Name: mouse footpad inoculation model to study viral-induced neuroinflammatory responses
Uploaded: 2020-06-14T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Mouse Footpad Inoculation Model to Study Viral-Induced Neuroinflammatory Responses at JoVE.com

الكتاب الاعتراف تشارلز ريفر مختبرات لدعمها التقني الممتاز تنفيذ التحليلات الهستوبات. تم تمويل هذا العمل من قبل المعهد الوطني للاضطرابات العصبية والسكتة الدماغية (NINDS) (RO1 NS033506 و RO1 NS060699). ولم يكن للممولين أي دور في تصميم الدراسة، وجمع البيانات وتحليلها، أو في اتخاذ قرار بنشرها، أو إعدادها.

تم إجراء جميع التجارب الحيوانية وفقًا لبروتوكول (رقم 2083-16 و 2083-19) تم استعراضه واعتماده من قبل لجنة رعاية الحيوان واستخدامه (IACUC) بجامعة برينستون. وقد تم هذا العمل من خلال اتباع صارم متطلبات السلامة البيولوجية -2 (BSL-2)، التي لدينا مختبر مجهز بالكامل معتمد من قبل لجنة السلامة البيولوجية بجامعة ?...

<ol>
	<li>Field, H. J., Hill, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pathogenesis+of+pseudorabies+in+mice+following+peripheral+inoculation.">The pathogenesis of pseudorabies in mice following peripheral inoculation.</a> Journal of General Virology. 23 (2), 145-157 (1974).</li><li>Engel, J. P., Madigan, T. C., Peterson, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+transneuronal+spread+phenotype+of+herpes+simplex+virus+type+1+infection+of+the+mouse+hind+footpad.">The transneuronal spread phenotype of herpes simplex virus type 1 infection of the mouse hind footpad.</a> Journal of Virology. 71 (3), 2425-2435 (1997).</li><li>Guedon, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+changes+induced+by+Varicella+Zoster+Virus+in+a+rat+model+of+postherpetic+neuralgia.">Neuronal changes induced by Varicella Zoster Virus in a rat model of postherpetic neuralgia.</a> Virology. 482, 167-180 (2015).</li><li>Pomeranz, L. E., Reynolds, A. E., Hengartner, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+biology+of+pseudorabies+virus:+impact+on+neurovirology+and+veterinary+medicine.">Molecular biology of pseudorabies virus: impact on neurovirology and veterinary medicine.</a> Microbiology and Molecular Biology Reviews. 69 (3), 462-500 (2005).</li><li>Wittmann, G., Rziha, H. J., Knipe, D. M., Howley, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aujeszky's+disease+(pseudorabies)+in+pigs.">Aujeszky's disease (pseudorabies) in pigs.</a> Herpesvirus diseases of cattle, horses and pigs. 9, 230-325 (1989).</li><li>Leman, A. D., Glock, R. D., Mengeling, W. L., Penny, R. H. C., Scholl, E., Straw, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Diseases of swine, 6th ed. , 209-223 (1986).</li><li>Sleigh, J. N., Weir, G. A., Schiavo, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple,+step-by-step+dissection+protocol+for+the+rapid+isolation+of+mouse+dorsal+root+ganglia.">A simple, step-by-step dissection protocol for the rapid isolation of mouse dorsal root ganglia.</a> BMC Research Notes. 9, 82 (2016).</li><li>Sands, S. A., Leung-Toung, R., Wang, Y., Connelly, J., LeVine, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+Histochemical+Detection+of+Iron+in+Paraffin+Sections+of+Mouse+Central+Nervous+System+Tissue:+Application+in+the+APP/PS1+Mouse+Model+of+Alzheimer's+Disease.">Enhanced Histochemical Detection of Iron in Paraffin Sections of Mouse Central Nervous System Tissue: Application in the APP/PS1 Mouse Model of Alzheimer's Disease.</a> ASN Neuro. 8 (5), (2016).</li><li>Cardiff, R. D., Miller, C. H., Munn, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manual+hematoxylin+and+eosin+staining+of+mouse+tissue+sections.">Manual hematoxylin and eosin staining of mouse tissue sections.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2014 (6), 655-658 (2014).</li><li>Koyuncu, O. O., MacGibeny, M. A., Hogue, I. B., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compartmented+neuronal+cultures+reveal+two+distinct+mechanisms+for+alpha+herpesvirus+escape+from+genome+silencing.">Compartmented neuronal cultures reveal two distinct mechanisms for alpha herpesvirus escape from genome silencing.</a> PLoS pathogens. 13 (10), 1006608 (2017).