Name: mouse footpad inoculation model to study viral-induced neuroinflammatory responses
Uploaded: 2020-06-14T14:30:00
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저자는 역사 병리학 분석을 실행하는 우수한 기술 지원에 대한 찰스 강 실험실을 인정합니다. 이 작품은 신경 장애 및 뇌졸중의 국립 연구소에 의해 투자되었다 (NINDS) (RO1 NS033506 및 RO1 NS060699). 기금은 연구 설계, 데이터 수집 및 분석, 출판 결정 또는 원고 준비에 아무런 역할이 없었습니다.

모든 동물 실험은 프린스턴 대학의 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC)에 의해 검토 및 승인 된 프로토콜 (번호 2083-16 및 2083-19)에 따라 수행되었습니다. 이 작업은 엄격하게 생물 안전 수준 2 (BSL-2) 요구 사항을 따라 수행되었다, 우리는 프린스턴 대학 생물 안전위원회에 의해 승인 된 완비 된 실험실이있는. 마우스 풋패드 마모, 바이러스 접종, 마우스 해부 및 조직 수집을 포함한 절차는 프린스?...

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	<li>Field, H. J., Hill, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pathogenesis+of+pseudorabies+in+mice+following+peripheral+inoculation.">The pathogenesis of pseudorabies in mice following peripheral inoculation.</a> Journal of General Virology. 23 (2), 145-157 (1974).</li><li>Engel, J. P., Madigan, T. C., Peterson, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+transneuronal+spread+phenotype+of+herpes+simplex+virus+type+1+infection+of+the+mouse+hind+footpad.">The transneuronal spread phenotype of herpes simplex virus type 1 infection of the mouse hind footpad.</a> Journal of Virology. 71 (3), 2425-2435 (1997).</li><li>Guedon, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+changes+induced+by+Varicella+Zoster+Virus+in+a+rat+model+of+postherpetic+neuralgia.">Neuronal changes induced by Varicella Zoster Virus in a rat model of postherpetic neuralgia.</a> Virology. 482, 167-180 (2015).</li><li>Pomeranz, L. E., Reynolds, A. E., Hengartner, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+biology+of+pseudorabies+virus:+impact+on+neurovirology+and+veterinary+medicine.">Molecular biology of pseudorabies virus: impact on neurovirology and veterinary medicine.</a> Microbiology and Molecular Biology Reviews. 69 (3), 462-500 (2005).</li><li>Wittmann, G., Rziha, H. J., Knipe, D. M., Howley, P. 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H., Munn, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manual+hematoxylin+and+eosin+staining+of+mouse+tissue+sections.">Manual hematoxylin and eosin staining of mouse tissue sections.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2014 (6), 655-658 (2014).</li><li>Koyuncu, O. O., MacGibeny, M. A., Hogue, I. B., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compartmented+neuronal+cultures+reveal+two+distinct+mechanisms+for+alpha+herpesvirus+escape+from+genome+silencing.">Compartmented neuronal cultures reveal two distinct mechanisms for alpha herpesvirus escape from genome silencing.</a> PLoS pathogens. 13 (10), 1006608 (2017).</li><li>Laval, K., Vernejoul, J. B., Van Cleemput, J., Koyuncu, O. O., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virulent+Pseudorabies+Virus+Infection+Induces+a+Specific+and+Lethal+Systemic+Inflammatory+Response+in+Mice.">Virulent Pseudorabies Virus Infection Induces a Specific and Lethal Systemic Inflammatory Response in Mice.</a> Journal of Virology. 92 (24), 01614-01618 (2018).</li><li>Laval, K., Van Cleemput, J., Vernejoul, J. B., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alphaherpesvirus+infection+of+mice+primes+PNS+neurons+to+an+inflammatory+state+regulated+by+TLR2+and+type+I+IFN+signaling.">Alphaherpesvirus infection of mice primes PNS neurons to an inflammatory state regulated by TLR2 and type I IFN signaling.