Name: live-cell imaging of the life cycle of bacterial predator bdellovibrio bacteriovorus using time-lapse fluorescence microscopy
Uploaded: 2020-05-08T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy at JoVE.com

Это исследование было поддержано Грантом Национального научного центра Opus 2018/29/B/N'6/00539 в J.Q.C.

1. Подготовка лизоворуса B. для микроскопического анализа
<ol><li>В колбе 250 мл, создать кокультуру, объединив 1 мл свежих 24 ч B. бактериоворной культуры (например, HD100 DnaN-mNeonGreen/Pil'-mCherry) и 3 мл ночной культуры добычи (например, E. coli S17-1 p'M100) с 50 мл буфера Ca-HEPES (25 мМ HEPES, 2 мМ CaCl2 «pH »...

<ol>
	<li>Shatzkes, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predatory+Bacteria+Attenuate+Klebsiella+pneumoniae+Burden+in+Rat+Lungs.">Predatory Bacteria Attenuate Klebsiella pneumoniae Burden in Rat Lungs.</a> mBio. 7 (6), (2016).</li><li>Iebba, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bdellovibrio+bacteriovorus+directly+attacks+Pseudomonas+aeruginosa+and+Staphylococcus+aureus+Cystic+fibrosis+isolates.">Bdellovibrio bacteriovorus directly attacks Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus Cystic fibrosis isolates.</a> Frontiers in Microbiology. 5, (2014).</li><li>Willis, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Injections+of+Predatory+Bacteria+Work+Alongside+Host+Immune+Cells+to+Treat+Shigella+Infection+in+Zebrafish+Larvae.">Injections of Predatory Bacteria Work Alongside Host Immune Cells to Treat Shigella Infection in Zebrafish Larvae.</a> Current biology: CB. 26 (24), 3343-3351 (2016).</li><li>Lambert, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterizing+the+flagellar+filament+and+the+role+of+motility+in+bacterial+prey-penetration+by+Bdellovibrio+bacteriovorus.">Characterizing the flagellar filament and the role of motility in bacterial prey-penetration by Bdellovibrio bacteriovorus.</a> Molecular Microbiology. 60 (2), 274-286 (2006).</li><li>Lambert, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Predatory+Patchwork:+Membrane+and+Surface+Structures+of+Bdellovibrio+bacteriovorus.">A Predatory Patchwork: Membrane and Surface Structures of Bdellovibrio bacteriovorus.</a> Advances in Microbial Physiology. 54, 313-361 (2008).</li><li>Makowski, &. #. 3. 2. 1. ;., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initiation+of+Chromosomal+Replication+in+Predatory+Bacterium+Bdellovibrio+bacteriovorus.">Initiation of Chromosomal Replication in Predatory Bacterium Bdellovibrio bacteriovorus.</a> Frontiers in Microbiology. 7, 1898 (2016).</li><li>Makowski, &. #. 3. 2. 1. ;., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+Chromosome+Replication+and+Its+Relationship+to+Predatory+Attack+Lifestyles+in+Bdellovibrio+bacteriovorus.">Dynamics of Chromosome Replication and Its Relationship to Predatory Attack Lifestyles in Bdellovibrio bacteriovorus.</a> Applied and Environmental Microbiology. 85 (14), (2019).</li><li>Fenton, A. K., Kanna, M., Woods, R. D., Aizawa, S. I., Sockett, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shadowing+the+actions+of+a+predator:+backlit+fluorescent+microscopy+reveals+synchronous+nonbinary+septation+of+predatory+Bdellovibrio+inside+prey+and+exit+through+discrete+bdelloplast+pores.">Shadowing the actions of a predator: backlit fluorescent microscopy reveals synchronous nonbinary septation of predatory Bdellovibrio inside prey and exit through discrete bdelloplast pores.</a> Journal of Bacteriology. 192 (24), 6329-6335 (2010).</li><li>Kuru, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+D-amino-acids+reveal+bi-cellular+cell+wall+modifications+important+for+Bdellovibrio+bacteriovorus+predation.">Fluorescent D-amino-acids reveal bi-cellular cell wall modifications important for Bdellovibrio bacteriovorus predation.</a> Nature Microbiology. 2 (12), 1648-1657 (2017).</li><li>Dashiff, A., Junka, R. A., Libera, M., Kadouri, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predation+of+human+pathogens+by+the+predatory+bacteria+Micavibrio+aeruginosavorus+and+Bdellovibrio+bacteriovorus.">Predation of human pathogens by the predatory bacteria Micavibrio aeruginosavorus and Bdellovibrio bacteriovorus.</a> Journal of Applied Microbiology. 110 (2), 431-444 (2011).</li></ol>

