Name: p. aeruginosa infected 3d co-culture of bronchial epithelial cells and macrophages at air-liquid interface for preclinical evaluation of anti-infectives
Uploaded: 2020-06-15T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about P. aeruginosa Infected 3D Co-Culture of Bronchial Epithelial Cells and Macrophages at Air-Liquid Interface for Preclinical Evaluation of Anti-Infectives at Jo

עבודה זו קיבלה מימון מתכנית HORIZON 2020 של האיחוד האירופי למחקר, פיתוח טכנולוגי, והדגמה תחת הסכם מענק מס ' 642028 H2020-MSCA-ITN-2014, NABBA - עיצוב, ופיתוח של ננו-תרופות מתקדמות כדי להתגבר על מחסומים ביולוגיים ולטייסת במחלות קשות. אנו מודים לד"ר אנה קוסטה וד"ר ג'ני Juntke על התמיכה הגדולה על הפיתוח של התרבות ההפוכת, אולגה הרטוויג, על האיור המדעי, אניה Honecker, עבור ELISA assays, פטרה König, יאנה Westhues וד"ר קיארה דה רוסי על התמיכה בתרבות התא, ניתוח, ומיקרוסקופיה. אנחנו גם מודים לצ'לסי ת'ורן על הגהה של כתב היד שלנו.

1. צמיחה והבידול של תאים בהוספת תמיכה חדיר
<ol><li>לטפח CFBE41o- בקבוקון T75 עם 13 מ"ל של מינימום חיוני בינוני (MEM) המכיל 10% סרום עגל עוברי (FCS), 1% חומצות אמינו לא חיוניות ו 600 מ"ג / L גלוקוז ב 37 ° C עם 5 % CO2 אטמוספרה. מוסיפים מדיום טרי לתאים כל 2-3 ימים.<ol>
<li>נתק את התאים לאחר שהגיע 70% confluence בקבוקון עם ...

