Name: quantifying tissue-specific proteostatic decline in caenorhabditis elegans
Uploaded: 2021-09-07T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantifying Tissue-Specific Proteostatic Decline in Caenorhabditis elegans at JoVE.com

We willen graag voormalige en huidige leden van het Samuelson-laboratorium bedanken voor hun hulp bij de verfijning van deze methode en / of discussie die de ontwikkeling van dit manuscript heeft geholpen. Onderzoek gerapporteerd in deze publicatie werd ondersteund door het National Institute on Aging van de National Institutes of Health onder awardnummers RF1AG062593 en R21AG064519. De inhoud is uitsluitend de verantwoordelijkheid van de auteurs en vertegenwoordigt niet noodzakelijkerwijs de officiële standpunten van de National Institutes of Health. De financiers hadden geen rol in het ontwerp van de studie, het verzamelen en analyseren van gegevens, de beslissing om te publiceren of de voorbereiding van het manuscript.

1. Bereiding van reagentia
<ol><li>Selecteer genen die van belang zijn om te worden geïnactiveerd via op voeding gebaseerde RNAi. Koop voorraden HT115 E. coli met daarin de RNAi-kloon van belang20. Als alternatief subclone het cDNA van het gen van belang in de multicloning site van de L4440 plasmide. OPMERKING: Om afbraak van dsRNA in de bacteriën te voorkomen, gebruikt u de HT115-stam. Dit is een RNase III-deficiënte E. coli-stam met IPTG-induceerbare T7-polymerase-activ...

Veroudering wordt gekenmerkt door een geleidelijke afname van proteostase. Proteostase wordt onderhouden door een complex systeem, het proteostatische netwerk, voor de gecoördineerde, dynamische, stressresponsieve controle van eiwitvouwing, -afbraak en -translatie. Waarom proteostase faalt in de loop van het ouder worden is slecht begrepen, maar een rottend epigenoom, afnemende induceerbaarheid van stressreacties en verlies van compenserende overspraak vallen allemaal samen met deze afbraak. Bij C. elegans neem...

