Name: mouse footpad inoculation model to study viral-induced neuroinflammatory responses
Uploaded: 2020-06-14T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Mouse Footpad Inoculation Model to Study Viral-Induced Neuroinflammatory Responses at JoVE.com

Авторы признают лаборатории Реки Чарльза за их отличную техническую поддержку выполнения гистопатологических анализов. Эта работа была профинансирована Национальным институтом неврологических расстройств и инсульта (NINDS) (RO1 NS033506 и RO1 NS060699). Спонсоры не имели никакой роли в разработке и анализе исследований, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Все эксперименты на животных были проведены в соответствии с протоколом (номер 2083-16 и 2083-19), рассмотренным и одобренным Комитетом по уходу и использованию животных Института (МАКУК) Принстонского университета. Эта работа была выполнена строго в соответствии с требованиями уровня биобе?...

<ol>
	<li>Field, H. J., Hill, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pathogenesis+of+pseudorabies+in+mice+following+peripheral+inoculation.">The pathogenesis of pseudorabies in mice following peripheral inoculation.</a> Journal of General Virology. 23 (2), 145-157 (1974).</li><li>Engel, J. P., Madigan, T. C., Peterson, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+transneuronal+spread+phenotype+of+herpes+simplex+virus+type+1+infection+of+the+mouse+hind+footpad.">The transneuronal spread phenotype of herpes simplex virus type 1 infection of the mouse hind footpad.</a> Journal of Virology. 71 (3), 2425-2435 (1997).</li><li>Guedon, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+changes+induced+by+Varicella+Zoster+Virus+in+a+rat+model+of+postherpetic+neuralgia.">Neuronal changes induced by Varicella Zoster Virus in a rat model of postherpetic neuralgia.</a> Virology. 482, 167-180 (2015).</li><li>Pomeranz, L. E., Reynolds, A. E., Hengartner, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+biology+of+pseudorabies+virus:+impact+on+neurovirology+and+veterinary+medicine.">Molecular biology of pseudorabies virus: impact on neurovirology and veterinary medicine.</a> Microbiology and Molecular Biology Reviews. 69 (3), 462-500 (2005).</li><li>Wittmann, G., Rziha, H. J., Knipe, D. M., Howley, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aujeszky's+disease+(pseudorabies)+in+pigs.">Aujeszky's disease (pseudorabies) in pigs.</a> Herpesvirus diseases of cattle, horses and pigs. 9, 230-325 (1989).</li><li>Leman, A. D., Glock, R. D., Mengeling, W. L., Penny, R. H. C., Scholl, E., Straw, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Diseases of swine, 6th ed. , 209-223 (1986).</li><li>Sleigh, J. N., Weir, G. A., Schiavo, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple,+step-by-step+dissection+protocol+for+the+rapid+isolation+of+mouse+dorsal+root+ganglia.">A simple, step-by-step dissection protocol for the rapid isolation of mouse dorsal root ganglia.</a> BMC Research Notes. 9, 82 (2016).</li><li>Sands, S. A., Leung-Toung, R., Wang, Y., Connelly, J., LeVine, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+Histochemical+Detection+of+Iron+in+Paraffin+Sections+of+Mouse+Central+Nervous+System+Tissue:+Application+in+the+APP/PS1+Mouse+Model+of+Alzheimer's+Disease.">Enhanced Histochemical Detection of Iron in Paraffin Sections of Mouse Central Nervous System Tissue: Application in the APP/PS1 Mouse Model of Alzheimer's Disease.</a> ASN Neuro. 8 (5), (2016).</li><li>Cardiff, R. D., Miller, C. H., Munn, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manual+hematoxylin+and+eosin+staining+of+mouse+tissue+sections.">Manual hematoxylin and eosin staining of mouse tissue sections.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2014 (6), 655-658 (2014).</li><li>Koyuncu, O. O., MacGibeny, M. A., Hogue, I. B., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compartmented+neuronal+cultures+reveal+two+distinct+mechanisms+for+alpha+herpesvirus+escape+from+genome+silencing.">Compartmented neuronal cultures reveal two distinct mechanisms for alpha herpesvirus escape from genome silencing.</a> PLoS pathogens. 13 (10), 1006608 (2017).