Name: scalable generation of mature cerebellar organoids from human pluripotent stem cells and characterization by immunostaining
Uploaded: 2020-06-13T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Scalable Generation of Mature Cerebellar Organoids from Human Pluripotent Stem Cells and Characterization by Immunostaining at JoVE.com

이 작품은 Fundação para a Ciência e a Tecnologia (FCT), 포르투갈 (UIDB/04565/2020 통해 Programa Operacional 지역 드 리스보아 2020, Project N. 007317, PD/BD/105773/2014 년 T.P.S 및 PD/BD/128376/2017 - D.E.S.N.까지, FEDER(POR 리스보아 2020-Programa Operacional Regional de Lisboa 포르투갈)이 공동 자금을 지원하는 프로젝트 2020) 및 FCT는 C-정밀 LISBOA-01-0145-FEDER-016394 및 CEREBEX 세대의 실조 연구 보조금 LISBOA-01-0145-FEDER-029298. 기금은 또한 유럽 연합의 호라이즌2020 연구 혁신 프로그램으로부터 보조금 협정 번호 739572-재생 및 정밀 의학 H2020-2016-2017에 따라 수령되었습니다.

1. 단층 문화에서 인간 iPSC의 패시징 및 유지 보수
<ol><li>플레이트 준비<ol>
<li>지하 멤브레인 매트릭스 (재료의 표참조) 4 °C에서 주식을 해동하고 60 μL 알리쿼트를 준비합니다. -20°C에서 알리쿼를 동결합니다.</li>
		<li>6 웰 플레이트의 우물을 코팅하려면 지하 막 매트릭스의 알리쿼트 하나를 얼음 위에 해동하십시오. 해동하면 DMEM-F12의 6mL에 60 μL을 추가합니다. 위아래로 피펫팅하여 ?...

<ol>
	<li>Takahashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+Pluripotent+Stem+Cells+from+Adult+Human+Fibroblasts+by+Defined+Factors.">Induction of Pluripotent Stem Cells from Adult Human Fibroblasts by Defined Factors.</a> Cell. 131 (5), 861-872 (2007).</li><li>Thomson, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+Stem+Cell+Lines+Derived+from+Human+Blastocysts.">Embryonic Stem Cell Lines Derived from Human Blastocysts.</a> Science. 282 (5391), 1145-1147 (1998).</li><li>Lancaster, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+organoids+model+human+brain+development+and+microcephaly.">Cerebral organoids model human brain development and microcephaly.</a> Nature. 501 (7467), 373-379 (2013).</li><li>Ishida, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vulnerability+of+Purkinje+Cells+Generated+from+Spinocerebellar+Ataxia+Type+6+Patient-Derived+iPSCs.">Vulnerability of Purkinje Cells Generated from Spinocerebellar Ataxia Type 6 Patient-Derived iPSCs.</a> Cell Reports. 17 (6), 1482-1490 (2016).</li><li>Liu, Y., Zhang, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+stem+cells+as+a+model+of+motoneuron+development+and+diseases.">Human stem cells as a model of motoneuron development and diseases.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1198, 192-200 (2010).</li><li>Mariani, J., Coppola, G., Pelphrey, K. A., Howe, J. R., Vaccarino, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FOXG1-Dependent+Dysregulation+of+GABA/+Glutamate+Neuron+Differentiation+in+Autism+Spectrum+Disorders.">FOXG1-Dependent Dysregulation of GABA/ Glutamate Neuron Differentiation in Autism Spectrum Disorders.</a> Cell. 162 (2), 375-390 (2015).</li><li>Muguruma, K., Nishiyama, A., Kawakami, H., Hashimoto, K., Sasai, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-Organization+of+Polarized+Cerebellar+Tissue+in+3D+Culture+of+Human+Pluripotent+Stem+Cells.">Self-Organization of Polarized Cerebellar Tissue in 3D Culture of Human Pluripotent Stem Cells.</a> Cell Reports. 10 (4), 537-550 (2015).</li><li>Qian, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+human+brain+region-specific+organoids+using+a+miniaturized+spinning+bioreactor.">Generation of human brain region-specific organoids using a miniaturized spinning bioreactor.</a> Nature Protocols. 13 (3), 565-580 (2018).</li><li>Aubry, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Striatal+progenitors+derived+from+human+ES+cells+mature+into+DARPP32+neurons+in+vitro+and+in+quinolinic+acid-lesioned+rats.">Striatal progenitors derived from human ES cells mature into DARPP32 neurons in vitro and in quinolinic acid-lesioned rats.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 105 (43), 16707-16712 (2008).</li><li>Gunhanlar, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+protocol+for+differentiation+of+electrophysiologically+mature+neuronal+networks+from+human+induced+pluripotent+stem+cells.">A simplified protocol for differentiation of electrophysiologically mature neuronal networks from human induced pluripotent stem cells.</a> Molecular Psychiatry. 23 (5), 1336-1344 (2018).</li><li>Hu, B. Y., Zhang, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+spinal+motor+neurons+from+pluripotent+human+stem+cells.">Differentiation of spinal motor neurons from pluripotent human stem cells.