Name: a planarian motility assay to gauge the biomodulating properties of natural products
Uploaded: 2020-05-30T14:00:00
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Os autores desejam reconhecer o escritório de Avanço Institucional, e a Morrisville College Foundation por uma bolsa de publicação para apoiar este trabalho, bem como o SUNY Morrisville Collegiate Science and Technology Entry Program (CSTEP) por sua assistência contínua e apoio à pesquisa de graduação na SUNY Morrisville. Também gostaríamos de agradecer sophia Hutchens por comentários úteis sobre a técnica descrita.

1. Criação planária
<ol><li>Use planários comprados de uma empresa de suprimentos biológicos ou capturados, se necessário. Os planários usados neste protocolo são Dugesia tigrina,conforme listado na lista de suprimentos. Esta espécie também é referida como Girardia tigrina31. Outras espécies planárias aquáticas também são aceitáveis2,3. NOTA: O protocolo descrito é voltado para animais comprados de ...

<ol>
	<li>Moustakas, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guarana+provides+additional+stimulation+over+caffeine+alone+in+the+planarian+model.">Guarana provides additional stimulation over caffeine alone in the planarian model.</a> PloS One. 10 (4), 0123310 (2015).</li><li>Raffa, R. B., Valdez, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cocaine+withdrawal+in+Planaria.">Cocaine withdrawal in Planaria.</a> European Journal of Pharmacology. 430 (1), 143-145 (2001).</li><li>Raffa, R. B., Holland, L. J., Schulingkamp, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+assessment+of+dopamine+D2+antagonist+activity+using+invertebrate+(Planaria)+locomotion+as+a+functional+endpoint.">Quantitative assessment of dopamine D2 antagonist activity using invertebrate (Planaria) locomotion as a functional endpoint.</a> Journal of Pharmacology and Toxicological Methods. 45 (3), 223-226 (2001).</li><li>Thum&#233;, I. S., Frizzo, M. 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M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sucrose+produces+withdrawal+and+dompamine-sensitive+reinforcing+effects+in+planarians.">Sucrose produces withdrawal and dompamine-sensitive reinforcing effects in planarians.</a> Physiology &amp; Behavior. , 8-13 (2013).</li><li>Zewde, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PLDT+(planarian+light/dark+test):+an+invertebrate+assay+to+quantify+defensive+responding+and+study+anxiety-like+effects.">PLDT (planarian light/dark test): an invertebrate assay to quantify defensive responding and study anxiety-like effects.</a> Journal of Neuroscience Methods. 293, 284-288 (2018).</li><li>Risse, B., Otto, N., Berh, D., Jiang, X., Kl&#228;mbt, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FIM+Imaging+and+FIMtrack:+two+new+tools+allowing+high-throughput+and+cost+effective+locomotion+analysis.">FIM Imaging and FIMtrack: two new tools allowing high-throughput and cost effective locomotion analysis.</a> Journal of Visualized Experiments. (94), e52207 (2014).</li><li>Inoue, T., Hoshino, H., Yamashita, T., Shimoyama, S., Agata, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Planarian+shows+decision-making+behavior+in+response+to+multiple+stimuli+by+integrative+brain+function.">Planarian shows decision-making behavior in response to multiple stimuli by integrative brain function.</a> Zoological Letters. 1, 7 (2015).</li><li>Hastrom, D., Cochet-Escartin, O., Zhang, S., Khuu, C., Collins, E. M. 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A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+organ+trail:+insights+into+organ+regeneration+in+the+planarian.">On the organ trail: insights into organ regeneration in the planarian.</a> Current Opinion in Genetics &amp; Development. 32, 37-46 (2015).</li><li>Ivancovic, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Model+systems+for+regeneration:+planarians.">Model systems for regeneration: planarians.</a> Development. 146 (17), 167684 (2019).