</li><li>Laval, K., Vernejoul, J. B., Van Cleemput, J., Koyuncu, O. O., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virulent+Pseudorabies+Virus+Infection+Induces+a+Specific+and+Lethal+Systemic+Inflammatory+Response+in+Mice.">Virulent Pseudorabies Virus Infection Induces a Specific and Lethal Systemic Inflammatory Response in Mice.</a> Journal of Virology. 92 (24), 01614-01618 (2018).</li><li>Laval, K., Van Cleemput, J., Vernejoul, J. B., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alphaherpesvirus+infection+of+mice+primes+PNS+neurons+to+an+inflammatory+state+regulated+by+TLR2+and+type+I+IFN+signaling.">Alphaherpesvirus infection of mice primes PNS neurons to an inflammatory state regulated by TLR2 and type I IFN signaling.</a> PLoS Pathogens. 15 (11), 1008087 (2019).</li><li>Brittle, E. E., Reynolds, A. E., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+modes+of+pseudorabies+virus+neuroinvasion+and+lethality+in+mice.">Two modes of pseudorabies virus neuroinvasion and lethality in mice.</a> Journal of Virology. 78 (23), 12951-12963 (2004).</li><li>Mancini, M., Vidal, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insights+into+the+pathogenesis+of+herpes+simplex+encephalitis+from+mouse+models.">Insights into the pathogenesis of herpes simplex encephalitis from mouse models.</a> Mammalian Genome: Official Journal of the International Mammalian Genome Society. 29 (7-8), 425-445 (2018).</li><li>Kopp, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infection+of+neurons+and+encephalitis+after+intracranial+inoculation+of+herpes+simplex+virus+requires+the+entry+receptor+nectin-1.">Infection of neurons and encephalitis after intracranial inoculation of herpes simplex virus requires the entry receptor nectin-1.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (42), 17916-17920 (2009).</li><li>Wang, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+specific+innate+immune+responses+in+herpes+simplex+virus+infection+of+the+central+nervous+system.">Role of specific innate immune responses in herpes simplex virus infection of the central nervous system.</a> Journal of Virology. 86 (4), 2273-2281 (2012).</li><li>Haberthur, K., Messaoudi, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+varicella+zoster+virus+infection.">Animal models of varicella zoster virus infection.</a> Pathogens. 2 (2), 364-382 (2013).</li><li>Sarova-Pinhas, I., Achiron, A., Gilad, R., Lampl, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+neuropathy+in+multiple+sclerosis:+a+clinical+and+electrophysiologic+study.">Peripheral neuropathy in multiple sclerosis: a clinical and electrophysiologic study.</a> Acta Neurologica Scandinavia. 91 (4), 234-238 (1995).</li><li>MacGibeny, M. A., Koyuncu, O. O., Wirblich, C., Schnell, M. J., Enquist, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retrograde+axonal+transport+of+rabies+virus+is+unaffected+by+interferon+treatment+but+blocked+by+emetine+locally+in+axons.">Retrograde axonal transport of rabies virus is unaffected by interferon treatment but blocked by emetine locally in axons.</a> PLoS Pathogens. 14 (7), 1007188 (2018).</li><li>Hunsperger, E. A., Roehrig, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+analyses+of+the+neuropathogenesis+of+a+West+Nile+virus+infection+in+mice.">Temporal analyses of the neuropathogenesis of a West Nile virus infection in mice.</a> Journal of Neurovirology. 12 (2), 129-139 (2006).</li><li>Swartwout, B. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zika+Virus+Persistently+and+Productively+Infects+Primary+Adult+Sensory+Neurons+In+Vitro.">Zika Virus Persistently and Productively Infects Primary Adult Sensory Neurons In Vitro.</a> Pathogens. 6 (4), 49 (2017).</li><li>Racaniello, V. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=One+hundred+years+of+poliovirus+pathogenesis.">One hundred years of poliovirus pathogenesis.</a> Virology. 344 (1), 9-16 (2006).</li></ol>

Модель прививки, описанная здесь, полезна для исследования инициирования и развития нейровоспалительных реакций во время альфагерпейвирусной инфекции. Кроме того, эта модель in vivo используется для установления кинетики репликации и распространения альфагерпезвируса от PNS до ЦНС. Это ?...