В связи с повышенным интересом к использованию B. bacteriovorus в качестве живого антибиотика необходимы новые инструменты наблюдения за хищным жизненным циклом, особенно взаимодействия хищника и патогена. Представленный протокол используется для отслеживания всего жизненного цикл?...

Bdellovibrio бактериоворус является небольшой (0,3-0,5 мкм на 0,5-1,4 мкм) грамотрицательная бактерия, которая охотится на другие грамотрицательных бактерий, в том числе вредных патогенов, таких как Klebsiella пневмонии, Pseudomonas aeruginosa, и Shigella flexneri1,2,3. Поскольку B. bacteriovorus убивает патогенные микроорганизмы, он считается потенциальным живым антибиотиком, который может быть применен для борьбы с бактериальными инфекциями, особенно вызванными штаммами с множественной лекарственной устойчивостью.
B. bacteriovorus демонстрирует своеобразный жизненный цикл, состоящий из двух фаз: свободной жизни не реплицативной фазы атаки и внутриклеточной репродуктивной фазы(рисунок 1). В фазе свободной жизни эта очень пестрая бактерия, которая движется со скоростью до 160 мкм/с, ищет свою добычу. Прикрепив к внешней мембране добычи, она попадает в периплазму4,,5. Во время межпериплазмической репродуктивной фазы B. bacteriovorus использует множество гидролитических ферментов для деградации макромолекул хозяина и повторного использования их для собственного роста. Вскоре после вторжения в периплазму, клетка-хозяин умирает и раздувается в сферическую структуру, называемую бделлопластом, внутри которого хищная клетка удлиняется и реплицирует свои хромосомы. Процесс репликации начинается с происхождения репликации(oriC)6 и продолжается до тех пор, пока несколько копий хромосомы не будут полностью синтезированы7. Интересно, что репликация каждой хромосомы не сопровождается делением клеток. Вместо этого хищник удлиняется, образовав длинные, многонуклеоидные и нитевидные клетки. После истощения питательных веществ, нить проходит синхронную перегородку и потомство клетки высвобождаются из bdelloplast8.
Прежде чем B. bacteriovorus может быть использован в качестве живого антибиотика против бактериальных инфекций, очень важно понять основные этапы его жизненного цикла, особенно те, которые связаны с его распространением внутри добычи. В течение сложной работы была сложная живая клеточная визуализация бактериоворуса B. из-за различных морфологических форм хищника и его добычи в течение сложного жизненного цикла. До сих пор взаимодействия между B. bacteriovorus и его клетки-хозяина были в основном изучены электронной микроскопии и оснастки выстрел анализа 2,9,10, оба из которых имеют ограничения, особенно когда они используются для мониторингапоследовательныхэтапов хищнического жизненного цикла. Эти методы обеспечивают высокое разрешение изображений клеток B. bacteriovorus и позволяют наблюдение небольшого хищника во время атаки или фазы роста. Тем не менее, они не позволяют отслеживать одиночные B. бактериоворусные клетки на протяжении обеих фаз жизненного цикла.
Здесь представлен комплексный протокол использования замедленной микроскопии флуоресценции (TLFM) для мониторинга полного жизненного цикла B. bacteriovorus. Система, состоящая из агарозы площадку используется в сочетании с клеточной визуализации блюдо, в котором хищные клетки могут свободно перемещаться под агарозой площадку в то время как обездвиженные клетки добычи способны образовывать bdelloplasts (Рисунок 2). Эта настройка подготовлена на основе конкретных штаммов кишечной палочки и B. bacteriovorus, но протокол может быть легко изменен, чтобы соответствовать индивидуальным штаммам пользователя (например, проведение различных маркеров отбора, белки, слитые с различными флюорофорами и т.д.).
В этом случае, чтобы визуализировать B. bacteriovorus во время фазы атаки, был построен специфический штамм (HD100 DnaN-mNeonGreen/Pil'-mCherry), который выражает флуоресцентно помеченную версию цитоплазмического белка, Pil' (доступен в нашей лаборатории позапросу) 7. Этот штамм дополнительно производит DnaN (раздвижной зажим), подразделение ДНК-полимеразы III голоэнзима, слитого с флуоресцентным белком. Это позволяет контролировать текущую репликацию ДНК внутри хищных клеток по мере их роста в пределах бделлопластов.
Хотя описанный протокол и программное обеспечение, используемое для получения изображений, относятся к перевернутому микроскопу, предоставленную конкретным производителем (см. таблицу материалов),этот метод может быть скорректирован для любого перевернутого микроскопа, оснащенного экологической камерой или другим внешним держателем отопления и способного изображения замедленного действия. Для анализа данных пользователи могут выбрать любое доступное программное обеспечение, совместимое с отдельными форматами вывода.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61105/61105fig01.jpg"> Рисунок 1: B. бактериоворусный жизненный цикл в кишечной палочке в качестве клетки-хозяина. Во время фазы атаки свободно плавающие клетки B. bacteriovorus ищут и прикрепляются к клетке кишечной палочки. После вторжения хищная клетка локализируется в периплазме жертвы, изменяя форму клетки-хозяина и образуя бделлопласт. Репродуктивная фаза начинается с образования бделлопласта. Хищная клетка переваривает клетку добычи и повторно использовать простые соединения для создания собственных структур. B. bacteriovorus растет как длинная нить внутри периплазмы хозяина. Когда ресурсы клетки добычи исчерпаны, бактериоворусная нить B. синхронно септирует и образует клетки потомства. После того, как клетки потомства развивают свою флагеллу, они высасывают бделлопласт. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61105/61105fig01large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.</a>