Eiwithomeostase (proteostase) wordt gedefinieerd als het cellulaire vermogen om de juiste functie en vouwing van het proteoom te behouden. De inherente uitdaging voor proteostase is ervoor te zorgen dat alle eiwitten goed worden gevouwen en onderhouden in een inheemse conformatie, die verder wordt versterkt door de gevarieerde aard van eiwitgrootte, aminozuursamenstelling, structurele conformatie, stabiliteit, omzet, expressie, subcellulaire compartimentering en modificaties1. Proteostase wordt gehandhaafd door de gecoördineerde werking van een groot proteostatisch netwerk, bestaande uit ongeveer 2000 unieke eiwitten, die de juiste synthese, vouwing, handel en afbraak binnen het proteoomreguleren 2,3. De werkpaardcomponenten van het proteostatische netwerk zijn negen belangrijke families van moleculaire chaperones4. Elk weefsel- en celtype maakt bij voorkeur gebruik van specifieke subsets van moleculaire chaperones, vermoedelijk in overeenstemming met de verschillende eisen van verschillende proteomen5.
Een kenmerk van normale organismale veroudering is de progressieve afname en ineenstorting van cellulaire proteostase, waarvan wordt gedacht dat het een onderliggende basis is voor het begin en de progressie van een groeiend aantal leeftijdsgebonden ziekten. De ziekte van Alzheimer, de ziekte van Parkinson, de ziekte van Huntington en Amyotrofische Laterale Sclerose (ALS) hebben bijvoorbeeld een gemeenschappelijk kenmerk: in elk geval wordt manifestatie van neurodegeneratie aangedreven door genetische veranderingen die een gemuteerd eiwit vatbaar maken voor aggregatie (respectievelijk amyloïde-β / Tau, α-synucleïne, HTT, FUS / TBD-43 / SOD-1)6,7,8,9,10 . Tijdens veroudering neemt de integriteit en induceerbaarheid van het proteostatische netwerk af, wat resulteert in de accumulatie van proteotoxische aggregaten die resulteren in cellulaire disfunctie en neurodegeneratie. Van belang is dat eiwit conformatieziekten niet uniek zijn voor neuronen en voorkomen in meerdere weefsels, zoals benadrukt door type II diabetes, multipel myeloom en cystische fibrose11,12,13,14. Daarom zal het ophelderen van mechanismen die in staat zijn om proteostase te behouden, de ontwikkeling van gerichte interventies voor de behandeling van ziekten en om gezond ouder worden te bevorderen, vergemakkelijken.
De kleine bodemnematode Caenorhabditis elegans (C. elegans) heeft een belangrijke rol gespeeld bij het ontdekken van genen en het ophelderen van routes die de proteostase veranderen. Veel componenten van het proteostatische netwerk en de signaaltransductieroutes die de proteostase reguleren, zijn evolutionair geconserveerd. Bovendien heeft C. elegans de complexiteit en redundantie ten opzichte van gewervelde systemen verminderd, waardoor het meer vatbaar is voor genetische analyse en genontdekking. Bijkomende voordelen van C. elegans die ertoe hebben geleid dat het op grote schaal wordt gebruikt als een modelsysteem om proteostase te bestuderen, zijn onder meer: krachtige genetische en functionele genomica, een korte levenscyclus (3 dagen) en levensduur (3 weken), een compact en goed geannoteerd genoom, de beschikbaarheid van een breed assortiment genetische mutanten en het gemak van het visualiseren van weefselspecifieke veranderingen in de celbiologie met behulp van fluorescerende reporters.
Het progressieve verval van proteostase tijdens veroudering kan gemakkelijk worden gekwantificeerd in C. elegans. Het Morimoto-laboratorium toonde voor het eerst aan dat een polyglutamine-expansie gefuseerd tot geel fluorescerend eiwit (polyQ: : YFP) kon worden gebruikt om proteostatische afname van C. elegans tijdens veroudering15,16,17,18te kwantificeren. YFP-fusies tot 35 glutamine-herhalingen of meer resulteren in een leeftijdsgebonden vorming van fluorescerende foci samen met tekenen van cellulaire pathologie. Van belang is dat dit bereik van glutamine-expansie de lengte weerspiegelt van het polyglutaminekanaal van het huntingtine-eiwit waarbij de pathologie van de ziekte van Huntington bij mensen begint te worden waargenomen (meestal >35 CAG-herhalingen)19. Stammen met expressie van polyQ::YFP in spier-, darm- of neuronale cellen zijn gebruikt om te bevestigen dat de leeftijdsgebonden achteruitgang van proteostase optreedt in verschillende cel- en weefseltypen. Spierspecifieke polyQ::YFP-expressie (d.w.z. unc-54p::Q35::YFP) is de meest gebruikte weefselspecifieke verslaggever, omdat accumulerende fluorescerende foci gemakkelijk te kwantificeren zijn gedurende de eerste paar dagen van de volwassenheid met behulp van een eenvoudige fluorescerende ontleedmicroscoop (Figuur 1A-1B). Bovendien raken dieren verlamd tijdens het midden van het leven, omdat het proteoom in de spier instort als gevolg van het proteotoxische effect van de verslaggever (figuur 1C). Evenzo kan de leeftijdsgebonden afname van neuronale proteostase worden gevolgd (rgef-1p::Q40::YFP) door het direct kwantificeren van foci/aggregaatvorming en leeftijdsgebonden afnames in gecoördineerde lichaamsbuigingen na het plaatsen van dieren in vloeistof(Figuur 2).
Hier presenteren we een gedetailleerd protocol over het meten van de leeftijdsafhankelijke progressie van eiwitaggregatieaccumulatie en de bijbehorende proteotoxiciteit geïnduceerd door de expressie van polyglutamineherhalingen in neuronaal en spierweefsel in C. elegans. We geven voorbeelden van typische resultaten die worden gegenereerd met behulp van deze stammen en methoden. Verder laten we zien hoe we deze methoden hebben gebruikt om transcriptionele regulatie van het proteostatische netwerk te bestuderen. We bespreken aanvullende manieren waarop deze reporters eenvoudig kunnen worden geïntegreerd met andere bestaande reagentia of kunnen worden aangepast voor grotere schermen.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>24 Well Culture Plates</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>#662102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 mL 96-well plates</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>#780286</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>600 &#181;L 96-well plates</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>#786261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-pin plate replicator</td>
			<td>Nunc</td>
			<td>250520</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Air-permeable plate seal</td>
			<td>VWR</td>
			<td>60941-086</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>bacteriological agar</td>
			<td>Affymetrix/USB</td>
			<td>10906</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>bacto-peptone</td>
			<td>VWR</td>
			<td>90000-368</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C. elegans RNAi clone library in HT115 bacteria- Ahringer</td>
			<td>Source Bioscience</td>
			<td>C. elegans RNAi Collection (Ahringer)</td>
			<td>See also Kamath et. al, Nature 2003.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C. elegans RNAi clone library in HT115 bacteria- Vidal</td>
			<td>Source Bioscience</td>
			<td>C. elegans ORF-RNAi Resource (Vidal)</td>
			<td>See also Rual et. al, Genome Research 2004. This library is also available from Dharmacon.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FuDR (5-Fluoro-2&#39;-deoxyuridine)</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>L16497</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass microscope cover slips</td>
			<td>VWR</td>
			<td>48404-455</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass microscope slides</td>
			<td>VWR</td>
			<td>160004-422</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IPTG (isopropyl beta-D-1-thigalactopyranoside)</td>
			<td>Gold Bio</td>
			<td>12481C100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Retangular non-treated single-well plate, 128x86mm</td>
			<td>Thermo-Fisher</td>
			<td>242811</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Azide, CAS #26628-22-8</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S2002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss Axio Imager M2m microscope with AxioVision v4.8.2.0 software</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>unknown</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss StemiSV11 M2 Bio Quad microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>unknown</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantifying tissue-specific proteostatic decline in caenorhabditis elegans

