Name: p. aeruginosa infected 3d co-culture of bronchial epithelial cells and macrophages at air-liquid interface for preclinical evaluation of anti-infectives
Uploaded: 2020-06-15T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about P. aeruginosa Infected 3D Co-Culture of Bronchial Epithelial Cells and Macrophages at Air-Liquid Interface for Preclinical Evaluation of Anti-Infectives at Jo

وقد تلقى هذا العمل تمويلاً من برنامج آفاق 2020 التابع للاتحاد الأوروبي للبحث والتطوير التكنولوجي والبيان العملي بموجب اتفاقية منحة رقم 642028 H2020-MSCA-ITN-2014, NABBA - تصميم وتطوير التقانات النانوية المتقدمة للتغلب على الحواجز البيولوجية ومعالجة الأمراض الشديدة. نشكر الدكتورة آنا كوستا والدكتورة جيني جونتك على الدعم الكبير في تطوير الثقافة المشتركة، أولغا هارتفيغ، للتوضيح العلمي، أنيا هونكر، لـ ELISA، بترا كونيغ، جانا ويستهويس والدكتورة كيارا دي روسي على الدعم على ثقافة الخلية، والتحليلات، والمجهر. كما نشكر تشيلسي ثورن على تدقيق مخطوطتنا.

1. نمو وتمايز الخلايا في إدراج الدعم نفاذة
<ol><li>زراعة CFBE41o- في قارورة T75 مع 13 مل من الحد الأدنى من المتوسطة الأساسية (MEM) التي تحتوي على 10٪ مصل العجل الجنين (FCS)، 1٪ الأحماض الأمينية غير الضرورية و 600 ملغم / لتر الجلوكوز في 37 درجة مئوية مع 5 ٪ CO2 الغلاف الجوي. أضف وسطًا جديدًا إلى الخلاي?...