</li><li>Laval, K., Vernejoul, J. B., Van Cleemput, J., Koyuncu, O. O., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virulent+Pseudorabies+Virus+Infection+Induces+a+Specific+and+Lethal+Systemic+Inflammatory+Response+in+Mice.">Virulent Pseudorabies Virus Infection Induces a Specific and Lethal Systemic Inflammatory Response in Mice.</a> Journal of Virology. 92 (24), 01614-01618 (2018).</li><li>Laval, K., Van Cleemput, J., Vernejoul, J. B., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alphaherpesvirus+infection+of+mice+primes+PNS+neurons+to+an+inflammatory+state+regulated+by+TLR2+and+type+I+IFN+signaling.">Alphaherpesvirus infection of mice primes PNS neurons to an inflammatory state regulated by TLR2 and type I IFN signaling.</a> PLoS Pathogens. 15 (11), 1008087 (2019).</li><li>Brittle, E. E., Reynolds, A. E., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+modes+of+pseudorabies+virus+neuroinvasion+and+lethality+in+mice.">Two modes of pseudorabies virus neuroinvasion and lethality in mice.</a> Journal of Virology. 78 (23), 12951-12963 (2004).</li><li>Mancini, M., Vidal, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insights+into+the+pathogenesis+of+herpes+simplex+encephalitis+from+mouse+models.">Insights into the pathogenesis of herpes simplex encephalitis from mouse models.</a> Mammalian Genome: Official Journal of the International Mammalian Genome Society. 29 (7-8), 425-445 (2018).</li><li>Kopp, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infection+of+neurons+and+encephalitis+after+intracranial+inoculation+of+herpes+simplex+virus+requires+the+entry+receptor+nectin-1.">Infection of neurons and encephalitis after intracranial inoculation of herpes simplex virus requires the entry receptor nectin-1.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (42), 17916-17920 (2009).</li><li>Wang, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+specific+innate+immune+responses+in+herpes+simplex+virus+infection+of+the+central+nervous+system.">Role of specific innate immune responses in herpes simplex virus infection of the central nervous system.</a> Journal of Virology. 86 (4), 2273-2281 (2012).</li><li>Haberthur, K., Messaoudi, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+varicella+zoster+virus+infection.">Animal models of varicella zoster virus infection.</a> Pathogens. 2 (2), 364-382 (2013).</li><li>Sarova-Pinhas, I., Achiron, A., Gilad, R., Lampl, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+neuropathy+in+multiple+sclerosis:+a+clinical+and+electrophysiologic+study.">Peripheral neuropathy in multiple sclerosis: a clinical and electrophysiologic study.</a> Acta Neurologica Scandinavia. 91 (4), 234-238 (1995).</li><li>MacGibeny, M. A., Koyuncu, O. O., Wirblich, C., Schnell, M. J., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retrograde+axonal+transport+of+rabies+virus+is+unaffected+by+interferon+treatment+but+blocked+by+emetine+locally+in+axons.">Retrograde axonal transport of rabies virus is unaffected by interferon treatment but blocked by emetine locally in axons.</a> PLoS Pathogens. 14 (7), 1007188 (2018).</li><li>Hunsperger, E. A., Roehrig, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+analyses+of+the+neuropathogenesis+of+a+West+Nile+virus+infection+in+mice.">Temporal analyses of the neuropathogenesis of a West Nile virus infection in mice.</a> Journal of Neurovirology. 12 (2), 129-139 (2006).</li><li>Swartwout, B. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zika+Virus+Persistently+and+Productively+Infects+Primary+Adult+Sensory+Neurons+In+Vitro.">Zika Virus Persistently and Productively Infects Primary Adult Sensory Neurons In Vitro.</a> Pathogens. 6 (4), 49 (2017).</li><li>Racaniello, V. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=One+hundred+years+of+poliovirus+pathogenesis.">One hundred years of poliovirus pathogenesis.</a> Virology. 344 (1), 9-16 (2006).</li></ol>

نموذج تطعيم القدم الموصوف هنا مفيد للتحقيق في بدء وتطوير استجابات الوهن العصبي أثناء عدوى فيروس ألفاهرب. وعلاوة على ذلك، يستخدم هذا في نموذج الجسم الحي لتحديد الحركية من النسخ المتماثل وانتشار فيروس ألفاهرب من PNS إلى CNS. هذا هو بديل لنماذج التلقيح الأخرى، مثل نموذج تلقيح الجلد الجناح، الذ?...