Het vermogen om een goede functie en vouwing van het proteoom (eiwithomeostase) te behouden, neemt af tijdens normale veroudering, waardoor het begin van een groeiend aantal leeftijdsgebonden ziekten wordt vergemakkelijkt. Eiwitten met polyglutamine-uitbreidingen zijn bijvoorbeeld gevoelig voor aggregatie, zoals geïllustreerd met het huntingtine-eiwit en het gelijktijdige begin van de ZvH. De leeftijdsgebonden verslechtering van het proteoom is op grote schaal bestudeerd door het gebruik van transgene Caenorhabditis elegans die polyQ-herhalingen tot expressie brengen die zijn gefuseerd met een geel fluorescerend eiwit (YFP). Dit polyQ::YFP transgene diermodel vergemakkelijkt de directe kwantificering van de leeftijdsgebonden achteruitgang van het proteoom door de progressieve vorming van fluorescerende foci (d.w.z. eiwitaggregaten) en het daaropvolgende begin van voortbewegingsdefecten die zich ontwikkelen als gevolg van de ineenstorting van het proteoom in beeld te brengen. Verder kan de expressie van het polyQ::YFP-transgen worden aangedreven door weefselspecifieke promotors, waardoor proteostase over weefsels kan worden beoordeeld in de context van een intact meercellig organisme. Dit model is zeer vatbaar voor genetische analyse en biedt dus een benadering om veroudering te kwantificeren die complementair is aan levensduurtests. We beschrijven hoe we de vorming van polyQ::YFP-foci in neuronen of lichaamswandspier tijdens het ouder worden nauwkeurig kunnen meten, en het daaropvolgende begin van gedragsdefecten. Vervolgens benadrukken we hoe deze benaderingen kunnen worden aangepast voor een hogere doorvoer en mogelijke toekomstige toepassingen met behulp van andere opkomende strategieën voor C. elegans genetische analyse.

In C. elegansis het polyglutamine-herhalingsmodel instrumenteel geweest voor de identificatie van genen die het proteostatische netwerk reguleren. We hebben bijvoorbeeld eerder aangetoond dat het homeodomain-interagerende eiwitkinase (hpk-1), een transcriptionele cofactor, de proteostase tijdens veroudering beïnvloedt door de expressie van autofagie en moleculaire chaperones te reguleren31. We ontdekten dat verlies van hpk-1, hetzij door RNAi-uitschakeling of in hpk...