</li><li>Herath, S., Lobo, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-inhibition+of+Turing+patterns+explains+the+self-organized+regulatory+mechanism+of+planarian+fission.">Cross-inhibition of Turing patterns explains the self-organized regulatory mechanism of planarian fission.</a> Journal of Theoretical Biology. 485, 110042 (2019).</li><li>Itoh, M. T., Shinozawa, T., Sumi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+rhythms+of+melatonin-synthesizing+enzyme+activities+and+melatonin+levels+in+planarians.">Circadian rhythms of melatonin-synthesizing enzyme activities and melatonin levels in planarians.</a> Brain Research. 830 (1), 165-173 (1999).</li><li>Itoh, M. T., Igarashi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+rhythm+of+serotonin+levels+in+planarians.">Circadian rhythm of serotonin levels in planarians.</a> Neuroreports. 11 (3), 473-476 (2000).</li><li>Hinrichsen, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photosensitivity+and+motility+in+planarian+Schmedtea+mediterranea+vary+diurnally.">Photosensitivity and motility in planarian Schmedtea mediterranea vary diurnally.</a> Chronobiology International. 36 (12), 1789-1793 (2019).</li><li>Raffa, R. B., Desai, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Description+and+quantification+of+cocaine+withdrawal+signs+in+planaria.">Description and quantification of cocaine withdrawal signs in planaria.</a> Brain Research. 1032 (1-2), 200-202 (2005).</li><li>Pag&#225;n, O. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+cembranoid+from+tobacco+prevents+the+expression+of+induced+withdrawal+behavior+in+planarian+worms.">A cembranoid from tobacco prevents the expression of induced withdrawal behavior in planarian worms.</a> European Journal of Pharmacology. 615 (1-3), 118-124 (2009).</li><li>Rawls, S. M., Patil, T., Yuvasheva, E., Raffa, R. 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R., Montgomery, E., Deats, S., Bach, D., Baker, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+of+nicotine-induced,+curare-sensitive,+behavior+in+planarians.">Evidence of nicotine-induced, curare-sensitive, behavior in planarians.</a> Neurochemical Research. 40 (10), 2087-2090 (2015).</li><li>Shibata, N., Agata, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+interference+in+planarians:+feeding+and+injection+of+synthetic+dsRNA.">RNA interference in planarians: feeding and injection of synthetic dsRNA.</a> Methods in Molecular Biology. 1774, 455-466 (2018).</li><li>Pag&#225;n, O. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversal+of+cocaine-induced+planarian+behavior+by+parthenolide+and+related+sesquiterpene+lactones.">Reversal of cocaine-induced planarian behavior by parthenolide and related sesquiterpene lactones.</a> Pharmacology Biochemistry and Behavior. 89 (2), 160-170 (2008).</li><li>Vouga, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stereochemistry+and+neuropharmacology+of+a+'bath+salt'+cathinone:+S-enantiomer+of+mephedrone+reduces+cocaine-induced+reward+and+withdrawal+in+invertebrates.">Stereochemistry and neuropharmacology of a 'bath salt' cathinone: S-enantiomer of mephedrone reduces cocaine-induced reward and withdrawal in invertebrates.</a> Neuropharmacology. 91, 109-116 (2015).</li><li>Chan, J. D., Marchant, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+and+functional+genetic+assays+to+manipulate+regeneration+of+the+planarian+Dugesia+japonica.">Pharmacological and functional genetic assays to manipulate regeneration of the planarian Dugesia japonica.</a> Journal of Visualized Experiments. (54), e3058 (2011).</li></ol>

Um ensaio de motilidade planária simples e acessível é descrito para determinar os efeitos estimulantes e de retirada de produtos naturais. Como modelo comportamental é necessário ter protocolos rigorosos para marcar movimento e definições claras de quaisquer comportamentos para padronizar observações entre diferentes experimentadores. As ideias apresentadas oferecem uma demonstração de como isso pode ser alcançado. Cada laboratório que utilizar este protocolo deve adaptar as informações apresentadas para ...