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>MPW MED. INSTRUMENTS</td>
			<td>MPW-260R</td>
			<td>Rotor ref. 12183</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CertifiedMolecular Biology Agarose</td>
			<td>BIO-RAD</td>
			<td>161-3100</td>
			<td>low fluorescence agarose for agarose pad</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiji</td>
			<td>ImageJ</td>
			<td>https://imagej.net/Fiji</td>
			<td>Open source image processing package</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Bottom Dish 35 mm</td>
			<td>ibidi</td>
			<td>81218-200</td>
			<td>uncoated glass</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>GE</td>
			<td>DeltaVision Elite</td>
			<td>Microtiter Stage, ultimate focus laser module, DV Elite CoolSnap HQ2 Camera, SSI assembly FP DV, kit obj. Oly 100x oil 1.4 NA, prism Nomarski 100x LWD DIC, ENV ctrl IX71 uTiter opaQ 240 V</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minisart Filter 0.45 &#181;m</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td>16555----------K</td>
			<td>Cellulose Acetate, Sterile, Luer Lock Outlet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Start SoftWoRx</td>
			<td>GE</td>
			<td></td>
			<td>Manufacturer-supplied imaging software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

live-cell imaging of the life cycle of bacterial predator bdellovibrio bacteriovorus using time-lapse fluorescence microscopy