<ol>
	<li>Cutting, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cystic+fibrosis+genetics:+from+molecular+understanding+to+clinical+application.">Cystic fibrosis genetics: from molecular understanding to clinical application.</a> Nature Reviews Genetics. 16 (1), 45-56 (2015).</li><li>Lyczak, J. B., Cannon, C. L., Pier, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+Pseudomonas+aeruginosa+infection:+Lessons+from+a+versatile+opportunist.">Establishment of Pseudomonas aeruginosa infection: Lessons from a versatile opportunist.</a> Microbes and Infection. 2 (9), 1051-1060 (2000).</li><li>Wilke, M., Buijs-Offerman, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+cystic+fibrosis:+Phenotypic+analysis+and+research+applications.">Mouse models of cystic fibrosis: Phenotypic analysis and research applications.</a> Journal of Cystic Fibrosis. 10, 152-171 (2011).</li><li>Moreau-Marquis, S., Stanton, B. A., O'Toole, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pseudomonas+aeruginosa+biofilm+formation+in+the+cystic+fibrosis+airway.">Pseudomonas aeruginosa biofilm formation in the cystic fibrosis airway.</a> Pulmonary Pharmacology and Therapeutics. 21 (4), 595-599 (2008).</li><li>Yu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+evaluation+of+tobramycin+and+aztreonam+versus+Pseudomonas+aeruginosa+biofilms+on+cystic+fibrosis-derived+human+airway+epithelial+cells.">In vitro evaluation of tobramycin and aztreonam versus Pseudomonas aeruginosa biofilms on cystic fibrosis-derived human airway epithelial cells.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 67 (11), 2673-2681 (2012).</li><li>Moreau-Marquis, S., Redelman, C. V., Stanton, B. a., Anderson, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-culture+models+of+Pseudomonas+aeruginosa+biofilms+grown+on+live+human+airway+cells.">Co-culture models of Pseudomonas aeruginosa biofilms grown on live human airway cells.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. (44), e2186 (2010).</li><li>Stanton, B. A., Coutermarsh, B., Barnaby, R., Hogan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pseudomonas+aeruginosa+reduces+VX-809+stimulated+F508del-CFTR+chloride+secretion+by+airway+epithelial+cells.">Pseudomonas aeruginosa reduces VX-809 stimulated F508del-CFTR chloride secretion by airway epithelial cells.</a> PLoS ONE. 10 (5), 1-13 (2015).</li><li>Lambrecht, B. N., Prins, J., Hoogsteden, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+dendritic+cells+and+host+immunity+to+infection.">Lung dendritic cells and host immunity to infection.</a> European Respiratory Journal. (18), 692-704 (2001).</li><li>Murgia, X., De Souza Carvalho, C., Lehr, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overcoming+the+pulmonary+barrier:+New+insights+to+improve+the+efficiency+of+inhaled+therapeutics.">Overcoming the pulmonary barrier: New insights to improve the efficiency of inhaled therapeutics.</a> European Journal of Nanomedicine. 6 (3), 157-169 (2014).</li><li>Ding, P., Wu, H., Fang, L., Wu, M., Liu, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transmigration+and+phagocytosis+of+macrophages+in+an+airway+infection+model+using+four-dimensional+techniques.">Transmigration and phagocytosis of macrophages in an airway infection model using four-dimensional techniques.</a> American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 51 (1), 1-10 (2014).</li><li>Hartl, D., Tirouvanziam, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+Immunity+of+the+Lung:+From+Basic+Mechanisms+to+Translational+Medicine.">Innate Immunity of the Lung: From Basic Mechanisms to Translational Medicine.</a> Journal of Innate Immunity. 10 (5-6), 487-501 (2018).</li><li>Esposito, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manipulating+proteostasis+to+repair+the+F508del-CFTR+defect+in+cystic+fibrosis.">Manipulating proteostasis to repair the F508del-CFTR defect in cystic fibrosis.</a> Molecular and cellular pediatrics. 3 (1), 13 (2016).</li><li>Hein, S., Bur, M., Schaefer, U. F., Lehr, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+Pharmaceutical+Aerosol+Deposition+Device+on+Cell+Cultures+(PADDOCC)+to+evaluate+pulmonary+drug+absorption+for+metered+dose+dry+powder+formulations.">A new Pharmaceutical Aerosol Deposition Device on Cell Cultures (PADDOCC) to evaluate pulmonary drug absorption for metered dose dry powder formulations.</a> European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 77 (1), 132-138 (2011).</li><li>Kletting, S., Barthold, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-culture+of+human+alveolar+epithelial+(hAELVi)+and+macrophage+(THP-1)+cell+lines.">Co-culture of human alveolar epithelial (hAELVi) and macrophage (THP-1) cell lines.</a> Altex. 35 (2), 211-222 (2018).</li><li>Schwende, H., Fitzke, E., Ambs, P., Dieter, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+the+state+of+differentiation+of+THP-1+cells+induced+by+phorbol+ester+and+1,25-dihydroxyvitamin+D3.">Differences in the state of differentiation of THP-1 cells induced by phorbol ester and 1,25-dihydroxyvitamin D3.</a> Journal of leukocyte biology. 59 (4), 555-561 (1996).</li><li>Castoldi, A., Empting, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aspherical+and+Spherical+InvA497-Functionalized+Nanocarriers+for+Intracellular+Delivery+of+Anti-Infective+Agents.">Aspherical and Spherical InvA497-Functionalized Nanocarriers for Intracellular Delivery of Anti-Infective Agents.</a> Pharmaceutical Research. 36 (1), 1-13 (2019).</li><li>Ebensen, T., Delandre, S., Prochnow, B., Guzm&#225;n, C. A., Schulze, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Combination+Vaccine+Adjuvant+System+Alum/c-di-AMP+Results+in+Quantitative+and+Qualitative+Enhanced+Immune+Responses+Post+Immunization.">The Combination Vaccine Adjuvant System Alum/c-di-AMP Results in Quantitative and Qualitative Enhanced Immune Responses Post Immunization.</a> Frontiers in cellular and infection microbiology. 9, 31 (2019).</li><li>Brockman, S. M., Bodas, M., Silverberg, D., Sharma, A., Vij, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendrimer-based+selective+autophagy-induction+rescues+&#948;F508-CFTR+and+inhibits+Pseudomonas+aeruginosa+infection+in+cystic+fibrosis.">Dendrimer-based selective autophagy-induction rescues &#948;F508-CFTR and inhibits Pseudomonas aeruginosa infection in cystic fibrosis.</a> PLoS ONE. 12 (9), 1-17 (2017).</li><li>Anderson, G. G., Moreau-Marquis, S., Stanton, B. A., O'Toole, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+analysis+of+tobramycin-treated+Pseudomonas+aeruginosa+biofilms+on+cystic+fibrosis-derived+airway+epithelial+cells.">In vitro analysis of tobramycin-treated Pseudomonas aeruginosa biofilms on cystic fibrosis-derived airway epithelial cells.</a> Infection and Immunity. 76 (4), 1423-1433 (2008).</li><li>Moreau-Marquis, S., Bomberger, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+DeltaF508-CFTR+mutation+results+in+increased+biofilm+formation+by+Pseudomonas+aeruginosa+by+increasing+iron+availability.">The DeltaF508-CFTR mutation results in increased biofilm formation by Pseudomonas aeruginosa by increasing iron availability.</a> American journal of physiology. Lung cellular and molecular physiology. 295, 25-37 (2008).</li><li>Braakhuis, H. M., Kloet, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progress+and+future+of+in+vitro+models+to+study+translocation+of+nanoparticles.">Progress and future of in vitro models to study translocation of nanoparticles.</a> Archives of Toxicology. 89 (9), 1469-1495 (2015).</li><li>Bosshart, H., Heinzelmann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=THP-1+cells+as+a+model+for+human+monocytes.">THP-1 cells as a model for human monocytes.</a> Annals of Translational Medicine. 4 (21), 4-7 (2016).</li><li>Daigneault, M., Preston, J. a., Marriott, H. M., Whyte, M. K. B., Dockrell, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+identification+of+markers+of+macrophage+differentiation+in+PMA-stimulated+THP-1+cells+and+monocyte-derived+macrophages.">The identification of markers of macrophage differentiation in PMA-stimulated THP-1 cells and monocyte-derived macrophages.</a> PLoS ONE. 5 (1), (2010).</li><li>Bismarck, P. V., Schneppenheim, R., Schumacher, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+treatment+of+pseudomonas+aeruginosa+respiratory+tract+infection+with+a+sugar+solution+-+A+case+report+on+a+lectin+based+therapeutic+principle.">Successful treatment of pseudomonas aeruginosa respiratory tract infection with a sugar solution - A case report on a lectin based therapeutic principle.</a> Klinische Padiatrie. 213 (5), 285-287 (2001).</li><li>Klinger-Strobel, M., Lautenschl&#228;ger, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aspects+of+pulmonary+drug+delivery+strategies+for+infections+in+cystic+fibrosis+-+where+do+we+stand.">Aspects of pulmonary drug delivery strategies for infections in cystic fibrosis - where do we stand.</a> Expert Opinion on Drug Delivery. 5247, 1-24 (2015).</li><li>Ehrhardt, C., Collnot, E. -. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Towards+an+in+vitro+model+of+cystic+fibrosis+small+airway+epithelium:+characterisation+of+the+human+bronchial+epithelial+cell+line+CFBE41o-.">Towards an in vitro model of cystic fibrosis small airway epithelium: characterisation of the human bronchial epithelial cell line CFBE41o-.</a> Cell and tissue research. 323 (3), 405-415 (2006).</li><li>Anderson, G. G., Kenney, T. F., Macleod, D. L., Henig, N. R., O'Toole, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eradication+of+Pseudomonas+aeruginosa+biofilms+on+cultured+airway+cells+by+a+fosfomycin/tobramycin+antibiotic+combination.">Eradication of Pseudomonas aeruginosa biofilms on cultured airway cells by a fosfomycin/tobramycin antibiotic combination.</a> Pathogens and Disease. 67 (1), 39-45 (2013).</li><li>Cavalieri, F., Tortora, M., Stringaro, A., Colone, M., Baldassarri, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanomedicines+for+antimicrobial+interventions.">Nanomedicines for antimicrobial interventions.</a> Journal of Hospital Infection. 88 (4), 183-190 (2014).</li><li>Savla, R., Minko, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanotechnology+approaches+for+inhalation+treatment+of+fibrosis.">Nanotechnology approaches for inhalation treatment of fibrosis.</a> Journal of Drug Targeting. 21 (10), 914-925 (2013).</li><li>Ho, D. -. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Challenges+and+strategies+in+drug+delivery+systems+for+treatment+of+pulmonary+infections.">Challenges and strategies in drug delivery systems for treatment of pulmonary infections.</a> European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 144, 110-124 (2019).</li></ol>

