Name: flypub to study ethanol induced behavioral disinhibition and sensitization
Uploaded: 2020-05-18T14:30:00
Duration: 8 min 13 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Flypub To Study Ethanol Induced Behavioral Disinhibition and Sensitization at JoVE.com

Эта работа была поддержана NIAAA 1R15AA020996, NIMH R21MH109953, Фонд исследований мозга и поведения NARSAD, и NIMHD 2G12MD007592 NMD Кластер грантов. Мы также признательны финансируемой NIH программе RISE (NIGMS 5R25GM069621) за поддержку NMD и CMS, программе UTEP COURI-SURPASS для поддержки NMD, финансируемой NIH программой MARC (NIGMS 2T34GM008048-31) для поддержки AA, и Dr. Keelung Graduate Hong Fellowship для поддержки ЭБС. Мы высоко ценим отдел коммуникаций UTEP: Дарлин Барахас, Кристиан Ривера, Карина Морено, Хосе Лойя Фернандес и музыкальный отдел: Стивен А. Хаддад за помощь в видео и закадровый продюссер. Наконец, мы очень благодарны доктору Андреасу Тхуму за то, что он поделилсямутантом в Кантоне-С вместе с управляемым мухами Кантона-С; и Джессика Burciaga за ее ценный вклад в первоначальные исследования на осьминога и Хан членов лаборатории для обсуждения и поддержки.

Авторам нечего раскрывать.

