Name: mouse footpad inoculation model to study viral-induced neuroinflammatory responses
Uploaded: 2020-06-14T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Mouse Footpad Inoculation Model to Study Viral-Induced Neuroinflammatory Responses at JoVE.com

המחברים מכירים במעבדות של שארל ריבר על התמיכה הטכנית המצוינת שלהם ביצוע ניתוחי histopathology. עבודה זו ממומנת על ידי המכון הלאומי של הפרעות נוירולוגיות שבץ (NINDS) (RO1 NS033506 ו RO1 NS060699). לתורמים לא היה כל תפקיד בתכנון לימוד, איסוף נתונים וניתוח, החלטה לפרסם או הכנת כתב היד.

כל ניסויי בעלי חיים בוצעו בהתאם לפרוטוקול (מספר 2083-16 ו 2083-19) שנבדקו ואושרו על ידי הוועדה לטיפול בבעלי חיים המוסד (IACUC) של אוניברסיטת פרינסטון. עבודה זו נעשתה על ידי בקפדנות הדרישות ברמת בטיחות 2 (BSL-2), אשר יש לנו מעבדה מאובזר באופן מלא אושרה על ידי ועדת אוניברסיטת פרינסטון בטיחות הוועדה. ההליכי...

<ol>
	<li>Field, H. J., Hill, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pathogenesis+of+pseudorabies+in+mice+following+peripheral+inoculation.">The pathogenesis of pseudorabies in mice following peripheral inoculation.</a> Journal of General Virology. 23 (2), 145-157 (1974).</li><li>Engel, J. P., Madigan, T. C., Peterson, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+transneuronal+spread+phenotype+of+herpes+simplex+virus+type+1+infection+of+the+mouse+hind+footpad.">The transneuronal spread phenotype of herpes simplex virus type 1 infection of the mouse hind footpad.</a> Journal of Virology. 71 (3), 2425-2435 (1997).</li><li>Guedon, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+changes+induced+by+Varicella+Zoster+Virus+in+a+rat+model+of+postherpetic+neuralgia.">Neuronal changes induced by Varicella Zoster Virus in a rat model of postherpetic neuralgia.</a> Virology. 482, 167-180 (2015).</li><li>Pomeranz, L. E., Reynolds, A. E., Hengartner, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+biology+of+pseudorabies+virus:+impact+on+neurovirology+and+veterinary+medicine.">Molecular biology of pseudorabies virus: impact on neurovirology and veterinary medicine.</a> Microbiology and Molecular Biology Reviews. 69 (3), 462-500 (2005).</li><li>Wittmann, G., Rziha, H. J., Knipe, D. M., Howley, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aujeszky's+disease+(pseudorabies)+in+pigs.">Aujeszky's disease (pseudorabies) in pigs.</a> Herpesvirus diseases of cattle, horses and pigs. 9, 230-325 (1989).</li><li>Leman, A. D., Glock, R. D., Mengeling, W. L., Penny, R. H. C., Scholl, E., Straw, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Diseases of swine, 6th ed. , 209-223 (1986).</li><li>Sleigh, J. N., Weir, G. A., Schiavo, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple,+step-by-step+dissection+protocol+for+the+rapid+isolation+of+mouse+dorsal+root+ganglia.">A simple, step-by-step dissection protocol for the rapid isolation of mouse dorsal root ganglia.</a> BMC Research Notes. 9, 82 (2016).</li><li>Sands, S. A., Leung-Toung, R., Wang, Y., Connelly, J., LeVine, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+Histochemical+Detection+of+Iron+in+Paraffin+Sections+of+Mouse+Central+Nervous+System+Tissue:+Application+in+the+APP/PS1+Mouse+Model+of+Alzheimer's+Disease.">Enhanced Histochemical Detection of Iron in Paraffin Sections of Mouse Central Nervous System Tissue: Application in the APP/PS1 Mouse Model of Alzheimer's Disease.</a> ASN Neuro. 8 (5), (2016).</li><li>Cardiff, R. D., Miller, C. H., Munn, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manual+hematoxylin+and+eosin+staining+of+mouse+tissue+sections.">Manual hematoxylin and eosin staining of mouse tissue sections.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2014 (6), 655-658 (2014).</li><li>Koyuncu, O. O., MacGibeny, M. A., Hogue, I. B., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compartmented+neuronal+cultures+reveal+two+distinct+mechanisms+for+alpha+herpesvirus+escape+from+genome+silencing.">Compartmented neuronal cultures reveal two distinct mechanisms for alpha herpesvirus escape from genome silencing.</a> PLoS pathogens. 13 (10), 1006608 (2017).