هذه الورقة يصف بروتوكول لثقافة 3D المشتركة من الشعب الهوائية المصابة، التي شكلتها الإنسان التليف الكيسي القصبي خط الخلايا الظهارية CFBE41o- والإنسان أحادية الخلية المشتقة خط الخلية THP-1. البروتوكول يسمح بتقييم سلامة الحاجز الظهاري, هجرة الضامة, بقاء البكتيريا, والتهاب, التي هي معايير هامة عند ...

Pseudomonas aeruginosa هو الممرض ذات الصلة في التليف الكيسي (CF) الذي يساهم في ضعف أنسجة الرئة1. إنتاج السكريات، مثل ألجينات وغيرها من exucoid exopolysaccharides، ينسق تقدم المرض، مما يؤدي إلى الالتزام البكتيري عنيد، يحد من تقديم المضادات الحيوية إلى البكتيريا ويحمي البكتيريا ضد الجهاز المناعي المضيف2. إن انتقال P. aeruginosa من مرحلة planktonic إلى تشكيل البيوفيلم مسألة حاسمة في هذا السياق ، مما يسهل أيضًا حدوث التسامح مع المضادات الحيوية.
في سياق CF، تم استخدام الفأرة في المقام الأول كنموذج. الفئران، ومع ذلك، لا تتطور تلقائيا هذا المرض مع إدخال الطفرات CF3. وقد أجريت معظم البكتيريا بيو فيلم التنمية والدراسات القابلية للأدوية على الأسطح غير الحيوية، مثل أطباق بيتري. غير أن هذا النهج لا يمثل التعقيدات الحيوية. على سبيل المثال، هناك حواجز بيولوجية مهمة غائبة، بما في ذلك الخلايا المناعية وكذلك ظهارة المخاطية. على الرغم من P. aeruginosa هو سامة جدا للخلايا الظهارية, وقد تمكنت بعض المجموعات للمشاركة في زراعة في وقت سابق P. aeruginosa بيو فيلم مع الخلايا القصبية البشرية. نشأت هذه الخلايا من مرضى التليف الكيسي مع طفرة CFTR (CFBE41o- الخلايا)4 وسمح لتقييم فعالية المضادات الحيوية5 أو تقييم تصحيح بروتين CFTR أثناء العدوى6. وقد تبين أن هذا النموذج لتحسين القدرة على التنبؤ بكفاءة المخدرات ، بالإضافة إلى تمكين توصيف القضايا مع الأدوية التي فشلت في المراحل اللاحقة من تطور المخدرات7.
ومع ذلك ، في الرئة ، يتعرض ظهارة المخاطية للهواء. وعلاوة على ذلك، فإن الخلايا المناعية الموجودة في الشعب الهوائية، مثل الضامة الأنسجة، تلعب دورا أساسيا ضد مسببات الأمراض المستنشقة أو الجسيمات8. تهاجر الضامة عبر طبقات الخلايا المختلفة للوصول إلى تجويف الشعب الهوائية ومحاربة العدوى. وعلاوة على ذلك، الأدوية المستنشقة أيضا للتعامل مع وجود المخاط كعنصر إضافي غير الخلوية من حاجز الدم الهوائية الرئوي9. في الواقع، تم تطوير العديد من النماذج المعقدة ثلاثية الأبعاد (3D) في المختبر، بهدف زيادة أهمية في الجسم الحي. ولا تزيد نظم الاستزراع المشترك من تعقيد نظم المختبرات لاكتشاف المخدرات فحسب، بل تمكن أيضا من دراسة تفاعلات الخلايا الخلوية. وقد تم تناول هذا التعقيد في دراسات حول هجرة الضامة10، والافراج عن الببتيدات المضادة للميكروبات من قبل العدلات11، ودور المخاط في العدوى9، ورد فعل الخلية الظهارية للضرر المفرط12. ومع ذلك، يمكن الاعتماد عليها CF المصابة في المختبر نموذج الذي يتميز الطفرة الجينية في CF، التي تتعرض للهواء (زيادة الحالة الفسيولوجية)، ويدمج الخلايا المناعية لا تزال تفتقر.
ولسد هذه الفجوة، فإننا نصف بروتوكولاً لثقافة الإنسان المشتركة المستقرة ثلاثية الأبعاد في الخطوط الجوية المصابة. النموذج هو الذي يتألف من الخلايا الظهارية 5 والخلايا الضامة، المصابة بP. aeruginosa وقادرة على تمثيل كل من حاجز الانتشار والمناعية. بهدف اختبار مضادات العدوى في إنتاجية عالية إلى حد معقول، تم تأسيس هذه الثقافة المشتركة على غشاء فلتر نفاذي من إدراج لوحة جيدا، وذلك باستخدام اثنين من خطوط الخلايا البشرية: CFBE41o- و THP-1 monocyte المشتقة من الضامة. وعلاوة على ذلك، لدراسة ترسب الهباء الجوي المضادللعدوى 13،تم إنشاء النموذج في واجهة الهواء السائل (ALI) بدلاً من الظروف المغطاة السائلة (LCC).
كما نحن التقرير هنا, هذا النموذج يسمح بتقييم البقاء على قيد الحياة ليس فقط البكتيرية على العلاج بالمضادات الحيوية ولكن أيضا السمية الخلوية الخلية, سلامة الحاجز الظهارية, الهجرة عبر الضامة, والاستجابات الالتهابية, التي هي معلمات أساسية لتطوير المخدرات.
يجمع هذا البروتوكول بين نوعين من الخلايا ذات الصلة لعلاج استنشاق الشعب الهوائية الرئوية: الضامة وظهارة الشعب الهوائية CF. وتُزرع هذه الخلايا على طرفي نقيض من إدراجات الدعم القابلة للنفاذ، مما يسمح بتعرض الخلايا للهواء (وتسمى ظروف الواجهة الهوائية السائلة (ALI). هذه الثقافة المشتركة للخلايا المضيفة المصابة في وقت لاحق مع P. aeruginosa. كلا خطوط الخلية المضيفة هي من أصل الإنسان: الخلايا الظهارية تمثل ظهارة الشعب الهوائية التليف الكيسي، مع طفرة على قناة CF (CFBE41o-) ، وخلايا THP-114 هي خط خلية تشبه الضامة. يسمح لأول مرة لطبقة ظهارية التقاء لتشكيل على الجانب العلوي من إدراج لوحة جيدا قبل أن تضاف الخلايا الضامة مثل إلى المقصورة المقابلة. بمجرد تأسيس الثقافة المشتركة في ALI ، يتم تلقيح النظام مع P. aeruginosa على الجانب apical. ثم يتم استخدام هذا النظام المصاب المشترك في الثقافة لتقييم فعالية المضادات الحيوية، مثل التوسرامايسين. يتم تحليل نقاط النهاية التالية: سلامة الحاجز الظهاري من حيث المقاومة الكهربائية عبر الطرفية (TEER) ، والتصور لتفاعلات الخلايا الخلوية والبكتيريا بواسطة المجهر المسح الضوئي بالليزر (CLSM) ، والبقاء على قيد الحياة البكتيرية من خلال عد وحدات تشكيل المستعمرة (CFU) ، والبقاء على قيد الحياة الخلية المضيفة (السمية الخلوية) وإطلاق سراح السيتوكين.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1308px;" width="1306">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:515px;">Accutase</td>
			<td style="width:525px;">Accutase</td>
			<td style="width:205px;">AT104</td>
			<td style="width:63px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ampicillin</td>
			<td>Carl Roth, Germany</td>
			<td>HP62.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CASY TT Cell Counter and Analyzer</td>
			<td>OLS Omni Life Sciences</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CellTrace Far Red</td>