تصف هذه الدراسة نموذج تلقيح الاقدام للتحقيق في تكرار وانتشار الفيروسات من PNS إلى CNS والاستجابات العصبية المرتبطة بها. وقد استخدم نموذج التطعيم في الاقدام بشكل مكثف لدراسة عدوى فيروس ألفا هيب في الخلايا العصبية1,2,3. والهدف الرئيسي لهذا النموذج هو السماح للفيروسات العصبية قطع مسافة قصوى من خلال الـ PNS قبل الوصول إلى الجهاز العصبي المركزي. هنا، يستخدم هذا النموذج للحصول على رؤى جديدة في تطوير اعتلال عصبي معين (حكة عصبية) في الفئران المصابة بفيروسات الإيدز (PRV).
PRV هو فيروس ألفاهرب مرتبط بالعديد من مسببات الأمراض المعروفة (أي الهربس البسيط النوع 1 و 2 [HSV1 و HSV2] وفيروسات الزوجة فاريتشيلا [VZV])، التي تسبب القروح الباردة، والآفات التناسلية، وجدري الماء، على التوالي4. هذه الفيروسات هي جميع pantropic وقادرة على إصابة العديد من أنواع الخلايا المختلفة دون إظهار تقارب لنوع أنسجة محددة. ومع ذلك ، فإنها تظهر جميعها عصبية مميزة من خلال غزو PNS (وأحيانا ، CNS) من الأنواع المضيفة. المضيف الطبيعي هو الخنزير ، ولكن PRV يمكن أن تصيب معظم الثدييات. في هذه المضيفين غير الطبيعية، PRV يصيب PNS ويحفز pruritus حاد يسمى "جنون حكة"، تليها الموت peracute5،6. دور استجابة المناعة العصبية في النتيجة السريرية والأمراض من العدوى PRV كان غير مفهومة بشكل جيد.
يسمح نموذج التطعيم في لوحة القدم لـ PRV ببدء العدوى في خلايا البشرة في لوحة القدم. ثم، تنتشر العدوى في الألياف العصبية الحسية والمتعاطفة التي تعم البشرة والغدد العرقية والأدمة. العدوى ينتشر عن طريق جزيئات الفيروس تتحرك عبر العصب الوركي إلى DRG في غضون 60 ساعة تقريبا. تنتشر العدوى عبر الحبل الشوكي، وتصل في نهاية المطاف إلى الـ hindbrain عندما تصبح الحيوانات محتضرة (82 ساعة بعد العدوى). خلال هذه النافذة الزمنية، يمكن جمع عينات الأنسجة ومعالجتها وتحليلها من أجل تكرار الفيروسات وعلامات الاستجابة المناعية. على سبيل المثال، يمكن إجراء الفحص النسيجي وتكميم الحمل الفيروسي في أنسجة مختلفة لإنشاء ارتباط بين بدء وتطوير العمليات السريرية والفيروسية والعصبية في التسبب في الـ PRV.
باستخدام نموذج تلقيح لوحة القدمين ، يمكن التحقيق في الآليات الخلوية والجزيئية من pruritus الناجم عن PRV في الفئران. وعلاوة على ذلك، يمكن أن يوفر هذا النموذج نظرة جديدة في بدء وتطوير العصبية الناجمة عن الفيروسات خلال التهابات فيروس الهربس. قد يؤدي فهم أفضل للعمليات الكامنة الكامنة في اضطرابات الأعصاب الناجمة عن فيروس ألفا هيريس إلى تطوير استراتيجيات علاجية مبتكرة. على سبيل المثال، هذا النموذج مفيد للتحقيق في آليات حكة الأعصاب في المرضى الذين يعانون من آفات ما بعد الهربس (على سبيل المثال، الهربس، القوباء المنطقية) واختبار الأهداف العلاجية الجديدة في الفئران للأمراض البشرية المقابلة.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Antibody anti-PRV gB</td>
			<td>Made by the lab</td>
			<td></td>
			<td>1/500 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aqua-hold2 pap pen red</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>2886909</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compact emery boards-24 count (100/180 grit nail files)</td>
			<td>Revlon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Complete EDTA-free Protease Inhibitor Cocktail</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>11836170001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6 mice (5-7 weeks)</td>
			<td>The Jackson Laboratories</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI solution (1mg/ml)</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>62248</td>
			<td>1/1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable sterile polystyrene petri dish 100 x 15 mm</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5731500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium (DMEM)</td>
			<td>Hyclone, GE Healthcare life Sciences</td>
			<td>SH30022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Phophate Buffer Saline (PBS) solution</td>
			<td>Hyclone, GE Healthcare life Sciences</td>
			<td>SH30028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Hyclone, GE Healthcare life Sciences</td>
			<td>SH30088</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine curved scissors stainless steel</td>
			<td>FST</td>
			<td>14095-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoromount-G mounting media</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>0100-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin solution, neutral buffered 10%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT501128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isothesia Isoflurane</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>NDC 11695-6776-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tube 2ml</td>
			<td>Denville Scientific</td>
			<td>1000945</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtube 1.5ml</td>
			<td>SARSTEDT</td>
			<td>72692005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Negative goat serum</td>
			<td>Vector</td>
			<td>S-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>154022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision Glide needle 18G</td>
			<td>BD</td>
			<td>305196</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blades steel back</td>
			<td>Personna</td>
			<td>9412071</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNA lysis buffer (RLT)</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>79216</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel Beads, 5 mm</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>69989</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfrost/plus microscopic slides</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>12-550-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue lyser LT</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>69980</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek OCT</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>4583</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>488 (goat anti-mouse)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A11029</td>
			<td>1/2000 dilution</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