Bdellovibrio bacteriovorus является небольшой грамотрицательных, обязательных хищных бактерий, которая убивает другие грамотрицательных бактерий, в том числе вредных патогенов. Поэтому он считается живым антибиотиком. Чтобы применить B. bacteriovorus в качестве живого антибиотика, сначала необходимо понять основные этапы его сложного жизненного цикла, в частности его распространение внутри добычи. До сих пор было трудно контролировать последовательные этапы хищнического жизненного цикла в режиме реального времени. Здесь представлен комплексный протокол для визуализации в режиме реального времени полного жизненного цикла B. bacteriovorus,особенно во время его роста внутри хозяина. Для этого используется система, состоящая из агарозной площадки в сочетании с клеточной визуализацией посуды, в которой хищные клетки могут свободно перемещаться под агарозной площадкой, в то время как обездвиженные клетки добычи способны образовывать бделлопласты. Применение штамма, производящего флуоресцентно помеченный к югу от полимеразы ДНК III, позволяет контролировать репликацию хромосом во время фазы размножения жизненного цикла B. bacteriovorus.

Описанная система на основе TLFM позволяет вовремя отслеживать отдельные клетки бактериоворуса B. (рисунок 3, Movie 1) и предоставляет ценную информацию о каждом этапе сложного хищнического жизненного цикла. Слияние Пиле-мчерри позволяет маркировать всю хищную...

Watch this Scientific Journal Video about Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy at JoVE.com

Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy

Здесь представлен протокол, описываемый мониторинг полного жизненного цикла хищной бактерии Bdellovibrio bacteriovorus с использованием замедленной микроскопии флуоресценции в сочетании с агарозной площадкой и клеточной визуализацией посуды.

Live-Cell Imaging жизненного цикла бактериального хищника Bdellovibrio бактериоворуса с использованием Time-Lapse флуоресценции микроскопии

Bdellovibrio bacteriovorus is a small gram-negative, obligate predatory bacterium that kills other gram-negative bacteria, including harmful pathogens. ...