O protocolo descrito utiliza motilidade planária para fornecer um meio de avaliar os efeitos biomoduladores das substâncias naturais. Foi especificamente adaptado para determinar se essas substâncias funcionam como estimulantes, e se elas foram então associadas a um comportamento de retirada mensurável1. Este ensaio, conhecido como teste de velocidade locomotor planária (pLmV), foi usado pela primeira vez para testar os conhecidos agentes farmacológicos2,3. A aplicação deste ensaio planário baseado em motilidade tem crescido desde então em popularidade e tem sido adotada por diferentes laboratórios interessados em outras substâncias além dos produtos naturais4,,5. Para este ensaio, um planário é colocado em uma placa de Petri contendo água de nascente ou água de nascente contendo um biomodulador dissolvido. Como o prato em si é colocado em papel gráfico, o número de linhas de grade cruzadas pelo animal com o tempo à medida que se move sobre o recipiente pode ser usado para determinar a taxa de movimento em cada condição. O teste claro/escuro, também chamado de teste de preferência de local condicionado (CPP), é outra variação sobre o tema do monitoramento da motilidade planária, e avalia a rapidez com que os animais respondem e migram para um ambiente escurecido6,7. O rastreamento de vídeo dos movimentos planários também pode ser analisado usando programas de computador e rastreamento do Centro de Massa (COM)8,,9,,10,,11.
Usar o planário como modelo animal para tais estudos oferece várias vantagens sobre outros animais, pois o experimentador pode facilmente controlar o ambiente de ensaio. Especificamente, passar fome aos planários antes da experimentação pode impedir sua exposição a outros agentes nutricionais ou farmacológicos que poderiam confundir os resultados, e o biomodulador específico sob investigação pode ser introduzido aos planários simplesmente adicionando-o diretamente à água da cultura, padronizando assim a exposição. Como os planários possuem um sistema nervoso e neurotransmissores que lembram animais de "alta ordem", a fisiologia e as respostas experimentais desses animais a estímulos neuromusculares são consideradas biologicamente relevantes para outros organismos12,,13,,14,,15,16. Além disso, como os planários são relativamente baratos e diretos de manter em laboratório, eles oferecem um modelo biológico acessível para muitos pesquisadores.
Como um animal experimental, os planários são adequados para uma ampla gama de estudos. Por exemplo, nosso grupo, assim como outros pesquisadores usam planários para estudar tumorigênese17,,18,,19. Os planários também exibem uma série de comportamentos de resposta a estímulos químicos, térmicos, gravitacionais, elétricos, fotográficos e magnéticos que formaram a base de outros sistemas de ensaio. Alguns desses efeitos têm sido utilizados para estudar a aprendizagem e a memória nesses animais20,21,22,23,24,25,26,27. O uso primário do modelo planário na literatura atualmente enfoque na atividade de células-tronco pluripotentes planárias, chamadas neoblastos, e seu papel na regeneração28,,29,30. Assim, a adoção do modelo aqui descrito permite um estudo mais aprofundado usando outros ensaios baseados em planários para fornecer uma compreensão mais ampla de como produtos naturais e outros biomoduladores afetam o organismo.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>Bottled Water - 1 Gal.</td>
			<td>Poland Spring</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Spring water for planarian culture and to prepare solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brown Planaria (Dugesia tigrina)</td>
			<td>Carolina Biological Supply Company</td>
			<td>132954</td>
			<td>Brown planaria living (other species are acceptable)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flat Paintbrush</td>
			<td>Royal Crafter&#39;s Choice</td>
			<td>9159</td>
			<td>Flat watercolor paintbrushes for cleaning planarian culture containers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Petri Dish - 10 cm</td>
			<td>Kimax</td>
			<td>N/A</td>
			<td>10 cm diameter (glass) Petri dishes for pLmV assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Petri Dish - 5 cm</td>
			<td>Kimax</td>
			<td>N/A</td>
			<td>5 cm and Petri dishes for rinsing planarians during withdrawal experiments and for stimulant habituation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Grid Paper</td>
			<td>Any</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Standard 0.5 cm grid paper for pLmV assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>iPEVO Visualizer (software)</td>
			<td>iPEVO</td>
			<td>https://www.ipevo.com/software/visualizer</td>
			<td>Document camera software for video capture and recording</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metalware Set with Support Stand and Retort Ring</td>
			<td>Any</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Standard chemistry lab ring stand to hold a cell phone camera if used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Organic Egg</td>
			<td>Any</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Organic egg or beef liver for feeding planarains</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polycarbonate Bottle w/ Screw-on Cap - 10 mL</td>
			<td>Beckman</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Plastic vials to hold 5 to 10 mL volumes for stimulant habituation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round Storage Container - 10 cm</td>
			<td>Ziploc</td>
			<td>N/A</td>
			<td>10 cm Round food storage containers for approximately 90 planarians or fewer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round Water Paint Brush</td>
			<td>LOEW-Cornell</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Small round watercolor paint brushes (numbers 3 to 6) - soft</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer Pipette</td>
			<td>Any</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Wide bore (5 mL) plastic transfer pipettes to move planarians</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>USB Document Camera</td>
			<td>iPEVO</td>
			<td>CDVU-06IP</td>
			<td>Document camera (or other camera or cell phone camera)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a planarian motility assay to gauge the biomodulating properties of natural products