<ol>
	<li>Cutting, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cystic+fibrosis+genetics:+from+molecular+understanding+to+clinical+application.">Cystic fibrosis genetics: from molecular understanding to clinical application.</a> Nature Reviews Genetics. 16 (1), 45-56 (2015).</li><li>Lyczak, J. B., Cannon, C. L., Pier, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+Pseudomonas+aeruginosa+infection:+Lessons+from+a+versatile+opportunist.">Establishment of Pseudomonas aeruginosa infection: Lessons from a versatile opportunist.</a> Microbes and Infection. 2 (9), 1051-1060 (2000).</li><li>Wilke, M., Buijs-Offerman, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+cystic+fibrosis:+Phenotypic+analysis+and+research+applications.">Mouse models of cystic fibrosis: Phenotypic analysis and research applications.</a> Journal of Cystic Fibrosis. 10, 152-171 (2011).</li><li>Moreau-Marquis, S., Stanton, B. A., O'Toole, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pseudomonas+aeruginosa+biofilm+formation+in+the+cystic+fibrosis+airway.">Pseudomonas aeruginosa biofilm formation in the cystic fibrosis airway.</a> Pulmonary Pharmacology and Therapeutics. 21 (4), 595-599 (2008).</li><li>Yu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+evaluation+of+tobramycin+and+aztreonam+versus+Pseudomonas+aeruginosa+biofilms+on+cystic+fibrosis-derived+human+airway+epithelial+cells.">In vitro evaluation of tobramycin and aztreonam versus Pseudomonas aeruginosa biofilms on cystic fibrosis-derived human airway epithelial cells.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 67 (11), 2673-2681 (2012).</li><li>Moreau-Marquis, S., Redelman, C. V., Stanton, B. a., Anderson, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-culture+models+of+Pseudomonas+aeruginosa+biofilms+grown+on+live+human+airway+cells.">Co-culture models of Pseudomonas aeruginosa biofilms grown on live human airway cells.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. (44), e2186 (2010).</li><li>Stanton, B. A., Coutermarsh, B., Barnaby, R., Hogan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pseudomonas+aeruginosa+reduces+VX-809+stimulated+F508del-CFTR+chloride+secretion+by+airway+epithelial+cells.">Pseudomonas aeruginosa reduces VX-809 stimulated F508del-CFTR chloride secretion by airway epithelial cells.</a> PLoS ONE. 10 (5), 1-13 (2015).</li><li>Lambrecht, B. N., Prins, J., Hoogsteden, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+dendritic+cells+and+host+immunity+to+infection.">Lung dendritic cells and host immunity to infection.</a> European Respiratory Journal. (18), 692-704 (2001).</li><li>Murgia, X., De Souza Carvalho, C., Lehr, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overcoming+the+pulmonary+barrier:+New+insights+to+improve+the+efficiency+of+inhaled+therapeutics.">Overcoming the pulmonary barrier: New insights to improve the efficiency of inhaled therapeutics.</a> European Journal of Nanomedicine. 6 (3), 157-169 (2014).</li><li>Ding, P., Wu, H., Fang, L., Wu, M., Liu, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transmigration+and+phagocytosis+of+macrophages+in+an+airway+infection+model+using+four-dimensional+techniques.">Transmigration and phagocytosis of macrophages in an airway infection model using four-dimensional techniques.</a> American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 51 (1), 1-10 (2014).</li><li>Hartl, D., Tirouvanziam, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+Immunity+of+the+Lung:+From+Basic+Mechanisms+to+Translational+Medicine.">Innate Immunity of the Lung: From Basic Mechanisms to Translational Medicine.</a> Journal of Innate Immunity. 10 (5-6), 487-501 (2018).</li><li>Esposito, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manipulating+proteostasis+to+repair+the+F508del-CFTR+defect+in+cystic+fibrosis.">Manipulating proteostasis to repair the F508del-CFTR defect in cystic fibrosis.</a> Molecular and cellular pediatrics. 3 (1), 13 (2016).</li><li>Hein, S., Bur, M., Schaefer, U. F., Lehr, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+Pharmaceutical+Aerosol+Deposition+Device+on+Cell+Cultures+(PADDOCC)+to+evaluate+pulmonary+drug+absorption+for+metered+dose+dry+powder+formulations.">A new Pharmaceutical Aerosol Deposition Device on Cell Cultures (PADDOCC) to evaluate pulmonary drug absorption for metered dose dry powder formulations.</a> European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 77 (1), 132-138 (2011).</li><li>Kletting, S., Barthold, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-culture+of+human+alveolar+epithelial+(hAELVi)+and+macrophage+(THP-1)+cell+lines.">Co-culture of human alveolar epithelial (hAELVi) and macrophage (THP-1) cell lines.</a> Altex. 35 (2), 211-222 (2018).</li><li>Schwende, H., Fitzke, E., Ambs, P., Dieter, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+the+state+of+differentiation+of+THP-1+cells+induced+by+phorbol+ester+and+1,25-dihydroxyvitamin+D3.">Differences in the state of differentiation of THP-1 cells induced by phorbol ester and 1,25-dihydroxyvitamin D3.</a> Journal of leukocyte biology. 59 (4), 555-561 (1996).</li><li>Castoldi, A., Empting, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aspherical+and+Spherical+InvA497-Functionalized+Nanocarriers+for+Intracellular+Delivery+of+Anti-Infective+Agents.">Aspherical and Spherical InvA497-Functionalized Nanocarriers for Intracellular Delivery of Anti-Infective Agents.</a> Pharmaceutical Research. 36 (1), 1-13 (2019).</li><li>Ebensen, T., Delandre, S., Prochnow, B., Guzm&#225;n, C. A., Schulze, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Combination+Vaccine+Adjuvant+System+Alum/c-di-AMP+Results+in+Quantitative+and+Qualitative+Enhanced+Immune+Responses+Post+Immunization.">The Combination Vaccine Adjuvant System Alum/c-di-AMP Results in Quantitative and Qualitative Enhanced Immune Responses Post Immunization.</a> Frontiers in cellular and infection microbiology. 9, 31 (2019).</li><li>Brockman, S. M., Bodas, M., Silverberg, D., Sharma, A., Vij, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendrimer-based+selective+autophagy-induction+rescues+&#948;F508-CFTR+and+inhibits+Pseudomonas+aeruginosa+infection+in+cystic+fibrosis.">Dendrimer-based selective autophagy-induction rescues &#948;F508-CFTR and inhibits Pseudomonas aeruginosa infection in cystic fibrosis.</a> PLoS ONE. 12 (9), 1-17 (2017).</li><li>Anderson, G. G., Moreau-Marquis, S., Stanton, B. A., O'Toole, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+analysis+of+tobramycin-treated+Pseudomonas+aeruginosa+biofilms+on+cystic+fibrosis-derived+airway+epithelial+cells.">In vitro analysis of tobramycin-treated Pseudomonas aeruginosa biofilms on cystic fibrosis-derived airway epithelial cells.</a> Infection and Immunity. 76 (4), 1423-1433 (2008).</li><li>Moreau-Marquis, S., Bomberger, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+DeltaF508-CFTR+mutation+results+in+increased+biofilm+formation+by+Pseudomonas+aeruginosa+by+increasing+iron+availability.">The DeltaF508-CFTR mutation results in increased biofilm formation by Pseudomonas aeruginosa by increasing iron availability.</a> American journal of physiology. Lung cellular and molecular physiology. 295, 25-37 (2008).</li><li>Braakhuis, H. M., Kloet, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progress+and+future+of+in+vitro+models+to+study+translocation+of+nanoparticles.">Progress and future of in vitro models to study translocation of nanoparticles.</a> Archives of Toxicology. 89 (9), 1469-1495 (2015).</li><li>Bosshart, H., Heinzelmann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=THP-1+cells+as+a+model+for+human+monocytes.">THP-1 cells as a model for human monocytes.</a> Annals of Translational Medicine. 4 (21), 4-7 (2016).</li><li>Daigneault, M., Preston, J. a., Marriott, H. M., Whyte, M. K. B., Dockrell, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+identification+of+markers+of+macrophage+differentiation+in+PMA-stimulated+THP-1+cells+and+monocyte-derived+macrophages.">The identification of markers of macrophage differentiation in PMA-stimulated THP-1 cells and monocyte-derived macrophages.</a> PLoS ONE. 5 (1), (2010).</li><li>Bismarck, P. V., Schneppenheim, R., Schumacher, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+treatment+of+pseudomonas+aeruginosa+respiratory+tract+infection+with+a+sugar+solution+-+A+case+report+on+a+lectin+based+therapeutic+principle.">Successful treatment of pseudomonas aeruginosa respiratory tract infection with a sugar solution - A case report on a lectin based therapeutic principle.</a> Klinische Padiatrie. 213 (5), 285-287 (2001).</li><li>Klinger-Strobel, M., Lautenschl&#228;ger, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aspects+of+pulmonary+drug+delivery+strategies+for+infections+in+cystic+fibrosis+-+where+do+we+stand.">Aspects of pulmonary drug delivery strategies for infections in cystic fibrosis - where do we stand.</a> Expert Opinion on Drug Delivery. 5247, 1-24 (2015).</li><li>Ehrhardt, C., Collnot, E. -. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Towards+an+in+vitro+model+of+cystic+fibrosis+small+airway+epithelium:+characterisation+of+the+human+bronchial+epithelial+cell+line+CFBE41o-.">Towards an in vitro model of cystic fibrosis small airway epithelium: characterisation of the human bronchial epithelial cell line CFBE41o-.</a> Cell and tissue research. 323 (3), 405-415 (2006).</li><li>Anderson, G. G., Kenney, T. F., Macleod, D. L., Henig, N. R., O'Toole, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eradication+of+Pseudomonas+aeruginosa+biofilms+on+cultured+airway+cells+by+a+fosfomycin/tobramycin+antibiotic+combination.">Eradication of Pseudomonas aeruginosa biofilms on cultured airway cells by a fosfomycin/tobramycin antibiotic combination.</a> Pathogens and Disease. 67 (1), 39-45 (2013).</li><li>Cavalieri, F., Tortora, M., Stringaro, A., Colone, M., Baldassarri, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanomedicines+for+antimicrobial+interventions.">Nanomedicines for antimicrobial interventions.</a> Journal of Hospital Infection. 88 (4), 183-190 (2014).</li><li>Savla, R., Minko, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanotechnology+approaches+for+inhalation+treatment+of+fibrosis.">Nanotechnology approaches for inhalation treatment of fibrosis.</a> Journal of Drug Targeting. 21 (10), 914-925 (2013).</li><li>Ho, D. -. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Challenges+and+strategies+in+drug+delivery+systems+for+treatment+of+pulmonary+infections.">Challenges and strategies in drug delivery systems for treatment of pulmonary infections.</a> European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 144, 110-124 (2019).</li></ol>

