Name: p. aeruginosa infected 3d co-culture of bronchial epithelial cells and macrophages at air-liquid interface for preclinical evaluation of anti-infectives
Uploaded: 2020-06-15T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about P. aeruginosa Infected 3D Co-Culture of Bronchial Epithelial Cells and Macrophages at Air-Liquid Interface for Preclinical Evaluation of Anti-Infectives at Jo

Bu çalışma, Avrupa Birliği'nin 642028 H2020-MSCA-ITN-2014, NABBA - Tasarım ve Gelişmiş Nanoilaçların Geliştirilmesi ve Biyolojik Engelleri aşmak ve ağır hastalıkların tedavisi için hibe anlaşması kapsamında araştırma, teknolojik geliştirme ve gösteri için Avrupa Birliği'nin HORIZON 2020 Programı'ndan fon almıştır. Biz ortak kültür, Olga Hartwig, bilimsel illüstrasyon, Anja Honecker, ELISA tahliller için, Petra König, Jana Westhues ve Dr Chiara De Rossi hücre kültürü, analitik ve mikroscopy desteği için gelişimi büyük destek için Dr Ana Costa ve Dr Jenny Juntke teşekkür ederiz. Ayrıca chelsea Thorn'a makalemizi okuduğu için teşekkür ederiz.

1. Geçirimli destek uçlarında hücrelerin büyümesi ve farklılaşması
<ol><li>CFBE41o yetiştirmek- % 10 fetal buzağı serumu (FCS), %1 esansiyel olmayan amino asitler ve %5 CO2 atmosferi ile 37 °C'de 600 mg/L glikoz içeren 13 mL minimum esansiyel ortama (MEM) sahip bir T75 şişesinde. Hücrelere her 2-3 günde bir taze ortam ekleyin.<ol>
<li>3 mL tripsin- Etilendiamintetraasetik asit (EDTA) ile şişede %70 birleştiğinde hücreleri 37°C'de 15 dakika ayırın. 7 mL taze MEM ekleyin ve...