</li><li>Laval, K., Vernejoul, J. B., Van Cleemput, J., Koyuncu, O. O., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virulent+Pseudorabies+Virus+Infection+Induces+a+Specific+and+Lethal+Systemic+Inflammatory+Response+in+Mice.">Virulent Pseudorabies Virus Infection Induces a Specific and Lethal Systemic Inflammatory Response in Mice.</a> Journal of Virology. 92 (24), 01614-01618 (2018).</li><li>Laval, K., Van Cleemput, J., Vernejoul, J. B., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alphaherpesvirus+infection+of+mice+primes+PNS+neurons+to+an+inflammatory+state+regulated+by+TLR2+and+type+I+IFN+signaling.">Alphaherpesvirus infection of mice primes PNS neurons to an inflammatory state regulated by TLR2 and type I IFN signaling.</a> PLoS Pathogens. 15 (11), 1008087 (2019).</li><li>Brittle, E. E., Reynolds, A. E., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+modes+of+pseudorabies+virus+neuroinvasion+and+lethality+in+mice.">Two modes of pseudorabies virus neuroinvasion and lethality in mice.</a> Journal of Virology. 78 (23), 12951-12963 (2004).</li><li>Mancini, M., Vidal, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insights+into+the+pathogenesis+of+herpes+simplex+encephalitis+from+mouse+models.">Insights into the pathogenesis of herpes simplex encephalitis from mouse models.</a> Mammalian Genome: Official Journal of the International Mammalian Genome Society. 29 (7-8), 425-445 (2018).</li><li>Kopp, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infection+of+neurons+and+encephalitis+after+intracranial+inoculation+of+herpes+simplex+virus+requires+the+entry+receptor+nectin-1.">Infection of neurons and encephalitis after intracranial inoculation of herpes simplex virus requires the entry receptor nectin-1.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (42), 17916-17920 (2009).</li><li>Wang, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+specific+innate+immune+responses+in+herpes+simplex+virus+infection+of+the+central+nervous+system.">Role of specific innate immune responses in herpes simplex virus infection of the central nervous system.</a> Journal of Virology. 86 (4), 2273-2281 (2012).</li><li>Haberthur, K., Messaoudi, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+varicella+zoster+virus+infection.">Animal models of varicella zoster virus infection.</a> Pathogens. 2 (2), 364-382 (2013).</li><li>Sarova-Pinhas, I., Achiron, A., Gilad, R., Lampl, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+neuropathy+in+multiple+sclerosis:+a+clinical+and+electrophysiologic+study.">Peripheral neuropathy in multiple sclerosis: a clinical and electrophysiologic study.</a> Acta Neurologica Scandinavia. 91 (4), 234-238 (1995).</li><li>MacGibeny, M. A., Koyuncu, O. O., Wirblich, C., Schnell, M. J., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retrograde+axonal+transport+of+rabies+virus+is+unaffected+by+interferon+treatment+but+blocked+by+emetine+locally+in+axons.">Retrograde axonal transport of rabies virus is unaffected by interferon treatment but blocked by emetine locally in axons.</a> PLoS Pathogens. 14 (7), 1007188 (2018).</li><li>Hunsperger, E. A., Roehrig, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+analyses+of+the+neuropathogenesis+of+a+West+Nile+virus+infection+in+mice.">Temporal analyses of the neuropathogenesis of a West Nile virus infection in mice.</a> Journal of Neurovirology. 12 (2), 129-139 (2006).</li><li>Swartwout, B. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zika+Virus+Persistently+and+Productively+Infects+Primary+Adult+Sensory+Neurons+In+Vitro.">Zika Virus Persistently and Productively Infects Primary Adult Sensory Neurons In Vitro.</a> Pathogens. 6 (4), 49 (2017).</li><li>Racaniello, V. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=One+hundred+years+of+poliovirus+pathogenesis.">One hundred years of poliovirus pathogenesis.</a> Virology. 344 (1), 9-16 (2006).</li></ol>

מודל החיסונים שמתואר כאן הוא שימושי כדי לחקור את ייזום ופיתוח של תגובות נוירודלקתיות במהלך זיהום וירוס אלפא. יתר על כן, זה במודל vivo משמש כדי ליצור את קינטיקה של שכפול והתפשטות של אלפא וירוס מהיקפית ל-CN. זהו חלופה לדגמים אחרים, כגון העור אגף החיסון, אשר מסתמך על גירוד בעורי עמוק13...