В этом докладе мы описали настройку и подробный протокол ассссы Flypub; новый метод для измерения того, как повторяющиеся воздействия этанола вызывает раскованный ухаживания и поведенческой сенсибилизации. Хотя результаты опроса Flypub относительно просты, несколько этапов требуют заботы и внимания для обеспечения надежных результатов. Во-первых, мухи для тестирования должны быть полностью пигментированы (т.е. полностью развитые взрослые мухи), здоровые и нетронутые. Деформации или повреждения, особенно в их крылья или ноги могут повлиять на способность мужчины к суду. Во-вторых, возраст мух и должен быть сопоставлен между контрольных и экспериментальных групп (оптимальный возраст: 3-5 дней при воздействии этанола 1). Две недели и старше дикого типа мужчин мух, как правило, отображают повышенные уровни раскованный ухаживания31. Таким образом, надлежащее возрастное соответствие мух, наисное, необходимо, чтобы избежать переменных результатов. В-третьих, номер мухи в пабе имеет жизненно важное значение (оптимальный: 33 за паб). Нижние или более высокие номера мух и мух в пабе могут сильно исказить оценки ухаживаний (данные не показаны). В-четвертых, камеры Flypub должны иметь одинаковые объемы, как показано на рисунке 2B. Это гарантирует, что мухи получают пара этанола синхронно и вызываемых поведения являются последовательными. В-пятых, четкая видеозапись и точный подсчет ухаживаний имеют важное значение. Этот протокол в значительной степени зависит от поведенческих наблюдений, поэтому тщательное соблюдение стандартизированного протокола оценки ухаживаний имеет основополагающее значение для минимизации несовместимых результатов. Наконец, настоятельно рекомендуется, чтобы как воздействие этанола и ухаживания скоринга шаги выполняются вслепую, где экспериментатор не знает о летать генотипов или экспериментальных методов лечения, тем самым предотвращая экспериментальные предубеждения.
В ассе Flypub есть несколько преимуществ. Во-первых, несколько групп мух могут быть проверены и сравнены одновременно. Во-вторых, это недорогой, простой в установке и легко учиться, что делает его весьма поддается экспериментаторов на всех уровнях, включая начальную школу, студентов и аспирантов, postdocs и факультета, а также учебные лаборатории с ограниченным пространством и бюджетов. В-третьих, он может быть использован для измерения дополнительных поведений, таких как раскованный ухаживания женщин мух и седативное действие этанола или других седативных средства для оценки первоначальной чувствительности и толерантности развития и поддержания31,32. Вместе, Flypub является универсальным методом для изучения различных особенностей AUD.
Основным ограничением анализ Flypub является строгий и трудоемкий ухаживания скоринга режима. Поведение ухаживания под влиянием этанола является весьма динамичным таким образом, что продолжительность ухаживания колеблется от менее одной секунды до многих минут, и мухи, участвующие в ухаживания довольно часто меняется. Режим скоринга, представленный здесь, был разработан для учета этой динамичной природы и обеспечения последовательных баллов по отдельным воздействиям этанола для данного генотипа31,32. Как отмечается в протоколе, ухаживания деятельности вручную забил, что занимает много времени. Несколько автоматизированных программ скоринга были разработаны для облегчения беспристрастного высокой пропускной стиды поведенческого скрининга и все из которых полагаются на движения отдельных мух и места39,40,41,42,43,44,45. Мы также пытались разработать компьютерное программное обеспечение для автоматического подсчета ухаживания деятельности, но не смог получить последовательные и надежные результаты. Это может быть связано с тем, что поведенческий скоринг включает в себя несколько ухаживания шаги (т.е., после, одностороннее расширение крыла, брюшной изгиб и монтаж)35,36,46 из нескольких мух одновременно. Даже с этим ограничением, экспериментатор с адекватной подготовки должны быть в состоянии количественно этанола индуцированных ухаживания поведения с последовательностью и точностью. Тем не менее, было бы очень важно принять машинное обучение или другие передовые алгоритмы в качестве последующей деятельности.
Как и модели грызунов, исследования на этанол в модели мухи в значительной степени сосредоточены на локомоторно этанола стимулирующих и седативных эффектов. Flypub асссе, однако, меры раскованный ухаживания, тип когнитивной расторможенности, которая является роман31,32. Таким образом, Flypub может помочь выяснить молекулярных игроков, клеточных путей и нейронных цепей, а также факторы риска (например, возраст, сон, диета или социальная среда) критически для поведенческого расторможенности и сенсибилизации. Ранее мы показали, что дофамин сигнализации требуется для EIBS, который в соответствии с выводами в моделях грызунов и человеческих субъектов6,9,31. Кроме того, в качестве доказательства концепции, мы рассмотрели тйх мутант не хватает ОА (беспозвоночных аналог норадреналина) и обнаружили, что ОА также имеет важное значение для поведенческой сенсибилизации в эффект расторможенности этанола, хотя его вклад относительно мал по сравнению с допамина31. Этот вывод в отличие от наблюдения Scholz47, что тч мутант мухней не проявляют никаких очевидных нарушений в сенсибилизации локомоторного эффекта этанола47. Это предполагает различные молекулярные, клеточные и нервные пути, опосредовающие поведенческую сенсибилизацию к расторможенности против локомотивной активации. Последующие исследования должны в дальнейшем сотрудничать с этим дразнящий понятие.
Таким образом, Flypub является недорогим, многогранным и эффективным методом для исследования поведенческих реакций на этанол, в частности, расторможенность и поведенческая сенсибилизация, которые могут помочь продвинуть наше понимание AUD и обеспечить понимание эффективных мероприятий для этого хронического расстройства.