<ol>
	<li>Cutting, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cystic+fibrosis+genetics:+from+molecular+understanding+to+clinical+application.">Cystic fibrosis genetics: from molecular understanding to clinical application.</a> Nature Reviews Genetics. 16 (1), 45-56 (2015).</li><li>Lyczak, J. B., Cannon, C. L., Pier, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+Pseudomonas+aeruginosa+infection:+Lessons+from+a+versatile+opportunist.">Establishment of Pseudomonas aeruginosa infection: Lessons from a versatile opportunist.</a> Microbes and Infection. 2 (9), 1051-1060 (2000).</li><li>Wilke, M., Buijs-Offerman, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+cystic+fibrosis:+Phenotypic+analysis+and+research+applications.">Mouse models of cystic fibrosis: Phenotypic analysis and research applications.</a> Journal of Cystic Fibrosis. 10, 152-171 (2011).</li><li>Moreau-Marquis, S., Stanton, B. A., O'Toole, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pseudomonas+aeruginosa+biofilm+formation+in+the+cystic+fibrosis+airway.">Pseudomonas aeruginosa biofilm formation in the cystic fibrosis airway.</a> Pulmonary Pharmacology and Therapeutics. 21 (4), 595-599 (2008).</li><li>Yu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+evaluation+of+tobramycin+and+aztreonam+versus+Pseudomonas+aeruginosa+biofilms+on+cystic+fibrosis-derived+human+airway+epithelial+cells.">In vitro evaluation of tobramycin and aztreonam versus Pseudomonas aeruginosa biofilms on cystic fibrosis-derived human airway epithelial cells.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 67 (11), 2673-2681 (2012).</li><li>Moreau-Marquis, S., Redelman, C. V., Stanton, B. a., Anderson, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-culture+models+of+Pseudomonas+aeruginosa+biofilms+grown+on+live+human+airway+cells.">Co-culture models of Pseudomonas aeruginosa biofilms grown on live human airway cells.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. (44), e2186 (2010).</li><li>Stanton, B. A., Coutermarsh, B., Barnaby, R., Hogan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pseudomonas+aeruginosa+reduces+VX-809+stimulated+F508del-CFTR+chloride+secretion+by+airway+epithelial+cells.">Pseudomonas aeruginosa reduces VX-809 stimulated F508del-CFTR chloride secretion by airway epithelial cells.</a> PLoS ONE. 10 (5), 1-13 (2015).</li><li>Lambrecht, B. N., Prins, J., Hoogsteden, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+dendritic+cells+and+host+immunity+to+infection.">Lung dendritic cells and host immunity to infection.</a> European Respiratory Journal. (18), 692-704 (2001).</li><li>Murgia, X., De Souza Carvalho, C., Lehr, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overcoming+the+pulmonary+barrier:+New+insights+to+improve+the+efficiency+of+inhaled+therapeutics.">Overcoming the pulmonary barrier: New insights to improve the efficiency of inhaled therapeutics.</a> European Journal of Nanomedicine. 6 (3), 157-169 (2014).</li><li>Ding, P., Wu, H., Fang, L., Wu, M., Liu, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transmigration+and+phagocytosis+of+macrophages+in+an+airway+infection+model+using+four-dimensional+techniques.">Transmigration and phagocytosis of macrophages in an airway infection model using four-dimensional techniques.</a> American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 51 (1), 1-10 (2014).</li><li>Hartl, D., Tirouvanziam, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+Immunity+of+the+Lung:+From+Basic+Mechanisms+to+Translational+Medicine.">Innate Immunity of the Lung: From Basic Mechanisms to Translational Medicine.</a> Journal of Innate Immunity. 10 (5-6), 487-501 (2018).</li><li>Esposito, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manipulating+proteostasis+to+repair+the+F508del-CFTR+defect+in+cystic+fibrosis.">Manipulating proteostasis to repair the F508del-CFTR defect in cystic fibrosis.</a> Molecular and cellular pediatrics. 3 (1), 13 (2016).</li><li>Hein, S., Bur, M., Schaefer, U. F., Lehr, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+Pharmaceutical+Aerosol+Deposition+Device+on+Cell+Cultures+(PADDOCC)+to+evaluate+pulmonary+drug+absorption+for+metered+dose+dry+powder+formulations.">A new Pharmaceutical Aerosol Deposition Device on Cell Cultures (PADDOCC) to evaluate pulmonary drug absorption for metered dose dry powder formulations.</a> European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 77 (1), 132-138 (2011).</li><li>Kletting, S., Barthold, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-culture+of+human+alveolar+epithelial+(hAELVi)+and+macrophage+(THP-1)+cell+lines.">Co-culture of human alveolar epithelial (hAELVi) and macrophage (THP-1) cell lines.</a> Altex. 35 (2), 211-222 (2018).</li><li>Schwende, H., Fitzke, E., Ambs, P., Dieter, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+the+state+of+differentiation+of+THP-1+cells+induced+by+phorbol+ester+and+1,25-dihydroxyvitamin+D3.">Differences in the state of differentiation of THP-1 cells induced by phorbol ester and 1,25-dihydroxyvitamin D3.</a> Journal of leukocyte biology. 59 (4), 555-561 (1996).</li><li>Castoldi, A., Empting, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aspherical+and+Spherical+InvA497-Functionalized+Nanocarriers+for+Intracellular+Delivery+of+Anti-Infective+Agents.">Aspherical and Spherical InvA497-Functionalized Nanocarriers for Intracellular Delivery of Anti-Infective Agents.</a> Pharmaceutical Research. 36 (1), 1-13 (2019).</li><li>Ebensen, T., Delandre, S., Prochnow, B., Guzm&#225;n, C. A., Schulze, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Combination+Vaccine+Adjuvant+System+Alum/c-di-AMP+Results+in+Quantitative+and+Qualitative+Enhanced+Immune+Responses+Post+Immunization.">The Combination Vaccine Adjuvant System Alum/c-di-AMP Results in Quantitative and Qualitative Enhanced Immune Responses Post Immunization.</a> Frontiers in cellular and infection microbiology. 9, 31 (2019).</li><li>Brockman, S. M., Bodas, M., Silverberg, D., Sharma, A., Vij, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendrimer-based+selective+autophagy-induction+rescues+&#948;F508-CFTR+and+inhibits+Pseudomonas+aeruginosa+infection+in+cystic+fibrosis.">Dendrimer-based selective autophagy-induction rescues &#948;F508-CFTR and inhibits Pseudomonas aeruginosa infection in cystic fibrosis.</a> PLoS ONE. 12 (9), 1-17 (2017).</li><li>Anderson, G. G., Moreau-Marquis, S., Stanton, B. A., O'Toole, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+analysis+of+tobramycin-treated+Pseudomonas+aeruginosa+biofilms+on+cystic+fibrosis-derived+airway+epithelial+cells.">In vitro analysis of tobramycin-treated Pseudomonas aeruginosa biofilms on cystic fibrosis-derived airway epithelial cells.</a> Infection and Immunity. 76 (4), 1423-1433 (2008).</li><li>Moreau-Marquis, S., Bomberger, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+DeltaF508-CFTR+mutation+results+in+increased+biofilm+formation+by+Pseudomonas+aeruginosa+by+increasing+iron+availability.">The DeltaF508-CFTR mutation results in increased biofilm formation by Pseudomonas aeruginosa by increasing iron availability.</a> American journal of physiology. Lung cellular and molecular physiology. 295, 25-37 (2008).</li><li>Braakhuis, H. M., Kloet, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progress+and+future+of+in+vitro+models+to+study+translocation+of+nanoparticles.">Progress and future of in vitro models to study translocation of nanoparticles.</a> Archives of Toxicology. 89 (9), 1469-1495 (2015).</li><li>Bosshart, H., Heinzelmann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=THP-1+cells+as+a+model+for+human+monocytes.">THP-1 cells as a model for human monocytes.</a> Annals of Translational Medicine. 4 (21), 4-7 (2016).</li><li>Daigneault, M., Preston, J. a., Marriott, H. M., Whyte, M. K. B., Dockrell, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+identification+of+markers+of+macrophage+differentiation+in+PMA-stimulated+THP-1+cells+and+monocyte-derived+macrophages.">The identification of markers of macrophage differentiation in PMA-stimulated THP-1 cells and monocyte-derived macrophages.</a> PLoS ONE. 5 (1), (2010).</li><li>Bismarck, P. V., Schneppenheim, R., Schumacher, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+treatment+of+pseudomonas+aeruginosa+respiratory+tract+infection+with+a+sugar+solution+-+A+case+report+on+a+lectin+based+therapeutic+principle.">Successful treatment of pseudomonas aeruginosa respiratory tract infection with a sugar solution - A case report on a lectin based therapeutic principle.</a> Klinische Padiatrie. 213 (5), 285-287 (2001).</li><li>Klinger-Strobel, M., Lautenschl&#228;ger, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aspects+of+pulmonary+drug+delivery+strategies+for+infections+in+cystic+fibrosis+-+where+do+we+stand.">Aspects of pulmonary drug delivery strategies for infections in cystic fibrosis - where do we stand.</a> Expert Opinion on Drug Delivery. 5247, 1-24 (2015).</li><li>Ehrhardt, C., Collnot, E. -. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Towards+an+in+vitro+model+of+cystic+fibrosis+small+airway+epithelium:+characterisation+of+the+human+bronchial+epithelial+cell+line+CFBE41o-.">Towards an in vitro model of cystic fibrosis small airway epithelium: characterisation of the human bronchial epithelial cell line CFBE41o-.</a> Cell and tissue research. 323 (3), 405-415 (2006).</li><li>Anderson, G. G., Kenney, T. F., Macleod, D. L., Henig, N. R., O'Toole, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eradication+of+Pseudomonas+aeruginosa+biofilms+on+cultured+airway+cells+by+a+fosfomycin/tobramycin+antibiotic+combination.">Eradication of Pseudomonas aeruginosa biofilms on cultured airway cells by a fosfomycin/tobramycin antibiotic combination.</a> Pathogens and Disease. 67 (1), 39-45 (2013).</li><li>Cavalieri, F., Tortora, M., Stringaro, A., Colone, M., Baldassarri, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanomedicines+for+antimicrobial+interventions.">Nanomedicines for antimicrobial interventions.</a> Journal of Hospital Infection. 88 (4), 183-190 (2014).</li><li>Savla, R., Minko, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanotechnology+approaches+for+inhalation+treatment+of+fibrosis.">Nanotechnology approaches for inhalation treatment of fibrosis.</a> Journal of Drug Targeting. 21 (10), 914-925 (2013).</li><li>Ho, D. -. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Challenges+and+strategies+in+drug+delivery+systems+for+treatment+of+pulmonary+infections.">Challenges and strategies in drug delivery systems for treatment of pulmonary infections.</a> European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 144, 110-124 (2019).</li></ol>