Live-Cell Bdellovibrio бактериоворная визуализация была сложной из-за сложного жизненного цикла этих хищных бактерий. Наш протокол позволяет контролировать этапы полного жизненного цикла в режиме реального времени. Хотя наш протокол основан на конкретных уравнять штаммы, он может быть легко адаптирован к различным бактериальным штаммам, включая патогенные штаммы.Чтобы создать культуру B.bacteriovorus, объединить один миллилитр свежих 24-часовых культурных бактерий с тремя миллилитров ночной культуры добычи в 250 миллилитров колбы, содержащей 50 миллилитров кальция хиппи буфер дополнен антибиотиками по мере необходимости. После 24-часовой инкубации при 30 градусах по Цельсию и 200 оборотов в минуту, убедитесь, что клетки добычи были полностью облизаны жидкой контрастной микроскопией лица. Многочисленные многонаступенчатые фазированные клетки B.bacteriovorus должны присутствовать и не должны быть видны клетки E.coli или bdelloplast.Процедите культуру B.bacteriovorus через фильтр размером 0,45 микрометра в 50-миллилитровую коническую трубку и приостановите филтрат в центрифуге. Затем повторно приостанавливайте гранулы B.bacteriovorus в трех миллилитров кальция хиппи буфера до окончательной оптической плотности на 600 нанометров примерно 0,2 и инкубировать бактерии при 30 градусов по Цельсию и 200 оборотов в минуту в течение 30 минут. Чтобы подготовить клетки-хозяина, выберите одну колонию из штамма хозяина интереса и кинулировать бактерии в 10 миллилитров YT среды дополняется антибиотиками по мере необходимости для ночной инкубации при 37 градусов по Цельсию и 180 оборотов в минуту.На следующее утро перенесите два миллилитров ночной культуры в двухми миллилитровую пробирку и гранулируемые клетки центрифугированием. Затем повторно приостановить гранулы в 200 микролитров кальция хиппи буфера. Очень важно полностью повторно приостановить всю ячейку гранулы после центрифугации, чтобы убедиться, что клетка добычи разделены на уровне одной клетки.Чтобы подготовить клетки к замедленной микроскопии, во-первых, смешайте 200 миллиграммов низкофлуоресцентной молекулярной градозы с 20 миллилитров буфера хиппи кальция и растворите агарозу в микроволновке. Налейте три миллилитров расплавленной агарозы в 35-миллиметровую стеклянную нижнюю тарелку и дайте агарозе затвердеть. Используя лабораторный микро шпатель, тщательно удалите агарозную площадку из тарелки, не нарушая центральный полюс колодки и поместите нижнюю сторону площадки вверх на крышку чашки Петри.Поместите пять микролитров концентрированной подвески клетки-хозяина на перевернутую площадку и используйте цикл прививки для распространения клеток в центре полюса. Далее добавьте пять микролитров концентрированной подвески B.bacteriovorus на поверхность клетки-хозяина, не распространяясь и быстро верните гель в 35-миллилитровую стеклянную нижнюю часть блюда вверху вниз. Затем накройте блюдо крышкой.Для микроскопии Time-Lapse Florescence совместной культуры поместите блюдо в держатель чашки Петри таким образом, чтобы блюдо не двигаться в течение эксперимента и поместите одну каплю масла погружения на перевернутый микроскоп цели и одну каплю на дне блюда. Установите держатель на сцену микроскопа в перевернутой камере микроскопа и в микроскоп программное обеспечение установить увеличение до 100X и полихромный объектив для GFP и Mcherry. Используя iPS в Брайтфилде, найдите координационный самолет и откройте бессмысленного менеджера.Переместите сцену и используйте кнопку точек отметки, чтобы хранить координаты не менее 10 позиций, представляющих интерес. Переключитесь с iPS на монитор. Установите фокусную плоскость и нажмите кнопку заменить точку в бессмысленно менеджер для калибровки каждой точки.Откройте экспериментальный конструктор и немаркированные болезни укладки коробки. Выберите соответствующие флуоресцентные каналы и оптимальные настройки устранения и установите интервалы между получением изображения и общим временем эксперимента. Включите фокусировку для выбранных позиций и выберите папку данных, в которой файлы изображений должны быть автоматически сохранены.Перепроверьте все настройки в микроскопе управления программным обеспечением и начать промежуток времени эксперимента. После первого часа эксперимента убедитесь, что все позиции на сцене все еще находятся в фокусе. Когда эксперимент с промежуток времени будет закончен, удалите чашку Петри и отбросьте 35-миллиметровую тарелку с агарозной прокладкой в соответствии с соответствующими протоколами биобезопасности.Для обработки данных изображений замедленного действия перенесите экспериментальные данные на компьютер, загруженный программным обеспечением Фиджи, и откройте изображение на Фиджи. В вариантах импорта биоформав выберите стек представления с гиперстахой. В составном цветовом режиме выберите автоматическую шкалу.Прокручивая стеки изображений, оцените, оставались ли клетки и bdelloplasts фокусом в ходе эксперимента. Присутствуют ли зеленые флуоресцентные пятна из ДНК и mNeon green в клетках B.bacteriovorus внутри bdelloplasts на протяжении всей фазы роста и можно ли визуализировать все этапы хищного жизненного цикла. Для анализа конкретного B.bacteriovorus ячейки bdelloplast, использовать инструмент отбора, чтобы отметить ячейку интереса.Затем дублируйте выбранный регион. В дублируется изображение, нажмите процесс и гладкой и для каждого флуоресцентного канала, нажмите изображение, цвет, каналы инструменты, и выбрать канал интереса. Затем нажмите на изображение, отрегулируйте и яркость контраста, чтобы настроить яркость и контрастность изображения в каждом канале.Чтобы добавить планку масштаба, выберите анализ, инструменты и планку масштабирования. Чтобы добавить таймштамп к изображениям, щелкните изображения, стеки и штамповщик времени. Для сохранения измененных изображений выберите TIF.Чтобы сохранить данные в качестве последовательности изображений, AVI для создания фильма, или PNG, чтобы сохранить одно изображение текущего кадра. Эта система микроскопии Time-Lapse Fluorescence позволяет в режиме реального времени отслеживать отдельные клетки B.bacteriovorus и предоставляет ценную информацию о каждом этапе сложного хищнического жизненного цикла. Синтез пилюльки mCherry позволяет маркировать всю хищную клетку в фазе нападения, а также на ранней стадии фазы роста.Переход от атаки к репликациольной фазе может быть визуализирована не только образованием хозяина bdelloplast, но и появлением реплисомы. Реплиома собирается на полюсе вторгающейся клетки и более одной replisome можно наблюдать в растущей нити B.bacteriovorus по мере развития фазы размножения. После синтеза нескольких копий хромосомы репликация прекращается.Наконец, многонуклеированная нить подвергается септации и потомства клетки высвобождаются из bdelloplast. Клетки B.bacteriovorus должны быть достаточно материальными, чтобы активно искать свою добычу, а плотность всей клетки должна быть достаточно высокой, чтобы позволить хищнической клеточной привязанности. Эта платформа может быть полезна в экспериментах с участием мультимедикаментозных устойчивых патогенов и для содействия улучшению генной инженерии B.bacteriovorus как живого антибиотика в человеческой и ветеринарной медицине.