</a> PLoS Pathogens. 15 (11), 1008087 (2019).</li><li>Brittle, E. E., Reynolds, A. E., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+modes+of+pseudorabies+virus+neuroinvasion+and+lethality+in+mice.">Two modes of pseudorabies virus neuroinvasion and lethality in mice.</a> Journal of Virology. 78 (23), 12951-12963 (2004).</li><li>Mancini, M., Vidal, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insights+into+the+pathogenesis+of+herpes+simplex+encephalitis+from+mouse+models.">Insights into the pathogenesis of herpes simplex encephalitis from mouse models.</a> Mammalian Genome: Official Journal of the International Mammalian Genome Society. 29 (7-8), 425-445 (2018).</li><li>Kopp, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infection+of+neurons+and+encephalitis+after+intracranial+inoculation+of+herpes+simplex+virus+requires+the+entry+receptor+nectin-1.">Infection of neurons and encephalitis after intracranial inoculation of herpes simplex virus requires the entry receptor nectin-1.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (42), 17916-17920 (2009).</li><li>Wang, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+specific+innate+immune+responses+in+herpes+simplex+virus+infection+of+the+central+nervous+system.">Role of specific innate immune responses in herpes simplex virus infection of the central nervous system.</a> Journal of Virology. 86 (4), 2273-2281 (2012).</li><li>Haberthur, K., Messaoudi, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+varicella+zoster+virus+infection.">Animal models of varicella zoster virus infection.</a> Pathogens. 2 (2), 364-382 (2013).</li><li>Sarova-Pinhas, I., Achiron, A., Gilad, R., Lampl, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+neuropathy+in+multiple+sclerosis:+a+clinical+and+electrophysiologic+study.">Peripheral neuropathy in multiple sclerosis: a clinical and electrophysiologic study.</a> Acta Neurologica Scandinavia. 91 (4), 234-238 (1995).</li><li>MacGibeny, M. A., Koyuncu, O. O., Wirblich, C., Schnell, M. J., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retrograde+axonal+transport+of+rabies+virus+is+unaffected+by+interferon+treatment+but+blocked+by+emetine+locally+in+axons.">Retrograde axonal transport of rabies virus is unaffected by interferon treatment but blocked by emetine locally in axons.</a> PLoS Pathogens. 14 (7), 1007188 (2018).</li><li>Hunsperger, E. A., Roehrig, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+analyses+of+the+neuropathogenesis+of+a+West+Nile+virus+infection+in+mice.">Temporal analyses of the neuropathogenesis of a West Nile virus infection in mice.</a> Journal of Neurovirology. 12 (2), 129-139 (2006).</li><li>Swartwout, B. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zika+Virus+Persistently+and+Productively+Infects+Primary+Adult+Sensory+Neurons+In+Vitro.">Zika Virus Persistently and Productively Infects Primary Adult Sensory Neurons In Vitro.</a> Pathogens. 6 (4), 49 (2017).</li><li>Racaniello, V. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=One+hundred+years+of+poliovirus+pathogenesis.">One hundred years of poliovirus pathogenesis.</a> Virology. 344 (1), 9-16 (2006).</li></ol>

여기에 설명된 풋패드 접종 모델은 알파헤르페스바이러스 감염 시 신경염증 반응의 개시 및 발달을 조사하는 데 유용하다. 더욱이, 이 생체 내 모델은 PNS에서 CNS로 알파헤르페스바이러스의 복제 및 확산의 역학을 확립하는 데 사용된다. 이는 깊은 진피스크래치(13)또는 CNS14,,15,16에바이러스를 직접 도입하는 두개내 ?...