Алкоголь является одним из наиболее легко доступных и широко потребляемых наркотиков в мире. Он имеет высокий потенциал для неправильного использования и наркомании; однако механизм, лежащий в основе этого процесса, остается неполно изученным. Этанол вызывает расторможенности, эйфории, когнитивных нарушений, гиперактивности, потери двигательного контроля и седативные у червей1, плодовых мушек1,2,3, мышей4, крыс5 и людей6, с указанием общих нейробиологических компонентов, опосредующих эффекты этанола от беспозвоночных для млекопитающих, включая людей. Хроническое потребление этанола вызывает нейроадаптации и поведенческие изменения, которые лежат в основе AUD. Одной из адаптаций является поведенческая сенсибилизация определяется как дополненная реакция с повторным опытом этанола7,8,,9 или других вызывающих привыкание веществ10,,11,12.
На протяжении десятилетий, исследования по этанолу индуцированной поведенческой сенсибилизации (EIBS) были сосредоточены на локомотивно-стимулирующий эффект, который используется в качестве прокси для эйфории ответ7,8,9,13. Например, крысы или мыши при повторном (каждые 24, 48 или 72 ч) введение этанола отображают увеличенную активность локомотиводвигателя, измеряемую скоростью ходьбы8,,14,,15,,16,,17,18,,19,,20,21. Аналогичным образом, плодовые мушки подвергаются второму воздействию этанола пара 4 ч после первого воздействия экспонат расширенной реакции локомотива, как измеряется скорость ходьбы, а22. Хотя нет никакой информации о механизме, лежащем в основе ЕИБС для локомотивно-стимулирующего эффекта у плодовых мушек, исследования на крысах и мышах обнаружили молекулярные и сигнальные компоненты (например, дофамин, глутамат и ГАМК систем), а также нервные субстраты и цепи (например, вентральная тегментальная область, ядро accumbens, миндалина и префронтальной коры), которые играют важную роль для EIBS6,9,23.
Расторможенности является основным эффектом этанола и приводит к проявлению поведения, которые, как правило, ограничены. Расгибающий эффект оказывается на двигательные, эмоциональные, социальные, сексуальные и когнитивные функции, что может привести к ненадлежащему сексуальному поведению, словесной или физической агрессии и импульсивным действиям у людей и животных24,,25,26,27,28,29. Этанол индуцированной дистормоции была исследована в животных моделях для механистических исследований, и они включают в себя импульсивность двигателя и агрессии у грызунов и обезьян, а также кормления расторможенности у червей6,9,24,28,29,30. Мы показали, что плодовые мушки показывают раскованное сексуальное поведение под воздействием этанола31. В частности, дикие самцы мух редко ухаживают за другими самцами без этанола31, а когда это делают, ухаживания за самцами активно отвергают ухаживания за самцами. Под влиянием этанола, однако, самцы мух показывают больше ухаживания по отношению к другим мужчинам и ухаживания мету проявляют меньше отторжения, в результате чего общее расширение межмужских ухаживаний. Примечательно, что мухи развивают поведенческую сенсибилизацию эффекта расторможенности при повторном воздействии этанола, который служит уникальной системой для изучения EIBS31,32.
В этом докладе, мы описываем, как настроить, выполнить, устранить неполадки и анализировать анализ Flypub и данные для изучения этанола индуцированной дисторбинции и сенсибилизации в плодовой мухи Drosophila меланогастер. Чтобы обеспечить его полезность и эффективность, мы протестировали дикий тип Canton-S (CS;контроль штамма мух) вместе с мухами, не достающих тирамин и гидроксилазу (тХ), который синтезирует осьтопамин (ОА). ОА является основным нейромодулятором у беспозвоночных33,34 и играет ключевую роль в развитии толерантности к этанолу у мух22. Мы впервые сообщаем здесь, что ОА имеет важное значение для ЕИБС.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>95 % Ethanol</td>