mouse footpad inoculation model to study viral-induced neuroinflammatory responses

يصف هذا البروتوكول نموذج تلقيح الاقدام المستخدم لدراسة بدء وتطوير الاستجابات العصبية خلال عدوى فيروس الفاتس في الفئران. كما alphaherpesviruses هي الغزاة الرئيسيين للجهاز العصبي المحيطي (PNS)، وهذا النموذج هو مناسبة لتوصيف الحركية من تكرار الفيروسية، وانتشاره من PNS إلى CNS، والاستجابات العصبية المرتبطة. يسمح نموذج التطعيم في لوحة القدم لجزيئات الفيروسات بلانتشار من موقع العدوى الأساسي في البشرة في منصة القدم إلى الألياف العصبية الحسية والمتعاطفة التي تُعمّق البشرة والغدد العرقية والأدمة. تنتشر العدوى عبر العصب الوركي إلى جذر الظهر (DRG) وفي نهاية المطاف من خلال الحبل الشوكي إلى الدماغ. هنا ، يتم تلقيح لوحة قدم الماوس مع فيروس pseudorabies (PRV) ، وهو فيروس ألفابروكس وثيق الصلة بفيروس الهربس البسيط (HSV) وفيروس varicella-zoster (VZV). هذا النموذج يدل على أن عدوى PRV يؤدي إلى التهاب حاد, تتميز بتسلل العدلات في مهبط القدم وDG. يتم الكشف عن تركيزات عالية من السيتوكينات الالتهابية في وقت لاحق في الأنسجة المتجانسة بواسطة ELISA. بالإضافة إلى ذلك ، لوحظ وجود ارتباط قوي بين جين PRV والتعبير البروتيني (عبر qPCR و IF تلطيخ) في DRG وإنتاج السيتوكينات الموالية للالتهابات. لذلك، يوفر نموذج التلقيح في الاقدام فهما أفضل للعمليات الكامنة تحت alphaherpes التي يسببها فيروس اعتلال الأعصاب، وقد يؤدي إلى تطوير استراتيجيات علاجية مبتكرة. بالإضافة إلى ذلك، يمكن للنموذج توجيه البحوث على الاعتلالات العصبية الطرفية، مثل التصلب المتعدد والأضرار الناجمة عن الفيروسية المرتبطة بها إلى PNS. وفي نهاية المطاف، يمكن أن تكون أداة فعالة من حيث التكلفة في مجال تطوير العقاقير.

نموذج تطعيم القدم الماوس يسمح لتوصيف من التسبب في التكاثر المناعي لعدوى فيروس ألفاهرب في الجسم الحي، بما في ذلك النسخ المتماثل وانتشار العدوى من مهبط القدم المحق إلى الجهاز العصبي وتحريض استجابات عصبية محددة.
في هذه الدراسة ، ونحن أولا abraded القدم الخلفية الماوس وإما وهمية ?...