			<td>Thermo Fischer</td>
			<td>C34564</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Centrifuge Universal 320R</td>
			<td>Hettich, Germany</td>
			<td>1406</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;">CFBE41o- cells</td>
			<td style="width:525px;">1. Gruenert Cell Line Distribution Program 
			2. Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:205px;">1. gift from Dr. Dieter C. Gruenert 
			2. SCC151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Chopstick Electrode Set for EVOM2, 4mm</td>
			<td>World Precision Instruments, Sarasota, USA</td>
			<td>STX2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Confocal Laser-Scanning Microscope CLSM</td>
			<td>Leica, Mannheim, Germany</td>
			<td>TCS SP 8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cytokines ELISA Ready-SET-Go kits</td>
			<td>Affymetrix eBioscience, USA</td>
			<td>15541037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cytokines Panel I and II</td>
			<td>LEGENDplex Immunoassay (Biolegend, USA).</td>
			<td>740102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cytotoxicity Detection Kit (LDH)</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11644793001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">D-(+) Glucose</td>
			<td>Merck</td>
			<td>47829</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dako Fluorescence Mounting Medium</td>
			<td>DAKO</td>
			<td>S3023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DAPI (4&#8242;,6-diamidino-2-phenylindole)</td>
			<td>Thermo Fischer</td>
			<td>D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Epithelial voltohmmeter</td>
			<td>World Precision Instruments, Sarasota, USA</td>
			<td>EVOM2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Falcon Permeable Support for 12 Well Plate with 3.0&#956;m Transparent PET Membrane, Sterile</td>
			<td>Corning, Amsterdam, Netherlands</td>
			<td>353181</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fetal calf serum</td>
			<td>Lonza, Basel, Switzerland</td>
			<td>DE14-801F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Goat anti-mouse (H+L) Cross-adsorbed secondary Antibody, Alexa Fluor 633</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-21050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">L-Lactate Dehydrogenase (LDH), rabbit muscle</td>
			<td>Roche, Mannheim, Germany</td>
			<td>10127230001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">LB broth</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Germany</td>
			<td>L2897-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MEM (Minimum Essential Medium)</td>
			<td>Gibco Thermo Fisher Scientific Inc.</td>
			<td>11095072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Non-Essential Amino Acids Solution (100X)</td>
			<td>Gibco Thermo Fisher Scientific Inc.</td>
			<td>11140050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">P. aeruginosa strain PAO1</td>
			<td>American Type Culture Collection</td>
			<td>47085</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">P. aeruginosa strain PAO1-GFP</td>
			<td>American Type Culture Collection</td>
			<td>10145GFP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Paraformaldehyde Aqueous Solution -16%</td>
			<td>EMS DIASUM</td>
			<td>15710-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phosphate buffer solution buffer</td>
			<td>Thermo Fischer</td>
			<td>10010023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Petri dishes</td>
			<td>Greiner</td>
			<td>664102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA)</td>
			<td>Sigma, Germany</td>
			<td>P8139-1MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Precision Cover Glasses</td>
			<td>ThorLabs</td>
			<td>CG15KH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Purified Mouse anti-human ZO-1 IgG antibody</td>
			<td>BD Transduction Laboratories</td>
			<td>610966</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 medium</td>
			<td>Gibco by Lifetechnologies, Paisley, UK</td>
			<td>11875093</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Soda-lime glass Petri dish, 50 x 200 mm (height x outside diameter)</td>
			<td>Normax, Portugal</td>
			<td>5058561</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Saponin</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Germany</td>
			<td>S4521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">T75 culture flasks</td>
			<td>Thermo Fischer</td>
			<td>156499</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">THP-1 cells</td>
			<td>Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen (DSMZ; Braunschweig, Germany)</td>
			<td>No. ACC-16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tobramycin sulfate salt</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T1783-500MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypsin-EDTA 0.05%</td>
			<td>Thermo Fischer</td>
			<td>25300054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tween80</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Germany</td>
			<td>P1754</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

