Name: flypub to study ethanol induced behavioral disinhibition and sensitization
Uploaded: 2020-05-18T14:30:00
Duration: 8 min 13 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Flypub To Study Ethanol Induced Behavioral Disinhibition and Sensitization at JoVE.com

تم دعم هذا العمل من قبل NIAAA 1R15AA020996 ، NIMH R21MH109953 ، مؤسسة أبحاث الدماغ والسلوك NARSAD ، وNIMHD 2G12MD007592 المنح العنقودية NMD. كما أننا ممتنون لبرنامج RISE الممول من المعاهد القومية للصحة (NIGMS 5R25GM069621) لدعم NMD و CMS ، وبرنامج UTEP COURI-تجاوز لدعم NMD ، وبرنامج MARC الممول من المعاهد القومية للصحة (NIGMS 2T34GM008048-31) لدعم AA ، وزمالة الدكتور كيلونغ هونغ للدراسات العليا لدعم EBS. نحن نقدر كثيرا قسم الاتصالات UTEP: دارلين باراخاس، كريستيان ريفيرا، كارينا مورينو، خوسيه لويا فرنانديز وقسم الموسيقى: ستيفن أ. حداد لمساعدتهم في إنتاج الفيديو والصوت. وأخيرا، نحن ممتنون جدا للدكتور أندرياس ثوم لتقاسم tαh متحولة في خلفية كانتون-S جنبا إلى جنب مع التحكم كانتون-S الذباب; وجيسيكا Burciaga لمساهمتها القيمة في الدراسات الأولية على octopamine وأعضاء مختبر هان للمناقشة والدعم.