Bu yazıda enfekte hava yollarının 3Boyutlu ortak kültür için bir protokol açıklar, insan kistik fibrozis bronşiyal epitel hücre hattı CFBE41o tarafından oluşturulan- ve insan monosit kaynaklı makrofaj hücre hattı THP-1. Protokol, aynı anda ilaç etkinliği ve konak yanıtları test ederken önemli parametreler olan epitel bariyer bütünlüğü, makrofaj transmigration, bakteri sağkalım ve inflamasyon, değerlendirilmesi sağlar. Modeldeki yenilik, akut bakteriyel enfeksiyon (yani P. aeruginosa)</e...

Pseudomonas aeruginosa kistik fibrozis ilgili bir patojen (CF) akciğer dokusubozukluğukatkıda 1. Aljinat ve diğer mukoid eksopolisakkaritler gibi polisakkaritlerin üretimi, inatçı bakteriyel yapışmayol açar hastalığın ilerlemesini koordine eder, bakterilere antibiyotik teslim sınırlar ve konak bağışıklık sistemine karşı bakterileri korur2. P. aeruginosa'nın planktonik evreden biyofilm oluşumuna geçişi bu bağlamda kritik bir konudur ve antibiyotik toleransının oluşmasını da kolaylaştırmaktadır.
CF bağlamında, fare öncelikle bir model olarak kullanılmıştır. Ancak fareler CF mutasyonları3'ündevreye girmesiyle bu hastalığa kendiliğinden yakalanmazlar. Bakteriyel biyofilm gelişimi ve ilaç duyarlılık çalışmalarının çoğu Petri kapları gibi abiyotik yüzeylerde yapılmıştır. Ancak, bu yaklaşım in vivo karmaşıklığı temsil etmez. Örneğin, önemli biyolojik engeller, bağışıklık hücreleri yanı sıra mukozal epitel de dahil olmak üzere yoktur. P. aeruginosa epitel hücreleri için oldukça toksik olmasına rağmen, bazı gruplar insan bronşiyal hücreleri ile daha önceki bir P. aeruginosa biyofilm yetiştirmek başardık. Bu hücreler CFTR mutasyonu olan kistik fibrozis hastalarından (CFBE41o- cells)4 kökenli ve antibiyotik etkinliğini değerlendirmek için izin5 veya enfeksiyon sırasında CFTR protein düzeltme değerlendirmek için izin6. Böyle bir model uyuşturucu etkinliğinin öngörülebilirliğini artırmak için gösterilmiştir, ilaç geliştirme sonraki aşamalarında başarısız ilaçlar ile sorunların karakterizasyonu sağlayan ek olarak7.
Ancak, akciğerde, mukozal epitel havaya maruz kalır. Ayrıca, doku makrofajları gibi solunum yollarında bulunan bağışıklık hücreleri, solunan patojenler veya parçacıklara karşı önemli bir rol oynamaktadır8. Makrofajlar bronşiyal lümen ulaşmak ve enfeksiyon mücadele için farklı hücre katmanları üzerinden göç. Ayrıca, inhale ilaçlar da pulmoner hava-kan bariyeri ek bir hücresel olmayan unsur olarak mukus varlığı ile başa çıkmak zorunda9. Nitekim, birkaç karmaşık üç boyutlu (3D) in vitro modeller geliştirilmiştir, in vivo alaka artırmak amacıyla. Ortak kültür sistemleri sadece ilaç keşfi için in vitro sistemlerin karmaşıklığını artırmakla kalmıyor, aynı zamanda hücre-hücre etkileşimlerini de incelemeyi mümkün kılmasını sağlıyor. Bu tür karmaşıklık makrofaj göçü ile ilgili çalışmalarda ele alınmıştır10, nötrofiller tarafından antimikrobiyal peptidlerin serbest bırakılması11, enfeksiyonda mukus rolü9, ve aşırı hasara epitel hücre reaksiyonu12. Ancak, cf genetik mutasyon özellikleri güvenilir bir CF enfekte in vitro modeli, havaya maruz kalan (artan fizyolojik durum), ve bağışıklık hücreleri entegre hala eksik.
Bu boşluğu kapatmak için, enfekte hava yollarının istikrarlı insan 3D eş kültürü için bir protokol uyguluyoruz. Model insan CF bronşiyal epitel hücreleri ve makrofajlar oluşur, P. aeruginosa ile enfekte ve hem difüzyonel hem de immünolojik bariyer temsil yeteneğine sahip. Anti-enfektifleri makul derecede yüksek iş kaynağında test etmek amacıyla, bu ortak kültür iyi plaka kesici uçların geçirilebilir filtre zarı üzerinde iki insan hücresi hattı kullanılarak kurulmuştur: CFBE41o- ve THP-1 monosit türevi makrofajlar. Ayrıca, sonunda aerosolize anti-enfektifler birikimi çalışmaiçin 13, model hava-sıvı arayüzü (ALI) yerine sıvı kaplı koşullar (LCC) kurulmuştur.
Burada rapor olarak, Bu model sadece bir antibiyotik tedavisi üzerine bakteriyel sağkalım değil, aynı zamanda hücre sitotoksisitesi, epitel bariyer bütünlüğü, makrofaj transmigration ve inflamatuar yanıtları, ilaç gelişimi için gerekli parametreler olan değerlendirme sağlar.
Bu protokol pulmoner hava yollarının inhalasyon tedavisi için iki ilgili hücre tipini biraraya getirir: makrofajlar ve CF bronşiyal epitel. Bu hücreler geçirilme destek uçlarının zıt taraflarında tohumlanır ve hücrenin havaya maruz kalmasına izin verir (hava-sıvı arabirimi (ALI) koşulları olarak adlandırılır. Konak hücrelerin bu co-kültür daha sonra P. aeruginosaile enfekte . Her iki konak hücre hatları insan kökenlidir: epitel hücreleri kistik fibrozis bronşiyal epitel temsil, CF kanalında bir mutasyon ile (CFBE41o-), ve THP-114 hücreleri iyi karakterize makrofaj benzeri hücre hattı vardır. Makrofaj benzeri hücreler karşı bölmeye eklenmeden önce kuyu plaka uçlarının üst tarafında bir konfluent epitel tabakasının oluşmasına izin verilir. ALI'de ortak kültür kurulduktan sonra sistem apikal tarafta P. aeruginosa ile aşılanır. Bu enfekte co-kültür sistemi daha sonra bir antibiyotik etkinliğini değerlendirmek için kullanılır, örneğin tobramisin. Aşağıdaki son noktalar analiz edilir: transepitelyal elektrikdirenci (TEER), hücre-hücre ve hücre-bakteri etkileşimlerinin konfokal lazer tarama mikroskopisi (CLSM) ile görselleştirilmesi, koloni oluşturan birimlerin (CFU) sayılarak bakterisel sağkalım, konak hücre sağkalım (sitotoksisite) ve sitokin salınımı açısından epitel bariyer bütünlüğü.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1308px;" width="1306">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:515px;">Accutase</td>
