Name: mouse footpad inoculation model to study viral-induced neuroinflammatory responses
Uploaded: 2020-06-14T14:30:00
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Die Autoren würdigen die Laboratorien von Charles River für ihre ausgezeichnete technische Unterstützung bei der Durchführung der histopathologischen Analysen. Diese Arbeit wurde vom National Institute of Neurological Disorders and Stroke (NINDS) (RO1 NS033506 und RO1 NS060699) finanziert. Die Geldgeber spielten keine Rolle bei der Studiengestaltung, Datenerhebung und -analyse, der Entscheidung zur Veröffentlichung oder der Vorbereitung des Manuskripts.

Alle Tierversuche wurden in Übereinstimmung mit einem Protokoll (Nummer 2083-16 und 2083-19) durchgeführt, das vom Institution Animal Care and Use Committee (IACUC) der Princeton University überprüft und genehmigt wurde. Diese Arbeit wurde unter strikter Befolgung der Biosicherheitsanforderungen der Biosicherheitsstufe 2 (BSL-2) durchgeführt, für die wir ein voll ausgestattetes Labor haben, das vom Biosicherheitsausschuss der Princeton University genehmigt wurde. Die Verfahren wie Maus-Fußpolsterabrieb, virale Imp...

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	<li>Field, H. J., Hill, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pathogenesis+of+pseudorabies+in+mice+following+peripheral+inoculation.">The pathogenesis of pseudorabies in mice following peripheral inoculation.</a> Journal of General Virology. 23 (2), 145-157 (1974).</li><li>Engel, J. P., Madigan, T. C., Peterson, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+transneuronal+spread+phenotype+of+herpes+simplex+virus+type+1+infection+of+the+mouse+hind+footpad.">The transneuronal spread phenotype of herpes simplex virus type 1 infection of the mouse hind footpad.</a> Journal of Virology. 71 (3), 2425-2435 (1997).</li><li>Guedon, J. 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W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+modes+of+pseudorabies+virus+neuroinvasion+and+lethality+in+mice.">Two modes of pseudorabies virus neuroinvasion and lethality in mice.</a> Journal of Virology. 78 (23), 12951-12963 (2004).</li><li>Mancini, M., Vidal, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insights+into+the+pathogenesis+of+herpes+simplex+encephalitis+from+mouse+models.">Insights into the pathogenesis of herpes simplex encephalitis from mouse models.</a> Mammalian Genome: Official Journal of the International Mammalian Genome Society. 29 (7-8), 425-445 (2018).</li><li>Kopp, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infection+of+neurons+and+encephalitis+after+intracranial+inoculation+of+herpes+simplex+virus+requires+the+entry+receptor+nectin-1.">Infection of neurons and encephalitis after intracranial inoculation of herpes simplex virus requires the entry receptor nectin-1.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (42), 17916-17920 (2009).</li><li>Wang, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+specific+innate+immune+responses+in+herpes+simplex+virus+infection+of+the+central+nervous+system.">Role of specific innate immune responses in herpes simplex virus infection of the central nervous system.</a> Journal of Virology. 86 (4), 2273-2281 (2012).</li><li>Haberthur, K., Messaoudi, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+varicella+zoster+virus+infection.">Animal models of varicella zoster virus infection.</a> Pathogens. 2 (2), 364-382 (2013).</li><li>Sarova-Pinhas, I., Achiron, A., Gilad, R., Lampl, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+neuropathy+in+multiple+sclerosis:+a+clinical+and+electrophysiologic+study.">Peripheral neuropathy in multiple sclerosis: a clinical and electrophysiologic study.</a> Acta Neurologica Scandinavia. 91 (4), 234-238 (1995).</li><li>MacGibeny, M. A., Koyuncu, O. O., Wirblich, C., Schnell, M. J., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retrograde+axonal+transport+of+rabies+virus+is+unaffected+by+interferon+treatment+but+blocked+by+emetine+locally+in+axons.">Retrograde axonal transport of rabies virus is unaffected by interferon treatment but blocked by emetine locally in axons.</a> PLoS Pathogens. 14 (7), 1007188 (2018).</li><li>Hunsperger, E. A., Roehrig, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+analyses+of+the+neuropathogenesis+of+a+West+Nile+virus+infection+in+mice.">Temporal analyses of the neuropathogenesis of a West Nile virus infection in mice.</a> Journal of Neurovirology. 12 (2), 129-139 (2006).</li><li>Swartwout, B. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zika+Virus+Persistently+and+Productively+Infects+Primary+Adult+Sensory+Neurons+In+Vitro.">Zika Virus Persistently and Productively Infects Primary Adult Sensory Neurons In Vitro.</a> Pathogens. 6 (4), 49 (2017).</li><li>Racaniello, V. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=One+hundred+years+of+poliovirus+pathogenesis.">One hundred years of poliovirus pathogenesis.</a> Virology. 344 (1), 9-16 (2006).</li></ol>