ملاحظة: يفصّل قسم البروتوكول الخطوات التحضيرية والفرعية والتحليلية لـ Flypub التي تشمل (1) تجميع الغرفة، (2) رعاية الذبابة وجمعها، (3) إعداد محطة المشاهدة، (4) التعرض للإيثانول، (5) تسجيل التودد وتحليل البيانات، و(6) التحليل الإحصائي. يتم تصوير الخطوات الرئيسية لإجراء القول والتحليل Flypub في سير العمل(الشكل 1).
1- جمعية الغرفة(الشكل 2)
<ol><li>قطع الجزء السفلي من زجاجة دروسوفيلا جولة في علامة 25 مل باستخدام شفرة حلاقة.</li>
	<li>جعل حفرة، 5 ملم في القطر، في علامة 50 مل من الزجاجة باستخدام الحديد لحام الساخنة. ملاحظة: هذه هي نقطة الوصول حيث سيتم نقل الذباب إلى الغرفة.</li>
	<li>قطع ورقة شبكة في دائرة، 54 ملم في القطر، لتناسب في زجاجة دروسوفيلا في علامة 75 مل.</li>
	<li>تأمين شبكة في علامة 75 مل من الزجاجة باستخدام الغراء الساخن.</li>
	<li>قطع ورقة بلاستيكية البولي في دائرة، 70 ملم في القطر.</li>
	<li>إرفاق ورقة بلاستيكية البولي إلى زجاجة في علامة 25 مل (أسفل منطقة مفتوحة المحرز في الخطوة 1.1) باستخدام الغراء الساخن.</li>
	<li>الضغط لأسفل باستخدام الأوزان لضمان أن يتم إرفاق جولة البولي بحزم إلى أسفل.</li>
	<li>غسل الحانات مع الإيثانول لإزالة أي الروائح وشطف بغزارة لهم عدة مرات تحت الماء المقطر الجاري. يهز الحانات بقوة لإزالة المياه الزائدة.</li>
	<li>تجفيف الحانات عن طريق وضعها أفقيا على المناشف الورقية في درجة حرارة الغرفة.</li>
</ol>2. يطير الرعاية وجمع
<ol><li>الحفاظ على الذباب على دقيق الذرة القياسية / أجار / السكر / الخميرة الغذاء المتوسطة (https://bdsc.indiana.edu/information/recipes/harvardfood.html).</li>
	<li>جمع الذباب الذكور من يوم واحد إلى يومين في مجموعة من 33، والتي تمثل نقطة بيانات واحدة، تحت ثاني أكسيد الكربون (CO2)التخدير. تأكد من اختيار الذباب مع مورفولوجيا سليمة ووضعها في قارورة الطعام لاسترداد. ملاحظة: ذبابتان أقل أو ثلاث ذبابة لكل مجموعة مقبولة. يمكن أن تكون السلوكيات حساسة للإعدادات التجريبية وبالتالي قد يحتاج إجمالي عدد الذبابة لكل حانة إلى تعديل خط طيران التحكم. ملاحظة: تأكد من وضع قارورة الطعام على الجانب حتى لا يعلق الذباب المُسَسَسَس َإلى الطعام.</li>
	<li>الحفاظ على الذباب في حاضنة 25 درجة مئوية مع ما لا يقل عن 50٪ الرطوبة النسبية و12 ساعة ضوء / 12 ساعة دورة مظلمة لمدة 2 أيام قبل التعرض للإيثانول. ملاحظة:إزالة ثاني أكسيد الكربون أمر بالغ الأهمية للقضاء على أي آثار فسيولوجية أو سلوكية مستحثة من CO2قد تغير الاستجابات الناجمة عن الإيثانول.</li>
	<li>استخدام رموز لالأنماط الجينية ذبابة أعمى أو ظروف العلاج إلى المجربين إجراء التعرض الإيثانول وتسجيل السلوكيات المغازلة. ملاحظة: تساعد الاختبارات العمياء في القضاء على التحيز التجريبي.</li>
</ol>3. محطة اعادة تعيين(الشكل 3A)
<ol><li>قم بإعداد حامل نسخة مع ذراع مركز مرفق على أعلى مقعد في غرفة جيدة التهوية. ملاحظة: حامل النسخ غير إلزامي. أي جهاز التدريج الذي يوفر منصة مستوى كافية.</li>
	<li>المشبك الذراعين الجانبي إلى موقف، مع كل ذراع ما يقرب من 18 سم من وسط الموقف.</li>
	<li>وضع ضوء الفلورسنت على كل ذراع من الوقوف واحد في الوسط.</li>
	<li>إرفاق مسجل الفيديو إلى الذراع الوسطى، ما يقرب من 38 سم فوق مركز القاعدة. سيؤدي ذلك إلى تسجيل الحانات من وجهة نظر أعلى.</li>
	<li>تغطية قاعدة الموقف مع ورقة بيضاء، مما يساعد على تصور الذباب داكنة اللون لخلق التباين.</li>
	<li>خلال يوم التعرض، قم بتشغيل أضواء الفلورسنت والكمبيوتر المتصل بكاميرا الفيديو المرفقة بحامل النسخة(الشكل 3A). ملاحظة: توفر شدة الضوء 2100-2200 لوكس نوعية جيدة من السلوكيات المسجلة للتسجيل. ومع ذلك، فإن ظروف الإضاءة المحيطة في المختبر كافية لمراقبة أنشطة المغازلة الناجمة عن الإيثانول.</li>
	<li>إعداد العناصر التي سيتم استخدامها للتعرض للإيثانول المبينة في الشكل 3B.</li>
	<li>جمع ستة نظيفة، والحانات تجميعها لمجموعة من التجارب وتسمية لهم مع رمز 1 إلى 6. ملاحظة: تأكد من وضع الرموز العشوائية على الأنماط الجينية للذبابة أو ظروف العلاج.</li>
</ol>4. التعرض للإيثانول(الشكل 3)
<ol><li>نقل بلطف مجموعة من 33 الذكور في غرفة Flypub من خلال ثقب في علامة 50 مل باستخدام قمع صغير. ملاحظة: لتقليل الضغط الميكانيكي على الذباب، ضع وسادة الماوس أو أي مادة توسيد تحت الحانة أثناء النقل.</li>
	<li>غطي الحفرة بشريط ملاحظة: يتم استخدام الشريط لإغلاق الحفرة، ومنع الذباب من الهروب من الحانة.</li>
	<li>محاذاة الحانات على خشبة المسرح من 1 إلى 6.</li>
	<li>تكييف الذباب إلى الغرفة لمدة 10 دقيقة(الشكل 3D).</li>
	<li>ضبط إعدادات الكاميرا بما في ذلك التركيز والتكبير والسطوع، وتسجيل آخر 5 دقيقة من التأقلم لقياس مستوى المغازلة القاعدية. ملاحظة: للقضاء على الوهج الناتج عن انعكاس الضوء من حانة، ضع مناديل المختبر (عادةً 4 طبقات أو أقل من سمك 1 مم) في الجزء السفلي من الحانة لضبط الزاوية.</li>
	<li>إعداد منصات القطن لتسليم الإيثانول عن طريق قطع وسادة في أربعة أرباع متساوية مع مقص نظيفة ومن ثم تقليم زوايا لجعلها تناسب في طبق بيتري أثناء التأقلم(الشكل 3C). ملاحظة: لا تستخدم الأيدي العارية للتعامل مع منصات القطن. استخدام ملقط للتعامل مع منصات القطن لتجنب أي نقل محتمل للروائح.</li>
	<li>إضافة وسادة القطن في كل طبق بيتري.</li>
	<li>أضف 1 مل من الإيثانول بنسبة 95٪ إلى كل وسادة قطنية، وتأكد من توزيع محلول الإيثانول بالتساوي على كامل مساحة اللوحة.</li>