			<td>VWR Chemicals</td>
			<td>BDH1158-4LP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Canton-S</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>wild-type strain used as a control</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Copy stand with arms</td>
			<td>Kaiser</td>
			<td>205411</td>
			<td>model RS 2-XA, with one central arm and two lateral arms; to set up a flypub station</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton rounds</td>
			<td>Swisspers</td>
			<td>COT-027</td>
			<td>to deliver ethanol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Excel</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td>-</td>
			<td>to analyze data; any worksheet or spreadsheet software can be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescent light bulb</td>
			<td>Lights of America</td>
			<td>7108N</td>
			<td>maximum (120 V-70 W Max.); to illuminate the flypub station</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsoft LifeCam software</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td>-</td>
			<td>version 3.60; to videotape flypubs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsoft LifeCam Studio</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td>Q2F-00013</td>
			<td>1080P HD sensor; to videotape flypubs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minitab 17</td>
			<td>Minitab</td>
			<td>-</td>
			<td>version 17; to conduct statistical analysis; any statistical analysis software can be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon mesh sheet</td>
			<td>Sefar Nitex</td>
			<td>-</td>
			<td>model B0043D1TVY, opaque white, 200 microns mesh; to make a flypub</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>08-757-100A</td>
			<td>35 x 10 mm; to deliever ethanol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic funnel - mid size</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>10-348A</td>
			<td>65 mm diameter and 67 mm height; to transfer sedated flies from a flypub into a food vial</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic funnel - small</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>07-202-121</td>
			<td>4 mm diameter and 46 mm height; to transfer flies from a vial into a flypub</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polycarbonate sheet</td>
			<td>Lexan</td>
			<td>-</td>
			<td>0.762 mm thickness, clear, 610 x 1220 mm Nominal; to make a flypub</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round-bottom bottle</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>AS115</td>
			<td>polypropylene, 103 mm height, 60 mm diameter and 177 ml capacity; to make a flypub</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soldering iron</td>
			<td>Weller</td>
			<td>WES51</td>
			<td>to make a hole in a flypub</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Time code</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>.smi file, a subtitle ticking timecode created in Han lab; to monitor time during courtship scoring; any time subtitles may be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tyramine b hydroxylase (tbh)</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>mutant fly strain (nM18 null allele)deficient in tbh in the wild-type Canton-S background ; obtained from Dr. Andreas Thum (University of Leipzig, Leipzeig, Germany)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VLC media player</td>
			<td>VideoLAN</td>
			<td>-</td>
			<td>version 3.0.8; any media player can be used to score courtship</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