Das hier beschriebene Footpad-Impfmodell ist nützlich, um die Einleitung und Entwicklung neuroinflammatorischer Reaktionen während einer Alphaherpesvirus-Infektion zu untersuchen. Darüber hinaus wird dieses In-vivo-Modell verwendet, um die Kinetik der Replikation und Ausbreitung des Alphaherpesvirus vom PNS auf DasZ S zu ermitteln. Dies ist eine Alternative zu anderen Impfmodellen, wie dem Flankenhaut-Impfmodell, das auf tiefem dermalen Kratzen13beruht, oder der intrakraniellen Route, die das V...

Diese Studie beschreibt ein Footpad-Impfmodell, um die Replikation und Ausbreitung von Viren vom PNS auf ZNS und die damit verbundenen neuroinflammatorischen Reaktionen zu untersuchen. Das Footpad-Impfmodell wurde intensiv verwendet, um Alphaherpesvirus-Infektionen in neuronen1,2,3zu untersuchen. Das Hauptziel dieses Modells ist es, neurotrope Viren zu ermöglichen, eine maximale Entfernung durch das PNS zu reisen, bevor sie das ZNS erreichen. Hier wird dieses Modell verwendet, um neue Erkenntnisse über die Entwicklung einer bestimmten Neuropathie (neuropathischer Schreiz) bei Mäusen zu erhalten, die mit dem Pseudorabivirus (PRV) infiziert sind.
PRV ist ein Alphaherpesvirus im Zusammenhang mit mehreren bekannten Krankheitserregern (d. h. Herpes simplex Typ 1 und 2 [HSV1 und HSV2] und Varicella-Zoster-Virus [VZV]), die Erkältungsgeschoren, Genitalläsionen und Windpocken verursachen, bzw.4. Diese Viren sind alle pantrop und in der Lage, viele verschiedene Zelltypen zu infizieren, ohne Affinität für einen bestimmten Gewebetyp zu zeigen. Sie alle weisen jedoch einen charakteristischen Neurotropismus auf, indem sie in die PNS (und gelegentlich auch in die ZNS) der Wirtsarten eindringen. Der natürliche Wirt ist das Schwein, aber PRV kann die meisten Säugetiere infizieren. Bei diesen nicht-natürlichen Wirten infiziert PRV die PNS und induziert einen schweren Pruritus, den "wahnsinnigen Juckreiz", gefolgt von perakutem Tod5,6. Die Rolle der Neuroimmunantwort im klinischen Ergebnis und der Pathogenese einer PRV-Infektion ist schlecht verstanden worden.
Das Footpad-Impfmodell ermöglicht PRV, infektionen in den epidermalen Zellen des Footpads zu initiieren. Dann breitet sich die Infektion in sensorische und sympathische Nervenfasern aus, die die Epidermis, Schweißdrüsen und Dermis innervierend beleben. Die Infektion breitet sich durch Viruspartikel aus, die sich innerhalb von ca. 60 h über den Ischiasnerv zum DRG bewegen. Die Infektion breitet sich über das Rückenmark aus und erreicht schließlich das Hinterhirn, wenn Tiere moribund werden (82 h nach der Infektion). Während dieses Zeitfensters können Gewebeproben gesammelt, verarbeitet und auf Virusreplikation und Marker der Immunantwort analysiert werden. Beispielsweise können histologische Untersuchungen und virale Lastquantifizierungen in verschiedenen Geweben durchgeführt werden, um Korrelationen zwischen der Einleitung und Entwicklung klinischer, virologischer und neuroinflammatorischer Prozesse bei der PRV-Pathogenese herzustellen.
Mit Hilfe des Footpad-Impfmodells können die zellulären und molekularen Mechanismen des PRV-induzierten Pruritus bei Mäusen untersucht werden. Darüber hinaus kann dieses Modell neue Einblicke in die Initiierung und Entwicklung von virusinduzierten Neuroinflammationen bei Herpesvirus-Infektionen liefern. Ein besseres Verständnis der Prozesse, die Alphaherpesvirus-induzierten Neuropathien zugrunde liegen, kann zur Entwicklung innovativer therapeutischer Strategien führen. Beispielsweise ist dieses Modell nützlich, um die Mechanismen des neuropathischen Schreizes bei Patienten mit postherpetischen Läsionen (z. B. Herpes zoster, Schindeln) zu untersuchen und neuartige therapeutische Ziele bei Mäusen auf die entsprechenden menschlichen Krankheiten zu testen.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>Antibody anti-PRV gB</td>