Watch this Scientific Journal Video about Quantifying Tissue-Specific Proteostatic Decline in Caenorhabditis elegans at JoVE.com

Quantifying Tissue-Specific Proteostatic Decline in Caenorhabditis elegans

Proteostatische achteruitgang is een kenmerk van veroudering en vergemakkelijkt het begin van neurodegeneratieve ziekten. We schetsen een protocol om proteostase kwantificeerbaar te meten in twee verschillende Caenorhabditis elegans-weefsels door heterologe expressie van polyglutamine-herhalingen gefuseerd met een fluorescerende verslaggever. Dit model maakt een snelle in vivo genetische analyse van proteostase mogelijk.

Kwantificering van weefselspecifieke proteostatische achteruitgang van Caenorhabditis elegans

The ability to maintain proper function and folding of the proteome (protein homeostasis) declines during normal aging, facilitating the onset of a ...

Het gebruik van weefselspecifieke expressie van polyglutamine fluorescerende reporter in C.elegans is belangrijk omdat het de ontdekking en karakterisering van proteostaseregulatoren mogelijk maakt in de context van een intact meercellig organisme. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het visualisatie en kwantificering mogelijk maakt van de leeftijdsgebonden afname van cellulaire proteostase in vivo, wat essentieel is om dieper mechanistisch inzicht te krijgen in hoe organismen de juiste vouwing en functie van het proteoom en de effecten van veroudering behouden. Het ophelderen van mechanismen die in staat zijn om proteostase te behouden, zal de ontwikkeling van gerichte interventies vergemakkelijken voor de behandeling van verouderingsgerelateerde ziekten waarbij proteostase in gevaar is en om gezond ouder worden te bevorderen.Proteostase-ineenstorting is een enorm probleem in de kliniek, omdat het ten grondslag ligt aan de ontwikkeling van eiwitmisvoudende ziekten, waaronder Alzheimer, Parkinson, de ziekte van Huntington en amyotrofische laterale sclerose. Begin met het gebruik van petriplaten met een diameter van 6 centimeter om vijf agarplaten voor elke testconditie te bereiden. Voor experimenten met RNAi, induceer dsRNA-productie in getransformeerde HT115 E.coli en gebruik RNAi-agar.Gebruik OP50 E.coli op standaard NGM-agar voor experimenten zonder RNAi. Kweek de E.coli-culturen 's nachts bij 37 graden Celsius terwijl je schudt bij 220 RPM. Pellet de volgende dag de bacteriën door centrifugering bij 2, 400 G gedurende 15 tot 20 minuten, adem vervolgens het supernatant op en suspensie de pellet opnieuw in een tiende van het startvolume van lb.Aliquot 200 microliter geconcentreerde bacteriën op elke plaat en laat de open platen drogen in een schone omgeving totdat alle vloeistof is geabsorbeerd. Om de C.Elegans te synchroniseren met hypochlorietbehandeling, wast u gravid hermafrodieten tweemaal met M9-buffer, brengt u ze over naar een verse buis en incubeert u gedurende vijf minuten in 5 milliliter hypochlorietoplossing, waarbij u ze elke minuut schudt. Draai na de incubatie de dieren naar beneden en was ze drie keer met M9-buffer.Laat embryo's 's nachts in buisjes uitkomen in 3 milliliter M9-oplossing met rotatie bij 20 graden Celsius. Bereken de dichtheid van L1-dieren door 10 microliter L1-oplossing drie keer op een plaat van 6 centimeter te laten vallen en het aantal L1-dieren te tellen. Meng periodiek de L1-oplossingen om te voorkomen dat de dieren bezinken.Zaai 50 L1 één dier op elke plaat, tel en noteer het aantal gezaaide en verplaats de platen naar een incubator van 20 graden Celsius. Als alternatief, om dieren te synchroniseren via eierleggen, plaats vijf tot tien jonge, gravid volwassen dieren op elk bord gedurende vier tot zes uur en laat ze eieren leggen totdat er ongeveer 50 eieren per bord zijn. Verwijder alle gravid volwassenen en verplaats de platen met de eieren naar een incubator van 20 graden Celsius.Laat de dieren groeien tot het L4-stadium, wat ongeveer 40 uur duurt bij 20 graden Celsius. Voeg vervolgens 50 microliter van 160 keer FUDR toe. Om de afname van