flypub to study ethanol induced behavioral disinhibition and sensitization

Расстройство употребления алкоголя (AUD) остается серьезной проблемой в нашем обществе. Для разработки эффективных мероприятий по борьбе с наркоманией важно понимать основные нейробиологические механизмы, для которых необходимы различные экспериментальные подходы и модельные системы. Основным ингредиентом алкогольных напитков является этанол, который вызывает адаптивные изменения в центральной нервной системе и поведении при хроническом уходе. Поведенческая сенсибилизация (т.е. эскалация ответов), в частности, представляет собой ключевое адаптивное изменение, лежащее в основе зависимости. Большинство этанол индуцированных поведенческих исследований сенсибилизации в животных моделях были проведены на локомотив активации эффект этанола. Заметным эффектом этанола является поведенческая расторможенности. Однако поведенческая чувствительность к эффекту расторможенности этанола недопредставлена. Для решения этой проблемы, мы разработали Flypub запрос, который позволяет измерения эскалации увеличение раскованных ухаживания деятельности при повторяющихся воздействия этанола в Drosophila melanogaster. Здесь мы сообщаем о поэтапном анализе Flypub, включая сборку камер воздействия этанола, установку станции анализа, критерии ухода и сбора лет, доставку этанола, количественную оценку раскованных ухаживаний, обработку данных и статистический анализ. Также предусмотрено, как устранить критические шаги, преодолеть ограничения и расширить свою полезность для оценки дополнительных поведения, вызванного этанолом. Анализ Flypub в сочетании с мощными генетическими инструментами в Drosophila melanogaster облегчит задачу открытия механизма, лежащего в основе этанола индуцированной поведенческой сенсибилизации.