			<td>Made by the lab</td>
			<td></td>
			<td>1/500 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aqua-hold2 pap pen red</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>2886909</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compact emery boards-24 count (100/180 grit nail files)</td>
			<td>Revlon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Complete EDTA-free Protease Inhibitor Cocktail</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>11836170001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6 mice (5-7 weeks)</td>
			<td>The Jackson Laboratories</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI solution (1mg/ml)</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>62248</td>
			<td>1/1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable sterile polystyrene petri dish 100 x 15 mm</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5731500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium (DMEM)</td>
			<td>Hyclone, GE Healthcare life Sciences</td>
			<td>SH30022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Phophate Buffer Saline (PBS) solution</td>
			<td>Hyclone, GE Healthcare life Sciences</td>
			<td>SH30028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Hyclone, GE Healthcare life Sciences</td>
			<td>SH30088</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine curved scissors stainless steel</td>
			<td>FST</td>
			<td>14095-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoromount-G mounting media</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>0100-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin solution, neutral buffered 10%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT501128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isothesia Isoflurane</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>NDC 11695-6776-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tube 2ml</td>
			<td>Denville Scientific</td>
			<td>1000945</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtube 1.5ml</td>
			<td>SARSTEDT</td>
			<td>72692005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Negative goat serum</td>
			<td>Vector</td>
			<td>S-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>154022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision Glide needle 18G</td>
			<td>BD</td>
			<td>305196</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blades steel back</td>
			<td>Personna</td>
			<td>9412071</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNA lysis buffer (RLT)</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>79216</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel Beads, 5 mm</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>69989</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfrost/plus microscopic slides</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>12-550-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue lyser LT</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>69980</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek OCT</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>4583</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>488 (goat anti-mouse)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A11029</td>
			<td>1/2000 dilution</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

mouse footpad inoculation model to study viral-induced neuroinflammatory responses