이 연구는 PNS에서 CNS 및 관련 신경 염증 반응에 바이러스의 복제 및 확산을 조사하기 위하여 발판 접종 모형을 기술합니다. 풋패드 접종 모델은 뉴런,1,2,23에서알파헤르페스바이러스 감염을 연구하는 데 집중적으로 사용되어 왔다. 이 모델의 주요 목적은 신경 tropic 바이러스 CNS에 도달 하기 전에 PNS를 통해 최대 거리를 여행 할 수 있도록 하는 것입니다. 여기서, 이 모형은 의사 바이러스 (PRV)에 감염된 마우스에 있는 특정 신경병증 (신경병성 가려움)의 발달에 있는 새로운 통찰력을 얻기 위하여 이용됩니다.
PRV는 감기 염증, 생식기 병변 및 수두를 유발하는 몇 가지 잘 알려진 병원체(즉, 헤르페스 심플렉스 타입 1 및 2 [HSV1 및 HSV2] 및 수두-동물 바이러스 [VZV]와 관련된 알파헤르페스바이러스로, 각각4. 이 바이러스는 모두 pantropic 및 특정 조직 유형에 대 한 친화성을 표시 하지 않고 많은 다른 세포 유형을 감염시킬 수. 그러나, 그들은 모두 PNS를 침범 하 여 특징적인 신경 tropism전시 (그리고 때때로, CNS) 호스트 종의. 자연 호스트는 돼지, 하지만 PRV 대부분의 포유류를 감염시킬 수 있습니다. 이러한 비자연적인 숙주에서 PRV는 PNS를 감염시키고 "미친 가려움증"이라고 불리는 심한 소양증을 유도하고, 그 다음에 는 과급성 사망5,,6을유도한다. PRV 감염의 임상 결과 및 병인에 있는 신경 면역 반응의 역할은 제대로 이해되지 않았습니다.
풋패드 접종 모델은 PRV가 풋패드의 표피 세포에서 감염을 개시할 수 있게 한다. 그런 다음, 감염은 표피, 땀샘 및 진피를 내면화하는 감각과 교감 신경 섬유로 퍼집니다. 감염은 약 60 시간 안에 DRG에 상골 신경을 통해 이동하는 바이러스 입자에 의해 퍼짐. 감염은 척수를 통해 퍼집니다, 동물이 moribund될 때 궁극적으로 힌뇌에 도달 (82 시간 감염 후). 이 기간 동안, 조직 샘플은 면역 반응의 바이러스 복제 및 마커를 위해 수집, 처리 및 분석될 수 있다. 예를 들어, 조직학적 검사 및 바이러스 부하 정량화는 PRV 병인의 임상, 바이러스학 및 신경 염증 과정의 개시 및 개발 사이의 상관 관계를 확립하기 위해 다른 조직에서 수행 될 수있다.
발패드 접종 모델을 사용하여, 마우스에서 PRV 유도 소양증의 세포 및 분자 메커니즘을 조사 할 수있다. 더욱이, 이 모형은 헤르페스 바이러스 감염 도중 바이러스 유도한 신경염증의 개시 그리고 발달에 새로운 통찰력을 제공할 수 있습니다. 알파헤르페스바이러스 유도 신경병증의 근본적인 과정에 대한 더 나은 이해는 혁신적인 치료 전략의 개발로 이어질 수 있습니다. 예를 들어, 이 모델은 헤르페스 후 병변 (예를 들어, 헤르페스 조스터, 대상 포진)을 가진 환자에서 신경 병증 가려움증의 메커니즘을 조사하고 해당 인간 질병에 대한 마우스에서 새로운 치료 표적을 테스트하는 데 유용합니다.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Antibody anti-PRV gB</td>
			<td>Made by the lab</td>
			<td></td>
			<td>1/500 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aqua-hold2 pap pen red</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>2886909</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compact emery boards-24 count (100/180 grit nail files)</td>
			<td>Revlon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Complete EDTA-free Protease Inhibitor Cocktail</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>11836170001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6 mice (5-7 weeks)</td>
			<td>The Jackson Laboratories</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI solution (1mg/ml)</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>62248</td>
			<td>1/1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable sterile polystyrene petri dish 100 x 15 mm</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5731500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium (DMEM)</td>
			<td>Hyclone, GE Healthcare life Sciences</td>
			<td>SH30022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Phophate Buffer Saline (PBS) solution</td>
			<td>Hyclone, GE Healthcare life Sciences</td>
			<td>SH30028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Hyclone, GE Healthcare life Sciences</td>
			<td>SH30088</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine curved scissors stainless steel</td>
			<td>FST</td>
			<td>14095-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoromount-G mounting media</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>0100-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin solution, neutral buffered 10%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT501128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isothesia Isoflurane</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>NDC 11695-6776-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tube 2ml</td>
			<td>Denville Scientific</td>
			<td>1000945</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtube 1.5ml</td>
			<td>SARSTEDT</td>
			<td>72692005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Negative goat serum</td>
			<td>Vector</td>
			<td>S-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>154022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision Glide needle 18G</td>
			<td>BD</td>
			<td>305196</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blades steel back</td>
			<td>Personna</td>
			<td>9412071</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNA lysis buffer (RLT)</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>79216</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel Beads, 5 mm</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>69989</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfrost/plus microscopic slides</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>12-550-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue lyser LT</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>69980</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek OCT</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>4583</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>488 (goat anti-mouse)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A11029</td>
			<td>1/2000 dilution</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