מחקר זה מתאר מודל כרית החיסון כדי לחקור את השכפול והתפשטות של וירוסים מ היקפית ל-CN ותגובות נוירודלקתיות הקשורים. מודל footpad החיסון השתמשו באופן אינטנסיבי כדי לחקור את הזיהום וירוס אלפא בנוירונים1,2,3. המטרה העיקרית של מודל זה היא לאפשר וירוסים נוירוטרופי לנסוע במרחק מקסימלי דרך היקפית לפני שהגיע ל-CN. כאן, מודל זה משמש כדי להשיג תובנות חדשות בפיתוח נוירופתיה מסוימת (גירוד נוירופתי) בעכברים נגועים בווירוס פסבדו אקראי (PRV).
PRV היא וירוס אלפא הקשורים מספר פתוגנים ידועים (קרי, הרפס סוג 1 ו 2 [HSV1 and HSV2] ו אבעבועות רוח-zoster וירוס [VZV]), אשר גורמות פצעים קרים, נגעים באברי המין, ואבעבועות עוף, בהתאמה4. וירוסים אלה הם כל pantropic ומסוגל להדביק סוגים רבים של תאים שונים מבלי להציג אהדה עבור סוג הרקמה הספציפית. עם זאת, הם כולם מוצגים נוירוטרוזם אופייני על ידי הפולשים היקפית (ולפעמים, ה-CN) של המינים המארחים. הפונדקאי הטבעי הוא חזיר, אבל PRV יכול להדביק את רוב היונקים. במחשבים מארחים לא טבעיים אלה, prv מדביק את היקפית ומשרה מתחריטוס חמור שנקרא "גירוד מטורף", ואחריו מוות בחריפות5,6. התפקיד של התגובה נוירוחיסונית בתוצאה הקלינית בפתוגנזה של זיהום PRV כבר הבינו היטב.
מודל החיסון מאפשר PRV ליזום זיהום בתאים באפידרמיס של footpad. לאחר מכן, הזיהום מתפשט לתוך סיבים עצביים חושים וסימפטיים הinnervate את האפידרמיס, בלוטות זיעה, ו dermis. הזיהום מתפשט על ידי חלקיקי וירוס נע דרך העצב הגיד כדי DRG בתוך כ 60 h. הזיהום מתפשט דרך חוט השדרה, בסופו של דבר להגיע המוח המבוקר כאשר בעלי חיים הופכים מורבנד (82 h לאחר ההדבקה). במהלך הזמן הזה חלון, דגימות רקמות ניתן לאסוף, מעובד, וניתח עבור שכפול וירוסים סמנים של התגובה החיסונית. למשל, בדיקה היסטולוגית וכימות העמסה ויראלי ניתן לבצע ברקמות שונות כדי ליצור מערכת יחסים בין ייזום ופיתוח של קליני, virological, ו דלקתיות תהליכים בפתוגנזה PRV.
באמצעות מודל החיסונים, המנגנונים הסלולאריים והמולקולריים של הפרוריטוס המושרה בעכברים ניתן לחקור. יתר על כן, מודל זה יכול לספק תובנה חדשה לתוך ייזום ופיתוח של דלקת נוירודלקתיות המושרה במהלך דלקות הרפס. הבנה טובה יותר של התהליכים הבסיסיים המושרה על ידי הנגיף האנטי-וירוס עלולה להוביל לפיתוח אסטרטגיות טיפוליות חדשניות. למשל, מודל זה שימושי כדי לחקור את המנגנונים של גירוד נוירופתי בחולים עם נגעים פוסט herpetic (למשל, הרפס zoster, רעפים) ולבדוק מטרות טיפוליות הרומן בעכברים עבור מחלות האדם המקביל.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Antibody anti-PRV gB</td>
			<td>Made by the lab</td>
			<td></td>
			<td>1/500 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aqua-hold2 pap pen red</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>2886909</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compact emery boards-24 count (100/180 grit nail files)</td>
			<td>Revlon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Complete EDTA-free Protease Inhibitor Cocktail</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>11836170001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6 mice (5-7 weeks)</td>
			<td>The Jackson Laboratories</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI solution (1mg/ml)</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>62248</td>
			<td>1/1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable sterile polystyrene petri dish 100 x 15 mm</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5731500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium (DMEM)</td>
			<td>Hyclone, GE Healthcare life Sciences</td>
			<td>SH30022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Phophate Buffer Saline (PBS) solution</td>
			<td>Hyclone, GE Healthcare life Sciences</td>
			<td>SH30028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Hyclone, GE Healthcare life Sciences</td>
			<td>SH30088</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine curved scissors stainless steel</td>
			<td>FST</td>
			<td>14095-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoromount-G mounting media</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>0100-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin solution, neutral buffered 10%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT501128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isothesia Isoflurane</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>NDC 11695-6776-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tube 2ml</td>
			<td>Denville Scientific</td>
			<td>1000945</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtube 1.5ml</td>
			<td>SARSTEDT</td>
			<td>72692005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Negative goat serum</td>
			<td>Vector</td>
			<td>S-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>154022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision Glide needle 18G</td>
			<td>BD</td>
			<td>305196</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blades steel back</td>
			<td>Personna</td>
			<td>9412071</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNA lysis buffer (RLT)</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>79216</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel Beads, 5 mm</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>69989</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfrost/plus microscopic slides</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>12-550-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue lyser LT</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>69980</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek OCT</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>4583</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>488 (goat anti-mouse)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A11029</td>
			<td>1/2000 dilution</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