Research

JoVE Journal

Biology

Live-Cell Imaging of the Life Cycle of Bacterial Predator Bdellovibrio bacteriovorus using Time-Lapse Fluorescence Microscopy

Monitoring Actin Disassembly with Time-lapse Microscopy

Мониторинг актина Разборка с покадровой микроскопии

Time-lapse Imaging of Mitosis After siRNA Transfection

Покадровый Визуализация Митоз После трансфекции миРНК

Changes in cellular organization and chromosome dynamics that occur during mitosis are tightly coordinated to ensure accurate inheritance of genomic and ...

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Покадровый Микроскопия раннего эмбриогенеза в Caenorhabditis Элеганс

Caenorhabditis elegans has often been used as a model system in studies of early developmental processes.  The transparency of the 
embryos, the genetic ...

Quantitative Live Cell Fluorescence-microscopy Analysis of Fission Yeast

Количественные живой клетки флуоресцентной микроскопии Анализ деления дрожжевой

Several microscopy techniques are available today that can detect a specific protein within the cell. During the last decade live cell imaging using ...

Quantitative Analysis of Random Migration of Cells Using Time-lapse Video Microscopy

Количественный анализ случайных миграции клеток помощью замедленной видео микроскопии

Cell migration is a dynamic process, which is important for embryonic development, tissue repair, immune system function, and tumor invasion 1, 2. During ...

Acquiring Fluorescence Time-lapse Movies of Budding Yeast and Analyzing Single-cell Dynamics using GRAFTS

Приобретение флуоресценции интервальной съемки бутонизации дрожжей и анализ Одноклеточный динамики с использованием ПРОТЕЗОВ

Fluorescence time-lapse microscopy has become a powerful tool in the study of many biological processes at the single-cell level. In particular, movies ...

Visualization of Craniofacial Development in the sox10: kaede Transgenic Zebrafish Line Using Time-lapse Confocal Microscopy

Визуализация черепно-лицевого развития в Sox10: Kaede Трансгенные данио рерио Линия Использование Покадровый конфокальной микроскопии

Vertebrate palatogenesis is a highly choreographed and complex developmental process, which involves migration of cranial neural crest (CNC) cells, ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

В Vivo 4-мерном Tracking гемопоэтических стволовых и клеток-предшественников в взрослой мыши свода черепа костного мозга

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Functional Imaging of Viral Transcription Factories Using 3D Fluorescence Microscopy

Функциональные изображений вирусных транскрипции заводов с использованием 3D флуоресцентной микроскопии

It is well known that spatial and temporal regulation of genes is an integral part of governing proper gene expression. Consequently, it is invaluable to ...

A Versatile Method for Mounting Arabidopsis Leaves for Intravital Time-lapse Imaging

A Versatile Method for Mounting Arabidopsis Leaves for Intravital Time-lapse Imaging

Универсальный метод для монтажа Arabidopsis оставляет для прижизненной покадровой изображений

The plant immune response associated with a genome-wide transcriptional reprogramming is initiated at the site of infection. Thus, the immune response is ...