proteostase in spierweefsel te meten, kiest u 20 dieren en monteert u ze op een microscoopglaasje met een 3% agarosepad en een druppel van 5 microliter van 10 millimolair natriumazide.Nadat alle wormen zijn geïmmobiliseerd, beeld je het hele lichaam van de dieren in met een vergrotingslens van 10 X. Gebruik een FITC- of YFP-filter en dezelfde blootstelling voor elk dier. Als u klaar bent, gooit u de dia's weg.Tel het aantal foci in de lichaamswandspieren van het hele dier. Foci zijn helderdere onderbroken signalen die kunnen worden onderscheiden van het dimmer oplosbare signaal op de achtergrond. Kijk op scoringsdagen naar de platen met de dieren en noteer het aantal verlamde dieren en verwijder vervolgens verlamde dieren van de plaat.Bereken aan het einde van het experiment de verlammingssnelheid voor elke aandoening en plot de progressie van de verlamming. Om de afname van proteostase in neuronaal weefsel te meten, monteer je de wormen op een dia zoals eerder beschreven en maak je Z-stack-afbeeldingen van het hoofd van de dieren op een samengestelde microscoop met behulp van een 40 X-vergrotingslens. Gooi de dia's weg na het afbeelden.Na het verkrijgen van de afbeeldingen, vlakt u de Z-stapels af en gebruikt u ze om het aantal foci in neuronen op het zenuwringgebied te kwantificeren. Plot de progressie van YFP foci accumulatie van dag 4, 6, 8 en 10. Op dag twee van de volwassenheid pluk je 10 gesynchroniseerde dieren van de plaat en plaats je ze op een 10 microliter druppel M9-buffer op een microscoopglaasje.Herhaal deze stap minstens vier keer om een monster van 40 of meer dieren te krijgen. Video-opname van de beweging van de dieren gedurende een periode van 30 seconden op een stereomicroscoop met een video-capabele camera. Zodra alle video's met de te analyseren dieren zijn opgenomen, speelt u de video af en scoort u de lichaamsbuigingen van elk dier.Zet het aantal lichaamsbuigingen voor elk dier uit in een kolomgrafiek, waarbij elke stip het aantal lichaamsbuigingen in 30 seconden op de Y-as en de verschillende omstandigheden op de X-as vertegenwoordigt. Het polyglutamine-herhalingsmodel heeft een belangrijke rol gespeeld bij de identificatie van genen die het proteostatische netwerk reguleren. Spierspecifieke polyQ-YFP-expressie resulteert in accumulatie van fluorescerende foci die gemakkelijk te kwantificeren zijn onder een eenvoudige fluorescerende ontleedmicroscoop.De dieren raken verlamd tijdens het midlife, omdat het proteoom in de spier instort als gevolg van het proteotoxische effect van de verslaggever. De leeftijdsgebonden afname van neuronale proteostase kan worden gevolgd door het direct kwantificeren van geaggregeerde vorming en afnames in gecoördineerde lichaamsbuigingen na het plaatsen van dieren in vloeistof. Deze methode is gebruikt om aan te tonen dat het homeo-domein interagerende eiwitkinase, een transcriptionele cofactor, de proteostase tijdens veroudering beïnvloedt door de expressie van autofagie en moleculaire chaperones te reguleren.Het verlies van HPK-1 verhoogt het aantal Q35-YFP-aggregaten dat zich ophoopt tijdens het ouder worden. Controledieren vertoonden gemiddeld 18 aggregaten, terwijl de met HPK1 null mutant en HPK1 RNAi behandelde dieren gemiddeld respectievelijk 28 en 26 aggregaten vertoonden. Op dag acht van de volwassenheid was 77 tot 78% van de HPK1-deficiënte dieren verlamd, vergeleken met slechts 50% van de controle.Bovendien werd aangetoond dat overexpressie van HPK1 de vorming van eiwitaggregaten reguleert en ouder wordende dieren beschermt tegen Q35-YFP-geassocieerde verlamming tijdens veroudering. Deze methode meet de algemene achteruitgang van het proteoom binnen een celtype. Er bestaan veel methoden om veranderingen in specifieke componenten van het prostaatnetwerk te beoordelen.Samen geven ze een totaalbeeld. Afnemende proteostase is een kenmerk van veroudering. Deze aanpak stelt onderzoekers in staat om deze daling te kwantificeren.In combinatie met genetische analyse is het een krachtig hulpmiddel voor ontdekking.