Um meio simples e controlável de usar o planário não parasitário, Dugesia tigrina, um verme aquático de vida livre, para estudar as propriedades estimulantes e de retirada de produtos naturais é descrito. Ensaios experimentais que se beneficiam de aspectos únicos da fisiologia planária têm sido aplicados a estudos sobre cicatrização de feridas, regeneração e tumorigênese. Além disso, como os planários apresentam sensibilidade a uma variedade de estímulos ambientais e são capazes de aprender e desenvolver respostas condicionadas, eles podem ser usados em estudos comportamentais que examinam a aprendizagem e a memória. Os planários possuem uma simetria bilateral básica e um sistema nervoso central que usa sistemas neurotransmissores favoráveis a estudos que examinam os efeitos dos biomoduladores neuromusculares. Consequentemente, sistemas experimentais que monitoram o movimento planário e a motilidade foram desenvolvidos para examinar o vício e a retirada de substâncias. Como a motilidade planária oferece o potencial de um sistema de ensaio de motilidade sensível e facilmente padronizado para monitorar o efeito dos estímulos, o teste de velocidade locomotor (pLmV) planário foi adaptado para monitorar tanto comportamentos de estimulação quanto de retirada por planários através da determinação do número de linhas de grade cruzadas pelos animais com o tempo. Aqui, a técnica e sua aplicação são demonstradas e explicadas.

O laboratório configurado e a preparação do espaço de trabalho para execução do ensaio pLmV devem ser concluídos antes do início da experimentação. Isso inclui a preparação do recipiente de habitação, o recipiente de lavagem, se necessário (para experimentos de retirada), placa de Petri sobre papel de grade laminada e câmera devidamente colocada(Figura 1). Uma vez que todos os vídeos são feitos, é aconselhável usar uma folha de dados comum para padronizar a coleta e apres...

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A Planarian Motility Assay to Gauge the Biomodulating Properties of Natural Products

A motilidade planária é usada para medir as propriedades estimulantes e de retirada de produtos naturais quando comparadas com o movimento dos animais apenas na água da nascente.

Um ensaio planário de motilidade para medir as propriedades biomodulantes de produtos naturais

A straightforward, controllable means of using the non-parasitic planarian, Dugesia tigrina, a free-living aquatic flatworm, to study the stimulant and ...