Dieses Protokoll beschreibt ein Footpad-Impfmodell, das verwendet wird, um die Initiierung und Entwicklung neuroentzündlicher Reaktionen während einer Alphaherpesvirus-Infektion bei Mäusen zu untersuchen. Da Alphaherpesviren Haupteindringlinge des peripheren Nervensystems (PNS) sind, eignet sich dieses Modell, um die Kinetik der Virusreplikation, ihre Ausbreitung von PNS auf ZNS und die damit verbundenen neuroentzündlichen Reaktionen zu charakterisieren. Das Footpad-Impfmodell ermöglicht die Ausbreitung von Viruspartikeln von einer primären Infektionsstelle in der Fußpolsterepidermis auf sensorische und sympathische Nervenfasern, die die Epidermis, Schweißdrüsen und Dermis innervierend beleben. Die Infektion breitet sich über den Ischiasnerv auf die Rückenwurzelganglien (DRG) und schließlich über das Rückenmark zum Gehirn aus. Hier wird ein Maus-Fußpad mit dem Pseudorabivirus (PRV) geimpft, einem Alphaherpesvirus, das eng mit dem Herpes-Simplex-Virus (HSV) und dem Varicella-Zoster-Virus (VZV) verwandt ist. Dieses Modell zeigt, dass PRV-Infektion schwere Entzündungen induziert, gekennzeichnet durch neutrophile Infiltration im Fußpad und DRG. Hohe Konzentrationen von entzündlichen Zytokinen werden anschließend in homogenisierten Geweben per ELISA nachgewiesen. Darüber hinaus wird eine starke Korrelation zwischen PRV-Gen und Proteinexpression (über qPCR und IF-Färbung) in DRG und der Produktion von proinflammatorischen Zytokinen beobachtet. Daher bietet das Footpad-Impfmodell ein besseres Verständnis der Prozesse, die Alphaherpesvirus-induzierten Neuropathien zugrunde liegen, und kann zur Entwicklung innovativer therapeutischer Strategien führen. Darüber hinaus kann das Modell die Forschung zu peripheren Neuropathien, wie Multiple Sklerose und damit verbundenen viral-induzierten Schäden an der PNS, leiten. Letztlich kann es als kostengünstiges In-vivo-Tool für die Arzneimittelentwicklung dienen.

Das Maus-Fußpad-Impfmodell ermöglicht die Charakterisierung der Immunpathogenese der Alphaherpesvirus-Infektion in vivo, einschließlich replikation und Ausbreitung der Infektion vom geimpften Fußpolster auf das Nervensystem und die Induktion spezifischer neuroinflammatorische Reaktionen.
In dieser Studie haben wir zunächst das Hinterfußpad der Maus abgerieben und entweder verspottet oder die abgeriebene Region mit einem virulenten PRV-Stamm (PRV-Becker) geimpft. Der Abriebort war im Steu...

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Mouse Footpad Inoculation Model to Study Viral-Induced Neuroinflammatory Responses

Das Footpad-Impfmodell ist ein wertvolles Werkzeug zur Charakterisierung viral-induzierter neuroentzündlicher Reaktionen in vivo. Insbesondere bietet es eine klare Bewertung der viralen Kinetik und der damit verbundenen immunpathologischen Prozesse, die im peripheren Nervensystem eingeleitet wurden.

Maus Footpad Inokulation Modell zur Untersuchung viral-induzierte neuroentzündliche Reaktionen

This protocol describes a footpad inoculation model used to study the initiation and development of neuroinflammatory responses during alphaherpesvirus ...