	<li>تغطية مع مناديل مختبر ذات طبقات مزدوجة لتجنب تبخر الإيثانول السريع.</li>
	<li>ضع طبق بيتري الصغير الذي يحتوي على وسادة القطن المنقوعة بالإيثانول ومناديل المختبر ذات الطبقات المزدوجة من خلال الفتحة السفلية للحانة بعد التأقلم.</li>
	<li>قم بمحاذاة الحانات على المسرح، وابدأ التسجيل وابدأ مؤقتًا في وقت واحد.</li>
	<li>سجل الحانات التي تحتوي على الذباب أثناء التعرض للإيثانول حتى يتوقف الذباب عن التودد أو الحركة بسبب التأنيب.</li>
	<li>إزالة طبق بيتري التي تحتوي على الإيثانول من كل حانة مع ملعقة عندما يتم وضع أكثر من 90٪ من الذباب.</li>
	<li>نقل بلطف الذباب مرة أخرى إلى قواريربهم المخصصة من خلال ثقب في علامة 50 مل في الحانة. ملاحظة: ضع قمعًا فوق قوارير الطعام للمساعدة في النقل. تأكد من وضع الذباب السبّاق على جانب قوارير الطعام لمنعهم من التعلق في الطعام.</li>
	<li>تنظيف الحانات مع الإيثانول لإزالة أي الروائح وشطف بغزارة لهم عدة مرات تحت الماء المقطر الجاري. يهز الحانات بقوة لإزالة المياه الزائدة.</li>
	<li>تجفيف الحانات عن طريق وضعها أفقيا على المناشف الورقية في درجة حرارة الغرفة.</li>
	<li>الحفاظ على الذباب في حاضنة 25 درجة مئوية مع ما لا يقل عن 50٪ الرطوبة النسبية و12 ساعة ضوء / 12 ساعة دورة مظلمة.</li>
	<li>كرر الخطوات 4.1-4.17 كل 24 ساعة لمدة ستة أيام متتالية وتأكد من إجراء التعرض للإيثانول في نفس الوقت من اليوم لتجنب أي آثار circadian. ملاحظة: تغيير قوارير الطعام كل 2 -3 أيام للحفاظ على الذباب صحية.</li>
</ol>5. سجل المغازلة وتحليل البيانات(الشكل4-6)
<ol><li>افتح مقاطع الفيديو المسجلة باستخدام مشغل وسائط (على سبيل المثال، VLC) وقم بتكبير الفيديو لمراقبة الذباب بوضوح للتسجيل(الشكل 4A).</li>
	<li>إرفاق رمز الوقت إلى الفيديو(الشكل 4B).</li>
	<li>عد عدد الذكور المشاركين في أنشطة المغازلة بما في ذلك التالية، تمديد الجناح من جانب واحد، سلسلة المغازلة، دائرة المغازلة، الانحناء البطن وتركيب لكل 10 s كتلة الوقت31 (الشكل 5).</li>
	<li>أدخل عدد الذكور الذين يعرضون المغازلة لكل كتلة زمنية 10 s في ورقة عمل(الشكل 6A).</li>
	<li>استخدام العدد الأقصى من الذكور التودد في ثلاثة متتالية 10 ق كتل الوقت كنقطة بيانات تمثيلية(الشكل 6B).</li>
	<li>حساب متوسط 10 نقاط بيانات متتالية لها أعلى قيمة(الشكل 6C)وهذا يمثل النسبة المئوية للمغازلة بين الذكور لكل حانة(الشكل 6A).</li>
</ol>6 - التحليل الإحصائي (الشكل التكميلي 1)
<ol><li>فتح برنامج التحليل الإحصائي (على سبيل المثال، Minitab 17) وإضافة بيانات المغازلة في ورقة العمل. ملاحظة: يمكن استخدام أي برنامج تحليل إحصائي.</li>
	<li>لتحديد توزيع البيانات (إما التوزيع العادي أو غير العادي)، انتقل إلى علامة التبويب Stat، حدد الإحصاءات الأساسية،وانقر على خيار اختبار العادي (الشكل التكميلي 1Ai).</li>
	<li>في متغير، حدد أعمدة فردية (كل عمود يمثل مجموعة بيانات من النمط الجيني أو العلاج قيد الدراسة) ، اختر اختبار Anderson-Darling ، وانقر فوق موافق (الشكل التكميلي 1Aii). ملاحظة: سوف تظهر "مخطط احتمال العادي" حساب P-القيمة: إذا كانت القيمة P أكبر من 0.05، ثم يتم توزيع البيانات عادة. إذا كانت القيمة P أقل من 0.05، يتم توزيع البيانات بشكل غير عادي(الشكل التكميلي 1Aiii).</li>
	<li>للمقارنة بين مجموعات متعددة، قم بتكديس الأعمدة للمقارنة بالنقر فوق علامة التبويب البيانات، وحدد المكدس، ثم الأعمدة (الشكل التكميلي 1Bi).</li>
	<li>في إطار أعمدة المكدس، حدد أعمدة البيانات المراد تكديسها، حدد التراص الذي تم إما في ورقة عمل جديدة أو عمود ورقة العمل الحالية مع العمود التالي المخصص للتّهي بـsubscript (على سبيل المثال، هوية مجموعة البيانات؛ الرقم التكميلي 1Bii-1Biii).</li>
	<li>انقر فوق علامة التبويب Stat، وحدد اختبار ANOVA، وحدد النموذج الخطي العام ثم انقر فوق النموذج الخطي العام المناسب (الشكل التكميلي 1Ci).</li>
	<li>في إطار النموذج الخطي العام، حدد الأعمدة المراد مقارنتها في مربع الاستجابات، حدد العمود مع النص الفرعي في مربع العوامل وانقر فوق موافق، مما يؤدي إلى نتائج التحليل الإحصائي(الشكل التكميلي 1Cii-1Ciii).</li>
	<li>لمقارنة مجموعتين مع البيانات الموزعة عادة، انقر فوق علامة التبويب الإحصائيات، حدد الإحصاءات الأساسية،وحدداختبار t -Sample 2(الشكل التكميلي 1Di).</li>
	<li>في 2-عينة t للإطار المتوسط، حدد كل عينة في عمودها الخاص،من مربع منسدل، حدد المجموعتين للمقارنة في مربعات العينة 1 وعينة 2 ثم انقر فوق موافق، مما يؤدي إلى نتائج التحليل الإحصائي(الشكل التكميلي 1Dii-1Diii).</li>
	<li>لمقارنة مجموعتين مع البيانات الموزعة غير عادة، انتقل إلى علامة التبويب ستات، حدد Nonparametrics وانقر على مان ويتني (الشكل التكميلي 1Ei)</li>
	<li>في نافذة Mann-Whitney، حدد المجموعتين للمقارنة في مربعات العينة الأولى والعينة الثانية ثم انقر فوق موافق، مما يؤدي إلى نتائج التحليل الإحصائي(الشكل التكميلي 1Eii-1Eiii).</li>
	<li>للمقارنة بين ثلاث مجموعات أو أكثر من البيانات الموزعة غير الموزعة عادة، انتقل إلى علامة التبويب Stat، حدد Nonparametrics،ثم انقر فوق اختبار Kruskal-Wallis (الشكل التكميلي 1Fi).</li>
	<li>في إطار Kruskal-Wallis، حدد الأعمدة المراد مقارنتها في مربع الاستجابة، حدد العمود مع النص الفرعي في مربع عامل وانقر فوق موافق، مما يؤدي إلى نتائج التحليل الإحصائي(الشكل التكميلي 1Fii-1Fiii).</li>
</ol>

وليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.

في هذا التقرير، قمنا بوصف الإعداد والبروتوكول التفصيلي للوصف Flypub. طريقة جديدة لقياس كيفية التعرض المتكرر للإيثانول يؤدي إلى تثبيط المغازلة والتوعية السلوكية. على الرغم من أن القول Flypub بسيط نسبيًا ، تتطلب عدة خطوات الرعاية والاهتمام لضمان نتائج موثوقة. أولاً ، يجب أن يكون الذباب للاختبار مصطبغًا تمامًا (أي الذباب البالغ المتطور بالكامل) ، صحيًا وسليمًا. يمكن أن تؤثر التشوهات أو الأضرار خاصة في أجنحتهم أو أرجلهم على قدرة الذكر على المحكمة. ثانياً، عصر الذبابة مهم ويجب أن يكون متطابقاً بين مجموعات التحكم والتجريبية (العمر الأمثل: 3-5 أيام من العمر عند التعرض للإيثانول 1). أسبوعين وكبار السن الذباب الذكور البرية تميل إلى عرض مستويات مرتفعة من المغازلة المثبطة31. وبالتالي، فإن مطابقة العمر السليم للذباب قيد الدراسة أمر ضروري لتجنب النتائج المتغيرة. ثالثا، رقم يطير لكل حانة أمر حيوي (الأمثل: 33 لكل حانة). يمكن أن تحرف أرقام الطيران المنخفضة أو الأعلى لكل حانة درجات المغازلة بشكل كبير (لا تظهر البيانات). رابعا، غرف Flypub تحتاج إلى وحدات تخزين متطابقة كما هو موضح في الشكل 2B. وهذا يضمن أن الذباب تلقي بخار الإيثانول بشكل متزامن والسلوكيات أثار متسقة. خامسا، من الضروري تسجيل فيديو واضح وتسجيل دقيق للمغازلة. يعتمد هذا البروتوكول بشكل كبير على الملاحظات السلوكية ، لذا فإن التقيد الدقيق ببروتوكول تسجيل المغازلة الموحد أمر أساسي لتقليل النتائج غير المتسقة. وأخيراً، يوصى بشدة بأن يتم تنفيذ كل من التعرض للإيثانول وخطوات تسجيل المغازلة بشكل أعمى، حيث لا يكون المجرب على علم بالأنماط الجينية للذبابة أو العلاجات التجريبية، وبالتالي منع التحيز التجريبي.
إن ّ مُقاة Flypub لها مزايا متعددة. أولاً، يمكن اختبار مجموعات متعددة من الذباب ومقارنتها في وقت واحد. ثانياً، أنها غير مكلفة وسهلة الإعداد وسهلة التعلم، مما يجعلها قابلة للغاية للتجارب على جميع المستويات بما في ذلك الابتدائية من خلال طلاب المدارس الثانوية والجامعية والدراسات العليا، والدراسات العليا والكليات والكليات، فضلا عن تدريس المختبرات ذات المساحة المحدودة والميزانيات. ثالثا، يمكن استخدامه لقياس السلوكيات الإضافية مثل التودد تثبيط الذباب الإناث وتأثير مهدئ من الإيثانول أو المهدئات الأخرى لتقييم الحساسية الأولية وتطوير التسامح والصيانة31،32. معا، Flypub هو طريقة متعددة الاستخدامات لدراسة ميزات متنوعة من AUD.
القيد الرئيسي للاقافية Flypub هو نظام التهديف المغازلة الصارمة والشاقة. سلوك المغازلة تحت تأثير الإيثانول ديناميكي للغاية بطريقة تتراوح مدة المغازلة من أقل من ثانية إلى عدة دقائق والذباب المنخرط في المغازلة يتغير بشكل متكرر. تم تطوير نظام التسجيل المعروض هنا لدمج هذه الطبيعة الديناميكية وتوفير درجات متسقة على التعرض للإيثانول الفردية لنوع جينويوم معين31،32. وكما لوحظ في البروتوكول، فإن نشاط المغازلة يُسجل يدوياً، وهو أمر يستغرق وقتاً طويلاً. وقد تم تطوير العديد من برامج التسجيل الآلي لتسهيل الفحص السلوكي عالي الإنتاجية غير المتحيز وكلها تعتمد على حركات الذباب الفرديةومواقعها 39، 40،41،,42،43،44،45.41 كما حاولنا تطوير برنامج كمبيوتر لحساب نشاط المغازلة تلقائيًا، ولكننا لم نتمكن من الحصول على نتائج متسقة وموثوقة. يمكن أن يكون هذا يرجع إلى حقيقة أن التهديف السلوكي يتضمن خطوات مغازلة متعددة (أي ، بعد ، تمديد الجناح من جانب واحد ، الانحناء البطني وتصاعد)35،36،46 من الذباب متعددة في وقت واحد. وحتى مع هذا القيد، ينبغي أن يكون المجرب الذي يُدرَب تدريباً كافياً قادراً على قياس سلوكيات المغازلة الناجمة عن الإيثانول باتساق ودقة. ومع ذلك، سيكون من الأهمية والمساعدة الكبيرة اعتماد التعلم الآلي أو الخوارزميات المتقدمة الأخرى كمتابعة.
على غرار نماذج القوارض ، ركزت الدراسات على الإيثانول في نموذج الذبابة إلى حد كبير على تأثيرات تحفيز ومهدئ ة للإيثانول. وFlypub القول ومع ذلك, التدابير التودد تثبيط, نوع من تثبيط المعرفي الذي هو رواية31,,32. لذلك ، يمكن أن تساعد Flypub في توضيح اللاعبين الجزيئيين والمسارات الخلوية والدوائر العصبية بالإضافة إلى عوامل الخطر (مثل العمر أو النوم أو النظام الغذائي أو البيئة الاجتماعية) الحرجة للتثبيط السلوكي والتوعية. لقد أثبتنا سابقا أن إشارات الدوبامين مطلوبة لـ EIBS ، وهو ما يتماشى مع النتائج في نماذج القوارض والموضوعات البشرية6،9،31. أيضا كدليل على المفهوم، درسنا tαh متحولة تفتقر إلى OA (النظير اللافقاري من النورادرينالين) ووجدنا أن OA مهم أيضا للتوعية السلوكية لتأثير تثبيط الإيثانول على الرغم من مساهمتها صغيرة نسبيا بالمقارنة مع الدوبامين31. هذه النتيجة هي على النقيض من ملاحظة Scholz47 أن tαh الذباب متحولة تظهر أي ضعف واضح في التوعية لتأثير تنشيط locomotor الإيثانول47. وهذا يشير إلى مسارات جزيئية وخلوية وعصبية متميزة تُسْلِّط بالتوعية السلوكية للتثبيط مقابل التنشيط الحركي. وينبغي أن تزيد دراسات المتابعة من التعاون مع هذا المفهوم المحير.
باختصار، فإن Flypub هي طريقة منخفضة التكلفة ومتعددة الأوجه وفعالة للتحقيق في الاستجابات السلوكية للإيثانول، وخاصة تثبيط التثبيط والتوعية السلوكية، التي قد تساعد في تعزيز فهمنا لAUD وتوفير نظرة ثاقبة للتدخلات الفعالة لهذا الاضطراب المزمن.