mouse footpad inoculation model to study viral-induced neuroinflammatory responses

פרוטוקול זה מתאר מודל החיסון לשימוש לימוד ייזום ופיתוח של תגובות נוירודלקתיות במהלך זיהום וירוס אלפא בעכברים. כמו אלפא וירוסים הם הפולשים העיקריים של מערכת העצבים ההיקפית (היקפית), מודל זה מתאים לאפיין את קינטיקה של שכפול נגיפי, התפשטות שלו מ היקפית ל-CN, ותגובות נוירודלקתיות הקשורים. מודל כרית הרגליים מאפשר חלקיקי וירוס להתפשט מאתר זיהום ראשוני באפידרמיס הfootpad לסיבי עצב חושי ואוהד הinnervate את האפידרמיס, בלוטות זיעה, ו dermis. הזיהום מתפשט דרך העצב המגיד לגנגוליה השורש (DRG) ובסופו של דבר דרך חוט השדרה אל המוח. כאן, footpad העכבר הוא מחוסן עם וירוס פסבדו אקראי (PRV), וירוס אלפהרתקרוב הקשורות וירוס הרפס (HSV) אבעבועות רוח-זוסטר וירוס (VZV). מודל זה ממחיש כי זיהום PRV מעורר דלקת חמורה, מאופיין הסתננות נויטרופילים ב footpad ו DRG. ריכוזים גבוהים של ציטוקינים דלקתיים מזוהים לאחר מכן ברקמות הומוגניים על ידי אליסה. בנוסף, מתאם חזק הוא הבחין בין הגן PRV וביטוי חלבון (דרך qPCR ו IF כתמים) ב DRG וייצור ציטוקינים פרו דלקתיים. לכן, מודל החיסון העצמי מספק הבנה טובה יותר של התהליכים הבסיסיים המושרה על ידי הנגיף אלפא, ועלול להוביל לפיתוח אסטרטגיות טיפוליות חדשניות. בנוסף, המודל יכול להנחות מחקר על neuropathies היקפית, כגון טרשת נפוצה ונזק המושרה ויראלי הקשורים היקפית. בסופו של דבר, זה יכול לשמש ככלי חסכוני vivo לפיתוח התרופה.

העכבר הfootpad המודל מאפשר אפיון של הimmunopathogenesis של דלקת וירוס אלפא בvivo, כולל שכפול והתפשטות של הזיהום מתוך footpad מחוסן למערכת העצבים אינדוקציה של תגובות נוירודלקתיות ספציפיות.
במחקר זה, אנחנו הראשון שבשנו את העכבר האחוריות footpad ו או ללעוג מחוסן או מחוסן האזור השורק עם זן השני של PR...