mouse footpad inoculation model to study viral-induced neuroinflammatory responses

이 프로토콜은 마우스에 있는 alphaherpesvirus 감염 도중 신경 선동적인 반응의 개시 그리고 발달을 연구하기 위하여 이용된 발판 접종 모형을 기술합니다. 알파헤르페스바이러스는 말초 신경계(PNS)의 주요 침략자이기 때문에, 이 모델은 바이러스 복제의 운동, PNS에서 CNS로의 확산, 관련 신경염증 반응을 특성화하는 데 적합합니다. 풋패드 접종 모델은 바이러스 입자가 발바닥 표피의 1차 감염 부위에서 표피, 땀샘 및 진피를 내면화하는 감각및 교감 신경 섬유로 확산될 수 있게 합니다. 감염은 등대 근간 (DRG)에 상반신 신경을 통해 궁극적으로 뇌에 척수를 통해 퍼짐. 여기서, 마우스 풋패드는 포진 심플렉스 바이러스(HSV) 및 수두-동물 바이러스(VZV)와 밀접한 관련이 있는 알파헤르페스 바이러스인 의사 바이러스(PRV)로 접종된다. 이 모델은 PRV 감염이 풋패드와 DRG에 호중구 침투를 특징으로 하는 심각한 염증을 유발한다는 것을 보여줍니다. 염증성 사이토카인의 고농도는 ELISA에 의해 균질화 된 조직에서 이후에 검출됩니다. 또한, DRG에서 PRV 유전자와 단백질 발현(qPCR 및 IF 염색을 통해) 및 프로 염증성 사이토카인의 생산 사이에 강한 상관관계가 관찰된다. 따라서, 풋패드 접종 모델은 알파헤르페스바이러스 유도 신경병증의 근본적인 과정을 더 잘 이해하고 혁신적인 치료 전략의 개발로 이어질 수 있다. 또한, 모델은 다발성 경화증 및 PNS에 대한 바이러스 유발 손상과 같은 말초 신경병증에 대한 연구를 안내할 수 있다. 궁극적으로, 그것은 약물 개발을 위한 생체 내 공구에서 비용 효과적인 역할을 할 수 있습니다.

마우스 풋패드 접종 모델은 생체 내에서 알파헤르페스바이러스 감염의 면역병증의 특성화를 허용하며, 이는 접종된 풋패드에서 신경계로의 감염의 복제 및 확산을 포함하고 특정 신경염증 반응의 유도를 포함한다.
이 연구에서는 마우스 뒷발패드를 먼저 밟고 모의 접종을 하거나 PRV(PRV-Becker)의 악성 균주로 아브라드 부위를 접종했습니다. 마모 부위는 제어 풋패드에 표시되?...

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Mouse Footpad Inoculation Model to Study Viral-Induced Neuroinflammatory Responses

풋패드 접종 모델은 생체 내에서 바이러스 유발 신경 염증 반응을 특성화하는 데 중요한 도구입니다. 특히, 말초 신경계에서 시작된 바이러스 운동 및 관련 면역 병리학 적 과정에 대한 명확한 평가를 제공한다.