Это исследование описывает модель прививки для исследования репликации и распространения вирусов от PNS до ЦНС и связанных с ними нейровоспалительных реакций. Модель прививки стопы интенсивно используется для изучения альфагерпейвирусной инфекции в нейронах1,,2,,3. Основная цель этой модели заключается в том, чтобы позволить нейротропных вирусов путешествовать максимальное расстояние через PNS до достижения ЦНС. Здесь эта модель используется для получения новых идей в развитии конкретной невропатии (нейропатический зуд) у мышей, инфицированных вирусом псевдораби (PRV).
PRV является альфагерпезвирус, связанный с несколькими известными патогенами (на самом деле, герпес симокс типа 1 и 2 "HSV1 и HSV2" и вирус ветряной опоясывающий лишая, которые вызывают герпес, половые язвы, и ветряная оспа, соответственно4. Эти вирусы все пантропные и в состоянии заразить много различных типов клеток, не показывая сродство к определенному типу ткани. Тем не менее, все они проявляют характерный нейротропизм, вторгаясь в PNS (а иногда и ЦНС) видов-хозяев. Естественным хозяином является свинья, но PRV может заразить большинство млекопитающих. В этих не-естественных хостов, PRV заражает PNS и вызывает тяжелые зуд называется "безумный зуд", а затем peracute смерти5,6. Роль нейроиммуна в клиническом исходе и патогенезе PRV инфекции было плохо изучено.
Модель прививки стопы позволяет PRV инициировать инфекцию в эпидермальных клетках стопы. Затем инфекция распространяется на сенсорные и симпатические нервные волокна, которые иннервирует эпидермис, потовые железы и дерму. Инфекция распространяется частицами вируса, движущимися через седалищный нерв к DRG в пределах приблизительно 60 ч. Инфекция распространяется через спинной мозг, в конечном счете, достигнув заднего мозга, когда животные становятся умирающими (82 ч после инфекции). В течение этого времени, образцы тканей могут быть собраны, обработаны и проанализированы для репликации вируса и маркеры иммунного ответа. Например, гистологическое обследование и количественная оценка вирусной нагрузки могут быть выполнены в различных тканях для установления корреляции между началом и развитием клинических, вирусологических и нейровоспалительных процессов в ВОЗ ПАТОГЕНеза PRV.
Используя модель прививки стопы, можно исследовать клеточные и молекулярные механизмы PRV-индуцированного зуда у мышей. Кроме того, эта модель может дать новое представление о начале и развитии вирус-индуцированной нейровоспламеняющиеся во время герпесвирусных инфекций. Более глубокое понимание процессов, лежащих в основе нейропатий, вызванных альфагерпейвирусом, может привести к разработке инновационных терапевтических стратегий. Например, эта модель полезна для исследования механизмов невропатического зуда у пациентов с пост-герпетическими поражениями (например, опоясывающим герпесом, черепицей) и тестирует новые терапевтические цели у мышей на соответствующие заболевания человека.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Antibody anti-PRV gB</td>
			<td>Made by the lab</td>
			<td></td>
			<td>1/500 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aqua-hold2 pap pen red</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>2886909</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compact emery boards-24 count (100/180 grit nail files)</td>
			<td>Revlon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Complete EDTA-free Protease Inhibitor Cocktail</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>11836170001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6 mice (5-7 weeks)</td>
			<td>The Jackson Laboratories</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI solution (1mg/ml)</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>62248</td>
			<td>1/1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable sterile polystyrene petri dish 100 x 15 mm</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5731500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium (DMEM)</td>
			<td>Hyclone, GE Healthcare life Sciences</td>
			<td>SH30022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Phophate Buffer Saline (PBS) solution</td>
			<td>Hyclone, GE Healthcare life Sciences</td>
			<td>SH30028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Hyclone, GE Healthcare life Sciences</td>
			<td>SH30088</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine curved scissors stainless steel</td>
			<td>FST</td>
			<td>14095-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoromount-G mounting media</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>0100-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin solution, neutral buffered 10%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>HT501128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isothesia Isoflurane</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>NDC 11695-6776-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tube 2ml</td>
			<td>Denville Scientific</td>
			<td>1000945</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtube 1.5ml</td>
			<td>SARSTEDT</td>
			<td>72692005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Negative goat serum</td>
			<td>Vector</td>
			<td>S-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>154022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision Glide needle 18G</td>
			<td>BD</td>
			<td>305196</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blades steel back</td>
			<td>Personna</td>
			<td>9412071</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNA lysis buffer (RLT)</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>79216</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel Beads, 5 mm</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>69989</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfrost/plus microscopic slides</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>12-550-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue lyser LT</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>69980</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek OCT</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>4583</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>488 (goat anti-mouse)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A11029</td>
			<td>1/2000 dilution</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

mouse footpad inoculation model to study viral-induced neuroinflammatory responses