Research

JoVE Journal

Biology

Quantifying Tissue-Specific Proteostatic Decline in Caenorhabditis elegans

Isolation and In vitro Activation of Caenorhabditis elegans Sperm

Isolation and In vitro Activation of Caenorhabditis elegans Sperm

Isolatie en In vitro Activering van Caenorhabditis elegans Sperma

Males and hermaphrodites are the two naturally found sexual forms in the nematode C. elegans. The amoeboid sperm are produced by both males and ...

Solid Plate-based Dietary Restriction in Caenorhabditis elegans

Solid Plate-based Dietary Restriction in Caenorhabditis elegans

Solid Plate-based dieetbeperking in Caenorhabditis elegans</em

Reduction of food intake without malnutrition or starvation is known to increase lifespan and delay the onset of various age-related diseases in a wide ...

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Time-lapse microscopie van de vroege embryogenese in Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans has often been used as a model system in studies of early developmental processes.  The transparency of the 
embryos, the genetic ...

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Basis-<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; Methoden: Synchronisatie-en-

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has ...

Prostaglandin Extraction and Analysis in Caenorhabditis elegans

Prostaglandin Extraction and Analysis in Caenorhabditis elegans

Prostaglandine-extractie en analyse in<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Caenorhabditis elegans is emerging as a powerful animal model to study the biology of lipids1-9. Prostaglandins are an important class of eicosanoids, ...

Dietary Supplementation of Polyunsaturated Fatty Acids in Caenorhabditis elegans

Dietary Supplementation of Polyunsaturated Fatty Acids in Caenorhabditis elegans

Aanvulling van de voeding van meervoudig onverzadigde vetzuren in<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Fatty acids are essential for numerous cellular functions. They serve as efficient energy storage molecules, make up the hydrophobic core of membranes, ...

Cultivation of Caenorhabditis elegans in Three Dimensions in the Laboratory

Cultivation of Caenorhabditis elegans in Three Dimensions in the Laboratory

teelt van<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; In drie dimensies in het Laboratorium

The use of genetic model organisms such as Caenorhabditis elegans has led to seminal discoveries in biology over the last five decades. Most of what we ...

Combined Nucleotide and Protein Extractions in Caenorhabditis elegans

Combined Nucleotide and Protein Extractions in Caenorhabditis elegans

Gecombineerde Nucleotide en eiwit extracties in Caenorhabditis elegans

A single biological sample holds a plethora of information, and it is now common practice to simultaneously investigate several macromolecules to capture ...

Measurement of Oxygen Consumption Rates in Intact Caenorhabditis elegans

Measurement of Oxygen Consumption Rates in Intact Caenorhabditis elegans

Meting van zuurstof verbruik in Intact Caenorhabditis elegans

Optimal mitochondrial function is critical for healthy cellular activity, particularly in cells that have high energy demands like those in the nervous ...

Using Caenorhabditis elegans to Screen for Tissue-Specific Chaperone Interactions

Using Caenorhabditis elegans to Screen for Tissue-Specific Chaperone Interactions

Caenorhabditis elegans gebruiken om te screenen op weefselspecifieke chaperonne-interacties

Correct folding and assembly of proteins and protein complexes are essential for cellular function. Cells employ quality control pathways that correct, ...