Watch this Scientific Journal Video about Mouse Footpad Inoculation Model to Study Viral-Induced Neuroinflammatory Responses at JoVE.com

Mouse Footpad Inoculation Model to Study Viral-Induced Neuroinflammatory Responses

نموذج تلقيح القدمين هو أداة قيمة لتميز الاستجابات العصبية الفيروسية في الجسم الحي. على وجه الخصوص، فإنه يوفر تقييما واضحا للحركيات الفيروسية والعمليات المناعية المرتبطة بها التي بدأت في الجهاز العصبي المحيطي.

نموذج تلقيح لوحة الماوس للقدم لدراسة الاستجابات العصبية المستحثة بالفيروسات

This protocol describes a footpad inoculation model used to study the initiation and development of neuroinflammatory responses during alphaherpesvirus ...

يسمح هذا البروتوكول بدراسة بدء وتطوير الاستجابات العصبية في الجهاز العصبي المحيطي في الجهاز العصبي المحيطي للماوس أثناء العدوى الفيروسية. مع هذا النموذج، تنتقل العدوى مسافة أكبر من المحيط إلى الجهاز العصبي المحيطي والمركزي، مما يسمح بإجراء تقييم أقصى لحركيات الاستجابة العصبية. بعد وضع خمسة إلى سبعة أسابيع من العمر تخدير C57BL/6 الماوس في موقف supine على وسادة جراحية, تأكيد عدم وجود استجابة لدواسة منعكس.واستخدام 100 إلى 180 حصى emery المجلس، لbrade بلطف الجلد جلاروس من لوحة القدم الخلفية واحدة بين كعب ومنصات المشي مع حوالي 20 يمر من المجلس. ثم استخدام ملقط غرامة لتقشير ببطء قبالة طبقة القرنية فصلها من قبل الكشط لفضح الطبقة basale. بعد خلط لطيف، تطبيق موضعيا 20 ميكرولترات من تتر المناسبة من الفيروس inoculum على لوحة القدم abraded.تنفيذ التطعيمات وهمية مع المتوسطة فقط في لوحات المشاة المتآكلة من الحيوانات السيطرة في موازاة. بعد كل تطبيق، فرك بلطف على footpad 10 مرات مع رمح إبرة لتسهيل الامتزاز من الفيروس كل 10 دقيقة لمدة 30 دقيقة. عندما يتم تجفيف لوحة القدم المشطمة ، اسمح للفئران بالتعافي مع المراقبة حتى إعادة شغل المؤخرة قبل وضع الحيوانات في أقفاص فردية للمتابعة السريرية وأخذ العينات.في الوقت التجريبي المناسب، وجمع الجهازين الفيروس يتعرض، بما في ذلك القلب والرئتين والطحال والبنكرياس والكبد والكلى والمثانة في 1.5 ملليلتر الفردية microtube على الجليد. ثم حصاد منصات المشاة المتآكلة بين الكعب ومنصات المشي ووضع العينات في الأنابيب الدقيقة الفردية 1.5 ملليلتر على الجليد. المقبل، وضع الماوس في موقف عرضة والرطب الفراء مع 70٪ الإيثانول.لفضح العمود الفقري، قم بعمل شق صغير في منطقة الحوض وتجريد الجلد من الأطراف الخلفية نحو الرأس. لإزالة الـ 55555، استخدم المقص لقطع متوازي مع العمود الفقري على كلا الجانبين وعلى مقربة منه. وأزيل الرأس عند قاعدة الجمجمةاستخدام مقص لفتح الجمجمة من ماغنوم ماغنوم foralmen إلى العظام الأمامية. واستخدم ملقط لسحب فتح الجمجمة في اتجاه الجانبي. ثم استخدام ملقط لغرف بلطف خارج الدماغ ووضع الدماغ في 1.5 ملليلتر microtube على الجليد.استخدم المقص المنحني لتنظيف العمود الفقري من العضلات والدهون والأنسجة الرخوة، وإزالة الذيل. ثم ضع العمود الفقري السليم في أنبوب 15 ملليلتر من PBS الجليد البارد العقيم على الجليد لمدة لا تزيد عن ثلاث ساعات. بعد تشريح, نقل الحبل الشوكي في طبق ثقافة الأنسجة للسماح بإزالة أي الأنسجة الرخوة المتبقية.استخدم شفرة حلاقة لإجراء ثلاث قطع عرضية عبر العمود الفقري في S2 و L1 وفقرات T1. نقل القطع إلى أطباق فردية 15 ملليمتر تحتوي على الثلج الباردة العقيمة PBS. تتبع وتحديد أصول الشرائح لتحليلها لاحقاً.