В этом разделе показаны результаты репрезентативного эксперимента Flypub. Дрозофилы мужчины редко суд других мужчин35,36. Во время первого воздействия этанола, дикий тип Canton-S (CS) мужчины продемонстрировали небольшое, но незначительное увеличение в раскованный межгольной ухаживания31 (Рисунок 7A). Тем не менее, CS мужчины показали эскалацию увеличения в раскованный ухаживания деятельности в последующих воздействия этанола (ANOVA GLM, CS: R20,83, F(5,66) 65,21, р-эт-л; 0,0001; p n No 12; Рисунок 7A), который указывает на поведенческую сенсибилизацию к эффекту расторможенности этанола. Мы ранее показали, что этот тип EIBS требует допамина и рецептора допамина DopEcR в грибных нейронов31,32.
Чтобы определить, участвуют ли дополнительные нейромодуляторы в EIBS, мы исследовали роль ОА, проверяя мух(тч; nM18 null allele)37,38 не хватает тирамин и гидроксилаза, скорость ограничения фермента в биосинтезе ОА, таким образом, дефицит в ОА. Самцы тх в генетическом фоне CS (добрый подарок от д-ра Андреаса Тума, Лейпцигский университет, Германия) продемонстрировали сенсибилизированную реакцию на раскованное ухаживание при ежедневном воздействии этанола (ANOVA GLM, тзч:R 2No0.67, F(5,66) p n No 12; Рисунок 7B) но на пониженном уровне по сравнению с CS (ANOVAGLM, эффект взаимодействия: F 2.50, стр. 0,034). После специального анализа, тч мужчины выставлены более низкие уровни межмужских ухаживания при каждой экспозиции, что наиболее очевидно в течение четвертого по шестой воздействия этанола по сравнению с CS (Двухобразный t-тест: р злт; 0,002 в EXP4, р-эт-л; 0,004 в EXP5, р-л; 0,021 в EXP6; p n No 12; Рисунок 7С). В совокупности эти результаты свидетельствуют о том, что ОА может играть определенную роль в ЕИБС в эффекте расторможенности этанола. Что еще более важно, эти наборы данных ясно демонстрируют полезность и эффективность анализа Flypub в изучении этанола индуцированной дистормоции и сенсибилизации.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61123/61123fig1.jpg"> Рисунок 1: Процесс ассеис Ассеса Flypub. Диаграмма рабочего процесса, подчеркивающая ключевые шаги для проведения асссея Flypub. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61123/61123fig1large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61123/61123fig2.jpg"> Рисунок 2: Камеры материалов и сборки Flypub. ()Материалы, необходимые для создания камеры Flypub включают (i) горячий клей пистолет клей палку, (ii) горячий клей пистолет, (iii) лезвие бритвы, (iv) паяльник железа, (v) правитель, (vi) сетки, (vii) поликарбонат ный пластиковый лист, и ( (viii) круглый дно Drosophila бутылка. (B) Схематическое представление собрания камеры Flypub. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61123/61123fig2large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61123/61123fig3.jpg"> Рисунок 3: Воздействие этанола. (A) Полностью собранная станция Flypub. (B) Материалы, необходимые для воздействия этанола включают (i) P1000 микропайпет,(ii)лента, (iii) ватная палочка, (iv) Чашка Петри, (v) лабораторные салфетки,(vi)небольшая воронка,(vii) таймер,(viii) среднеразмерная воронка,(ix) коврик для мыши,(x)ножницы,(xi)95% этанол,(xii)силовые и( (C) Шаги о том, как сократить ватные палочки. (D) Вид сверху изображение пабов выровнены на сцене. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61123/61123fig3large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61123/61123fig4.jpg"> Рисунок 4: Видеоустановка для поведенческого скоринга. Показан шаг за шагом руководство по (A) как увеличить на видео и (B) как вставить файл тайм-код в медиаплеер VLC для поведенческих скоринга. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61123/61123fig4large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61123/61123fig5.jpg"> Рисунок 5: Мужское поведение ухаживания. Представитель изображения иллюстрируют Drosophila мужской ухаживания поведения, включая следующие и одностороннее расширение крыла для (A) ухаживания песни, (B) ухаживания цепи, (C) ухаживания круг (D) брюшной изгиб и (( E) монтаж, которые используются для поведенческих скоринга. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61123/61123fig5large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61123/61123fig6.jpg"> Рисунок 6: Ввод и анализ данных. (A) Количество мужчин, участвующих в ухаживания в каждые 10 с временной блок транскрибируется в листе. Наибольшее число ухаживающих мужчин из трех последовательных 10 временных блоков (зеленая стрелка) используется в качестве репрезентативной точки данных. В среднем 10 последовательных точек данных (синяя или оранжевая кронштейн), имеющих максимальное значение, представляют собой процент межмужских ухаживаний за пабом «оранжевый кронштейн»; MAX (средний), черная стрелка. (B, C) Формулы листа, используемые для расчета максимальной репрезентативной точки данных и максимального среднего показателя в 10 последовательных репрезентативных точек данных на паб. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61123/61123fig6large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61123/61123fig7.jpg"> Рисунок 7: Этанол индуцированной поведенческой расторможенности и сенсибилизации в CS и тх. (A, B) Самцы CS и t'hпродемонстрировали сенсибилизированную расторможенность ухаживаний с повторными воздействиями этанола (ANOVA GLM, CS: R2,0,83, F(5,66)65,21, стр. h тч: R20,67, F(5,66)27,60, р-н злт; 0,0001; n No 12). (C) ТЗч мужчины показали менее раскованный ухаживания по сравнению с CS (n '12). Значения p пост-специальных анализов показаны выше строки. Межмужские ухаживания деятельность была проанализирована из видео, созданных для каждого воздействия этанола. Все данные сообщаются как средства и стандартная ошибка среднего. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61123/61123fig7large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.</a>
Дополнительная цифра 1: Статистический анализ. Шаги в программном обеспечении Minitab 17 о том, как выполнитьтестна нормальность , (B) укладка данных, (C) Общая линейная модель ANOVA тест, (D) Два образца t-тест, (E) Манн-Уитни тест и (F) Kruskal-Wallis тест. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61123/61123supfig1large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы загрузить этот файл.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Flypub To Study Ethanol Induced Behavioral Disinhibition and Sensitization at JoVE.com