Этот протокол описывает модель прививки, используемой для изучения инициации и развития нейровоспалительных реакций во время альфагерпепсвирусной инфекции у мышей. Поскольку альфагерпексвирусы являются основными захватчиками периферической нервной системы (PNS), эта модель подходит для характеристики кинетики вирусной репликации, ее распространения от PNS к ЦНС и связанных с ними нейровоспалительных реакций. Модель прививки стопы позволяет частицам вируса распространяться от первичного места инфекции в footpad эпидермис к сенсорным и симпатическим нервным волокнам, которые иннервировать эпидермис, потовые железы и дерму. Инфекция распространяется через седалищный нерв к спинной корневой ганглии (DRG) и в конечном итоге через спинной мозг к мозгу. Здесь, мышь footpad прививается с вирусом pseudorabies (PRV), альфагерпезвирус тесно связаны с вирусом простого герпеса (HSV) и вирус ветряной опоясывающий лишай (ВЗВ). Эта модель показывает, что PRV инфекция вызывает сильное воспаление, характеризуется инфильтрацией нейтрофила в подножку и DRG. Высокие концентрации воспалительных цитокинов впоследствии обнаруживаются в гомогенизированных тканях ELISA. Кроме того, наблюдается сильная корреляция между геном PRV и экспрессией белка (через qPCR и IF окрашивания) в DRG и производством провоспалительных цитокинов. Таким образом, модель прививки стопы обеспечивает лучшее понимание процессов, лежащих в основе нейропатий, вызванных альфагерпейвирусом, и может привести к разработке инновационных терапевтических стратегий. Кроме того, модель может направлять исследования на периферических невропатий, таких как рассеянный склероз и связанные с ними вирусные индуцированных повреждений PNS. В конечном счете, он может служить экономически эффективным инструментом in vivo для разработки лекарств.

Модель прививки стопы мыши позволяет олицеделять иммунопатогенез альфагерпезвирусной инфекции in vivo, включая репликацию и распространение инфекции от привитой стопы к нервной системе и индукции специфических нейровоспалительных реакций.
В этом исследовании, мы сначал...

Watch this Scientific Journal Video about Mouse Footpad Inoculation Model to Study Viral-Induced Neuroinflammatory Responses at JoVE.com

Mouse Footpad Inoculation Model to Study Viral-Induced Neuroinflammatory Responses

Модель прививки стопы является ценным инструментом для характеристики вирусных индуцированных нейровоспалительных реакций в vivo. В частности, он обеспечивает четкую оценку вирусной кинетики и связанных с ней иммунопатологических процессов, инициированных в периферической нервной системе.

Мышь Footpad прививки Модель для изучения вирусно-индуцированных нейровоспалительных реакций

This protocol describes a footpad inoculation model used to study the initiation and development of neuroinflammatory responses during alphaherpesvirus ...