מאמר זה מתאר פרוטוקול עבור תרבית 3D של דרכי הנשימה הנגועות, המהווה על ידי סיסטיק פיברוזיס הסימפונת הסימפונת קו תא CFBE41o- ואת קו תא מקרופאג מונוציט אנושי נגזר THP-1. הפרוטוקול מאפשר הערכה של שלמות מחסום אפיתל, תרדת מקרופאג, הישרדות חיידקים, ודלקת, שהם פרמטרים חשובים בעת בדיקת יעילות התרופה ותגוב?...

פסאודומונס aeruginosa הוא פתוגן רלוונטי סיסטיק פיברוזיס (CF) שתורם ליקוי רקמת ריאה1. הייצור של פוליסכרידים, כגון אלגינט ואקסופוליסכרידים אחרים, מתאם את התקדמות המחלה, מה שמוביל לדבקות חיידקים עקשנית, מגביל את אספקת אנטיביוטיקה לחיידקים ומגן על החיידקים מפני המערכת החיסוניתהמארחת 2. המעבר של P. aeruginosa מהשלב פלנקטוני להיווצרות biofilm הוא נושא קריטי בהקשר זה, גם להקל על המופע של סובלנות לאנטיביוטיקה.
בהקשר של CF, העכבר שימש בעיקר כמודל. עכברים, עם זאת, לא באופן ספונטני לפתח מחלה זו עם המבוא של מוטציות CF3. רוב פיתוח הביופילם החיידקי ותרופות רגישות מחקרים בוצעו על משטחים abiotic, כגון צלי פטרי. עם זאת, גישה זו אינה מייצגת את מורכבות vivo. לדוגמה, מחסומים ביולוגיים חשובים נעדרים, כולל תאים חיסוניים, כמו גם אפיתל ריר. למרות P. aeruginosa הוא רעיל למדי לתאי אפיתל, כמה קבוצות הצליחו לטפח מוקדם P. aeruginosa biofilm עם תאים הסימונכיאליים האנושיים. תאים אלה מקורם חולי סיסטיק פיברוזיס עם מוטציה CFTR (CFBE41o- תאים)4 ומותר להעריך יעילותאנטיביוטית 5 או להעריך את התיקון של חלבון CFTR במהלךזיהום 6. מודל כזה הוצג כדי לשפר את יכולת החיזוי של יעילות התרופה, בנוסף לאפשר אפיון של בעיות עם תרופות שנכשלו בשלבים מאוחרים יותר של פיתוח תרופות7.
עם זאת, בריאה, אפיתל הריר חשוף לאוויר. יתר על כן, תאים חיסוניים נוכחים בדרכי הנשימה, כמו מקרופאגים רקמה, לשחק תפקיד חיוני נגד פתוגנים בשאיפה אוחלקיקים 8. מקרופאגים נודדים דרך שכבות התא השונות כדי להגיע לומן הסיפונות ולהילחם בזיהום. יתר על כן, תרופות בשאיפה גם צריך להתמודד עם הנוכחות של ריר כמרכיב נוסף שאינו תאי של מחסום דם האווירריאתי 9. ואכן, פותחו מספר תלת מימד מורכבים (תלת מימד) בדגמי מבחנה, במטרה להגדיל את הרלוונטיות של vivo. מערכות שיתוף תרבות לא רק להגדיל את המורכבות של מערכות חוץ חוץ עבור גילוי סמים, אלא גם לאפשר ללמוד אינטראקציות תא. מורכבות כזו טופלה במחקרים על הגירהמקרופאג 10, שחרור פפטידים מיקרוביאליים על ידינויטרופילים 11, התפקיד שלריר בזיהום 9, ואת התגובה תא אפיתל לנזקמוגזם 12. עם זאת, אמין CF נגוע במודל במבחנה הכולל את המוטציה הגנטית ב CF, כי הוא חשוף לאוויר (מצב פיזיולוגי מוגבר), ומשלב תאים חיסוניים עדיין חסר.
כדי לגשר על הפער הזה, אנו מתארים פרוטוקול לתרבות תלת-מית-מית-מית-אנושית יציבה של דרכי הנשימה הנגועות. המודל מורכב של תאי אפיתל סימונכיים CF אנושיים מקרופאגים, נגוע P. aeruginosa ומסוגל לייצג מחסום דיפוזיה ואימונולוגית. במטרה לבחון נוגדי זיהומים בתפוקה גבוהה למדי, תרבות משותפת זו הוקמה על קרום מסנן חדיר של תוספות צלחת באר, באמצעות שני קווי תאים אנושיים: CFBE41o- ו מקרופאגים נגזר THP-1 מונוציט. יתר על כן, כדי ללמוד בסופו של דבר את התצהיר שלתרסיס נגד זיהומים 13, המודל הוקם בממשק האוויר נוזלי (ALI) ולא תנאים מכוסים נוזלי (LCC).
כפי שאנו מדווחים כאן, מודל זה מאפשר להעריך לא רק הישרדות חיידקים על טיפול אנטיביוטי, אלא גם ציטוקסיות תא, שלמות מחסום אפיתל, טרנסמיג מקרופאג, ותגובות דלקתיות, שהם פרמטרים חיוניים לפיתוח תרופות.
פרוטוקול זה משלב שני סוגי תאים רלוונטיים לטיפול בשאיפה של דרכי הנשימה הריאתיות: מקרופאגים ואפיליום סימפונות CF. תאים אלה נזרעים משני צדי המתוספה לתמיכה חדיר, ומאפשרים חשיפה לתא לאוויר (הנקרא תנאי ממשק נוזלי אוויר (ALI). תרבות זו של תאים מארחים נגועה לאחר מכן P. aeruginosa. שני קווי התא המארחים הם ממוצא אנושי: תאי האפיתל מייצגים את האפיתל הסימפונת סיסטיק פיברוזיס, עם מוטציה בערוץ CF (CFBE41o-), ואת THP-1114 תאים הם קו תא מאופיין היטב דמוי מקרופאג. שכבת אפיתל confluent מותרת תחילה ליצור בצד העליון של מותב צלחת באר לפני תאים כמו מקרופאג מתווספים לתא הנגדי. לאחר שהתרבות ההתופת הוקמה ב-ALI, המערכת מחוסנת עם P. aeruginosa בצד apical. מערכת זו נגועה שיתוף תרבות משמש לאחר מכן כדי להעריך את היעילות של אנטיביוטיקה, למשל tobramycin. נקודות הקצה הבאות מנותחות: שלמות מחסום אפיתל במונחים של התנגדות חשמלית טרנסאפיתליאלית (TEER), הדמיה של תא תא ותאי-חיידקים אינטראקציות על ידי מיקרוסקופ סריקת לייזר confocal (CLSM), הישרדות חיידקים על ידי ספירה של יחידות יוצרי מושבה (CFU), הישרדות תאי מארח (cytotoxicity) ושחרור ציטוקינה.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1308px;" width="1306">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:515px;">Accutase</td>
			<td style="width:525px;">Accutase</td>
			<td style="width:205px;">AT104</td>
			<td style="width:63px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ampicillin</td>
			<td>Carl Roth, Germany</td>
			<td>HP62.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CASY TT Cell Counter and Analyzer</td>
			<td>OLS Omni Life Sciences</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CellTrace Far Red</td>
			<td>Thermo Fischer</td>
			<td>C34564</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Centrifuge Universal 320R</td>
			<td>Hettich, Germany</td>
			<td>1406</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;">CFBE41o- cells</td>