الكحول هي واحدة من المخدرات الأكثر سهولة والمستهلكة على نطاق واسع في العالم. لديها احتمال كبير لسوء الاستخدام والإدمان. ومع ذلك، فإن الآلية التي تقوم عليها هذه العملية لا تزال مفهومة تماما. الإيثانول يحفز تثبيط، والنشوة، وضعف الإدراك، فرط النشاط، وفقدان التحكم الحركي والرضاعة في الديدان1،ذباب الفاكهة1،2،23،3الفئران4،الفئران5 والبشر6،مما يشير إلى المكونات العصبية البيولوجية المشتركة التوسط آثار الإيثانول من اللافقاريات إلى الثدييات بما في ذلك البشر. تناول الإيثانول المزمن يسبب التكيفات العصبية والتعديلات السلوكية التي تكمن وراء AUD. واحدة من التعديلات هي التوعية السلوكية التي تعرف بأنها الاستجابة المعززة مع التجارب المتكررة من الإيثانول7،8،9 أو غيرها من المواد الإدمانية10،11،12.
على مر العقود ، ركزت الدراسات على التوعية السلوكية الناجمة عن الإيثانول (EIBS) على التأثير المحفز للمحرك ، والذي يستخدم كوكيل لاستجابة بهيجة7،8،9،13. على سبيل المثال ، الفئران أو الفئران المتكررة (كل 24 ، 48 أو 72 ح) إدارة الإيثانول عرض النشاط الحركي المعزز كما يقاس سرعة المشي8،14،1515،16،1717،18،19،20،21. وبالمثل، فإن ذباب الفاكهة يتعرض للتعرض الثاني لبخار الإيثانول 4 ساعة بعد التعرض الأول عرض استجابة locomotor المحسنة كما تقاس سرعة المشي وكذلك22. في حين لا تتوفر معلومات عن الآلية الكامنة وراء EIBS لتأثير محفز ة للمركبات في ذباب الفاكهة ، كشفت الدراسات في الفئران والجرذان عن المكونات الجزيئية والإشارات (على سبيل المثال ، الدوبامين والغلوتامات وأنظمة GABA) وكذلك الركائز العصبية والدائرة (على سبيل المثال ، منطقة tegmental البطنية ، النواة accumbens ، amygdala والقشرة الجبهية) التي تلعب أدوارًا رئيسية لـ EIBS6،9،23.
التثبيط هو تأثير رئيسي من الإيثانول ويؤدي إلى مظاهر السلوكيات التي عادة ما تكون مقيدة. يتم ممارسة تأثير تثبيط على الوظائف الحركية والعاطفية والاجتماعية والجنسية والمعرفية ، والتي قد تؤدي إلى السلوك الجنسي غير اللائق ، والعدوان اللفظي أو البدني والأفعال المتهورة في البشر والنماذج الحيوانية24،25،26،27،28،29. وقد تم التحقيق في تثبيط الإيثانول الناجم ة في النماذج الحيوانية للدراسات الميكانيكية وأنها تشمل الاندفاع الحركي والعدوان في القوارض والقرود وكذلك تثبيط الأعلاف في الديدان6,9,24,28,29,30. لقد أثبتنا أن ذباب الفاكهة يظهر السلوك الجنسي المثبط تحت تأثير الإيثانول31. على وجه التحديد، الذكور البرية من نوع الذباب نادرا ما البلاط الذكور الآخرين دون الإيثانول31 وعندما يفعلون ذلك، كورتس ترفض بنشاط مغازلة الذكور. تحت تأثير الإيثانول، ومع ذلك، الذباب الذكور تظهر المزيد من المغازلة تجاه الذكور الآخرين والمغازل تظهر أقل الرفض، مما أدى إلى تعزيز المغازلة بين الذكور عموما. وتجدر الإشارة إلى أن الذباب يطور التوعية السلوكية لتأثير تثبيط التثبيط على التعرض المتكرر للإيثانول ، والذي يعمل كنظام فريد لدراسة EIBS31،32.
في هذا التقرير، ونحن نصف كيفية إعداد وتنفيذ واستكشاف الأخطاء وإصلاحها وتحليل القول Flypub والبيانات لدراسة تثبيط الإيثانول الناجم عن والحساسية في ذبابة الفاكهة Drosophila melanogaster. لتوفير فائدته وفعاليته، اختبرنا البرية من نوع كانتون-S (CS؛التحكم في سلالة الذباب) جنبا إلى جنب مع الذباب ناقص في الثيامين α هيدروكسيلاز (tβh) التي توليف octopamine (الزراعة السبوة). OA هو المموّل العصبي الرئيسي في اللافقاريات33،34 ويلعب دورا رئيسيا في تطوير التسامح الإيثانول في الذباب22. ونحن نبلغ هنا لأول مرة أن OA مهم لـ EIBS.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>95 % Ethanol</td>
			<td>VWR Chemicals</td>
			<td>BDH1158-4LP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Canton-S</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>wild-type strain used as a control</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Copy stand with arms</td>
			<td>Kaiser</td>
			<td>205411</td>
			<td>model RS 2-XA, with one central arm and two lateral arms; to set up a flypub station</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton rounds</td>
			<td>Swisspers</td>
			<td>COT-027</td>
			<td>to deliver ethanol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Excel</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td>-</td>
			<td>to analyze data; any worksheet or spreadsheet software can be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescent light bulb</td>
			<td>Lights of America</td>
			<td>7108N</td>
			<td>maximum (120 V-70 W Max.); to illuminate the flypub station</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsoft LifeCam software</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td>-</td>
			<td>version 3.60; to videotape flypubs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsoft LifeCam Studio</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td>Q2F-00013</td>
			<td>1080P HD sensor; to videotape flypubs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minitab 17</td>
			<td>Minitab</td>
			<td>-</td>
			<td>version 17; to conduct statistical analysis; any statistical analysis software can be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon mesh sheet</td>
			<td>Sefar Nitex</td>
			<td>-</td>
			<td>model B0043D1TVY, opaque white, 200 microns mesh; to make a flypub</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>08-757-100A</td>
			<td>35 x 10 mm; to deliever ethanol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic funnel - mid size</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>10-348A</td>
			<td>65 mm diameter and 67 mm height; to transfer sedated flies from a flypub into a food vial</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic funnel - small</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>07-202-121</td>
			<td>4 mm diameter and 46 mm height; to transfer flies from a vial into a flypub</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polycarbonate sheet</td>
			<td>Lexan</td>
			<td>-</td>
			<td>0.762 mm thickness, clear, 610 x 1220 mm Nominal; to make a flypub</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round-bottom bottle</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>AS115</td>
			<td>polypropylene, 103 mm height, 60 mm diameter and 177 ml capacity; to make a flypub</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soldering iron</td>
			<td>Weller</td>
			<td>WES51</td>
			<td>to make a hole in a flypub</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Time code</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>.smi file, a subtitle ticking timecode created in Han lab; to monitor time during courtship scoring; any time subtitles may be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tyramine b hydroxylase (tbh)</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>mutant fly strain (nM18 null allele)deficient in tbh in the wild-type Canton-S background ; obtained from Dr. Andreas Thum (University of Leipzig, Leipzeig, Germany)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VLC media player</td>
			<td>VideoLAN</td>
			<td>-</td>
			<td>version 3.0.8; any media player can be used to score courtship</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

flypub to study ethanol induced behavioral disinhibition and sensitization

اضطراب تعاطي الكحول (AUD) لا يزال مشكلة خطيرة في مجتمعنا. لتطوير تدخلات فعالة للإدمان ، من المهم فهم الآليات العصبية البيولوجية الأساسية ، والتي تحتاج إلى نهج تجريبية متنوعة وأنظمة نموذجية. المكون الرئيسي للمشروبات الكحولية هو الإيثانول ، والذي يسبب تغييرات التكيفية في الجهاز العصبي المركزي والسلوك عند المدخول المزمن. التوعية السلوكية (أي الاستجابات المتصاعدة) على وجه الخصوص تمثل تغييرًا رئيسيًا في التكيف يقوم عليه الإدمان. وقد أجريت معظم الدراسات التوعية السلوكية الناجمة عن الإيثانول في النماذج الحيوانية على تأثير تنشيط locomotor من الإيثانول. ومن الآثار البارزة للإيثانول تثبيط السلوك. ومع ذلك، فإن التوعية السلوكية لتأثير تثبيط الإيثانول ممثلة تمثيلاً ناقصاً. لمعالجة هذه المسألة، وضعنا القول Flypub التي تسمح قياس الزيادة المتصاعدة في أنشطة المغازلة المثبطة على التعرض الإيثانول المتكررة في drosophila melanogaster. هنا ، نقوم بالإبلاغ عن القول السريع التدريجي بما في ذلك تجميع غرف التعرض للإيثانول ، وإعداد محطة القياس ، ومعايير رعاية الذبابة وجمعها ، وتسليم الإيثانول ، والتقدير الكمي لأنشطة المغازلة المثبطة ، ومعالجة البيانات والتحليل الإحصائي. كما يتم توفير كيفية استكشاف الأخطاء وإصلاحها الخطوات الحرجة، والتغلب على القيود وتوسيع فائدتها لتقييم السلوكيات الإضافية الناجمة عن الإيثانول. سوف القول Flypub في تركيبة مع أدوات وراثية قوية في drosophila melanogaster تسهيل مهمة اكتشاف آلية الكامنة وراء التوعية السلوكية الناجمة عن الإيثانول.

