सीटू निकटता बंधाव परख

Regulated protein-protein interactions are a guiding principle for many signaling events, and the detection of such events is an important element in ...

A Fluorescence Fluctuation Spectroscopy Assay of Protein-Protein Interactions at Cell-Cell Contacts

सेल-सेल संपर्कों में प्रोटीन-प्रोटीन इंटरैक्शन की एक प्रतिदीप्ति अस्थिरता स्पेक्ट्रोस्कोपी परख

A variety of biological processes involves cell-cell interactions, typically mediated by proteins that interact at the interface between neighboring ...

High Sensitivity Measurement of Transcription Factor-DNA Binding Affinities by Competitive Titration Using Fluorescence Microscopy

प्रतिलेखन फैक्टर के उच्च संवेदनशीलता माप-प्रतिस्पर्धी अनुमापन द्वारा डीएनए बाध्यकारी समानताएं प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी का उपयोग

Accurate quantification of transcription factor (TF)-DNA interactions is essential for understanding the regulation of gene expression. Since existing ...

A Fluorogenic Peptide Cleavage Assay to Screen for Proteolytic Activity: Applications for coronavirus spike protein activation

Proteolytic गतिविधि के लिए स्क्रीन करने के लिए एक Fluorogenic पेप्टाइड दरार परख: कोरोनावायरस कील प्रोटीन सक्रियण के लिए आवेदन

Enveloped viruses such as coronaviruses or influenza virus require proteolytic cleavage of their fusion protein to be able to infect the host cell. Often ...

Evaluation of Protein&#8211;Protein Interactions using an On-Membrane Digestion Technique

Evaluation of ProteinÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â‚¬Å“Protein Interactions using an On-Membrane Digestion Technique

एक पर झिल्ली पाचन तकनीक का उपयोग कर प्रोटीन-प्रोटीन इंटरेक्शन का मूल्यांकन

Numerous intracellular proteins physically interact in accordance with their intracellular and extracellular circumstances. Indeed, cellular functions ...

Creating Highly Specific Chemically Induced Protein Dimerization Systems by Stepwise Phage Selection of a Combinatorial Single-Domain Antibody Library

एक संयोजन एकल डोमेन एंटीबॉडी लाइब्रेरी के स्टेपवाइज फाग चयन द्वारा अत्यधिक विशिष्ट रासायनिक प्रेरित प्रोटीन डामरीकरण सिस्टम बनाना

Protein dimerization events that occur only in the presence of a small-molecule ligand enable the development of small-molecule biosensors for the ...

Deciphering Molecular Mechanism of Histone Assembly by DNA Curtain Technique

Chromatin is a higher-order structure that packages eukaryotic DNA. Chromatin undergoes dynamic alterations according to the cell cycle phase and in ...

An Integrated Workflow of Identification and Quantification on FDR Control-Based Untargeted Metabolome

एफडीआर नियंत्रण-आधारित अलक्षित चयापचय पर पहचान और मात्रा का ठहराव का एक एकीकृत वर्कफ़्लो

Untargeted metabolomics techniques are being widely used in recent years. However, the rapidly increasing throughput and number of samples create an ...