			<td style="width:525px;">1. Gruenert Cell Line Distribution Program 
			2. Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:205px;">1. gift from Dr. Dieter C. Gruenert 
			2. SCC151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Chopstick Electrode Set for EVOM2, 4mm</td>
			<td>World Precision Instruments, Sarasota, USA</td>
			<td>STX2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Confocal Laser-Scanning Microscope CLSM</td>
			<td>Leica, Mannheim, Germany</td>
			<td>TCS SP 8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cytokines ELISA Ready-SET-Go kits</td>
			<td>Affymetrix eBioscience, USA</td>
			<td>15541037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cytokines Panel I and II</td>
			<td>LEGENDplex Immunoassay (Biolegend, USA).</td>
			<td>740102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cytotoxicity Detection Kit (LDH)</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11644793001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">D-(+) Glucose</td>
			<td>Merck</td>
			<td>47829</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dako Fluorescence Mounting Medium</td>
			<td>DAKO</td>
			<td>S3023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DAPI (4&#8242;,6-diamidino-2-phenylindole)</td>
			<td>Thermo Fischer</td>
			<td>D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Epithelial voltohmmeter</td>
			<td>World Precision Instruments, Sarasota, USA</td>
			<td>EVOM2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Falcon Permeable Support for 12 Well Plate with 3.0&#956;m Transparent PET Membrane, Sterile</td>
			<td>Corning, Amsterdam, Netherlands</td>
			<td>353181</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fetal calf serum</td>
			<td>Lonza, Basel, Switzerland</td>
			<td>DE14-801F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Goat anti-mouse (H+L) Cross-adsorbed secondary Antibody, Alexa Fluor 633</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-21050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">L-Lactate Dehydrogenase (LDH), rabbit muscle</td>
			<td>Roche, Mannheim, Germany</td>
			<td>10127230001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">LB broth</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Germany</td>
			<td>L2897-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MEM (Minimum Essential Medium)</td>
			<td>Gibco Thermo Fisher Scientific Inc.</td>
			<td>11095072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Non-Essential Amino Acids Solution (100X)</td>
			<td>Gibco Thermo Fisher Scientific Inc.</td>
			<td>11140050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">P. aeruginosa strain PAO1</td>
			<td>American Type Culture Collection</td>
			<td>47085</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">P. aeruginosa strain PAO1-GFP</td>
			<td>American Type Culture Collection</td>
			<td>10145GFP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Paraformaldehyde Aqueous Solution -16%</td>
			<td>EMS DIASUM</td>
			<td>15710-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phosphate buffer solution buffer</td>
			<td>Thermo Fischer</td>
			<td>10010023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Petri dishes</td>
			<td>Greiner</td>
			<td>664102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA)</td>
			<td>Sigma, Germany</td>
			<td>P8139-1MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Precision Cover Glasses</td>
			<td>ThorLabs</td>
			<td>CG15KH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Purified Mouse anti-human ZO-1 IgG antibody</td>
			<td>BD Transduction Laboratories</td>
			<td>610966</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 medium</td>
			<td>Gibco by Lifetechnologies, Paisley, UK</td>
			<td>11875093</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Soda-lime glass Petri dish, 50 x 200 mm (height x outside diameter)</td>
			<td>Normax, Portugal</td>
			<td>5058561</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Saponin</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Germany</td>
			<td>S4521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">T75 culture flasks</td>
			<td>Thermo Fischer</td>
			<td>156499</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">THP-1 cells</td>
			<td>Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen (DSMZ; Braunschweig, Germany)</td>
			<td>No. ACC-16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tobramycin sulfate salt</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T1783-500MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypsin-EDTA 0.05%</td>
			<td>Thermo Fischer</td>
			<td>25300054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tween80</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Germany</td>
			<td>P1754</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