يوضح هذا القسم نتائج تجربة Flypub تمثيلية. دروسوفيلا الذكور نادرا ما البلاط الذكور الآخرين35,36. خلال التعرض الأول للإيثانول ، أظهر نوع البرية كانتون - S (CS) الذكور زيادة صغيرة ولكنها ضئيلة في المغازلة بين الذكور المثبطة31 (الشكل 7A). ومع ذلك، أظهر الذكور CS الزيادات المتصاعدة في نشاط المغازلة المثبطة في التعرض الإيثانول اللاحقة (ANOVA GLM، CS: R2= 0.83، F(5,66) = 65.21، p < 0.0001; n = 12؛ الشكل 7A)،الذي يشير إلى التوعية السلوكية لتأثير تثبيط الإيثانول. لقد أظهرنا سابقا أن هذا النوع من بنك الاستثمار الأوروبي يتطلب الدوبامين ومستقبلات الدوبامين DopEcR في الخلايا العصبية الفطر31,32.
لتحديد ما إذا كانت تشارك الموجات العصبية الإضافية في EIBS ، قمنا بالتحقيق في دور OA عن طريق اختبار الذباب(tαh ؛ nM18 null allele)37،38 تفتقر إلى الستيرامين α هيدروكسيلاز ، الإنزيم الذي يحد من المعدل في التمثيل الحيوي لـ OA ، وبالتالي نقص في OA. tαح الذكور في الخلفية الوراثية CS (هدية لطيفة من الدكتور أندرياس ثوم، جامعة لايبزيغ، ألمانيا) عرض استجابة التودد المثبطة الحساسة على التعرض الإيثانول اليومي (ANOVA GLM، tαh: R2= 0.67، F(5,66) = 27.60، p < 0.0001; n = 12؛ الشكل 7B) ولكن على مستوى انخفاض بالمقارنة مع CS (ANOVAGLM، تأثير التفاعل: F = 2.50، ف <0.034). عند التحليل المخصص ، أظهر الذكور tα h مستويات أقل من المغازلة بين الذكور في كل تعرض أكثر وضوحًا خلال التعرض للإيثانول من الرابع إلى السادس بالمقارنة مع CS (اختبار t من عينتين: P < 0.002 في EXP4 ، p & 0.004 في EXP5 ، p & 0.021 في EXP6 ؛ n = 12؛ الشكل 7C). وتشير هذه النتائج مجتمعة إلى أن اليافة للسكان قد تلعب دوراً في بنك الاستثمار الأوروبي إلى تأثير تثبيط الإيثانول. والأهم من ذلك، أن مجموعات البيانات هذه تبين بوضوح فائدة وفعالية القول بـ Flypub في دراسة التثبيط والتوعية الناجمعن الإيثانول.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61123/61123fig1.jpg"> الشكل 1: سير عمل القول Flypub. رسم تخطيطي لسير العمل يسلط الضوء على الخطوات الرئيسية لإجراء القول بـ Flypub. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61123/61123fig1large.jpg" target="_blank">يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61123/61123fig2.jpg"> الشكل 2: مواد غرفة Flypub والتجميع. (أ)المواد اللازمة لبناء غرفة Flypub تشمل (ط) عصا الغراء الساخن الغراء ،(ii)بندقية الغراء الساخن ،(3)شفرة الحلاقة ،(4)لحام الحديد ،(الخامس)الحاكم ،(6)شبكة ،(7)البولي ورقة بلاستيكية ، و(8)جولة القاع drosophila زجاجة. (ب)التمثيل التخطيطي لجمعية غرفة Flypub. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61123/61123fig2large.jpg" target="_blank">يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61123/61123fig3.jpg"> الشكل 3: التعرض للإيثانول. (أ)محطة Flypub مجمعة بالكامل. (ب)تشمل المواد اللازمة للتعرض للإيثانول (1)P1000 ميكروبيبيت ،(ii)الشريط ،(iii)وسادة القطن ،(iv)طبق بيتري ،(v)مناديل المختبر ،(vi)قمع صغير ،(7)مؤقت ،(8)قمع متوسط الحجم ،(التاسع)وسادة الماوس ،(x)مقص ،(15٪الإيثانول) (( 11) القوة و (الثالث عشر) (C)خطوات حول كيفية قطع منصات القطن. (D)صورة العرض العلوي للحانات المنحازة على المسرح. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61123/61123fig3large.jpg" target="_blank">يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61123/61123fig4.jpg"> الشكل 4: إعداد الفيديو للتسجيل السلوكي. يظهر هو دليل خطوة بخطوة على (أ)كيفية التكبير على الفيديو و (ب)كيفية إدراج ملف رمز الوقت في مشغل الوسائط VLC لتسجيل الأهداف السلوكية. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61123/61123fig4large.jpg" target="_blank">يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61123/61123fig5.jpg"> الشكل 5: سلوكيات المغازلة الذكورية. صور تمثيلية توضح سلوكيات التودد الذكور Drosophila بما في ذلك التالية والانفرادية تمديد الجناح ل (A)التودد أغنية ،(ب)سلسلة المغازلة ،(C)دائرة التودد(D)الانحناء البطني و(E)تصاعد التي تستخدم لتسجيل السلوكية. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61123/61123fig5large.jpg" target="_blank">يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61123/61123fig6.jpg"> الشكل 6: إدخال البيانات وتحليلها. (أ)يتم نسخ عدد الذكور المنخرطين في المغازلة في كل كتلة زمنية 10 s في ورقة عمل. يستخدم أكبر عدد من الذكور التودد من ثلاث كتل زمنية متتالية 10 s (السهم الأخضر) كنقطة بيانات تمثيلية. ويمثل متوسط 10 نقاط بيانات متتالية (قوس أزرق أو برتقالي) لها قيمة قصوى النسبة المئوية للمغازلة بين الذكور لكل حانة [قوس برتقالي؛ ماكس (متوسط)، السهم الأسود]. (B, C) صيغ ورقة العمل المستخدمة لحساب نقطة البيانات التمثيلية القصوى والمعدل الأقصى لـ 10 نقاط بيانات تمثيلية متتالية لكل حانة. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61123/61123fig6large.jpg" target="_blank">يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61123/61123fig7.jpg"> الشكل 7: الإيثانول الناجم عن تثبيط السلوكية والتوعية في CS و tαح. (أ، ب) وعرض الذكور CS و tαh تثبيط المغازلة الحساسة مع التعرض الإيثانول المتكررة (ANOVA GLM, CS: R2= 0.83, F(5,66)= 65.21, p < 0.0001; tαh: R2= 0.67، F(5,66)= 27.60، p < 0.0001؛ ن = 12). (C)أظهر الذكور tα h مغازلة أقل تثبيطمقارنة CS (n = 12). وترد قيم p من التحليلات المخصصة posts فوق السطر. تم تحليل نشاط المغازلة بين الذكور من مقاطع الفيديو التي تم إنشاؤها لكل تعرض للإيثانول. يتم الإبلاغ عن جميع البيانات كوسيلة ± خطأ قياسي للمتوسط. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61123/61123fig7large.jpg" target="_blank">يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
الشكل التكميلي 1: التحليل الإحصائي. الخطوات في برنامج Minitab 17 حول كيفية تنفيذ (أ) اختبار العادى ، (ب) تكديس البيانات ، (ج) نموذج خطي عام ANOVA اختبار ، (D) اختبار تي من عينتين ،(E)اختبار مان ويتني و (F)Kruskal - Wallis الاختبار. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61123/61123supfig1large.jpg" target="_blank">الرجاء الضغط هنا لتحميل هذا الملف.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Flypub To Study Ethanol Induced Behavioral Disinhibition and Sensitization at JoVE.com