Flypub To Study Ethanol Induced Behavioral Disinhibition and Sensitization

Анализ Flypub измеряет поведение, которое плодовая муха Drosophila melanogaster отображает под влиянием этанола. Анализ может быть легко освоен экспериментаторами на всех уровнях и применен к различным испаряемым стимулам, облегчая злоупотребление психоактивными веществами и исследования наркомании.

Flypub для изучения этанола индуцированной поведенческой дистормогии и сенсибилизации

Alcohol use disorder (AUD) remains a serious problem in our society. To develop effective interventions for addiction, it is important to understand the ...

Flypub анализ меры раскованое поведение под воздействием алкоголя. Тем самым облегчая механистическое изучение расстройства употребления алкоголя. Алкоголь является одним из наиболее доступных и широко злоупотребляют наркотиками в мире.Нейробиологический механизм, лежащий в основе расстройства употребления алкоголя, однако, не до конца понят. Плодовая муха, Drosophila melanogaster, широко используется для изучения влияния этанола на эйфорию, передвижение, расшажение и седитацию. Он также используется для изучения его длительных и длительных изменений в поведении, имеющих отношение к наркомании, таких как толерантность, сенсибилизация, и этанол ищет.Многие исследования в Дрозофиле и других моделях животных сосредоточены на локомотивном активировании эффектов этанола. Отличительным эффектом этанола является поведенческая дезибибция. Тем не менее, это исследование довольно недопредставлены.Для решения этой ключевой проблемы мы разработали анализ Flypub для измерения раскованного поведения под воздействием этанола. Чтобы собрать камеру Flypub, возьмите круглую бутылку и отрежьте ее нижнюю часть 25-миллилитровой марки лезвием бритвы. Создайте отверстие на отметке 50 миллилитров с помощью горячего припоя железа.Это точка доступа, где мухи будут введены. Поместите круглую сетку диаметром 54 миллиметра на отметку 75 миллилитров и закрелите ее горячим клеем. Распоистите четкий пластиковый лист диаметром 70 миллиметров на открытом нижнем конце и закрестите его горячим клеем.Чтобы убедиться, что пластиковый раунд прочно прикреплен к нижней, давление вниз с помощью весов. Соберите самца мух в группу из 33 человек. Поместите их на стороне пищевой флакон.Поместите их в 25 градусов по Цельсию инкубатор с по крайней мере 50% относительной влажности и 12-часовой свет, 12-часовой темный цикл в течение 2 дней до воздействия этанола. Подготовь станцию анализа Flypub, включив свет, компьютер и камеру для видеозаписи. Подготовь шесть пабов к набору экспериментов.Наклейте на них ярлыки с номерами от одного до шести. Аккуратно ввемите мух в паб с помощью небольшой воронки. Закройте паб лентой.Акклиматизировать мух в течение 10 минут. Во время акклиматизации отрегулируйте фокус камеры и замелите последние пять минут акклиматизации. Во время акклиматизации подготовьем ватные палочки для доставки этанола.Разрежьте ватную палочку на четыре равных квадранта, а затем обрежьте углы, чтобы она вписывается в чашку Петри. Добавьте ватную палочку в чашку Петри. Добавьте один миллилитр 95%этанола на ватную палочку.Убедитесь в том, что раствор этанола равномерно распределен по всей площади колодки. Быстро накройте чашку Петри лабораторными салфетками. Аккуратно поместите этанол, содержащий чашку Петри, под каждый паб.Выровнять пабы на сцене. Начните запись и одновременно запустите таймер. Запись до тех пор, пока мухи не перестанут приуготовиться или двигаться.Удалите этанол, содержащий чашку Петри, когда более 90% мух поделись. Аккуратно перенесите подкилышки обратно в пищевые флаконы. Поместите их обратно в инкубатор.Повторите предыдущие шаги каждые 24 часа в течение шести дней подряд. Откройте видео с помощью медиа-плеера. Затем оценка числа мужчин, участвующих в ухаживания деятельности каждые 10 секунд.Ухаживание деятельности забить включают в себя следующие: одностороннее расширение крыла, ухаживания цепи, ухаживания круг, брюшной изгиб и монтаж. Показаны репрезентативные записи поведения мух. Во время акклиматизации, где самцы не проявляют большой активности.Во время первой экспозиции, где мужчины проявляют спорадические ухаживания. И во время шестой экспозиции, где самцы проявляют активность ухаживания. Введите число мужчин, отображающих ухаживания в десяти втором блоке времени.Используйте максимальное количество придворных самцов в три последовательных 10-секундных блока времени в качестве репрезентативной точки данных. В среднем 10 последовательных точек данных, имеющих наибольшее значение представляют собой процент межмалийных ухаживаний за пабом. Дикий тип Canton-S экспонат постепенно увеличивается деятельность раскованных ухаживания при повторном воздействии этанола.Это представляет собой поведенческую сенсибилизацию для дезингибиционной эффекта этанола. Мы изучили роль октопамина в сенсибилизации путем тестирования мух, которые не хватает тиамина бета-гидроксилазы, T бета H, таким образом, дефицит октопамина. Как и Canton-S, мутанты T beta H показали эскалацию реакции на повторное воздействие этанола, но на более низком уровне.Когда мы сравнили T бета H и Canton-S, мы заметили, что T бета H мутант мужчин отображается менее раскованный ухаживания, чем Кантон-S мужчин в каждой экспозиции о том, что октопамин может иметь важное значение для сенсибилизации. Теперь вы можете настроить, провести и проанализировать поведение, вызванное этанолом с помощью анализа Flypub. Ключевые моменты, которые нужно иметь в виду, включают, один, надлежащее собрание паба.Два, последовательные поставки этанола, и три, точные и беспристрастные поведенческие оценки. Анализ Flypub имеет много преимуществ. Это просто, недорогой в настройке, и легко учиться.Кроме того, несколько групп мух могут быть анализированы одновременно, облегчая это исследование для выявления последствий генетических или экспериментальных манипуляций. Flypub анализ весьма привлекает экспериментаторов на всех уровнях, включая начальные через среднюю школу, студентов и аспирантов, после документов и преподавателей. Таким образом, flypub анализ позволит вам определить молекулярных игроков, клеточных путей, мозговых цепей, и факторы риска, которые способствуют расстройству употребления алкоголя.