</a> Nature Protocols. 4 (9), 1295-1304 (2009).</li><li>Jo, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Midbrain-like+Organoids+from+Human+Pluripotent+Stem+Cells+Contain+Functional+Dopaminergic+and+Neuromelanin-Producing+Neurons.">Midbrain-like Organoids from Human Pluripotent Stem Cells Contain Functional Dopaminergic and Neuromelanin-Producing Neurons.</a> Cell Stem Cell. 19 (2), 248-257 (2016).</li><li>Muguruma, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ontogeny-recapitulating+generation+and+tissue+integration+of+ES+cell-derived+Purkinje+cells.">Ontogeny-recapitulating generation and tissue integration of ES cell-derived Purkinje cells.</a> Nature Neurosciences. 13 (10), 1171-1180 (2010).</li><li>Watson, L. M., Wong, M. M. K., Vowles, J., Cowley, S. A., Becker, E. B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Simplified+Method+for+Generating+Purkinje+Cells+from+Human-Induced+Pluripotent+Stem+Cells.">A Simplified Method for Generating Purkinje Cells from Human-Induced Pluripotent Stem Cells.</a> The Cerebellum. 17 (4), 419-427 (2018).</li><li>Wang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+human+induced+pluripotent+stem+cells+to+mature+functional+Purkinje+neurons.">Differentiation of human induced pluripotent stem cells to mature functional Purkinje neurons.</a> Science Reports. 5, 9232 (2015).</li><li>Tao, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+generation+of+mature+cerebellar+Purkinje+cells+from+mouse+embryonic+stem+cells.">Efficient generation of mature cerebellar Purkinje cells from mouse embryonic stem cells.</a> Journal of Neuroscience Research. 88 (2), 234-247 (2010).</li><li>Croughan, M. S., Giroux, D., Fang, D., Lee, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+Single-Use+Bioreactors+for+Scale-Up+of+Anchorage-Dependent+Cell+Manufacturing+for+Cell+Therapies.">Novel Single-Use Bioreactors for Scale-Up of Anchorage-Dependent Cell Manufacturing for Cell Therapies.</a> Stem Cell Manufacturing. , 105-139 (2016).</li><li>Simunovic, M., Brivanlou, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryoids,+organoids+and+gastruloids:+new+approaches+to+understanding+embryogenesis.">Embryoids, organoids and gastruloids: new approaches to understanding embryogenesis.</a> Development. 144 (6), 976-985 (2017).</li><li>Lou, Y. R., Leung, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Next+generation+organoids+for+biomedical+research+and+applications.">Next generation organoids for biomedical research and applications.</a> Biotechnology Advances. 36 (1), 132-149 (2018).</li><li>Silva, T. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Design+Principles+for+Pluripotent+Stem+Cell-Derived+Organoid+Engineering.">Design Principles for Pluripotent Stem Cell-Derived Organoid Engineering.</a> Stem Cells International. 2019, 1-17 (2019).</li><li>Silva, T. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maturation+of+human+pluripotent+stem+cell-derived+cerebellar+neurons+in+the+absence+of+co-culture.">Maturation of human pluripotent stem cell-derived cerebellar neurons in the absence of co-culture.</a> Frontiers of Bioengineering and Biotechnology. , (2020).</li><li>Burridge, P. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+universal+system+for+highly+efficient+cardiac+differentiation+of+human+induced+pluripotent+stem+cells+that+eliminates+interline+variability.">A universal system for highly efficient cardiac differentiation of human induced pluripotent stem cells that eliminates interline variability.</a> PLoS One. 6 (4), 18293 (2011).</li><li>Watanabe, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+ROCK+inhibitor+permits+survival+of+dissociated+human+embryonic+stem+cells.">A ROCK inhibitor permits survival of dissociated human embryonic stem cells.</a> Nature Biotechnology. 25 (6), 681-686 (2007).</li><li>Smith, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+Activin/Nodal+signaling+promotes+specification+of+human+embryonic+stem+cells+into+neuroectoderm.">Inhibition of Activin/Nodal signaling promotes specification of human embryonic stem cells into neuroectoderm.</a> Developmental Biology. 313 (1), 107-117 (2008).