Flypub To Study Ethanol Induced Behavioral Disinhibition and Sensitization

يقيس قياس Flypub السلوكيات التي تعرضها ذبابة الفاكهة Drosophila melanogaster تحت تأثير الإيثانول. يمكن أن يتقن الفحص بسهولة من قبل المجربين على جميع المستويات وتطبيقها على مختلف المحفزات المتبخرة ، مما يسهل تعاطي المخدرات ودراسات الإدمان.

Flypub لدراسة الإيثانول الناجم عن تثبيط السلوكية والتوعية

Alcohol use disorder (AUD) remains a serious problem in our society. To develop effective interventions for addiction, it is important to understand the ...

يقيس فحص Flypub السلوكيات المثبطة تحت تأثير الكحول. وبالتالي تسهيل الدراسة الآلية لاضطراب تعاطي الكحول. الكحول هو واحد من أكثر المخدرات المتاحة بسهولة وتعاطيها على نطاق واسع في العالم.ومع ذلك، فإن الآلية العصبية البيولوجية التي تقوم عليها اضطراب تعاطي الكحول مفهومة بشكل غير كامل. ذبابة الفاكهة، Drosophila الميلانوغاستر، وقد استخدمت على نطاق واسع لدراسة آثار الإيثانول على النشوة، و الحركة، والثني، والتخذيب، والتخذيب. كما أنها تستخدم لدراسة تغييراتها الطويلة والدائمة في السلوك ذات الصلة للإدمان مثل التسامح, التوعية, والتماس الإيثانول.تركز العديد من الدراسات في دروسوفيليا وغيرها من النماذج الحيوانية على آثار تنشيط الايثانول الحركي. التأثير المتميز من الإيثانول هو disinhibition السلوكي. ومع ذلك ، فإن الدراسة هي ناقصة إلى حد ما.لمعالجة هذه المسألة الرئيسية، قمنا بتطوير مقايسة فلايبوب لقياس السلوك المثبط تحت تأثير الإيثانول. لتجميع غرفة Flypub، خذ زجاجة مستديرة وقطع الجزء السفلي من علامة 25 ملليلتر بشفرة حلاقة. إنشاء ثقب عند علامة 50 ملليلتر باستخدام الحديد لحام الساخنة.هذه هي نقطة الوصول حيث سيتم إدخال الذباب. ضع شبكة مستديرة قطرها 54 ملليمترًا عند علامة 75 ملليلتر، واضمنها باستخدام الغراء الساخن. ضع ورقة بلاستيكية واضحة قطرها 70 ملليمترًا في الطرف السفلي المفتوح ، وآمن باستخدام الغراء الساخن.لضمان أن يتم إرفاق البلاستيك بقوة إلى أسفل، والضغط على أسفل باستخدام الأوزان. جمع الذباب الذكور في مجموعة من 33. ضعها على جانب قارورة الطعام.وضعها في حاضنة 25 درجة مئوية مع ما لا يقل عن 50٪ الرطوبة النسبية و12 ساعة ضوء، 12 ساعة دورة داكنة لمدة 2 أيام قبل التعرض الإيثانول. إعداد محطة فحص Flypub عن طريق تشغيل الأضواء، جهاز كمبيوتر، وكاميرا لتسجيل الفيديو. إعداد ست حانات لمجموعة من التجارب.تسمية لهم مع الأرقام من واحد إلى ستة. أدخل الذباب بلطف إلى الحانة باستخدام قمع صغير. أغلق الحانة باستخدام شريط.التأقلم الذباب لمدة 10 دقائق. أثناء التأقلم، قم بضبط تركيز الكاميرا وسجل آخر خمس دقائق من التأقلم. أثناء التأقلم إعداد منصات القطن لتسليم الإيثانول.قطع وسادة القطن إلى أربعة أرباع متساوية ومن ثم تقليم الزوايا لجعلها تناسب طبق بيتري. أضف وسادة قطنية إلى طبق بيتري. إضافة ملليلتر واحد من 95٪ الإيثانول إلى وسادة القطن.تأكد من أن يتم توزيع محلول الإيثانول بالتساوي على كامل مساحة الوسادة. سرعان ما تغطية طبق بيتري مع مناديل المختبر. ضع بعناية الإيثانول الذي يحتوي على طبق بيتري تحت كل حانة.محاذاة الحانات على المسرح. بدء التسجيل وبدء في وقت واحد جهاز ضبط وقت. سجل حتى الذباب وقف التودد أو التحرك.إزالة الإيثانول التي تحتوي على طبق بيتري عندما يتم تخدير أكثر من 90٪ من الذباب. نقل بلطف الذباب مخدر مرة أخرى إلى قوارير الطعام. ضعهم مرة أخرى في الحاضنة.كرر الخطوات السابقة كل 24 ساعة لمدة ستة أيام متتالية. افتح الفيديو باستخدام مشغل وسائط. ثم يسجل عدد الذكور المشاركين في أنشطة المغازلة كل 10 ثوان.وتشمل أنشطة المغازلة لدرجة التالية: امتداد الجناح الأحادي الجانب ، سلسلة المغازلة ، دائرة المغازلة ، الانحناء البطني والتركيب. تظهر هي تسجيلات تمثيلية لسلوك الذبابة. أثناء تأقلم حيث الذكور لا تظهر الكثير من النشاط.خلال التعرض الأول حيث يظهر الذكور المغازلة متفرقة. وخلال التعرض السادس حيث يعرض الذكور التودد إلى النشاط. أدخل عدد الذكور الذين يعرضون المغازلة في كتلة 10 مرة ثانية.استخدام العدد الأقصى من التودد الذكور إلى ثلاثة متتالية 10 كتل مرة ثانية كنقطة بيانات تمثيلية. ويمثل متوسط 10 نقاط بيانات متتالية ذات أعلى قيمة النسبة المئوية للمغازلة بين الطوائف لكل حانة. نوع البرية معرض كانتون-S زيادة تدريجيا أنشطة المغازلة المثبطة على التعرض الإيثانول المتكررة.وهذا يمثل التوعية السلوكية لتأثير disinhibition من الإيثانول. درسنا دور الأخطبامين في التوعية عن طريق اختبار الذباب التي تفتقر إلى الثيامين بيتا هيدروكسيلاس، تي بيتا H، وبالتالي نقص في الأخكتوتامين. وعلى غرار كانتون-س، أظهرت طفرات T beta H ردوداً متصاعدة على التعرض المتكرر للأيثانول، ولكن عند مستوى مخفض.عندما قارنا تي بيتا H وكانتون-S, لاحظنا أن الذكور بيتا H متحولة تي عرض أقل المغازلة غير المثبطة من الذكور كانتون S في كل التعرض مما يدل على أن الأخطبامين قد تكون مهمة للتوعية. الآن يمكنك إعداد، والسلوك، وتحليل السلوكيات الناجمة عن الإيثانول باستخدام مقايسة Flypub. النقاط الرئيسية التي يجب أن نضع في اعتبارنا، واحد، التجمع السليم للحانة.اثنان، تسليم الإيثانول ثابت، وثلاثة، دقيقة وغير متحيزة درجة السلوك. إن فحص Flypub له العديد من المزايا. انها بسيطة وغير مكلفة لإعداد ، وسهلة للتعلم.كما يمكن تحليل مجموعات متعددة من الذباب في وقت واحد، مما يسهل هذه الدراسة لتحديد آثار التلاعب الجيني أو التجريبي. إن مقايسة Flypub قابلة لجذب التجارب على جميع المستويات بما في ذلك المرحلة الابتدائية من خلال المدرسة الثانوية وطلاب المرحلة الجامعية والدراسات العليا ومستندات البريد وأعضاء هيئة التدريس. باختصار، ستسمح لك مقايسة Flypub بتحديد اللاعبين الجزيئيين والمسارات الخلوية ودوائر الدماغ وعوامل الخطر التي تساهم في اضطراب تعاطي الكحول.