p. aeruginosa infected 3d co-culture of bronchial epithelial cells and macrophages at air-liquid interface for preclinical evaluation of anti-infectives

מחקר fDrug לטיפול בדלקות ריאות מתקדם לקראת חיזוי במודלים מוליטרו של מורכבות גבוהה. הנוכחות הרב-גפית של חיידקים במודלים של ריאות יכולה להתאים מחדש את הסידור האפיתל, בעוד תאים חיסוניים לתאם תגובה דלקתית נגד החיידקים בסביבה מיקרו. בעוד במודלים vivo היו הבחירה לבדיקת אנטי-זיהומים חדשים בהקשר של סיסטיק פיברוזיס, הם עדיין לא לחקות במדויק את תנאי vivo של מחלות כאלה בבני אדם ואת תוצאות הטיפול. מורכבים במודלים מולכיים של דרכי הנשימה הנגועות המבוססות על תאים אנושיים (אפיתל סיפונות וקרופאגים) ופתוגנים רלוונטיים יכולים לגשר על הפער הזה ולהקל על תרגום של נוגדי זיהומים חדשים למרפאה. למטרות כאלה, מודל תרבות שיתופית של סיסטיק פיברוזיס האנושית סימפונות קו תא אפיתל CFBE41o- ו THP-1 מונוציט נגזר מקרופאגים הוקמה, מחקה זיהום של רירית הסימפונות האנושית על ידי P. aeruginosa בממשק אוויר נוזלי (ALI) תנאים. מודל זה מוגדר בשבעה ימים, ואת הפרמטרים הבאים מוערכים בו זמנית: שלמות מחסום אפיתל, טרנסמיג מקרופאג,הישרדות חיידקים, ודלקת. הפרוטוקול הנוכחי מתאר מערכת חזקה ותשובת להערכת יעילות התרופה ותגובות מארחות שיכולות להיות רלוונטיות לגילוי נוגדי זיהומים חדשים ולייטוב אספקת האירוסול שלהם לריאות.

איור 1A מראה את המורפולוגיה של התרבות ההפוכה של תאי אפיתל הסימונכיים האנושיים וקרופאגים לאחר גידול במשך 24 שעות בצד האפי והבסולטרלי של תמיכות חדירות, בהתאמה. שלמות מחסום האפיתל מוצגת על-ידי TEER גבוה יותר (834 Ω×cm2)ו- CLSM על-ידי חיסון עבור חלבון צומת הדוק ZO-1(איור 1B...

Watch this Scientific Journal Video about P. aeruginosa Infected 3D Co-Culture of Bronchial Epithelial Cells and Macrophages at Air-Liquid Interface for Preclinical Evaluation of Anti-Infectives at Jo

P. aeruginosa Infected 3D Co-Culture of Bronchial Epithelial Cells and Macrophages at Air-Liquid Interface for Preclinical Evaluation of Anti-Infectives

אנו מתארים פרוטוקול עבור מודל תלת מימדי של שיתוף תרבות של דרכי הנשימה הנגועות, באמצעות CFBE41o- תאים, מקרופאגים THP-1, ו פסאודומונס aeruginosa, הוקמה בממשק אוויר נוזלי. מודל זה מספק פלטפורמה חדשה כדי לבדוק בו זמנית יעילות אנטיביוטיקה, פונקציית מחסום אפיתל, סמנים דלקתיים.