</li><li>Yaguchi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblast+growth+factor+(FGF)+gene+expression+in+the+developing+cerebellum+suggests+multiple+roles+for+FGF+signaling+during+cerebellar+morphogenesis+and+development.">Fibroblast growth factor (FGF) gene expression in the developing cerebellum suggests multiple roles for FGF signaling during cerebellar morphogenesis and development.</a> Developmental Dynamics. 238 (8), 2058-2072 (2008).</li><li>Fischer, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fgf15-mediated+control+of+neurogenic+and+proneural+gene+expression+regulates+dorsal+midbrain+neurogenesis.">Fgf15-mediated control of neurogenic and proneural gene expression regulates dorsal midbrain neurogenesis.</a> Developmental Biology. 350 (2), 496-510 (2011).</li><li>Bagri, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chemokine+SDF1+regulates+migration+of+dentate+granule+cells.">The chemokine SDF1 regulates migration of dentate granule cells.</a> Development. 129 (18), 4249-4260 (2002).</li><li>Bardy, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+medium+that+supports+basic+synaptic+functions+and+activity+of+human+neurons+in+vitro.">Neuronal medium that supports basic synaptic functions and activity of human neurons in vitro.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 112 (20), 2725-2734 (2015).</li><li>Bauwens, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+Human+Embryonic+Stem+Cell+Colony+and+Aggregate+Size+Heterogeneity+Influences+Differentiation+Trajectories.">Control of Human Embryonic Stem Cell Colony and Aggregate Size Heterogeneity Influences Differentiation Trajectories.</a> Stem Cells. 26 (9), 2300-2310 (2008).</li><li>Bratt-Leal, A. M., Carpenedo, R. L., McDevitt, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+the+embryoid+body+microenvironment+to+direct+embryonic+stem+cell+differentiation.">Engineering the embryoid body microenvironment to direct embryonic stem cell differentiation.</a> Biotechnology Progress. 25 (1), 43-51 (2009).</li><li>Miranda, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+and+temporal+control+of+cell+aggregation+efficiently+directs+human+pluripotent+stem+cells+towards+neural+commitment.">Spatial and temporal control of cell aggregation efficiently directs human pluripotent stem cells towards neural commitment.</a> Biotechnology Journal. 10 (10), 1612-1624 (2015).</li><li>Miranda, C. C., Fernandes, T. G., Diogo, M. M., Cabral, J. M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scaling+up+a+chemically-defined+aggregate-based+suspension+culture+system+for+neural+commitment+of+human+pluripotent+stem+cells.">Scaling up a chemically-defined aggregate-based suspension culture system for neural commitment of human pluripotent stem cells.</a> Biotechnology Journal. 11 (12), 1628-1638 (2016).</li><li>Bardy, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microcarrier+Suspension+Cultures+for+High-Density+Expansion+and+Differentiation+of+Human+Pluripotent+Stem+Cells+to+Neural+Progenitor+Cells.">Microcarrier Suspension Cultures for High-Density Expansion and Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells to Neural Progenitor Cells.</a> Tissue Engineering Part C Methods. 19 (2), 166-180 (2013).</li><li>Rigamonti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large-Scale+Production+of+Mature+Neurons+from+Human+Pluripotent+Stem+Cells+in+a+Three-Dimensional+Suspension+Culture+System.">Large-Scale Production of Mature Neurons from Human Pluripotent Stem Cells in a Three-Dimensional Suspension Culture System.</a> Stem Cell Reports. 6 (6), 993-1008 (2016).</li><li>Arora, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+process+engineering+approach+to+increase+organoid+yield.">A process engineering approach to increase organoid yield.</a> Development. 144 (6), 1128-1136 (2017).</li><li>Gimeno, L., Martinez, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+chick+Fgf19+and+mouse+Fgf15+orthologs+is+regulated+in+the+developing+brain+by+Fgf8+and+Shh.">Expression of chick Fgf19 and mouse Fgf15 orthologs is regulated in the developing brain by Fgf8 and Shh.</a> Developmental Dynamics. 236 (8), 2285-2297 (2007).</li></ol>

신약 스크리닝 및 재생의학 적용을 위한 특정 세포 유형을 생성하는 정된 배양 조건뿐만 아니라 큰 세포 수의 필요성은 확장 가능한 배양 시스템의 개발을 주도하고 있다. 최근 몇 년 동안, 몇몇 그룹은 신경 선조 및 기능성뉴런32,,33,,34의확장 가능한 생성을 보고하고, 신경 퇴행성 장애를 위한 새로운 모델의 발달에 있는 중요?...