بعد ذلك ، استخدم ملقط لتأمين جانب آخر من شرائح الظهر واستخدام شفرة حلاقة لجعل قطع واحد طولي من خلال خط الوسط لتقسيم العمود إلى نصفين متساويين. ضع كلا النصفين في طبق بيتري جديد يحتوي على برنامج تلفزيوني بارد ثلجي جديد وعقيم في الاتجاه الأصلي ليتمكن من التمييز بين الجانبين الأيسر والأيني من العمود الفقري. تحت مجهر تشريح، واستخدام ملقط غرامة لقشر بلطف الحبل الشوكي من كل نصف العمود الفقري في اتجاه روسترالي إلى السد.ثم ضع كل من أنصاف الحبل الشوكي في الأنابيب الدقيقة الفردية 1.5 ملليلتر التي تحتوي على 500 ميكرولترات من PBS الجليد البارد العقيم على الجليد. لفضح ganglion الجذر الظهري، وإزالة بلطف السحايا من جانب واحد من العمود الفقري إلى الآخر. واسحب العصب الشوكي الأبيض المكشوف من العمود الفقريحصاد جولة، شفافة العقدة الجذر الظهري من الجزء العمود الفقري في طبق بيتري 15 ملليمتر من الجليد البارد PBS. وجمع العقدة جذر الظهرية ipsilateral و contralateral كما أظهرت للتو. بعد حصاد العصب الشوكي و العقدة جذر الظهر من أجزاء العمود الفقري الأخرى اثنين كما أظهرت للتو، الطرد المركزي جميع أنابيب الأنسجة بسرعة عالية.ثم التعرق على السبيع وفلاش تجميد العينات في النيتروجين السائل، وتخزينها في ناقص 80 درجة مئوية حتى التجانس. بالنسبة لتجانس الأنسجة، اذيب أنابيب الأنسجة المجمدة على الجليد قبل أن تزن 100 ملليغرام من كل عينة. نقل إلى أنبوب microcentuge ملليلتر تحتوي على حبات معقم و 500 ميكرولترات من العازلة فحص المناعة الشعاعية.بعد ذلك، تعطل الأنسجة في درجة حرارة الغرفة على التجانس في 20 دورة في الثانية لمدة دقيقتين، تليها فترة انتظار دقيقة واحدة، و 20 دورة في الثانية لمدة دقيقتين إضافيتين. بعد الجولة الثانية من التجانس، الطرد المركزي الأنسجة بسرعة عالية قبل نقل 500 ميكرولترات من كل عظمى إلى أنبوب جديد المسمى بشكل مناسب. تخزين في ناقص 20 درجة مئوية حتى تحليل المصب.موقع التآكل مرئي في لوحة التحكم. وهو نموذجي للقشرة لتشكيل في موقع الكشط كجزء من عملية الشفاء. في المقابل ، تظهر الفئران المحمضة بـ pseudorabies التهابًا حادًا في لوحة القدم عند نقطة النهاية الإنسانية التي تتميز بالتورم والاحمرار.يكشف الفحص الهدى للوحة القدم الملقح والجذر الظهري نخر البشرة والتهاب الجلد الحاد داخل أقسام القدم المصابة في pseudorabies. كما لوحظ تسلل العدلات في أقسام الحمض الوباءاتية المصابة. يتم قياس زيادة كبيرة في تعبير بروتين G-CSF في عقدة القدم والجذر الظهري للفئران المصابة بالرشاشات الزائفة مقارنة بالضوابط في كل من سبع ساعات و82 ساعة بعد العدوى.كما لوحظت مستويات كبيرة من الـ G-CSF في 82 ساعة بعد العدوى في الحبل الشوكي والدماغ والقلب وأنسجة الكبد من الفئران المصابة بـ pseudorabies مقارنة بالتحكم. وعلاوة على ذلك، يتم الكشف عن مستويات كبيرة من IL-6 في جميع الأنسجة المختبرة من الفئران المصابة بـ pseudorabies بدءا من 24 ساعة بعد العدوى. في حالة احتضار، تم الكشف عن pseudorabies في لوحة القدم، ganglion الجذر الظهري، الحبل الشوكي، والدماغ.مع التعبير السيتوبلازمي عالية من psuedorabies جليكوبروتين gB في الخلايا العصبية من العقدة جذر الظهر في الفئران المصابة pseudorabies. لضمان نجاح العدوى، من المهم ألا تسقط قطرة الفيروس في العمود من لوحة القدم المشطَطة. قد يخدم هذا النموذج الحيواني منصة لاختبار فعالية الأدوية المضادة للالتهابات ومضادات الفيروسات من أجل منع الاعتلال العصبي المحيطي الناجم عن الفيروسات.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Protocols for Vaginal Inoculation and Sample Collection in the Experimental Mouse Model of Candida vaginitis