Research

JoVE Journal

Behavior

Behavioral Phenotyping of Murine Disease Models with the Integrated Behavioral Station (INBEST)

Behavioral Phenotyping of Murine Disease Models with the Integrated Behavioral Station INBEST

Поведенческая Фенотипирование мышиный Disease Models с интегрированной поведенческой станции (INBEST)

Due to rapid advances in genetic engineering, small rodents have become the preferred subjects in many disciplines of biomedical research. In studies of ...

A Procedure to Observe Context-induced Renewal of Pavlovian-conditioned Alcohol-seeking Behavior in Rats

Процедура Соблюдать Context-индуцированной Возобновление павловской кондиционером Алкоголь на обращении у крыс

Environmental contexts in which drugs of abuse are consumed can trigger craving, a subjective Pavlovian-conditioned response that can facilitate ...

A Mouse Model of Subchronic and Mild Social Defeat Stress for Understanding Stress-induced Behavioral and Physiological Deficits

Мышь Модель СУБХРОНИЧЕСКАЯ и Mild социального Одержать победу над стрессом для понимания стресс-индуцированной поведенческие и физиологические бюджетный дефицит

Stressful life events often increase the incidence of depression in humans. To study the mechanisms of depression, the development of animal models of ...

Combined Shuttle-Box Training with Electrophysiological Cortex Recording and Stimulation as a Tool to Study Perception and Learning

В сочетании Трансфер-Box Обучение с электрофизиологических Cortex записи и стимуляции как инструмент для изучения восприятия и обучения

Shuttle-box avoidance learning is a well-established method in behavioral neuroscience and experimental setups were traditionally custom-made; the ...

Rodent Brain Microinjection to Study Molecular Substrates of Motivated Behavior

Грызунов Мозг Микроинъекция по изучению молекулярных субстратов мотивированное поведение

Brain microinjection can aid elucidation of the molecular substrates of complex behaviors, such as motivation. For this purpose rodents can serve as ...

Assessment of Cocaine-induced Behavioral Sensitization and Conditioned Place Preference in Mice

Оценка кокаина индуцированных поведенческих сенсибилизации и условной площади Домашние у мышей

It is thought that rewarding experiences with drugs create strong contextual associations and encourage repeated intake. In turn, repeated exposures to ...

Basic Methods for the Study of Reproductive Ecology of Fish in Aquaria

Основные методы изучения репродуктивной экологии рыб в аквариуме

Captive-rearing observations are valuable for revealing aspects of fish behavior and ecology when continuous field investigations are impossible. Here, a ...

Reversible Cooling-induced Deactivations to Study Cortical Contributions to Obstacle Memory in the Walking Cat

Реверсивные охлаждения индуцированной деактиваций учиться корковых вклад препятствие памяти в пешеходных Cat

On complex, naturalistic terrain, sensory information about an environmental obstacle can be used to rapidly adjust locomotor movements for avoidance. For ...

Using the FishSim Animation Toolchain to Investigate Fish Behavior: A Case Study on Mate-Choice Copying In Sailfin Mollies

Using the FishSim Animation Toolchain to Investigate Fish Behavior: A Case Study on Mate-Choice Copying In Sailfin Mollies

С помощью набора инструментов анимации FishSim расследовать поведение рыбы: тематическое исследование на Мате Выбор копирования в Sailfin Моллис

Over the last decade, employing computer animations for animal behavior research has increased due to its ability to non-invasively manipulate the ...

Behavioral Assessments of Spontaneous Locomotion in a Murine MPTP-induced Parkinson's Disease Model

Поведенческие оценки спонтанного передвижения в модели мышиных MPTP-индуцированной болезни Паркинсона

Parkinson&#8217;s disease (PD) is a common neurodegenerative disorder disease, causing the phenomenon of shaking, rigidity, slowness of movement and ...