O Teste de Velocidade Locomotor Planarian é um meio para avaliar rapidamente os efeitos estimulantes e possíveis de retirada para uma variedade de agentes modificadores biológicos que podem afetar a motilidade. Este ensaio é facilmente controlado e fornece um método simples e acessível para gerar dados comportamentais confiáveis até mesmo nas configurações de pesquisa mais básicas. Uma vez que o sistema nervoso planário tem um cérebro rudimentar centralizado, uma simetria bilateral e sistemas neurotransmissores análogos, estudos comportamentais usando esses organismos oferecem insights pré-clínicos sobre possíveis respostas de vertebrados.Experimentos podem ser ainda mais afetados por modificadores fisiológicos, drogas ou mesmo planários geneticamente modificados para fornecer informações sobre os mecanismos biológicos associados. É importante ter o planário para que as transferências entre os contêineres não os enfatizem e padronizem as curvas da linha de grade entre os membros do laboratório. A melhor maneira de obter resultados consistentes a partir deste experimento de ensaio comportamental, é vendo como os usuários experientes os realizaram.Depois de criar uma cultura planária, alimente os vermes ad libitum em um cronograma regular duas vezes por semana de ovos cozidos orgânicos picados ou fígado de carne orgânica misturado por uma a duas horas. Após a alimentação, remova qualquer água suja do recipiente e use uma escova de tinta de aquarela plana para transferir quaisquer detritos alimentares e lodo aderindo ao recipiente para uma toalha de papel. Use água de nascente fresca e suave rodopiagem ou agitação para desalojar os planários e descampar os vermes em um recipiente limpo.Deslize uma dica de pipeta larga sob quaisquer planários que permaneçam aderidos ao recipiente antigo para facilitar sua transferência para o novo prato e decantar cuidadosamente a água de transferência. Em seguida, cubra os planários no novo recipiente com água fresca da fonte. Para realizar um Teste de Velocidade Locomotor Planarian, primeiro assegure-se de que os planários famintos de cinco a dez dias estejam totalmente formados com cabeças e caudas completas e pigmentadas.Se os planários estiverem prontos coloque uma placa de Petri de 10 centímetros de diâmetro limpo em um pedaço de papel de grade pré-laminado com quadrados de 0,5 centímetros por grupo experimental e adicione 20 mililitros de água de mola não adulterada para o grupo controle ou 20 mililitros de água de nascente contendo a concentração apropriada do produto natural que está sendo testado em cada prato. Posicione uma câmera acima da placa de estimulação de velocidade locomotor preparada e adicione cinco a 10 mililitros de água de nascente não adulterada ou água de nascente contendo a concentração apropriada do composto experimental a um recipiente de habitação de tamanho apropriado. Em seguida, use uma pequena escova de tinta de aquarela limpa para transferir suavemente um planário do recipiente de cultura para o recipiente de habitação preparado e permitir que o planário se habituar à solução no recipiente por dois minutos.A pesquisa permitirá que os planários se movam para o mato e levantem cuidadosamente os animais sem forçá-los. Ao final do período de habituação, use o pincel para transferir cuidadosamente o planário para o centro do prato de estimulação de velocidade locomotor preparado contendo a mesma solução do recipiente de habitação e inicie a câmera para gravar de 10 a 11 minutos de movimento do planário. Para testar os efeitos da retirada ao final do período de habituação, enxágue o planário em um prato de cinco centímetros contendo apenas água de nascente.Antes de transferir o verme para o centro do prato de velocidade locomotor preparado contendo água de mola fresca e iniciar a câmera para gravar 10 a 11 minutos de movimento. A configuração da câmera permite uma visão clara do planário e do papel da grade e permite uma avaliação precisa do progresso do animal durante a duração do experimento. A coleta de dados deve incluir o número total de linhas de grade cruzadas, bem como o número total acumulado de linhas cruzadas por minuto do experimento.Para padronizar os resultados de cada ensaio, as velocidades locomotores planárias podem ser calculadas e traçadas à medida que o número de caixas cruzadas em relação ao progresso do worm de controle correspondente. Como referência, os planários em água de nascente normalmente cobrem aproximadamente 25 caixas em três minutos. Uma série de concentrações de reagentes de teste podem ser examinadas para determinar a motilidade planária em resposta aos compostos de teste de interesse.Os dados de retirada podem ser avaliados quantificando o número de linhas de rede cruzadas em águas de nascente em relação ao controle de água da nascente após a habitaçãoria no produto bio modulador que está sendo examinado. Os planários de controle de água da primavera se movem sobre as linhas de rede durante a duração do experimento. Às vezes, porém, os planários de teste deixam de cruzar linhas de grade durante o ensaio com comportamentos característicos do produto que está sendo testado.Isso sugere que um método diferente de análise pode ser necessário. Tais instâncias podem ser rastreadas e os dados podem ser ilustrados como a porcentagem do número total de animais expostos a uma determinada concentração de reagentes. É essencial lidar com o planário para que eles não sejam danificados durante a transferência entre os pratos.Após determinar os efeitos de diferentes concentrações de um produto natural, modificadores de vias biológicas podem ser adicionados para observar quaisquer alterações dinâmicas nos resultados iniciais. O Teste de Velocidade Locomotor Planarian foi usado para testar estimulação e retirada usando agentes farmacológicos conhecidos. Adaptamos o sistema para estudar esses mesmos conceitos com produtos naturais.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