פ. ארוגינוזה נגוע 3D שיתוף תרבות של תאים אפיתל הסיפונות מקרופאגים בממשק אוויר נוזלי להערכה פרה-סרטנית של אנטי זיהומים

fDrug research for the treatment of lung infections is progressing towards predictive in vitro models of high complexity. The multifaceted presence of ...

לכן, כאשר אנו מעריכים אנטי-מדביקים חדשניים, עלינו להתייחס לשני דברים. צד אחד הוא החיידקים. אם הם ביופילמים פלנקטוניים או מושכלים, הצד השני הוא נוכחות של תאים מארחים, במיוחד תאים מארחים אפיתל, אשר יוצרים מחסומים ביולוגיים הדוקים.אם מחסומים אלה יושפעו, איך התגובה המונולוגית עשויה להיות, ועם מודל חדש זה, אנחנו יכולים למעשה לפקח על שני הפרמטרים בו זמנית. כאשר מטפלים בזיהומים חיידקיים, עלינו להבין איזה איבר מושפע. לדוגמה, אם זה הריאה, אנחנו יכולים לנצל, באופן topically לנהל את התרופה כמו תרסיס.עם זאת, אם אנחנו רוצים שיהיה לנו מודל ללימוד זה, אנחנו צריכים מודל המאפשר גם את המיקום של אירוסולים וזה המקרה במודל שלנו. היתרון השני הוא שהוא מבוסס על תאים אנושיים, כדי שנוכל להימנע מבעיות עקב הבדלים בין בעלי חיים לבין הבדלי מינים. מערכת זו יכולה לתת לך תובנה רבה יותר לתחום מחקר הזיהום על ידי שפיכת אור על אירועים מולקולריים ותאיים במהלך האינטראקציה של תאים מארחים וחיידקים.בעת ניסיון פרוטוקול זה בפעם הראשונה, זכור לבדוק את מדיום התא עבור סטריליות ומורפולוגיה של התאים ולהיזהר בעת טיפול בתמיך הניתן חדיר. לטפח CFBE41 O מינוס תאים בבקבוק T 75 עם מדיום חיוני מינימלי המכיל 10% FCS, 1% חומצות אמינו לא חיוניות, ו 600 מיליגרם לליטר גלוקוז ב 37 מעלות צלזיוס עם 5% פחמן דו חמצני. מוסיפים מדיום טרי לתאים כל יומיים עד שלושה ימים.לאחר התאים הגיעו 70%confluency, לשטוף אותם עם 10 מיליליטר של PBS להתנתק עם שלושה מיליליטר של טריפסין EDTA ב 37 מעלות צלזיוס במשך 15 דקות. לאחר מכן, להוסיף שבעה מיליליטר של MEM טרי צנטריפוגה התאים ב 300 פעמים G במשך ארבע דקות. לאחר השלכת supernatant, ב 10 מיליליטר של MEM, תוך שיבוש הגושים עם צינורות עדינים.לספור את התאים עם מונה תאים אוטומטי או תא Hemocytometer, ולאחר מכן לדלל אותם לריכוז של 200, 000 תאים לכל 500 microliters עבור זריעה ב 12 צלחות גם עם תמיכות חדירות. הוסף 500 microliters של ההשעיה התא לכל באר לצד apical של התמיכה חדירה. לאחר מכן מוסיפים 1.5 מיליליטר של מדיום טרי לצד הצדדי הבסיסי.דגירה התאים ב 37 מעלות צלזיוס ו 5% פחמן דו חמצני במשך 72 שעות. ביום השלישי לאחר הזריעה, ליצור ממשק נוזלי אוויר על ידי הסרת המדיום מהצד הצדדי הבסיסי הראשון ולאחר מכן מהצד apical. הוסף 500 microliters של MEM טרי לצד הצדדי הבסיסי ולשנות את המדיום כל יום שני עד התאים יוצרים monolayer confluent.כדי להעריך את תכונות מחסום האפיתל של התאים, להוסיף 500 microliters של תא בינוני לצד apical, ו 1.5 מיליליטר לצד הצדדי הבסיסי, ואז החזיר את הצלחת לאנקובטור במשך שעה. למדוד את חומר המעבר עמידות חשמלית או TEER עם אלקטרודה מקל אכילה אן STX2 ומטר אום וולט אפיתל. כדי לטפח תאי THP1, לגדל אותם בבקבוק T 75 באמצעות RPMI 1640 בינוני, בתוספת 10% FCS ב 37 מעלות צלזיוס ו 5% פחמן דו חמצני.לפצל את התאים כל יום שני על ידי זריעת 2 מיליון תאים למיליליטר בבקבוק T75 חדש. כדי להבדיל בין תאי ה- THP1, יש להשליך צנטריפוגה על תכולת הבקבוק פי 300 G למשך ארבע דקות, להשליך את העל-טבעי. תכניסו את הכדור במדיום טרי ותכניסו בקבוק T75 חדש.מוסיפים 10 ננוגרם למיליליטר PMA לתאים ומחזירים אותם לאנקובטור. כדי לנתק את המקרופאג כמו תאים, לשטוף אותם פעם אחת עם PBS ב 37 מעלות צלזיוס, ו דגירה אותם עם שלושה מיליליטר של פתרון ניתוק התא המכיל 0.5 מילימולרית EDTA במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר. בדוק אם יש ניתוק תאים תחת מיקרוסקופ הפוך.