			<td style="width:525px;">Accutase</td>
			<td style="width:205px;">AT104</td>
			<td style="width:63px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ampicillin</td>
			<td>Carl Roth, Germany</td>
			<td>HP62.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CASY TT Cell Counter and Analyzer</td>
			<td>OLS Omni Life Sciences</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CellTrace Far Red</td>
			<td>Thermo Fischer</td>
			<td>C34564</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Centrifuge Universal 320R</td>
			<td>Hettich, Germany</td>
			<td>1406</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="33">
			<td height="33" style="height:33px;">CFBE41o- cells</td>
			<td style="width:525px;">1. Gruenert Cell Line Distribution Program 
			2. Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:205px;">1. gift from Dr. Dieter C. Gruenert 
			2. SCC151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Chopstick Electrode Set for EVOM2, 4mm</td>
			<td>World Precision Instruments, Sarasota, USA</td>
			<td>STX2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Confocal Laser-Scanning Microscope CLSM</td>
			<td>Leica, Mannheim, Germany</td>
			<td>TCS SP 8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cytokines ELISA Ready-SET-Go kits</td>
			<td>Affymetrix eBioscience, USA</td>
			<td>15541037</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cytokines Panel I and II</td>
			<td>LEGENDplex Immunoassay (Biolegend, USA).</td>
			<td>740102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cytotoxicity Detection Kit (LDH)</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11644793001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">D-(+) Glucose</td>
			<td>Merck</td>
			<td>47829</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dako Fluorescence Mounting Medium</td>
			<td>DAKO</td>
			<td>S3023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DAPI (4&#8242;,6-diamidino-2-phenylindole)</td>
			<td>Thermo Fischer</td>
			<td>D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Epithelial voltohmmeter</td>
			<td>World Precision Instruments, Sarasota, USA</td>
			<td>EVOM2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Falcon Permeable Support for 12 Well Plate with 3.0&#956;m Transparent PET Membrane, Sterile</td>
			<td>Corning, Amsterdam, Netherlands</td>
			<td>353181</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fetal calf serum</td>
			<td>Lonza, Basel, Switzerland</td>
			<td>DE14-801F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Goat anti-mouse (H+L) Cross-adsorbed secondary Antibody, Alexa Fluor 633</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-21050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">L-Lactate Dehydrogenase (LDH), rabbit muscle</td>
			<td>Roche, Mannheim, Germany</td>
			<td>10127230001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">LB broth</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Germany</td>
			<td>L2897-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MEM (Minimum Essential Medium)</td>
			<td>Gibco Thermo Fisher Scientific Inc.</td>
			<td>11095072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Non-Essential Amino Acids Solution (100X)</td>
			<td>Gibco Thermo Fisher Scientific Inc.</td>
			<td>11140050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">P. aeruginosa strain PAO1</td>
			<td>American Type Culture Collection</td>
			<td>47085</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">P. aeruginosa strain PAO1-GFP</td>
			<td>American Type Culture Collection</td>
			<td>10145GFP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Paraformaldehyde Aqueous Solution -16%</td>
			<td>EMS DIASUM</td>
			<td>15710-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phosphate buffer solution buffer</td>
			<td>Thermo Fischer</td>
			<td>10010023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Petri dishes</td>
			<td>Greiner</td>
			<td>664102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA)</td>
			<td>Sigma, Germany</td>
			<td>P8139-1MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Precision Cover Glasses</td>
			<td>ThorLabs</td>
			<td>CG15KH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Purified Mouse anti-human ZO-1 IgG antibody</td>
			<td>BD Transduction Laboratories</td>
			<td>610966</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 medium</td>
			<td>Gibco by Lifetechnologies, Paisley, UK</td>
			<td>11875093</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Soda-lime glass Petri dish, 50 x 200 mm (height x outside diameter)</td>
			<td>Normax, Portugal</td>
			<td>5058561</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Saponin</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Germany</td>
			<td>S4521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">T75 culture flasks</td>
			<td>Thermo Fischer</td>
			<td>156499</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">THP-1 cells</td>
			<td>Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen (DSMZ; Braunschweig, Germany)</td>
			<td>No. ACC-16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tobramycin sulfate salt</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T1783-500MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trypsin-EDTA 0.05%</td>
			<td>Thermo Fischer</td>
			<td>25300054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tween80</td>
			<td>Sigma-Aldrich, Germany</td>
			<td>P1754</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