p. aeruginosa infected 3d co-culture of bronchial epithelial cells and macrophages at air-liquid interface for preclinical evaluation of anti-infectives

البحوث fDrug لعلاج التهابات الرئة تتقدم نحو النماذج التنبؤية في المختبر عالية التعقيد. يمكن أن يؤدي وجود البكتيريا متعددة الأوجه في نماذج الرئة إلى إعادة تكييف الترتيب الظهاري ، في حين تنسق الخلايا المناعية استجابة التهابية ضد البكتيريا في البيئة الدقيقة. بينما في نماذج الجسم الحي كانت الخيار لاختبار جديدة مضادة للعدوى في سياق التليف الكيسي، فإنها لا تزال لا تحاكي بدقة في الظروف في الجسم الحي من هذه الأمراض في البشر ونتائج العلاج. ويمكن لنماذج معقدة في المختبر من الشعب الهوائية المصابة على أساس الخلايا البشرية (الظهارية الشعب الهوائية و الضامة) ومسببات الأمراض ذات الصلة سد هذه الفجوة وتسهيل ترجمة جديدة لمكافحة العدوى في العيادة. لهذه الأغراض، تم إنشاء نموذج مشترك للثقافة من التليف الكيسي البشري القصبي خط الخلايا الظهارية CFBE41o- و THP-1 monocyte المستمدة من الضامة، تقليد عدوى الغشاء المخاطي القصبي البشري من قبل P. aeruginosa في الهواء السائل واجهة (ALI) الظروف. تم إعداد هذا النموذج في سبعة أيام ، ويتم تقييم المعلمات التالية في وقت واحد: سلامة الحاجز الظهاري ، والهجرة الضامة ، والبقاء على قيد الحياة البكتيرية ، والالتهاب. ويصف هذا البروتوكول نظاما قويا ويمكن استنساخه لتقييم فعالية الأدوية والاستجابات المضيفة التي يمكن أن تكون ذات صلة باكتشاف مضادات جديدة للعدوى وتعظيم إيصالها للهباء الجوي إلى الرئتين.

الشكل 1A يظهر مورفولوجيا الناتجة المشتركة في الثقافة من الخلايا الظهارية الشعب الهوائية البشرية و الضامة بعد تزايد كل من ل 24 ح على الجانب apical والبصلة من يدعم نفاذية، على التوالي. يظهر سلامة الحاجز الظهاري بواسطة TEER العالي (834 Ω × سم2)و CLSM عن طريق المناعة للبروتين وصلة ض?...

Watch this Scientific Journal Video about P. aeruginosa Infected 3D Co-Culture of Bronchial Epithelial Cells and Macrophages at Air-Liquid Interface for Preclinical Evaluation of Anti-Infectives at Jo

P. aeruginosa Infected 3D Co-Culture of Bronchial Epithelial Cells and Macrophages at Air-Liquid Interface for Preclinical Evaluation of Anti-Infectives

نحن وصف بروتوكول لنموذج ثقافة ثلاثية الأبعاد المشتركة من الشعب الهوائية المصابة، وذلك باستخدام CFBE41o- الخلايا، الضامة THP-1، وSوى pseudomonas aeruginosa،التي أنشئت في واجهة الهواء السائل. يوفر هذا النموذج منصة جديدة لاختبار فعالية المضادات الحيوية في وقت واحد، وظيفة الحاجز الظهاري، وعلامات الالتهاب.