Watch this Scientific Journal Video about Mouse Footpad Inoculation Model to Study Viral-Induced Neuroinflammatory Responses at JoVE.com

Mouse Footpad Inoculation Model to Study Viral-Induced Neuroinflammatory Responses

מודל החיסונים הוא כלי רב ערך לאפיון תגובות נוירודלקתיות המושרה בvivo. בפרט, היא מספקת הערכה ברורה של קינטיקה ויראלית ותהליכים immunopathological משויכים המופעלים במערכת העצבים ההיקפית.

עכבר כרית הרגליים מודל לחקר ויראלי המושרה תגובות נוירודלקתיות

This protocol describes a footpad inoculation model used to study the initiation and development of neuroinflammatory responses during alphaherpesvirus ...

פרוטוקול זה מאפשר את המחקר של ייזום ופיתוח של תגובות נוירו-אינפלציה במערכת העצבים ההיקפית של העכבר במהלך זיהום ויראלי. עם מודל זה, זיהומים לנסוע מרחק גדול יותר מהפריפריה למערכת העצבים ההיקפית והמרכזית, המאפשר הערכה מקסימלית של הקינטיקה של התגובה neuroinflammatory. לאחר הצבת עכבר C57BL/6 הרדמה בן חמישה עד שבעה שבועות בתדר השופע על כרית כירורגית, לאשר חוסר תגובה רפלקס הדוושה.ולהשתמש 100 כדי 180 לוח אמרי חצץ, כדי לשחוק בעדינות את העור glabrous של רגל אחורית אחת בין העקב ואת רפידות הליכה עם כ 20 מעברים של הלוח. לאחר מכן השתמש במקלפים עדין כדי לקלף לאט את הקרנית שכבה מנותק על ידי שחיקה לחשוף את השכבות בזלה. לאחר ערבוב עדין, למרוח topically 20 microliters של טיטר המתאים של אינוקולום וירוס על footpad abraded.לבצע חיסונים מדומה עם בינוני רק ב footpads abraded של חיות בקרה במקביל. לאחר כל יישום, בעדינות לשפשף את footpad 10 פעמים עם פיר של מחט כדי להקל על הספחת הנגיף כל 10 דקות במשך 30 דקות. כאשר משטח הרגליים abraded מיובש, לאפשר לעכברים להתאושש עם ניטור עד recumbency עצם החזה לפני הצבת בעלי החיים לתוך כלובים בודדים למעקב קליני ודגימה.בנקודות הזמן הניסיוניות המתאימות, אספו את האיברים החשופים לנגיף, כולל הלב, הריאות, הטחול, הלבלב, הכבד, הכליות ושלפוחית השתן למיקרו-צינורות בודדים של 1.5 מיליליטר על קרח. לאחר מכן לקצור את כפות הרגליים abraded בין העקב ואת רפידות הליכה ולמקום את הדגימות לתוך צינורות בודדים 1.5 מיליליטר על קרח. לאחר מכן, מניחים את העכבר במצב נוטה להרטיב את הפרווה עם 70% אתנול.כדי לחשוף את עמוד החוליות, בצע חתך קטן באזור האגן והפשט את העור מהגפיים האחוריות לכיוון הראש. כדי להסיר את החלק הראשון ואת הגפיים האחוריות, השתמש במספריים כדי לחתוך במקביל וקרוב לעמוד השדרה משני הצדדים. ולהסיר את הראש בבסיס הגולגולת.השתמש במספריים כדי לפתוח את הגולגולת מאגנום foramen לעצם הקדמית. ולהשתמש במקלות כדי למשוך לפתוח את הגולגולת בכיוון הרוחווי. לאחר מכן השתמש בממטרים כדי לגרוף בעדינות את המוח ול למקם את המוח לתוך microtube 1.5 מיליליטר על קרח.השתמש מספריים מעוגלים כדי לנקות את עמוד השדרה של שריר, שומן, ורקמות רכות, ולהסיר את הזנב. ואז למקם את עמוד השדרה שלם לתוך צינור 15 מיליליטר של PBS קר כקרח סטרילי על קרח במשך לא יותר משלוש שעות. לאחר הניתוח, להעביר את חוט השדרה לתוך צלחת תרבית רקמות כדי לאפשר הסרה של כל רקמה רכה שנותרה.השתמש בסכין גילוח כדי לבצע שלושה חתכים רוחביים דרך עמוד השדרה בחוליות S2, L1 ו- T1. מעבירים את החלקים למנות בודדות של 15 מ"מ המכילות PBS סטרילי קר כקרח. מעקב וסימון מקורות המקטעים לצורך ניתוח מאוחר יותר.