p. aeruginosa infected 3d co-culture of bronchial epithelial cells and macrophages at air-liquid interface for preclinical evaluation of anti-infectives

akciğer enfeksiyonlarının tedavisi için fDrug araştırma yüksek karmaşıklık tahmine dayalı in vitro modellerdoğru ilerliyor. Akciğer modellerinde bakterilerin çok yönlü varlığı epitel dizilişi yeniden adapte edebilir, bağışıklık hücreleri mikroortamda bakterilere karşı inflamatuar bir yanıt koordine ederken. In vivo modelleri kistik fibrozis bağlamında yeni anti-enfektifleri test etmek için tercih olsa da, hala doğru insanlarda bu tür hastalıkların in vivo koşulları ve tedavi sonuçları taklit etmez. İnsan hücrelerine (bronşiyal epitel ve makrofajlar) ve ilgili patojenlere dayalı enfekte hava yollarının kompleks in vitro modelleri bu boşluğu kapatabilir ve yeni anti-enfektiflerin kliniğe çevrilmesini kolaylaştırabilir. Bu amaçla, insan kistik fibrozis bronkil epitel hücre hattı CFBE41o bir co-kültür modeli- ve THP-1 monosit kaynaklı makrofajlar, hava-sıvı arayüzü (ALI) koşullarda P. aeruginosa tarafından insan bronşiyal mukoza bir enfeksiyon taklit kurulmuştur. Bu model yedi gün içinde ayarlanır ve aşağıdaki parametreler aynı anda değerlendirilir: epitel bariyer bütünlüğü, makrofaj transmigration, bakteriyel sağkalım, ve inflamasyon. Bu protokol, yeni anti-enfektifleri keşfetmek ve akciğerlere aerosol dağıtımını optimize etmek için uygun olabilecek ilaç etkinliğini ve konak yanıtlarını değerlendirmek için sağlam ve tekrarlanabilir bir sistemi tanımlar.

Şekil 1A, permeable desteklerin apikal ve bazolateral tarafında 24 saat büyüdükten sonra insan bronşiyal epitel hücrelerinin ve makrofajların ortaya çıkan eş kültürünün morfolojisini göstermektedir. Epitel bariyer bütünlüğü daha yüksek TEER (834 Ω×cm2) ve CLSM ile sıkı kavşak proteini ZO-1(Şekil 1B)için immünboyama ile gösterilir. Enfekte olmayan CFBE41o bariyer bütünlüğü açısından gözlenen aynı sonuçlar-...