ب. ايروجينوسا مصابة 3D شارك الثقافة من الخلايا الظهارية القصبي و الضامة في واجهة الهواء السائل لتقييم ما قبل الإكلينيكي من المضادة للعدوى

fDrug research for the treatment of lung infections is progressing towards predictive in vitro models of high complexity. The multifaceted presence of ...

لذلك عندما نقوم بتقييم مضادات العدوى الجديدة، علينا أن نعالج أمرين. جانب واحد هو البكتيريا. إذا كانت planktonic أو علم الأغشية الحيوية ، والجانب الآخر هو وجود الخلايا المضيفة ، وخاصة الخلايا المضيفة الظهارية ، والتي تشكل حواجز بيولوجية ضيقة.إذا تم تنفيذ هذه الحواجز، وكيف يمكن أن تكون الاستجابة الأحادية، ومع هذا النموذج الجديد، يمكننا في الواقع رصد كلا المعلمتين في نفس الوقت. عند علاج الالتهابات البكتيرية، علينا أن ندرك ما هو الجهاز المتضرر. على سبيل المثال ، إذا كانت الرئة ، يمكننا الاستفادة ، وإدارة الدواء موضعياً كهباء جوي.ومع ذلك، إذا كنا نريد أن يكون لدينا نموذج لدراسة هذا، ونحن بحاجة إلى نموذج يسمح أيضا موقف الهباء الجوي وهو الحال في نموذجنا. الميزة الأخرى هي أنها تقوم على الخلايا البشرية، حتى نتمكن من تجنب المشاكل بسبب الاختلافات بين الحيوانات والأنواع. هذا النظام يمكن أن تعطيك المزيد من التبصر في مجال أبحاث العدوى عن طريق تسليط الضوء على الأحداث الجزيئية والخلوية خلال التفاعل بين الخلايا المضيفة والبكتيريا.عند محاولة هذا البروتوكول للمرة الأولى، تذكر أن تحقق من متوسط الخلية للعقم ومورفولوجيا الخلية وأن تكون حذراً عند التعامل مع يدعم نفاذية. زراعة خلايا ناقص CFBE41 O في قارورة T 75 مع الحد الأدنى من المتوسطة الأساسية التي تحتوي على 10٪ FCS, 1٪ الأحماض الأمينية غير الأساسية, و 600 ملليغرام لكل لتر الجلوكوز في 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون. إضافة المتوسطة الطازجة إلى الخلايا كل يومين إلى ثلاثة أيام.بعد الخلايا وصلت إلى 70٪ التقاء، وغسلها مع 10 ملليلتر من برنامج تلفزيوني وفصل مع ثلاثة ملليلتر من التربسين EDTA في 37 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. ثم، إضافة سبعة ملليلتر من ميوم الطازجة والطرد المركزي الخلايا في 300 مرة G لمدة أربع دقائق. بعد التخلص من المابير، في 10 ملليلتر من MEM، في حين تعطيل كتل مع الأنابيب لطيف.عد الخلايا مع عداد الخلايا الآلي أو غرفة قياس الهيموسيت، ثم تمييع لهم إلى تركيز 200، 000 خلية لكل 500 ميكرولترتر للبذور في 12 لوحات جيدا مع يدعم نفاذية. إضافة 500 microliters من تعليق الخلية في بئر إلى الجانب apical من الدعم نفاذية. ثم إضافة 1.5 ملليلتر من المتوسطة الطازجة إلى الجانب الجانبي القاعدي.احتضان الخلايا في 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة 72 ساعة. في اليوم الثالث بعد البذر، إنشاء واجهة سائلة الهواء عن طريق إزالة المتوسطة من الجانب الجانبي القاعدي أولا ثم من الجانب apical. إضافة 500 ميكرولترات من MEM الطازجة إلى الجانب الجانبي القاعدي وتغيير المتوسطة كل يوم واحد حتى الخلايا تشكل أحادية التقاء.لتقييم خصائص الحاجز الظهاري للخلايا، أضف 500 ميكرولترات من الخلية المتوسطة إلى الجانب المزلي، و1.5 ملليلتر إلى الجانب الجانبي القاعدي، ثم عاد لوحة إلى الحاضنة لمدة ساعة. قياس المقاومة الكهربائية مواد العبور أو TEER مع قطب عيدان آن STX2 ومتر أوم فولت الظهارية. لزراعة خلايا THP1، تنمو لهم في قارورة T 75 باستخدام 1640 1640 1640 متوسطة، وتستكمل مع FCS 10٪ في 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون.تقسيم الخلايا كل يوم الثانية عن طريق بذر 2 مليون خلية لكل ملليلتر في قارورة T75 جديدة. للتمييز بين خلايا THP1، الطرد المركزي محتويات القارورة في 300 مرة G لمدة أربع دقائق، والتخلص من عظمى. Resuspend بيليه في وسط جديد ووضع في قارورة T75 جديدة.أضف 10 نانوجرامات لكل ملليلتر PMA إلى الخلايا واعيدها إلى الحاضنة. لفصل الضامة مثل الخلايا، وغسلها مرة واحدة مع برنامج تلفزيوني في 37 درجة مئوية، واحتضان لهم مع ثلاثة ملليلتر من محلول مفرزة الخلايا التي تحتوي على 0.5 ملليمولار EDTA لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. تحقق من انفصال الخلايا تحت مجهر مقلوب.عندما تكون الخلايا منفصلة، إضافة سبعة ملليلتر من المتوسطة الطازجة والطرد المركزي لهم في 300 مرة G لمدة أربع دقائق. بعد إزالة عظمى، resuspend خلايا الضامة في ثلاثة ملليلتر من THP1 المتوسطة في أنبوب مخروطي 15 ملليلتر، عد الخلايا، واحتضانها لمدة أقصاها ساعة واحدة قبل إعداد الثقافة المشتركة. لإنشاء الظهارية الضامة المشتركة الثقافة, إزالة المتوسطة من الغرفة السفلية من CFBE41 O ناقص monolayers وعكس بعناية الدعم داخل طبق بيتري الزجاج المعقم, استخدام مكشط الخلية لإزالة الخلايا متضخمة من خلال المسام الغشاء.