Protocols for Vaginal Inoculation and Sample Collection in the Experimental Mouse Model of Candida vaginitis

بروتوكولات لتلقيح المهبل وجمع العينات في النموذج التجريبي للماوس المبيضات المهبل

Vulvovaginal candidiasis (VVC), caused by Candida species, is a fungal infection of the lower female genital tract that affects approximately 75% of ...

Examining the Role of Nasopharyngeal-associated Lymphoreticular Tissue (NALT) in Mouse Responses to Vaccines

Examining the Role of Nasopharyngeal-associated Lymphoreticular Tissue NALT in Mouse Responses to Vaccines

دراسة دور النسيج اللمفي البلعوم المرتبط (NALT) في الردود الفأر إلى اللقاحات

The nasopharyngeal-associated lymphoreticular tissues (NALT) found in humans, rodents, and other mammals, contribute to immunity in the nasal sinuses1-3. ...

An In vitro Model to Study Immune Responses of Human Peripheral Blood Mononuclear Cells to Human Respiratory Syncytial Virus Infection

An In vitro Model to Study Immune Responses of Human Peripheral Blood Mononuclear Cells to Human Respiratory Syncytial Virus Infection

Human respiratory syncytial  virus (HRSV) infections present a broad spectrum of disease severity, ranging  from mild infections to life-threatening ...

Humanized Mouse Model to Study Bacterial Infections Targeting the Microvasculature

أنسنة نموذج الفأر لدراسة الالتهابات البكتيرية استهداف الأوعية الدموية الدقيقة

Neisseria meningitidis causes a severe, frequently fatal sepsis when it enters the human blood stream. Infection leads to extensive damage of the blood ...

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

زرع الجلد الذيل لدراسة خيفي CD4 T الردود الخليوي في الفئران

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

Increased Recovery Time and Decreased LPS Administration to Study the Vagus Nerve Stimulation Mechanisms in Limited Inflammatory Responses

زيادة وقت الاسترداد وانخفاض إدارة LPS لدراسة آليات تحفيز عصب فاجوس في الاستجابات الالتهابية محدودة

Inflammation is a local response to infection and tissue damage mediated by activated macrophages, monocytes, and other immune cells that release ...

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

و إيل-8 عابر نموذج الماوس المعدلة وراثيا ل<em&gt; في فيفو</em&gt; رصد طويل الأمد للردود الالتهابية

Airway inflammation is often associated with bacterial infections and represents a major determinant of lung disease. The in vivo determination of the ...

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

بروتوكول نفطة شفط لدراسة الخلية تي البشرية استدعاء الاستجابات في فيفو

Cutaneous antigen-recall models allow for studies of human memory responses in vivo. When combined with skin suction blister (SB) induction, this model ...

A Galleria mellonella Oral Administration Model to Study Commensal-Induced Innate Immune Responses

A Galleria mellonella Oral Administration Model to Study Commensal-Induced Innate Immune Responses

نموذج الإدارة عن طريق الفم Galleria mellonella للاستجابات المناعية الفطرية Study Commensal-Induced

The investigation of the immunogenic potential of commensal bacteria on the host immune system is one essential component when studying intestinal ...

Tailoring In Vivo Cytotoxicity Assays to Study Immunodominance in Tumor-specific CD8+ T Cell Responses

Tailoring In Vivo Cytotoxicity Assays to Study Immunodominance in Tumor-specific CD8+ T Cell Responses

الخياطة في فيفو الاختبارات الخلوية لدراسة المناعي في الأورام الخاصةCD8 + T الاستجابات الخلية

Carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE)-based in vivo cytotoxicity assays enable sensitive and accurate quantitation of CD8+ cytolytic T lymphocyte ...