Watch this Scientific Journal Video about P. aeruginosa Infected 3D Co-Culture of Bronchial Epithelial Cells and Macrophages at Air-Liquid Interface for Preclinical Evaluation of Anti-Infectives at Jo

P. aeruginosa Infected 3D Co-Culture of Bronchial Epithelial Cells and Macrophages at Air-Liquid Interface for Preclinical Evaluation of Anti-Infectives

Biz cfbe41o kullanarak enfekte hava yollarının üç boyutlu ortak kültür modeli için bir protokol tarif- hücreler, THP-1 makrofajlar, ve Pseudomonas aeruginosa, hava-sıvı arayüzü nde kurulan. Bu model aynı anda antibiyotik etkinliğini test etmek için yeni bir platform sağlar, epitel bariyer fonksiyonu, ve inflamatuar belirteçleri.

P. aeruginosa Anti-Enfektiflerin Klinik Öncesi Değerlendirilmesi Için Hava-Sıvı Arabiriminde Bronşiyal Epitel Hücrelerin in enfekte 3D Eş Kültür

fDrug research for the treatment of lung infections is progressing towards predictive in vitro models of high complexity. The multifaceted presence of ...

Bu yüzden yeni anti-enfektifleri değerlendirirken, iki şeye değinmemiz gerekir. Bir tarafı bakteri. Eğer planktonik veya bilgili biyofilmler ise, diğer tarafta konak hücrelerin varlığı, özellikle epitel konak hücreleri, sıkı biyolojik bariyerler oluşturan.Eğer bu engeller etkilenirse, monoolojik yanıtın nasıl olabileceği ve bu yeni modelle her iki parametreyi de aynı anda izleyebiliriz. Bakteriyel enfeksiyonları tedavi ederken, hangi organın etkilendiğini anlamamız gerekir. Örneğin, eğer akciğer ise, biz yararlanmak, ve topikal bir aerosol olarak ilaç yönetmek.Ancak, bunu incelemek için bir modele sahip olmak istiyorsak, modelimizde olduğu gibi aerosollerin pozisyonunu da sağlayan bir modele ihtiyacımız vardır. Diğer bir avantajı ise insan hücrelerine dayanması, böylece hayvanlar ve tür farklılıkları nedeniyle sorunları önleyebilmemizdir. Bu sistem, konak hücreleri ve bakterilerin etkileşimi sırasında moleküler ve hücresel olaylara ışık tutarak enfeksiyon araştırmaları alanında daha fazla bilgi verebilir.Bu protokolü ilk kez denerken, sterilite ve hücre morfolojisi için hücre ortamını kontrol etmeyi ve geçirimsiz destekleri kullanırken dikkatli olmayı unutmayın. %10 FCS, %1 esansiyel olmayan amino asitler ve litre başına 600 miligram içeren minimum esansiyel ortama sahip bir T 75 şişesinde CFBE41 O eksi hücreleri 37 santigrat derecede %5 karbondioksitle geliştirin. Her 2-3 günde bir hücrelere taze ortam ekleyin.Hücreler %70 birleştiğinde, 10 mililitre PBS ile yıkayın ve 37 santigrat derecede üç mililitre tripsin EDTA ile 15 dakika ayırın. Daha sonra, yedi mililitre taze MEM ekleyin ve hücreleri 4 dakika boyunca 300 kez G'de santrifüj edin. Supernatant attıktan sonra, MEM 10 mililitre, nazik pipetleme ile kümeleri bozarak.Hücreleri otomatik bir hücre sayacı veya Hemositometre odası ile sayın, sonra geçirimli destekler ile 12 kuyu plakaları tohumlama için 500 mikrolitre başına 200, 000 hücre konsantrasyonu onları seyreltmek. Geçirilebilir desteğin apikal tarafına kuyu başına hücre süspansiyonunun 500 mikrolitresini ekleyin. Sonra bazal lateral tarafına taze orta 1,5 mililitre ekleyin.Hücreleri 37 derecede ve %5 karbondioksitle 72 saat kuluçkaya yatırın. Tohumlama dan sonra üçüncü gün, bazal lateral tarafında ilk sonra apikal taraftan orta kaldırarak bir hava sıvı arabirimi oluşturun. Bazal lateral tarafa 500 mikrolitre taze MEM ekleyin ve hücreler bir eşzamanlı monolayer oluşturana kadar her iki günde bir orta değiştirin.Hücrelerin epitel bariyer özelliklerini değerlendirmek için, apikal tarafa hücre orta 500 mikrolitre ekleyin, ve bazal lateral tarafa 1.5 mililitre, sonra bir saat için kuvöz plaka döndü. Ann STX2 çubuk elektrot ve epitel volt ohm metre ile transit malzeme elektrik direnci veya TEER ölçün. THP1 hücreleri yetiştirmek için, RPMI 1640 orta kullanarak T 75 şişesinde büyümek, 37 santigrat derece ve% 5 karbondioksit% 10 FCS ile desteklenmektedir.Yeni bir T75 şişesinde mililitre başına 2 milyon hücre tohumlayarak hücreleri her iki günde bir bölün. THP1 hücrelerini ayırt etmek için, şişenin içeriğini 4 dakika boyunca 300 kez G'de santrifüj edin, süpernatant'ı atın. Taze ortamda pelet resuspend ve yeni bir T75 şişesi koymak.Hücrelere mililitre PMA başına 10 nanogram ekleyin ve onları kuvöze geri döndürün. Hücreler gibi makrofajı ayırmak için, 37 santigrat derecede PBS ile bir kez yıkayın ve oda sıcaklığında 10 dakika boyunca 0,5 milimolar EDTA içeren üç mililitre hücre ayırma çözeltisi ile kuluçkaya yatırın. Ters bir mikroskop altında hücre müfrezesi olup yok.Hücreler ayrıldığında, yedi mililitre taze orta ve santrifüj ekleyin ve dört dakika boyunca 300 kez G onları santrifüj. Supernatant çıkardıktan