Данный протокол позволяет изучать инициирование и развитие нейровоспламеняящих реакций в периферической нервной системе мыши во время вирусной инфекции. С помощью этой модели инфекции промещают большее расстояние от периферии до периферической и центральной нервной системы, что позволяет получить максимальную оценку кинетики нейровоспламеняющий ответ. После размещения пять-семь недель обезболивающее C57BL/6 мыши в положении на спине на хирургической площадке, подтвердить отсутствие ответа на педаль рефлекс.И использовать от 100 до 180 песка Эмери борту, чтобы мягко abrade глабрузной кожи одной задней подножки между пяткой и пешеходные прокладки с около 20 проходов доски. Затем используйте тонкие миппы, чтобы медленно отслаить роговицу слоя, отделенную ссадиной, чтобы разоблачить слой базале. После нежного смешивания, местно нанесите 20 микролитров соответствующего titer инокулума вируса на абрадированную подножку.Проводить макетные прививки со средними только в абраденых подножких контрольных животных параллельно. После каждого применения, осторожно руб подножку 10 раз с валом иглы, чтобы облегчить adorption вируса каждые 10 минут в течение 30 минут. Когда абрадированная подножка высушена, позвольте мышам восстановиться с мониторингом до стернальной лежачих мест перед размещением животных в отдельных клетках для клинического наблюдения и отбора проб.В соответствующие экспериментальные точки времени, собирать вирус подвергаются органов, в том числе сердца, легких, селезенки, поджелудочной железы, печени, почек и мочевого пузыря в отдельных 1,5 миллилитров микротрубки на льду. Затем соберем абраденые подножки между пяткой и пешеходными площадками и поместите образцы в отдельные микротрубочки 1,5 миллилитров на льду. Далее поместите мышь в положение склонных и мокрый мех с 70% этанола.Чтобы разоблачить позвоночник, сделайте небольшой разрез в области таза и смойте кожу от задних конечностей к голове. Чтобы удалить переконд и задние конечности, используйте ножницы, чтобы прорезать параллельно и близко к позвоночнику с обеих сторон. И удалить голову у основания черепа.Используйте ножницы, чтобы открыть череп от foramen magnum до лобной кости. И используйте типсы, чтобы открыть череп в боковом направлении. Затем используйте типсы, чтобы аккуратно вычерпыть мозг и поместить мозг в 1,5 миллилитров микротрубки на льду.Используйте изогнутые ножницы для очистки позвоночника мышц, жира и мягких тканей, а также удалить хвост. Затем поместите нетронутый позвоночник в 15-миллилитровую трубку стерильного ледяного PBS на льду не более трех часов. После вскрытия перенесите спинной мозг в блюдо культуры тканей, чтобы удалить оставшиеся мягкие ткани.Используйте лезвие бритвы, чтобы сделать три поперечных прорезает позвоночник на S2, L1, и T1 позвонков. Перенесите кусочки в отдельные 15-миллиметровые блюда, содержащие стерильный ледяной PBS. Отслеживание и маркировка происхождения сегментов для более длительного анализа.Далее, используйте щипцы для обеспечения одного сегмента спинной стороны вверх и использовать лезвие бритвы, чтобы сделать один, продольный сократить через середину, чтобы разделить столбец на две равные половинки. Поместите обе половинки в новую чашку Петри, содержащую свежий, стерильный ледяной PBS в первоначальной ориентации, чтобы иметь возможность различать левую и правую стороны позвоночника. Под рассечением микроскопа используйте тонкие типсы, чтобы аккуратно очистить спинной мозг от каждой половины позвоночного столба в ростральном и хвостовом направлении.Затем поместите обе половинки спинного мозга в отдельные микротрубки 1,5 миллилитров, содержащие 500 микролитров стерильного ледяного PBS на льду. Чтобы разоблачить спинной корневой ганглий, аккуратно удалите околение с одной стороны позвоночника на другую. И вытащите открытый белый спинной нерв из позвоночника.Урожай круглый, прозрачный спинной корень ганглия из позвоночника сегмента в 15 миллиметров Петри блюдо ледяной PBS. И собирать ипсилатеральный и контралатеральный спинной корневой ганглион, как только что продемонстрировано. После сбора спинного нерва и спинного корня ганглиона из двух других сегментов позвоночника, как только что продемонстрировано, центрифуга всех трубок ткани на высокой скорости.Затем аспирировать супернатанты и флэш-заморозить образцы в жидком азоте, и хранить при температуре минус 80 градусов по Цельсию до гомогенизации. Для гомогенизации тканей, оттаивать трубки замороженных тканей на льду, прежде чем взвешивать 100 миллиграммов каждого образца. Передача в двухмилитровую микроцентрифугированную трубку, содержащую стерильные бусы и 500 микролитров буфера анализа радиоиммунопреципиентации.Затем нарушить ткани при комнатной температуре на гомогенизатор на 20 циклов в секунду в течение двух минут, а затем одну минуту ожидания период, и 20 циклов в секунду в течение дополнительных двух минут. После второго раунда гомогенизации центрифуга тканей на высокой скорости перед передачей 500 микролитров каждого супернатанта в новую соответствующую помеченную трубку. Хранить при температуре минус 20 градусов по Цельсию до анализа ниже по течению.Место ссадины видно на подножку управления. И это типично для коры, чтобы сформировать в месте ссадины как часть процесса заживления. В отличие от этого, мыши, привитые псевдорабиями, демонстрируют сильное воспаление подножки на гуманной конечной точке, которая характеризуется отеком и покраснением.Гистопатологическое обследование привитой подножки и спинного корня ганглиона выявляет эпидермальный некроз и тяжелое дермальное воспаление в псевдорабиях инфицированных участков стопы. Инфильтрация нейтрофилов также наблюдается в псевдорабиях инфицированных DRG разделов. Значительное увеличение экспрессии белка G-CSF измеряется в подножке и спинном корневом ганглии псевдорабий инфицированных мышей по сравнению с контролем как на семи, так и на 82-часовой пост-инфекции.Значительные уровни G-CSF также наблюдаются на 82-часовой пост-инфекции в спинном мозге, головном мозге, сердце, и печени тканей псевдорабии инфицированных мышей по сравнению с контроля. Кроме того, значительные уровни ИЛ-6 обнаруживаются во всех проверенных тканях псевдорабий инфицированных мышей, начиная с 24-часовой пост-инфекции. В умирающем состоянии псевдорабии были обнаружены в подножки, спинном корневом ганглии, спинном мозге и головном мозге.При высокой цитоплазмической экспрессии psuedorabies гликопротеин GB в нейронах спинного корня ганглиона у псевдорабов инфицированных мышей. Чтобы обеспечить успешную инфекцию, важно, чтобы капля вируса в столбце не упала с ссадины. Эта модель животных может служить платформой для проверки эффективности противовоспалительных и противовирусных препаратов для предотвращения вирусных индуцированных периферических невропатий.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Protocols for Vaginal Inoculation and Sample Collection in the Experimental Mouse Model of Candida vaginitis