Research

JoVE Journal

Behavior

Behavioral Phenotyping of Murine Disease Models with the Integrated Behavioral Station (INBEST)

Behavioral Phenotyping of Murine Disease Models with the Integrated Behavioral Station INBEST

السلوكية Phenotyping من نماذج الأمراض الفئران مع محطة المتكاملة السلوكية (INBEST)

Due to rapid advances in genetic engineering, small rodents have become the preferred subjects in many disciplines of biomedical research. In studies of ...

A Procedure to Observe Context-induced Renewal of Pavlovian-conditioned Alcohol-seeking Behavior in Rats

إجراءات لمراقبة الناجم عن السياق تجديد مكيفة بافلوف-السلوك الكحول التماس في الجرذان

Environmental contexts in which drugs of abuse are consumed can trigger craving, a subjective Pavlovian-conditioned response that can facilitate ...

A Mouse Model of Subchronic and Mild Social Defeat Stress for Understanding Stress-induced Behavioral and Physiological Deficits

نموذج الفأر من شبه المزمنة ومعتدل تغلب على الإجهاد الاجتماعية لفهم العجز السلوكية والفسيولوجية التي يسببها الإجهاد

Stressful life events often increase the incidence of depression in humans. To study the mechanisms of depression, the development of animal models of ...

Combined Shuttle-Box Training with Electrophysiological Cortex Recording and Stimulation as a Tool to Study Perception and Learning

جنبا إلى جنب المكوك بوكس ​​التدريب مع الكهربية اللحاء تسجيل وتحفيز كأداة لدراسة الإدراك والتعلم

Shuttle-box avoidance learning is a well-established method in behavioral neuroscience and experimental setups were traditionally custom-made; the ...

Rodent Brain Microinjection to Study Molecular Substrates of Motivated Behavior

القوارض الدماغ Microinjection لدراسة ركائز الجزيئي للسلوك الدوافع

Brain microinjection can aid elucidation of the molecular substrates of complex behaviors, such as motivation. For this purpose rodents can serve as ...

Assessment of Cocaine-induced Behavioral Sensitization and Conditioned Place Preference in Mice

تقييم التوعية السلوكية التي يسببها الكوكايين ومشروطة مكان الأفضلية في الفئران

It is thought that rewarding experiences with drugs create strong contextual associations and encourage repeated intake. In turn, repeated exposures to ...

Basic Methods for the Study of Reproductive Ecology of Fish in Aquaria

الطرق الأساسية لدراسة الإيكولوجيا الإنجابية للأسماك في أكواريا

Captive-rearing observations are valuable for revealing aspects of fish behavior and ecology when continuous field investigations are impossible. Here, a ...

Reversible Cooling-induced Deactivations to Study Cortical Contributions to Obstacle Memory in the Walking Cat

ديكتيفاتيونس عكسها المستحثة بالتبريد لدراسة المساهمات القشرية للذاكرة عقبة في القط المشي

On complex, naturalistic terrain, sensory information about an environmental obstacle can be used to rapidly adjust locomotor movements for avoidance. For ...

Using the FishSim Animation Toolchain to Investigate Fish Behavior: A Case Study on Mate-Choice Copying In Sailfin Mollies

Using the FishSim Animation Toolchain to Investigate Fish Behavior: A Case Study on Mate-Choice Copying In Sailfin Mollies

استخدام Toolchain الرسوم المتحركة فيشسيم للتحقيق في سلوك الأسماك: دراسة حالة عن رفيقه-خيار النسخ في مليس سيلفين

Over the last decade, employing computer animations for animal behavior research has increased due to its ability to non-invasively manipulate the ...

Behavioral Assessments of Spontaneous Locomotion in a Murine MPTP-induced Parkinson's Disease Model

تقييمات السلوكية للحركة عفوية في نموذج مورين MPTP الناجمة عن مرض باركنسون

Parkinson&#8217;s disease (PD) is a common neurodegenerative disorder disease, causing the phenomenon of shaking, rigidity, slowness of movement and ...