A Rapid Laser Probing Method Facilitates the Non-invasive and Contact-free Determination of Leaf Thermal Properties

A Laser rápida Sondagem Método facilita a determinação não invasiva e sem contato das propriedades térmicas da folha

Plants can produce valuable substances such as secondary metabolites and recombinant proteins. The purification of the latter from plant biomass can be ...

Bioquímica

Preparation of Giant Vesicles Encapsulating Microspheres by Centrifugation of a Water-in-oil Emulsion

Preparação de gigantes Vesículas Encapsulamento microesferas por centrifugação de uma emulsão de água-em-óleo

The constructive biology and the synthetic biology approach to creating artificial life involve the bottom-up assembly of biological or nonbiological ...

Assay for Phosphorylation and Microtubule Binding Along with Localization of Tau Protein in Colorectal Cancer Cells

Ensaio para fosforilação e vinculação de Microtubule juntamente com a localização da proteína Tau em células de cancro colo-rectal

The microtubule-associated protein tau is a neuronal protein that localizes mostly in axons. Generally tau is essential for normal neuronal functioning ...

A High-Throughput Luciferase Assay to Evaluate Proteolysis of the Single-Turnover Protease PCSK9

Um ensaio de Luciferase de alto rendimento para avaliar a proteólise de PCSK9 a Protease Single-volume de negócios

Proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 (PCSK9) is a single-turnover protease which regulates serum low-density lipoprotein (LDL) levels and, ...

A Customizable Approach for the Enzymatic Production and Purification of Diterpenoid Natural Products

Uma abordagem personalizável para a produção enzimática e purificação de produtos naturais de Diterpenóides

Diterpenoids form a diverse class of small molecule natural products that are widely distributed across the kingdoms of life and have critical biological ...

A Semi-High-Throughput Adaptation of the NADH-Coupled ATPase Assay for Screening Small Molecule Inhibitors

Uma adaptação semi-high-throughput do ensaio ATPase NADH-acoplado para a seleção de inibidores pequenos da molécula

ATPase enzymes utilize the free energy stored in adenosine triphosphate to catalyze a wide variety of endergonic biochemical processes in vivo that would ...

Labelling and Visualization of Mitochondrial Genome Expression Products in Baker's Yeast Saccharomyces cerevisiae

Labelling and Visualization of Mitochondrial Genome Expression Products in Baker's Yeast Saccharomyces cerevisiae

Rotulagem e Visualização de Produtos de Expressão do Genoma Mitocondrial no Saccharomyces cerevisiae de Levedura de Baker

Mitochondria are essential organelles of eukaryotic cells capable of aerobic respiration. They contain circular genome and gene expression apparatus. A ...

Motility of Single Molecules and Clusters of Bi-Directional Kinesin-5 Cin8 Purified from S. cerevisiae Cells

Motility of Single Molecules and Clusters of Bi-Directional Kinesin-5 Cin8 Purified from S. cerevisiae Cells

Motilidade de Moléculas Únicas e Aglomerados de Kinesin-5 Cin8 Bidiso

The mitotic bipolar kinesin-5 motors perform essential functions in spindle dynamics. These motors exhibit a homo-tetrameric structure with two pairs of ...

Reconstitution of Septin Assembly at Membranes to Study Biophysical Properties and Functions

Reconstituição da Assembleia septina em membranas para estudar propriedades e funções biofísicas

Most cells can sense and change their shape to carry out fundamental cell processes. In many eukaryotes, the septin cytoskeleton is an integral component ...

Shotgun Lipidomics of Rodent Tissues

Shotgun Lipidômica de Tecidos de Roedores

Lipids play a vital role as essential components of all prokaryotic and eukaryotic cells. Constant technological improvements in mass spectrometry have ...