مكان 200، 000 الضامة THP1 في 200 ميكرولترات من RPMI على الجانب الجانبي القاعدي من إدراج مقلوب في كل بئر، وإغلاق أطباق بيتري، واحتضان لهم لمدة ساعتين. ثم ضع إدراج مرة أخرى في 12 لوحات صغيرة جيدا وإضافة 500 ميكرولترات من MEM المتوسطة إلى الجانب الجانبي القاعدي من إدراج نفاذية. تلقيح 15 ملليلتر من رطل تكملها 300 ميكروغرام لكل ملليلتر أمبيسيلين مع مستعمرة واحدة من P aeruginosa, PAO1GFP, احتضان البكتيريا لمدة 18 ساعة في 37 درجة مئوية, في حين تهتز في 180 دورة في الدقيقة.بعد الحضانة، نقل البكتيريا إلى أنبوب مخروطي 50 ملليلتر، وأجهزة الطرد المركزي في 3، 850 مرات G لمدة خمس دقائق. تجاهل الماثرة وإضافة 10 ملليلتر من برنامج تلفزيوني عقيمة التي تم تسخينها إلى 37 درجة مئوية. قياس الكثافة البصرية في 600 نانومتر وضبط تركيز البكتيريا مع متوسطة لثقافة الخلية إلى تركيز نهائي من 200،000 مستعمرة تشكيل وحدات لكل ملليلتر، والذي يتوافق مع تعدد العدوى من بكتيريا واحدة لكل خلية ظهارية.إضافة 100 ميكرولترات من التعليق البكتيري إلى الجانب apical من الدعم نفاذية واحتضان لوحة في 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة ساعة واحدة للسماح للبكتيريا لإرفاق الخلايا، ثم إزالة بعناية السائل apical مع ماصة لاستعادة شروط ALI. لتجارب العلاج من المخدرات، إضافة 500 ميكرولترات من محلول المخدرات المخففة في خلية المتوسطة إلى الجانب apical. ثم إضافة 1.5 ملليلتر من متوسطة الخلية إلى الجانب الجانبي القاعدي.جمع 500 ميكرولترات من الوسط الجانبي غير نمطي والباسدسية و تجمع لهم لتقييم CFU من البكتيريا غير المرفقة. لتقييم بقاء البكتيريا المرفقة أو الداخلية ، أضف 500 ميكرولترات من الماء البارد المعقم المعقم إلى كل حجرة من الدعم نفاذية ، واحتضان الخلايا لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. إذا تقييم CFU من العينات المجمدة، ذوبانها في 37 درجة مئوية لمدة 10 دقائق.ثم استخدام نصائح ماصة لكشط سطح الغشاء مع الحرص على عدم وضع الكثير من الضغط على الآبار. الماصات صعودا وهبوطا لإزالة جميع المحتويات الملتزم بها. مع التعليق البكتيري من كلا الكسور، وجعل واحد إلى 10 تخفيف المسلسل مع توين برنامج تلفزيوني وطبقة البكتيريا على لوحات أجار lb.احتضان لوحات أجار في 30 درجة مئوية لمدة 16 إلى 72 ساعة، ثم عد المستعمرات وحساب CFU. مورفولوجيا الثقافة المشتركة الناتجة عن الخلايا الظهارية القصبية البشرية و الضامة على الجانب الجانبي المزين من الدعامات القابلة للنفاذ تظهر هنا. A أعلى قياس TEER والمناعة لبروتينات تقاطع ضيق ZO1، أثبتت سلامة الحاجز الظهارية.لنموذج عدوى بكتيرية، تم تلقيح P aeruginosa على خلايا ناقص CFBE41 س. ولوحظت الضامة على الجانب apical من الثقافة المشتركة بعد ست ساعات من العدوى. انخفض TEER إلى 250 أوم لكل سنتيمتر مربع ، مما يشير إلى حاجز ظهاري للخطر ، والذي اقترحه أيضًا تلطيخ ZO1.يتم عرض هجرة عبر الضامة من خلال المسام القابلة للتسرب من المرشح والبكتيريا التي تُمَتَكُثَى بواسطة خلايا THP-1 على الجانب الزّامي هنا. في الثقافات أحادية THP-1، هجرة الضامة في وقت مبكر من ساعة واحدة بعد العدوى. وفي الوقت نفسه شوهدت الهجرة بعد ثلاث ساعات بعد العدوى في الثقافة المشتركة.تم تصوير الثقافات المشاركة المصابة المعالجة بالتبراميسين لمدة ست أو 20 ساعة باستخدام المجهر الليزري المناوب. دون علاج، إما الخلايا الظهارية أو الضامة توفي بعد 20 ساعة من العدوى. على الرغم من رؤيته بعد ست ساعات من العلاج في صور المجهر ، أظهر فحص CFU أن البكتيريا لم تتكاثر.ومع ذلك، استعادت البكتيريا قدرتها على الانتشار بعد العلاج لمدة 20 ساعة. كما تم قياس TEER من الثقافات الأحادية والثقافات المشتركة. لم الثقافة المشتركة من الخلايا ناقص CFBE41 س مع THP-1 لا تستحث أي تغييرات في سلامة الحاجز الظهاري مقارنة بزراعة أحادية.عند الإصابة، انخفضت قيمة TEER. عند إجراء هذا الإجراء، من المهم التأكد من أن الخلايا جالسة بشكل صحيح وعدم تعطل غشاء التصفية. لذلك تحتاج خطوات البذر الخلية إلى أن يتم تنفيذها بعناية.بالإضافة إلى هذا البروتوكول، فإن ابخاخ المضادات الحيوية على إدراج سيجعل من الممكن معرفة ما إذا كانت التغيرات البقاء على قيد الحياة البكتيريا بالمقارنة مع الظروف الغمرية.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