כאשר התאים התנתקו, להוסיף שבעה מיליליטר של בינוני טרי צנטריפוגה אותם ב 300 פעמים G במשך ארבע דקות. לאחר הסרת העל-טבעי, יש להתריע מחדש על תאי המקרופאג' בשלושה מיליליטר של מדיום THP1 בצינור חרוטי של 15 מיליליטר, לספור את התאים ולרמוס אותם למשך שעה לכל היותר לפני הגדרת השיתוף התרבותי. כדי להקים תרבות מקרופאג אפיתל, להסיר את המדיום מן התא התחתון של CFBE41 O מינוס monolayers בזהירות להפוך את התמיכה בתוך צלחת פטרי זכוכית סטרילית, להשתמש מגרד תאים כדי להסיר את התאים מגודלים דרך נקבוביות קרום.מניחים 200, 000 מקרופאגים THP1 ב 200 microliters של RPMI בצד הצדדי הבסיסי של להוסיף הפוך בכל באר, לסגור את מנות פטרי, לדגר אותם במשך שעתיים. לאחר מכן מניחים את התוספות בחזרה לתוך 12 צלחות מיקרו באר ולהוסיף 500 microliters של מדיום MEM לצד הצדדי הבסיסי של הכנס חדיר. לחסן 15 מיליליטר של ליברות בתוספת 300 מיקרוגרם למיליליטר אמפיצילין עם מושבה אחת של P aeruginosa, PAO1GFP, דגירה החיידקים במשך 18 שעות ב 37 מעלות צלזיוס, תוך טלטול ב 180 סל"ד.לאחר הדגירה, מעבירים את החיידקים לצינור חרוט 50 מיליליטר, וצנטריפוגות ב 3, 850 פעמים G במשך חמש דקות. השליכו את העל-טבעי והוסיפו 10 מיליליטר של PBS סטרילי שחומם מראש ל-37 מעלות צלזיוס. למדוד צפיפות אופטית ב 600 ננומטר ולהתאים את הריכוז של חיידקים עם מדיום תרבות התא לריכוז סופי של 200, 000 מושבה להרכיב יחידות למיליליטר, אשר תואם ריבוי של זיהום של חיידק אחד לכל תא אפיתל.הוסף 100 microliters של השעיה חיידקית לצד apical של תמיכה חדירה דגירה הצלחת ב 37 מעלות צלזיוס ו 5% פחמן דו חמצני במשך שעה אחת כדי לאפשר חיידקים לצרף לתאים, ולאחר מכן להסיר בזהירות נוזל אפי עם פיפטה כדי לשחזר את תנאי ALI. לניסויים עם טיפול תרופתי, להוסיף 500 microliters של פתרון תרופה מדוללת בתא בינוני לצד apical. לאחר מכן להוסיף 1.5 מיליליטר של תא בינוני לצד הצדדי הבסיסי.לאסוף 500 microliters של המדיום הדו-תכליתי לא טיפוסי ובזלי ולאסוף אותם כדי להעריך CFU של חיידקים שאינם מחוברים. כדי להעריך את הישרדותם של חיידקים מחוברים או פנימיים, הוסיפו 500 מיקרוליטרים של מים קרים סטריליים לכל תא של התמיכה המחלחלת, והדגירה את התאים במשך 30 דקות בטמפרטורת החדר. אם מעריכים CFU מדגימות קפואות, מפשירים אותם ב 37 מעלות צלזיוס במשך 10 דקות.לאחר מכן השתמש טיפים פיפטה כדי לגרד את משטח הממברנה דואג לא לשים יותר מדי לחץ על בארות. פיפטה למעלה ולמטה כדי להסיר את כל התוכן שדבק. עם ההשעיה החיידקית משני השברים, לעשות דילול סדרתי אחד עד 10 עם Tween PBS צלחת החיידקים על צלחות אגר lb.להדגירה את צלחות אגר ב 30 מעלות צלזיוס במשך 16 עד 72 שעות, ואז לספור את המושבות ולחשב CFU. המורפולוגיה של התרבות השיתוף וכתוצאה מכך של תאים אפיתל הסנפה האנושי מקרופאגים בצד הצדדי אפי ובזיליקום של תמיכות חדירות מוצגים כאן. מדידת TEER גבוהה יותר והגנה על חלבוני הצומת ההדוקים ZO1, הוכיחו שלמות מחסום אפיתל.כדי מודל זיהום חיידקי, P aeruginosa היה מחוסן על CFBE41 o מינוס תאים. מקרופאגים נצפו בצד האפי של התרבות ה-6 שעות לאחר ההדבקה. TEER ירד ל 250 אוהם סנטימטר בריבוע, המציין מחסום אפיתל בסכנה, אשר הוצע גם על ידי כתמי ZO1.נדידת טרנס מקרופאג דרך נקבוביות מסנן חדיר ספיגת חיידקים על ידי תאי THP-1 בצד apical מוצג כאן. במונוקולטורות THP-1, נדידת מקרופאג' כבר שעה לאחר ההדבקה. בינתיים ההגירה נראתה לאחר שלוש שעות לאחר ההדבקה בתרבות השיתוף.תרבויות שיתוף נגועות שטופלו בצברמיצין במשך שש או 20 שעות דימויו עם מיקרוסקופ לייזר סריקה קונפוקל. ללא טיפול, תאי ההתגלות או המקרופאגים מתו לאחר 20 שעות של זיהום. למרות שנראה לאחר שש שעות של טיפול בתמונות מיקרוסקופיה, בדיקה CFU הוכיחה כי החיידקים לא להתרבות.עם זאת, החיידקים התאוששו יכולת ההתפשטות שלהם לאחר הטיפול 20 שעות. כמו כן נמדדו TEER של מונוקולטורות ותרבויות שיתוף. התרבות השיתוף של CFBE41 o מינוס תאים עם THP-1 לא לגרום לשינויים בשלמות מחסום האפיתל בהשוואה למונוקולטורה.לאחר ההדבקה, ערך TEER ירד. בעת ביצוע הליך זה, חיוני לוודא כי התאים יושבים כראוי ואת קרום המסנן לא שיבש. לכן שלבי זריעת התא צריכים להתבצע בזהירות.בנוסף לפרוטוקול זה, ערפיליות של אנטיביוטיקה על תוספות יאפשר לראות אם שינויים הישרדות חיידקים לעומת תנאים שקועים.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