바이러스 유발 신경 염증 반응을 연구하는 마우스 풋패드 접종 모델

This protocol describes a footpad inoculation model used to study the initiation and development of neuroinflammatory responses during alphaherpesvirus ...

이 프로토콜은 바이러스 감염 중 마우스 말초 신경계에서 신경 염증 반응의 개시 및 발달에 대한 연구를 허용합니다. 이 모형으로, 감염은 신경 선동적인 반응의 운동성의 최대 평가를 허용하는 주변및 중추 신경계에 주변에서 더 큰 거리를 여행합니다. 수술 패드의 척추 위치에 5~7주 된 마취 C57BL/6 마우스를 배치한 후 페달 반사에 대한 반응부족을 확인한다.그리고 100에서 180 개의 모래 에머리 보드를 사용하여 발 뒤꿈치와 보행 패드 사이에 뒷발 패드 의 글라브러스 피부를 부드럽게 래브라데하고 약 20 패스의 보드가 있습니다. 그런 다음 미세 한 집게를 사용하여 찰과상에 의해 분리 된 지층 각질을 천천히 벗겨 내어 지층 바살레를 노출시하십시오. 부드러운 혼합 후, 포티컬에 적용 20 바이러스 접종의 적절한 티터의 마이크로 리터는 abraded 풋 패드에.대조동물의 발판에서만 매체로 모의 접종을 수행합니다. 각 응용 프로그램 후, 부드럽게 30 분 동안 10 분마다 바이러스의 흡착을 용이하게하기 위해 바늘의 샤프트와 풋 패드를 10 번 문질러. 마모된 풋패드가 건조되면, 쥐가 임상 후속 및 샘플링을 위해 동물을 개별 케이지에 넣기 전에 흉골 이내까지 모니터링하여 회복하도록 허용하십시오.적절한 실험 시점에서 심장, 폐, 비장, 췌장, 간, 신장 및 방광을 포함한 바이러스 가 노출된 장기를 얼음에 있는 개별 1.5 밀리리터 마이크로튜브로 수집합니다. 그런 다음 발 뒤꿈치와 보행 패드 사이의 마모 된 풋 패드를 수확하고 샘플을 얼음에 개별 1.5 밀리리터 마이크로 튜브에 넣습니다. 다음으로, 마우스를 경향이 있는 위치에 놓고 70%에탄올로 털을 적시습니다.척추 컬럼을 노출하려면 골반 부위에 작은 절개를 하고 뒷두에서 머리쪽으로 피부를 제거합니다. 앞다리와 뒷다리를 제거하려면 가위를 사용하여 양쪽의 척추와 평행하고 가깝게 자른다. 그리고 두개골의 기지에서 머리를 제거합니다.가위를 사용하여 앞골 매그넘에서 정면 뼈까지 두개골을 엽니다. 그리고 집게를 사용하여 측면 방향으로 두개골을 엽니 다. 그런 다음 집게를 사용하여 뇌를 부드럽게 떠서 뇌를 얼음에 1.5 밀리리터 마이크로튜브에 넣습니다.구부러진 가위를 사용하여 근육, 지방 및 연조직의 척추를 청소하고 꼬리를 제거합니다. 그런 다음 그대로 척수열을 얼음 위에 얼음 위에 멸균 된 얼음 차가운 PBS15 밀리리터 튜브에 3 시간 이상 놓습니다. 해부 후, 남은 연조직을 제거할 수 있도록 척수를 조직 배양 접시로 옮기십시오.면도날을 사용하여 S2, L1 및 T1 척추의 척추를 통과하는 세 개의 횡반 컷을 만듭니다. 멸균 얼음 차가운 PBS를 포함하는 개별 15 밀리미터 요리로 조각을 전송합니다. 이후 분석을 위해 세그먼트의 원점이 추적 및 표시를 유지합니다.그런 다음 집게를 사용하여 한 세그먼트 등쪽을 위로 고정하고 면도날을 사용하여 중간선을 통해 세로가 잘라 서 컬럼을 두 개의 동일한 반으로 분할합니다. 