Dieses Protokoll ermöglicht die Untersuchung der Einleitung und Entwicklung von neuroinflammatorischen Reaktionen im peripheren Nervensystem der Maus während einer Virusinfektion. Mit diesem Modell bewegen sich Infektionen einen größeren Abstand von der Peripherie zum peripheren und zentralen Nervensystem, was eine maximale Beurteilung der Kinetik der neuroinflammatorischen Reaktion ermöglicht. Nachdem Sie die fünf bis sieben Wochen alte anästhesierte C57BL/6-Maus in die Rückenlage auf einem chirurgischen Pad gelegt haben, bestätigen Sie einen Mangel an Reaktion auf Pedalreflexe.Und verwenden Sie ein 100 bis 180 Grit Emery Board, um sanft die glabrous Haut eines Hinterfußpolsters zwischen der Ferse und Wanderpads mit etwa 20 Pässen des Brettes abzuschleifen. Dann verwenden Sie feine Zangen, um langsam das durch den Abrieb abgelöste Stratum corneum abzuziehen, um den Stratum basale freizulegen. Nach sanftem Mischen 20 Mikroliter des entsprechenden Virusinokulums totopisch auf das abgeriebene Fußpolster auftragen.Führen Sie Scheinimpfungen mit Medium nur in den abgeriebenen Fußpolstern von Kontrolltieren parallel durch. Nach jeder Anwendung, reiben Sie das Fußpolster 10 Mal mit der Welle einer Nadel, um die Adsorption des Virus alle 10 Minuten für 30 Minuten zu erleichtern. Wenn das abgeriebene Fußpolster getrocknet ist, erlauben Sie den Mäusen, sich mit Derastalebissbisz zu erholen, bevor sie die Tiere zur klinischen Nachbeobachtung und Probenahme in einzelne Käfige legen.Zu den entsprechenden experimentellen Zeitpunkten sammeln Sie die virusexponierten Organe, einschließlich Herz, Lunge, Milz, Bauchspeicheldrüse, Leber, Nieren und Blase, in einzelne 1,5 Milliliter Mikroröhren auf Eis. Dann ernten Sie die abgeriebenen Fußpolster zwischen Ferse und Gehpolster und legen Sie die Proben in einzelne 1,5 Milliliter Mikroröhren auf Eis. Als nächstes legen Sie die Maus in die anfällige Position und befeuchten Sie das Fell mit 70% Ethanol.Um die Wirbelsäule freizulegen, machen Sie einen kleinen Schnitt im Bereich des Beckens und streifen Sie die Haut von den Hinterbeinen zum Kopf. Um die Vorder- und Hinterbeine zu entfernen, verwenden Sie eine Schere, um parallel zur Wirbelsäule auf beiden Seiten parallel zu schneiden und zu schließen. Und entfernen Sie den Kopf an der Basis des Schädels.Verwenden Sie die Schere, um den Schädel vom Foramen magnum bis zum Frontalknochen zu öffnen. Und verwenden Sie Zangen, um den Schädel in eine seitliche Richtung zu ziehen. Dann verwenden Sie die Zange, um das Gehirn sanft auszuhöhlen und das Gehirn in ein 1,5 Milliliter Mikrotube auf Eis zu legen.Verwenden Sie eine gekrümmte Schere, um die Wirbelsäule von Muskel, Fett und Weichgewebe zu reinigen und den Schwanz zu entfernen. Dann legen Sie die intakte Wirbelsäule in eine 15 Milliliter Tube steriler eiskalter PBS für nicht mehr als drei Stunden auf Eis. Nach der Zerlegung, übertragen Sie das Rückenmark in eine Gewebekulturschale, um die Entfernung von restlichem Weichgewebe zu ermöglichen.Verwenden Sie eine Rasierklinge, um drei Querschnitte durch die Wirbelsäule an den Wirbeln S2, L1 und T1 zu machen. Übertragen Sie die Stücke in einzelne 15-Millimeter-Geschirr mit sterilem eiskaltem PBS. Verfolgen und Markieren der Ursprünge der Segmente für eine spätere Analyse.Als nächstes verwenden Sie Zangen, um ein Segment dorsale Seite nach oben zu sichern und verwenden Sie eine Rasierklinge, um eine einzelne, längs geschnitten durch die Mittellinie zu machen, um die Säule in zwei gleiche Hälften zu teilen. Legen Sie beide Hälften in eine neue Petrischale mit frischem, sterilem eiskaltem PBS in der ursprünglichen Ausrichtung, um die linke und rechte Seite der Wirbelsäule unterscheiden zu können. Verwenden Sie unter einem