sonra, 15 mililitrekonik tüp THP1 orta üç mililitre makrofaj hücreleri resuspend, hücreleri saymak, ve ortak kültür kurmadan önce en fazla bir saat için onları kuluçka. Epitel makrofaj co-kültür kurmak için, CFBE41 O eksi monolayers alt odasından orta kaldırmak ve dikkatle steril bir cam Petri çanak içinde destek ters, membran gözenekleri ile büyümüş hücreleri kaldırmak için bir hücre kazıyıcı kullanın.Her kuyuda ters kesici kesici nin bazal lateral tarafına 200, 000 THP1 makrofajyerleştirin, Petri kaplarını kapatın ve iki saat kuluçkaya yatırın. Daha sonra kesici uçları 12 kuyu mikro plakaya geri yerleştirin ve geçirgen kesici ucun bazal lateral tarafına 500 mikrolitre MEM ortamı ekleyin. P aeruginosa tek bir koloni ile mililitre ampisilin başına 300 mikrogram ile desteklenen lb 15 mililitre aşılamak, PAO1GFP, 18 saat boyunca bakterileri kuluçkaya yatarak 37 santigrat derece, 180 RPM sallayarak iken.Kuluçkadan sonra bakterileri 50 mililitrelik konik bir tüpe aktarın ve 5 dakika boyunca 3, 850 kez G'de santrifüjler. Supernatant atın ve 37 santigrat derece önceden ısıtılmış olan steril PBS 10 mililitre ekleyin. Optik yoğunluğu 600 nanometre olarak ölçün ve hücre kültürü ortamı ile bakterilerin konsantrasyonunu mililitre başına 200,000 koloni oluşturan birim, epitel hücre başına bir bakteri enfeksiyonu çokluğu karşılık gelir nihai konsantrasyonu ayarlayın.Geçirilebilir desteğin apikal tarafına 100 mikrolitre bakteriyel süspansiyon ekleyin ve bakterilerin hücrelere bağlanmasına izin vermek için bir saat boyunca 37 santigrat derece ve %5 karbondioksit le plakayı kuluçkaya yatırın, ardından ALI koşullarını geri getirmek için bir pipetle apikal sıvıyı dikkatlice çıkarın. İlaç tedavisi ile deneyler için, apikal tarafına hücre orta seyreltilmiş bir ilaç çözeltisi 500 mikrolitre ekleyin. Sonra bazal lateral tarafına hücre orta 1.5 mililitre ekleyin.Atipik ve bazal lateral orta 500 mikrolitre toplamak ve bağlı olmayan bakterilerin CFU değerlendirmek için onları havuz. Bağlı veya içselleştirilmiş bakterilerin hayatta kalmasını değerlendirmek için, geçirilme desteğinin her bölmesine 500 mikrolitre steril deiyonize soğuk su ekleyin ve hücreleri oda sıcaklığında 30 dakika kuluçkaya yatırın. Dondurulmuş numunelerden CFU'u değerlendirirken, 37 derecede 10 dakika eritin.Daha sonra kuyulara çok fazla baskı yapmamaya dikkat ederek membran yüzeyini kazımak için pipet uçlarını kullanın. Tüm yapıştırılanan içeriği kaldırmak için pipet yukarı ve aşağı. Her iki fraksiyonları bakteriyel süspansiyon ile, PBS ara ile bir ila 10 seri seyreltme yapmak ve lb agar plakaları üzerinde bakteri plaka.Agar plakalarını 30 derecede 16 ila 72 saat kuluçkaya yatırın, sonra kolonileri sayın ve CFU'yu hesaplayın. Geçirgen desteklerin apikal ve fesleğen lateral tarafında insan bronşiyal epitel hücrelerinin ve makrofajların ortaya çıkan eş kültürünün morfolojisi burada gösterilmiştir. Sıkı kavşak proteinleri ZO1 için daha yüksek BIR TEER ölçümü ve immünboyama, epitel bariyer bütünlüğünü kanıtladı.Bir bakteriyel enfeksiyon modellemek için, P aeruginosa CFBE41 o eksi hücrelere aşılandı. Makrofajlar enfeksiyondan altı saat sonra eş kültürün apikal tarafında gözlendi. TEER santimetre karesi 250 ohm'a düşerek, ZO1 boyamanın da önerdiği bir epitel bariyerinin uzatıldığını gösteriyor.Permeable filtre gözenekleri ve apikal tarafında THP-1 hücreleri tarafından bakteri alımı ile makrofaj trans göç burada gösterilmiştir. THP-1 monokültürlerinde makrofaj göçü enfeksiyon sonrası bir saat kadar erkendir. Bu arada göç, ortak kültürdeki enfeksiyon dan üç saat sonra görüldü.Altı veya 20 saat boyunca tobramisin ile tedavi edilen enfekte ko-kültürler konfokal tarama lazer mikroskopisi ile görüntülendi. Tedavi olmadan, ya epitel hücreleri veya makrofajlar enfeksiyon 20 saat sonra öldü. Mikroskopi resimlerinde altı saatlik tedaviden sonra görülmesine rağmen, CFU'nun bir tonu bakterilerin çoğalmadığını göstermiştir.Yine de, bakteriler 20 saatlik tedaviden sonra çoğalma yeteneklerini geri kazandılar. Monokültürlerin TEER'i ve ortak kültürler de ölçüldü. THP-1 ile CFBE41 o eksi hücrelerin ortak kültürü monokültür ile karşılaştırıldığında epitel bariyer bütünlüğü herhangi bir değişiklik neden olmadı.Enfeksiyon üzerine TEER değeri düştü. Bu işlemi gerçekleştirirken, hücrelerin düzgün bir şekilde oturduğundan ve filtre zarının bozulmadığından emin olmak çok önemlidir. Bu nedenle hücre tohumlama adımlarını dikkatle yapılmalıdır.Bu protokole ek olarak, kesici uçlarda antibiyotiklerin nebülizasyonu, bakterilerin sağkalımlarının dalgıç koşullara göre değişip değişmeyeceğini görmek mümkün olacaktır.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