척추의 왼쪽과 오른쪽을 구별할 수 있도록 신선하고 멸균된 얼음-차가운 PBS를 새로운 페트리 접시에 모두 놓습니다. 해부 현미경에서 미세한 집게를 사용하여 척골 컬럼의 각 절반에서 척수를 부드럽게 벗겨 서 소달 방향으로 가십시오.그런 다음 두 척수를 각각 1.5 밀리리터 마이크로튜브에 넣고 멸균 얼음-차가운 PBS 500 마이크로리터를 얼음 위에 놓습니다. 등쪽 뿌리 신경절을 노출하려면 척추의 한쪽에서 다른 쪽으로 수막을 부드럽게 제거합니다. 그리고 척추에서 노출 된 백색 척추 신경을 당깁니다.척추 세그먼트에서 15밀리미터 페트리 요리로 둥근 투명한 등살 뿌리 신경절을 수확하여 차가운 PBS를 15밀리미터로 수확합니다. 그리고 방금 입증 된 바와 같이 ipsilateral 및 모순 된 등갈 뿌리 신경절을 수집합니다. 척수 신경과 등쪽 루트 신경절을 다른 두 척추 기둥 세그먼트에서 수확한 후, 조직의 모든 튜브를 고속으로 원심분리합니다.그런 다음 슈퍼 나츠제를 흡습하고 액체 질소로 샘플을 플래시 동결하고 균질화 될 때까지 영하 80도에서 저장합니다. 조직 균질화를 위해, 각 샘플의 100 밀리그램을 계량하기 전에 얼음에 얼어 붙은 조직의 튜브를 해동. 멸균 구슬과 500 마이크로리터의 방사성 면역 침전 분석 버퍼를 포함하는 2밀리리터 마이크로센심심분리기 튜브로 이송합니다.다음으로, 2분 동안 초당 20사이클에서 균질화의 실온에서 조직을 방해하고, 1분 대기 기간, 20사이클은 2분 더 진행한다. 균질화의 두 번째 라운드 후, 원심 분리는 새로운 적절하게 표시 튜브로 각 슈퍼 나탄의 500 마이크로 리터를 전송하기 전에 고속으로 조직을 원심 분리. 다운스트림 분석전까지 영하 20도에 보관하십시오.마모 부위는 제어 풋패드에 표시됩니다. 그리고 치유 과정의 일환으로 마모 부위에 지각이 형성되는 것이 일반적이다. 대조적으로, 의사로 접종된 마우스는, 붓기와 발적을 특징으로 하는 인도적인 끝점에서 발판의 가혹한 염증을 보여줍니다.접종된 풋패드와 등대 뿌리 신경절의 조직 병리학 검사는 감염된 발 섹션 내의 표피 괴사와 심한 진피 염증을 드러낸다. 호중구의 침투는 또한 DRG 섹션에 감염된 의사랍에서 관찰된다. G-CSF 단백질 발현의 현저한 증가는 7시간 82시간 후 감염시 대조군과 비교하여 인질 감염된 마우스의 풋패드 및 등쪽 뿌리 신경절에서 측정된다.중요한 G-CSF 수준은 또한 통제에 비해 척수, 두뇌, 심혼 및 간 조직에 있는 82 시간 후 감염에서 관찰됩니다. 더욱이, IL-6의 중요한 수준은 24 시간 감염 후에서 시작하는 가짜 감염된 마우스의 모든 시험된 조직에서 검출됩니다. 모리번드 상태에서, 의사 근간, 척수 및 뇌에서 발견되었습니다.psuedorabies의 높은 세포질 발현으로 감염 된 마우스에 있는 등쪽 뿌리 신경절의 뉴런에서 당단백질 gB. 성공적인 감염을 보장하기 위해, 열에 바이러스의 물방울이 마모 된 풋 패드에서 떨어지지 않는 것이 중요합니다. 이 동물 모델은 바이러스 유발 말초 신경 병증을 방지하기 위해 항 염증 및 항 바이러스 약물의 효능을 테스트하는 플랫폼을 제공 할 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Protocols for Vaginal Inoculation and Sample Collection in the Experimental Mouse Model of Candida vaginitis