Sezierendes Mikroskop feine Zangen, um das Rückenmark vorsichtig aus der jeder Hälfte der Wirbelsäule in rostraler bis kaudaler Richtung zu schälen.Dann legen Sie beide Rückenmarkshälften in einzelnen 1,5 Milliliter Mikroröhren mit 500 Mikroliter sterilen eiskalten PBS auf Eis. Um das dorsale Wurzelganglion freizulegen, entfernen Sie vorsichtig die Hirngespinst von einer Seite der Wirbelsäule auf die andere. Und ziehen Sie den freiliegenden weißen Spinalnerv aus der Wirbelsäule.Ernten Sie das runde, transparente Rückenwurzelganglion aus dem Wirbelsäulensegment in eine 15 Millimeter lange Petrischale aus eiskaltem PBS. Und sammeln Sie die ipsilaterale und kontralaterale dorsale Wurzel Ganglion, wie gerade gezeigt. Nach der Ernte des Spinalnervs und des Rückenwurzelgangliens aus den beiden anderen Wirbelsäulensegmenten, wie gerade gezeigt, zentrifugieren alle Geweberöhren mit hoher Geschwindigkeit.Dann die Überräube ansaugen und die Proben in flüssigem Stickstoff einfrieren und bis zur Homogenisierung bei minus 80 Grad Celsius lagern. Für die Gewebehomogenisierung die Rohre des gefrorenen Gewebes auf Eis auftauen, bevor Sie 100 Milligramm jeder Probe auswiegen. Transfer in ein Zwei-Milliliter-Mikrozentrifugenrohr mit sterilen Perlen und 500 Mikroliter Radioimmunpräzipitations-Assay-Puffer.Als nächstes stören Sie das Gewebe bei Raumtemperatur auf einem Homogenisator bei 20 Zyklen pro Sekunde für zwei Minuten, gefolgt von einer einminütigen Wartezeit und 20 Zyklen pro Sekunde für weitere zwei Minuten. Nach der zweiten Homogenisierungsrunde zentrifugieren Sie das Gewebe mit hoher Geschwindigkeit, bevor Sie 500 Mikroliter jedes Überstandes in ein neues entsprechend beschriftetes Rohr übertragen. Bei minus 20 Grad Celsius bis zur nachgelagerten Analyse lagern.Der Abriebort ist im Steuerfußpad sichtbar. Und es ist typisch, dass sich eine Kruste an der Abriebstelle als Teil des Heilungsprozesses bildet. Im Gegensatz dazu zeigen Mäuse, die mit Pseudorabige geimpft sind, eine schwere Entzündung des Fußpolsters am humanen Endpunkt, die durch Schwellung und Rötung gekennzeichnet ist.Die histopathologische Untersuchung des geimpften Fußpolsters und des dorsalen Wurzelgangliens zeigt epidermale Nekrose und schwere dermale Entzündung enthoben in den Pseudorabi-infizierten Fußabschnitten. Die Infiltration von Neutrophilen wird auch in Pseudorabi-infizierten DRG-Abschnitten beobachtet. Eine signifikante Zunahme der G-CSF-Proteinexpression wird im Fußpad und dorsalen Wurzelganglien von Pseudorabi-infizierten Mäusen gemessen, verglichen mit Kontrollen sowohl bei sieben- als auch 82-stündigen Nachinfektionen.Signifikante G-CSF-Spiegel werden auch bei 82-Stunden-Post-Infektion im Rückenmark beobachtet, Gehirn, Herz, und Lebergewebe von Pseudorabi infizierten Mäusen im Vergleich zu Kontrollen. Darüber hinaus werden signifikante Konzentrationen von IL-6 in allen getesteten Geweben von Pseudotollwut-infizierten Mäusen ab 24 Stunden nach der Infektion nachgewiesen. In einem moribunden Zustand wurden Pseudotollwut im Fußpolster, dorsalen Wurzelganglien, Rückenmark und Gehirn nachgewiesen.Mit der hohen zytoplasmatischen Expression von Psuedorabies Glykoprotein gB in den Neuronen des dorsalen Wurzelgangliens bei Pseudorabi-infizierten Mäusen. Um eine erfolgreiche Infektion zu gewährleisten, ist es wichtig, dass das Tröpfchen des Virus in einer Säule nicht vom abgeriebenen Fußpolster fällt. Dieses Tiermodell kann Plattform dienen, um die Wirksamkeit von entzündungshemmenden und antiviralen Medikamenten zu testen, um virale periphere Neuropathien zu verhindern.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Protocols for Vaginal Inoculation and Sample Collection in the Experimental Mouse Model of Candida vaginitis