לאחר מכן, השתמש במלקחיים כדי לאבטח צד דורסל מקטע אחד למעלה ולהשתמש בסכין גילוח כדי לבצע חתך אחד, אורך למטה דרך קו האמצע כדי לפצל את העמודה בשני חצאים שווים. מניחים את שני החצאים בצלחת פטרי חדשה המכילה PBS טרי, סטרילי קר כקרח בכיוון המקורי כדי להיות מסוגל להבחין בין הצדדים השמאליים והימין של עמוד השדרה. תחת מיקרוסקופ מנתח, השתמש במקלפים עדין כדי לקלף בעדינות את חוט השדרה מתוך כל מחצית של עמוד החוליות בכיוון rostral כדי caudal.לאחר מכן מניחים את שני חצאי חוט השדרה במיקרו-צינורות בודדים של 1.5 מיליליטר המכילים 500 מיקרוליטרים של PBS סטרילי קר כקרח על קרח. כדי לחשוף את גנגליון השורש הגבי, הסר בעדינות את קרום המוח מצד אחד של עמוד השדרה לצד השני. ולמשוך את עצב עמוד השדרה הלבן החשוף מעמוד השדרה.קוצרים את גנגליון השורש הגבי העגול והשקוף ממקטע עמוד השדרה לצלחת פטרי 15 מ"מ של PBS קר כקרח. ולאסוף את גנגליון שורש הגב של Ipsilateral ו contralateral כפי שהוכח רק. לאחר קצירת עצב עמוד השדרה וגנגליון שורש הגב משני מקטעי עמוד השדרה האחרים כפי שהוכח זה בלבד, צנטריפוגה כל צינורות הרקמה במהירות גבוהה.לאחר מכן שאפו את העל-טבעיים והקפיאו את הדגימות בחנקן נוזלי, ואחסנו במינוס 80 מעלות צלזיוס עד להומוגניזציה. עבור הומוגניזציה של רקמות, להפשיר את הצינורות של רקמה קפואה על קרח לפני שקילה החוצה 100 מיליגרם של כל מדגם. מעבירים לצינור מיקרוצנטריפוגה של שני מיליליטר המכיל חרוזים סטריליים ו-500 מיקרוליטרים של חיץ בדיקה של רדיואימון-פריציפציפציה.לאחר מכן, לשבש את הרקמות בטמפרטורת החדר על homogenizer ב 20 מחזורים לשנייה במשך שתי דקות, ואחריו תקופת המתנה של דקה אחת, ו 20 מחזורים לשנייה במשך שתי דקות נוספות. לאחר הסיבוב השני של הומוגניזציה, צנטריפוגה הרקמות במהירות גבוהה לפני העברת 500 microliters של כל על טבעי לתוך צינור חדש שכותרתו כראוי. יש לאחסן במינוס 20 מעלות צלזיוס עד לניתוח במורד הזרם.אתר השחיטות גלוי במשטח הבקרה. וזה אופייני עבור קרום להיווצר באתר שחיקה כחלק מתהליך הריפוי. לעומת זאת, עכברים מחוסנים עם פסאודורביות, מדגימים דלקת חמורה של כף הרגל בנקודת הקצה ההומנית המאופיינת בנפיחות ואדמומיות.בדיקה היסטופתולוגית של משטח הליכה מחוסן וגנגליון שורש הגב חושף נמק אפידרמיס ודלקת עורית חמורה בתוך קטעי כף הרגל הנגועים פסאודורביים. חדירה של נויטרופילים נצפתה גם בסעיפי DRG נגועים פסאודורביים. עלייה משמעותית בביטוי חלבון G-CSF נמדדת במשטח הרגליים ובגנגליון השורש הגבי של עכברים נגועים פסאודורביים בהשוואה לפקדים הן בשבעה והן ב-82 שעות לאחר ההדבקה.רמות G-CSF משמעותיות נצפו גם ב 82 שעות לאחר זיהום בחוט השדרה, המוח, הלב, ורקמות הכבד של עכברים נגועים pseudorabies לעומת פקדים. יתר על כן, רמות משמעותיות של IL-6 מזוהים בכל הרקמות שנבדקו של עכברים נגועים pseudorabies החל 24 שעות לאחר ההדבקה. במצב מורבידי, התגלו פסאודורביים במשטח הרגליים, גנגליון שורש הגבי, חוט השדרה והמוח.עם הביטוי הציטופלסמי הגבוה של פסאודורביס גליקופרוטאין gB בנוירונים של גנגליון השורש הגבי בעכברים נגועים פסאודורביים. כדי להבטיח זיהום מוצלח, חשוב כי טיפה של וירוס בעמודה לא נופל מן footpad abraded. מודל זה של בעלי חיים עשוי לשמש פלטפורמה לבדיקת היעילות של תרופות אנטי דלקתיות ואנטי ויראליות על מנת למנוע נוירופתיות היקפיות הנגרמות על ידי ויראלי.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Protocols for Vaginal Inoculation and Sample Collection in the Experimental Mouse Model of Candida vaginitis