P. aeruginosa Infected 3D Co-Culture of Bronchial Epithelial Cells and Macrophages at Air-Liquid Interface for Preclinical Evaluation of Anti-Infectives

Co-culture Models of Pseudomonas aeruginosa Biofilms Grown on Live Human Airway Cells

Co-culture Models of Pseudomonas aeruginosa Biofilms Grown on Live Human Airway Cells

شارك في نماذج من الثقافة الزائفة الزنجارية الأغشية الحيوية نمت على خلايا حية إيرواي الإنسان

Bacterial biofilms have been associated with a number of different human diseases, but biofilm development has generally been studied on non-living ...

Application of a Mouse Ligated Peyer&#x2019;s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

Application of a Mouse Ligated PeyerÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â€žÂ¢s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

Ligated تطبيق ماوس الفحص باير لتصحيح حلقة لتقييم امتصاص الأمعاء البكتيرية بواسطة خلايا M

The inside of our gut is inhabited with enormous number of commensal bacteria. The mucosal surface of the gastrointestinal tract is continuously exposed ...

Affinity Purification of Influenza Virus Ribonucleoprotein Complexes from the Chromatin of Infected Cells

تنقية تقارب من المجمعات الأنفلونزا فيروس بروتين نووي ريبوزي من لونين من الخلايا المصابة

Like all negative-strand RNA viruses, the genome of influenza viruses is packaged in the form of viral ribonucleoprotein complexes (vRNP), in which the ...

Determination of Tolerable Fatty Acids and Cholera Toxin Concentrations Using Human Intestinal Epithelial Cells and BALB/c Mouse Macrophages

تقرير من الأحماض الدهنية المسموح وتركيزات ذيفان الكوليرا عن طريق خلايا الإنسان الظهارية في الأمعاء وBALB / ج الضامة ماوس

The positive role of fatty acids in the prevention and alleviation of non-human and  human diseases have been and continue to be extensively documented. ...

Assessing the Innate Sensing of HIV-1 Infected CD4+ T Cells by Plasmacytoid Dendritic Cells Using an Ex vivo Co-culture System.

Assessing the Innate Sensing of HIV-1 Infected CD4+ T Cells by Plasmacytoid Dendritic Cells Using an Ex vivo Co-culture System.

تقييم الفطرية الاستشعار من HIV-1 CD4 المصابة<sup&gt; +</sup&gt; T الخلايا عن طريق الخلايا الجذعية بلازماوية الشكل باستخدام<em&gt; خارج الحي</em&gt; المشارك ثقافة النظام.

HIV-1 innate sensing requires direct contact of infected CD4+ T cells with plasmacytoid dendritic cells (pDCs). In order to study this process, the ...

Isolation of Human Monocytes by Double Gradient Centrifugation and Their Differentiation to Macrophages in Teflon-coated Cell Culture Bags

عزل حيدات الإنسان من مزدوجة التدرج الطرد المركزي والتمايز لالضامة في تفلون المغلفة حقائب خلية ثقافة

Human macrophages are involved in a plethora of pathologic processes ranging from infectious diseases to cancer. Thus they pose a valuable tool to ...

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

الزائفة الزنجارية المستحثة الرئة الإصابات نموذج

In order to study human acute lung injury and pneumonia, it is important to develop animal models to mimic various pathological features of this disease. ...

Assessing Bacterial Invasion of Cardiac Cells in Culture and Heart Colonization in Infected Mice Using Listeria monocytogenes

Assessing Bacterial Invasion of Cardiac Cells in Culture and Heart Colonization in Infected Mice Using Listeria monocytogenes

تقييم الغزو البكتيري لخلايا القلب في الثقافة والاستعمار القلب في الفئران المصابة باستخدام monocytogenes الليستيريا

Listeria monocytogenes is a Gram-positive facultative intracellular pathogen that is capable of causing serious invasive infections in immunocompromised ...

High-throughput Quantitative Real-time RT-PCR Assay for Determining Expression Profiles of Types I and III Interferon Subtypes

عالية الإنتاجية الكمي في الوقت الحقيقي RT-PCR الفحص لتحديد ملامح التعبير من أنواع الأول والثالث الانترفيرون الأنواع الفرعية

Described in this report is a qRT-PCR assay for the analysis of seventeen human IFN subtypes in a 384-well plate format that incorporates highly specific ...

Isolation of Leukocytes from the Murine Tissues at the Maternal-Fetal Interface

عزل الكريات البيض من أنسجة الفئران في واجهة الأم والجنين

Immune tolerance in pregnancy requires that the immune system of the mother undergoes distinctive changes in order to accept and nurture the developing ...