P. aeruginosa Infected 3D Co-Culture of Bronchial Epithelial Cells and Macrophages at Air-Liquid Interface for Preclinical Evaluation of Anti-Infectives

Co-culture Models of Pseudomonas aeruginosa Biofilms Grown on Live Human Airway Cells

Co-culture Models of Pseudomonas aeruginosa Biofilms Grown on Live Human Airway Cells

Co-מודלים של תרבות Pseudomonas aeruginosa Biofilms גדל על תאים חיים Airway האדם

Bacterial biofilms have been associated with a number of different human diseases, but biofilm development has generally been studied on non-living ...

Application of a Mouse Ligated Peyer&#x2019;s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

Application of a Mouse Ligated PeyerÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â€žÂ¢s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

יישום של עכבר Ligated מעיים תיקון של Peyer Assay Loop להערכת ספיגת חיידקים על ידי תאים M

The inside of our gut is inhabited with enormous number of commensal bacteria. The mucosal surface of the gastrointestinal tract is continuously exposed ...

Affinity Purification of Influenza Virus Ribonucleoprotein Complexes from the Chromatin of Infected Cells

זיקה טיהור של נגיף השפעת תסביכים Ribonucleoprotein של הכרומטין של תאים נגועים

Like all negative-strand RNA viruses, the genome of influenza viruses is packaged in the form of viral ribonucleoprotein complexes (vRNP), in which the ...

Determination of Tolerable Fatty Acids and Cholera Toxin Concentrations Using Human Intestinal Epithelial Cells and BALB/c Mouse Macrophages

נחישות של חומצות שומן נסבלות וריכוזי רעלן הכולרה שימוש בתאי אפיתל במעי אדם ומקרופאגים עכבר BALB / ג

The positive role of fatty acids in the prevention and alleviation of non-human and  human diseases have been and continue to be extensively documented. ...

Assessing the Innate Sensing of HIV-1 Infected CD4+ T Cells by Plasmacytoid Dendritic Cells Using an Ex vivo Co-culture System.

Assessing the Innate Sensing of HIV-1 Infected CD4+ T Cells by Plasmacytoid Dendritic Cells Using an Ex vivo Co-culture System.

הערכת חישה המולדת של CD4 הנגוע ב- HIV-1<sup&gt; +</sup&gt; T תאים על ידי תאים דנדריטים Plasmacytoid שימוש<em&gt; Ex vivo</em&gt; עמית תרבות מערכת.

HIV-1 innate sensing requires direct contact of infected CD4+ T cells with plasmacytoid dendritic cells (pDCs). In order to study this process, the ...

Isolation of Human Monocytes by Double Gradient Centrifugation and Their Differentiation to Macrophages in Teflon-coated Cell Culture Bags

בידוד של אדם מונוציטים ידי זוגי Gradient צנטריפוגה והבידול שלהם להמקרופאגים בתיקי תרבית תאים מצופים טפלון

Human macrophages are involved in a plethora of pathologic processes ranging from infectious diseases to cancer. Thus they pose a valuable tool to ...

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

Pseudomonas aeruginosa מושרה ריאות פגיעה דגם

In order to study human acute lung injury and pneumonia, it is important to develop animal models to mimic various pathological features of this disease. ...

Assessing Bacterial Invasion of Cardiac Cells in Culture and Heart Colonization in Infected Mice Using Listeria monocytogenes

Assessing Bacterial Invasion of Cardiac Cells in Culture and Heart Colonization in Infected Mice Using Listeria monocytogenes

הערכת פלישת חיידקים לתאי לב בתרבות וקולוניזציה של הלב בעכברים נגועים באמצעות מונוציטוגנים ליסטריה

Listeria monocytogenes is a Gram-positive facultative intracellular pathogen that is capable of causing serious invasive infections in immunocompromised ...

High-throughput Quantitative Real-time RT-PCR Assay for Determining Expression Profiles of Types I and III Interferon Subtypes

תפוקה גבוהה בזמן אמת כמותי RT-PCR Assay לקביעת פרופילי ביטוי של סוגי I ו- III תת סוגי אינטרפרון

Described in this report is a qRT-PCR assay for the analysis of seventeen human IFN subtypes in a 384-well plate format that incorporates highly specific ...

Isolation of Leukocytes from the Murine Tissues at the Maternal-Fetal Interface

בידוד של לויקוציטים מרקמות Murine בממשק האם והעובר

Immune tolerance in pregnancy requires that the immune system of the mother undergoes distinctive changes in order to accept and nurture the developing ...