P. aeruginosa Infected 3D Co-Culture of Bronchial Epithelial Cells and Macrophages at Air-Liquid Interface for Preclinical Evaluation of Anti-Infectives

Co-culture Models of Pseudomonas aeruginosa Biofilms Grown on Live Human Airway Cells

Co-culture Models of Pseudomonas aeruginosa Biofilms Grown on Live Human Airway Cells

Co-kültür Modelleri Pseudomonas aeruginosa</emCanlı İnsan Havayolu Hücreler Yetiştirilen> Biyofilmler

Bacterial biofilms have been associated with a number of different human diseases, but biofilm development has generally been studied on non-living ...

Application of a Mouse Ligated Peyer&#x2019;s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

Application of a Mouse Ligated PeyerÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â€žÂ¢s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

Fare Uygulama M hücreleri tarafından Bakteriyel Alımı değerlendirin Peyer Patch Bağırsak Loop Testi bağlandı

The inside of our gut is inhabited with enormous number of commensal bacteria. The mucosal surface of the gastrointestinal tract is continuously exposed ...

Affinity Purification of Influenza Virus Ribonucleoprotein Complexes from the Chromatin of Infected Cells

Enfekte Hücre Kromatin gelen Gribi ribonükleoprotein Komplekslerinin Affinity Arıtma

Like all negative-strand RNA viruses, the genome of influenza viruses is packaged in the form of viral ribonucleoprotein complexes (vRNP), in which the ...

Determination of Tolerable Fatty Acids and Cholera Toxin Concentrations Using Human Intestinal Epithelial Cells and BALB/c Mouse Macrophages

İnsan Bağırsak Epitel Hücreleri ve BALB / c Fare makrofajlar kullanarak Tolere edilebilir yağ asitleri ve Kolera Toksin Konsantrasyonları belirlenmesi

The positive role of fatty acids in the prevention and alleviation of non-human and  human diseases have been and continue to be extensively documented. ...

Assessing the Innate Sensing of HIV-1 Infected CD4+ T Cells by Plasmacytoid Dendritic Cells Using an Ex vivo Co-culture System.

Assessing the Innate Sensing of HIV-1 Infected CD4+ T Cells by Plasmacytoid Dendritic Cells Using an Ex vivo Co-culture System.

HIV-1 Enfekte CD4 Doğuştan Algılama Değerlendirilmesi<sup&gt; +</sup&gt; Bir kullanılması plazmositoid dendritik hücreler tarafından T Hücreleri<em&gt; Ex vivo</em&gt; Co-kültür sistemi.

HIV-1 innate sensing requires direct contact of infected CD4+ T cells with plasmacytoid dendritic cells (pDCs). In order to study this process, the ...

Isolation of Human Monocytes by Double Gradient Centrifugation and Their Differentiation to Macrophages in Teflon-coated Cell Culture Bags

İnsan Çift Gradient Santrifüj ile Monositlerinde ve teflon kaplı Hücre Kültürü Çantalar Makrofagların Onların Farklılaşma İzolasyonu

Human macrophages are involved in a plethora of pathologic processes ranging from infectious diseases to cancer. Thus they pose a valuable tool to ...

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

Pseudomonas aeruginosa Kaynaklı Akciğer Hasarı Modeli

In order to study human acute lung injury and pneumonia, it is important to develop animal models to mimic various pathological features of this disease. ...

Assessing Bacterial Invasion of Cardiac Cells in Culture and Heart Colonization in Infected Mice Using Listeria monocytogenes

Assessing Bacterial Invasion of Cardiac Cells in Culture and Heart Colonization in Infected Mice Using Listeria monocytogenes

Listeria monocytogenes Kullanarak Enfekte Farelerde Kültür ve Kalp Kolonizasyonunda Kardiyak Hücrelerin Bakteriyel İstilasının Değerlendirilmesi

Listeria monocytogenes is a Gram-positive facultative intracellular pathogen that is capable of causing serious invasive infections in immunocompromised ...

High-throughput Quantitative Real-time RT-PCR Assay for Determining Expression Profiles of Types I and III Interferon Subtypes

Yüksek verim Kantitatif Gerçek zamanlı RT-PCR Testi Türleri I ve III İnterferon Alttipleriyle İfadesi Profilleri belirlenmesi için

Described in this report is a qRT-PCR assay for the analysis of seventeen human IFN subtypes in a 384-well plate format that incorporates highly specific ...

Isolation of Leukocytes from the Murine Tissues at the Maternal-Fetal Interface

Maternal Fetal Arayüz at Fare Dokular lökosit İzolasyonu

Immune tolerance in pregnancy requires that the immune system of the mother undergoes distinctive changes in order to accept and nurture the developing ...