Protocols for Vaginal Inoculation and Sample Collection in the Experimental Mouse Model of Candida vaginitis

הפרוטוקולים עבור הרכבת חיסון וגינלי אוסף דוגמאות במודל ניסיוני של עכבר קנדידה דלקת הנרתיק

Vulvovaginal candidiasis (VVC), caused by Candida species, is a fungal infection of the lower female genital tract that affects approximately 75% of ...

Examining the Role of Nasopharyngeal-associated Lymphoreticular Tissue (NALT) in Mouse Responses to Vaccines

Examining the Role of Nasopharyngeal-associated Lymphoreticular Tissue NALT in Mouse Responses to Vaccines

לבחון את תפקידה של רקמות האף והלוע הקשורים Lymphoreticular (NALT) בתגובות עכבר לחיסונים

The nasopharyngeal-associated lymphoreticular tissues (NALT) found in humans, rodents, and other mammals, contribute to immunity in the nasal sinuses1-3. ...

An In vitro Model to Study Immune Responses of Human Peripheral Blood Mononuclear Cells to Human Respiratory Syncytial Virus Infection

An In vitro Model to Study Immune Responses of Human Peripheral Blood Mononuclear Cells to Human Respiratory Syncytial Virus Infection

Human respiratory syncytial  virus (HRSV) infections present a broad spectrum of disease severity, ranging  from mild infections to life-threatening ...

Humanized Mouse Model to Study Bacterial Infections Targeting the Microvasculature

אנושי עכבר מודל ללמוד זיהומים חיידקיים מיקוד microvasculature

Neisseria meningitidis causes a severe, frequently fatal sepsis when it enters the human blood stream. Infection leads to extensive damage of the blood ...

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

השתלה של עור זנב לחקר תגובות תא Allogeneic T מסוג CD4 בעכברים

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

Increased Recovery Time and Decreased LPS Administration to Study the Vagus Nerve Stimulation Mechanisms in Limited Inflammatory Responses

הגברת Recovery Time וירידה מינהל LPS לחקר העצב התועה מנגנוני גירוי בתגובות דלקתיות מוגבל

Inflammation is a local response to infection and tissue damage mediated by activated macrophages, monocytes, and other immune cells that release ...

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

דגם IL-8 עכבר transgenized חולף עבור<em&gt; בויבו</emמעקב ארוך טווח אחר תגובות דלקתיות

Airway inflammation is often associated with bacterial infections and represents a major determinant of lung disease. The in vivo determination of the ...

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

פרוטוקול שלפוחית היניקה לימודים אדם T-cell האחזור תגובות In Vivo

Cutaneous antigen-recall models allow for studies of human memory responses in vivo. When combined with skin suction blister (SB) induction, this model ...

A Galleria mellonella Oral Administration Model to Study Commensal-Induced Innate Immune Responses

A Galleria mellonella Oral Administration Model to Study Commensal-Induced Innate Immune Responses

גלרייה mellonella מודל הניהול אוראלי את תגובות מערכת החיסון מולדים Study Commensal-Induced

The investigation of the immunogenic potential of commensal bacteria on the host immune system is one essential component when studying intestinal ...

Tailoring In Vivo Cytotoxicity Assays to Study Immunodominance in Tumor-specific CD8+ T Cell Responses

Tailoring In Vivo Cytotoxicity Assays to Study Immunodominance in Tumor-specific CD8+ T Cell Responses

תפירה Vivo ציטורעילות Assays ללמוד אימונומימינינס ב-CD8 התגובות הספציפיות לגידול של תאים

Carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE)-based in vivo cytotoxicity assays enable sensitive and accurate quantitation of CD8+ cytolytic T lymphocyte ...