Protocols for Vaginal Inoculation and Sample Collection in the Experimental Mouse Model of Candida vaginitis

의 실험 마우스 모델에서 질 접종 및 샘플 수집을위한 프로토콜 칸디다 질염

Vulvovaginal candidiasis (VVC), caused by Candida species, is a fungal infection of the lower female genital tract that affects approximately 75% of ...

연구

면역학 및 감염병학

Examining the Role of Nasopharyngeal-associated Lymphoreticular Tissue (NALT) in Mouse Responses to Vaccines

Examining the Role of Nasopharyngeal-associated Lymphoreticular Tissue NALT in Mouse Responses to Vaccines

백신에 마우스 응답 Nasopharyngeal - 관련 Lymphoreticular 조직 (NALT)의 역할을 검토

The nasopharyngeal-associated lymphoreticular tissues (NALT) found in humans, rodents, and other mammals, contribute to immunity in the nasal sinuses1-3. ...

An In vitro Model to Study Immune Responses of Human Peripheral Blood Mononuclear Cells to Human Respiratory Syncytial Virus Infection

An In vitro Model to Study Immune Responses of Human Peripheral Blood Mononuclear Cells to Human Respiratory Syncytial Virus Infection

Human respiratory syncytial  virus (HRSV) infections present a broad spectrum of disease severity, ranging  from mild infections to life-threatening ...

Humanized Mouse Model to Study Bacterial Infections Targeting the Microvasculature

인간 답게 된 마우스 모델은 미세 혈관을 대상으로 세균 감염을 연구하는

Neisseria meningitidis causes a severe, frequently fatal sepsis when it enters the human blood stream. Infection leads to extensive damage of the blood ...

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

마우스에 동종 CD4 T 세포 반응을 연구하기 위해 테일 피부 이식

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

Increased Recovery Time and Decreased LPS Administration to Study the Vagus Nerve Stimulation Mechanisms in Limited Inflammatory Responses

복구 시간 증가 및 제한 염증 반응에서 미주 신경 자극 메커니즘을 연구에 LPS 관리를 감소

Inflammation is a local response to infection and tissue damage mediated by activated macrophages, monocytes, and other immune cells that release ...

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

IL-8 transiently Transgenized 마우스 모델<em&gt; In Vivo</em&gt; 염증 반응의 장기 모니터링

Airway inflammation is often associated with bacterial infections and represents a major determinant of lung disease. The in vivo determination of the ...

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

인간 T 세포 회수 응답에서 Vivo에서 공부 하는 흡입 물집 프로토콜

Cutaneous antigen-recall models allow for studies of human memory responses in vivo. When combined with skin suction blister (SB) induction, this model ...

A Galleria mellonella Oral Administration Model to Study Commensal-Induced Innate Immune Responses

A Galleria mellonella Oral Administration Model to Study Commensal-Induced Innate Immune Responses

갤러리아 mellonella 구강 관리 모델 Study Commensal-Induced 타고 난 면역 반응에

The investigation of the immunogenic potential of commensal bacteria on the host immune system is one essential component when studying intestinal ...

Tailoring In Vivo Cytotoxicity Assays to Study Immunodominance in Tumor-specific CD8+ T Cell Responses

Tailoring In Vivo Cytotoxicity Assays to Study Immunodominance in Tumor-specific CD8+ T Cell Responses

종양 특이 CD8+ T 세포 반응에서 면역 우세를 연구 하기 위한 생체 내 세포 독성 분석 법

Carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE)-based in vivo cytotoxicity assays enable sensitive and accurate quantitation of CD8+ cytolytic T lymphocyte ...