Protocols for Vaginal Inoculation and Sample Collection in the Experimental Mouse Model of Candida vaginitis

Protokolle für Vaginal Inokulation und Probenahme in der Experimental-Maus-Modell der Candida Vaginitis

Vulvovaginal candidiasis (VVC), caused by Candida species, is a fungal infection of the lower female genital tract that affects approximately 75% of ...

Forschung

Immunologie und Infektion

Examining the Role of Nasopharyngeal-associated Lymphoreticular Tissue (NALT) in Mouse Responses to Vaccines

Examining the Role of Nasopharyngeal-associated Lymphoreticular Tissue NALT in Mouse Responses to Vaccines

Überprüfung der Rolle der Nasopharynx-assoziierte lymphoide Gewebe (NALT) in Maus auf Impfstoffe

The nasopharyngeal-associated lymphoreticular tissues (NALT) found in humans, rodents, and other mammals, contribute to immunity in the nasal sinuses1-3. ...

An In vitro Model to Study Immune Responses of Human Peripheral Blood Mononuclear Cells to Human Respiratory Syncytial Virus Infection

An In vitro Model to Study Immune Responses of Human Peripheral Blood Mononuclear Cells to Human Respiratory Syncytial Virus Infection

Human respiratory syncytial  virus (HRSV) infections present a broad spectrum of disease severity, ranging  from mild infections to life-threatening ...

Humanized Mouse Model to Study Bacterial Infections Targeting the Microvasculature

Humanisierten Maus-Modell, um bakterielle Infektionen Studieren Targeting der Mikrogefäß

Neisseria meningitidis causes a severe, frequently fatal sepsis when it enters the human blood stream. Infection leads to extensive damage of the blood ...

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

Transplantation von Haut-Schwanz zu allogene CD4-T-Zellantworten in Mäusen untersucht

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

Increased Recovery Time and Decreased LPS Administration to Study the Vagus Nerve Stimulation Mechanisms in Limited Inflammatory Responses

Erhöhte Erholzeit und abnehmend LPS-Verabreichung die Vagusnervstimulation Mechanisms in beschränkten Entzündungsreaktionen zu studieren

Inflammation is a local response to infection and tissue damage mediated by activated macrophages, monocytes, and other immune cells that release ...

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

Ein IL-8 transientes transgenisiertes Mausmodell für die<em&gt; In vivo</em&gt; Langzeitüberwachung von entzündlichen Reaktionen

Airway inflammation is often associated with bacterial infections and represents a major determinant of lung disease. The in vivo determination of the ...

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

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Ein Saug Blister-Protokoll, menschliche T-Zelle Recall Antworten In Vivo zu studieren

Cutaneous antigen-recall models allow for studies of human memory responses in vivo. When combined with skin suction blister (SB) induction, this model ...

A Galleria mellonella Oral Administration Model to Study Commensal-Induced Innate Immune Responses

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Ein Galleria Mellonella mündliche Administrationsmodell zu Study Commensal-Induced angeborene Immunantwort

The investigation of the immunogenic potential of commensal bacteria on the host immune system is one essential component when studying intestinal ...

Tailoring In Vivo Cytotoxicity Assays to Study Immunodominance in Tumor-specific CD8+ T Cell Responses

Tailoring In Vivo Cytotoxicity Assays to Study Immunodominance in Tumor-specific CD8+ T Cell Responses

Schneider In Vivo Cytotoxicity Assays zur Untersuchung von Immunodominanz in modularspezifischen CD8+ T Cell-Reaktionen

Carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE)-based in vivo cytotoxicity assays enable sensitive and accurate quantitation of CD8+ cytolytic T lymphocyte ...