Protocols for Vaginal Inoculation and Sample Collection in the Experimental Mouse Model of Candida vaginitis

Протоколы для Вагинальные Прививка и сбора проб в экспериментальной модели мышей Candida Вагинит

Vulvovaginal candidiasis (VVC), caused by Candida species, is a fungal infection of the lower female genital tract that affects approximately 75% of ...

Examining the Role of Nasopharyngeal-associated Lymphoreticular Tissue (NALT) in Mouse Responses to Vaccines

Examining the Role of Nasopharyngeal-associated Lymphoreticular Tissue NALT in Mouse Responses to Vaccines

Рассматривая роль носоглотки связанных лимфоретикулярных тканей (NALT) в мышь Ответы на вакцины

The nasopharyngeal-associated lymphoreticular tissues (NALT) found in humans, rodents, and other mammals, contribute to immunity in the nasal sinuses1-3. ...

An In vitro Model to Study Immune Responses of Human Peripheral Blood Mononuclear Cells to Human Respiratory Syncytial Virus Infection

An In vitro Model to Study Immune Responses of Human Peripheral Blood Mononuclear Cells to Human Respiratory Syncytial Virus Infection

Human respiratory syncytial  virus (HRSV) infections present a broad spectrum of disease severity, ranging  from mild infections to life-threatening ...

Humanized Mouse Model to Study Bacterial Infections Targeting the Microvasculature

Humanized мышь моделью для изучения Бактериальные инфекции Ориентация микрососудов

Neisseria meningitidis causes a severe, frequently fatal sepsis when it enters the human blood stream. Infection leads to extensive damage of the blood ...

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

Трансплантация кожи хвоста изучать Аллогенная лимфоцитов CD4 ответов у мышей

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

Increased Recovery Time and Decreased LPS Administration to Study the Vagus Nerve Stimulation Mechanisms in Limited Inflammatory Responses

Увеличение времени восстановления и снижение LPS администрации по изучению Нерв стимуляции блуждающего механизмов в ограниченной Воспалительные Ответы

Inflammation is a local response to infection and tissue damage mediated by activated macrophages, monocytes, and other immune cells that release ...

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

Модель переходной трансгенерации IL-8 для<em&gt; В Виво</em&gt; Долгосрочный мониторинг воспалительных реакций

Airway inflammation is often associated with bacterial infections and represents a major determinant of lung disease. The in vivo determination of the ...

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

Всасывания блистер протокол для изучения человеческий Т-клеточный вспомнить ответы в естественных условиях

Cutaneous antigen-recall models allow for studies of human memory responses in vivo. When combined with skin suction blister (SB) induction, this model ...

A Galleria mellonella Oral Administration Model to Study Commensal-Induced Innate Immune Responses

A Galleria mellonella Oral Administration Model to Study Commensal-Induced Innate Immune Responses

Модель администрирования Galleria mellonella устные Innate иммунных реакций Study Commensal-Induced

The investigation of the immunogenic potential of commensal bacteria on the host immune system is one essential component when studying intestinal ...

Tailoring In Vivo Cytotoxicity Assays to Study Immunodominance in Tumor-specific CD8+ T Cell Responses

Tailoring In Vivo Cytotoxicity Assays to Study Immunodominance in Tumor-specific CD8+ T Cell Responses

Портняжное в естественных условиях цитотоксичности исследования для изучения Иммунодоминирования в опухоль конкретных CD8+ т ячейки ответы

Carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE)-based in vivo cytotoxicity assays enable sensitive and accurate quantitation of CD8+ cytolytic T lymphocyte ...