인간 만능 줄기세포(PSC)의 출현은 이러한 세포가인체의대부분의 세포 계보로 분화될 수 있기 때문에 재생 의학 및 질병 모델링을 위한 우수한 도구를 나타낸다1,2. 이들의 발견 이후, 다양한 접근법을 이용한 PSC 분화는 신경퇴행성 질환3,4,,55,6등 다양한 질병을 모델링하는 것으로 보고되었다.,
최근에는 인간 뇌 구조를 닮은 PSCs로부터 파생된 3D 배양에 대한 보고가 있었습니다. 이들은 뇌 오르가노이드3,,7,,8이라고합니다. 건강하고 참을성 있는 특정 PsCs 둘 다에서 이 구조물의 생성은 인간 발달 및 신경 발달 무질서를 모델링할 귀중한 기회를 제공합니다. 그러나, 이러한 잘 조직된 대뇌 구조를 생성하는 데 사용되는 방법은 대규모 생산을 신청하기 어렵다. 오르가노이드 내부의 괴사 없이 조직 형태 발생을 재구성할 수 있을 만큼 큰 구조를 생성하기 위해 프로토콜은 정적 조건에서 초기 신경 약념에 의존하고, 하이드로겔의 캡슐화 및 동적 시스템3의후속 배양에 의존한다. 그러나, 이러한 접근은 오르가노이드 생산의 잠재적 인 확장을 제한 할 수있다. 피질, 줄무늬, 중뇌 및 척수 뉴런,9,,10,11,,12를포함한 중추 신경계의 특정 부위에 PSC 분화를 지시하기 위한 노력이 있었지만, 동적 조건에서 특정 뇌 영역의 생성은 여전히 과제입니다. 특히, 3D 구조에서 성숙한 소뇌 뉴런의 생성은 아직 설명되지 않았다. Muguruma 등은 초기 소뇌 발달을 재구성하는 배양 조건의 생성을개척하고 최근 인간 배아 줄기 세포가 제1 삼분기 소뇌7을연상시키는 편광 구조를 생성할 수 있도록 하는 프로토콜을 보고했다. 그러나, 보고된 연구에서 소뇌뉴런의 성숙은 오르가노이드의 해리, 소뇌선 선조의 분류, 및 단층 배양 시스템에서 피더 세포와 의 공동7배양을 필요로7,14,,15,,16. 따라서, 정의된 조건하에서 질병 모델링을 위한 바람직한 소뇌 유기성 의 재현 가능한 생성은 여전히 배양 및 피더 소스 가변성과 관련된 도전이다.
이 프로토콜은 3D 확장을 위한 최적의 배양 조건과 인간 PSC를 일회용 수직 휠 생체 반응기(사양에 대한 재료 표 참조)를 사용하여 소뇌 뉴런으로 효율적으로 분화하는 최적의 배양 조건을 제시합니다( 이후 생물 반응기라고 하는 재료표 참조). 생물 반응기는 U 자형 바닥과 함께 선박 내부에 더 균일한 전단 분포를 제공하는 대형 수직 임펠러가 장착되어 있어 부드럽고 균일한 혼합 및 입자 서스펜션을 허용하여 교반 속도17을줄입니다. 이 시스템을 사용하면 모양 과 크기 조절 셀 응집체를 얻을 수 있으며, 이는 보다 균일하고 효율적인 분화에 중요합니다. 더욱이, 더 많은 수의 iPSC 유래 오르가노이드가 덜 힘든 방식으로 생성될 수 있다.
일반적으로 줄기 세포에서 형성되는 3D 다세포 구조인 오르가노이드의 주요 특징은 인간 형태 발생18,,19,,20에서볼 수 있는 것과 같은 특정 모양을 형성하는 다른 세포 유형의 자체 조직이다. 따라서, 오르가노이드 형태는 분화 과정에서 평가되는 중요한 기준이다. 유기체의 극저분과 특정 항체 세트를 가진 유기성 슬라이스의 추가 면역 염색은 세포 증식, 분화, 세포 인구 정체성 및 세포 세포 집단 정체성을 분석하기 위해 분자 마커의 공간 시각화를 허용합니다. 이 프로토콜을 사용하면, 면역 염색 유기성 저온 절제에 의해, 초기 효율적인 신경 약념은 분화의 7일에 의해 관찰된다. 분화 하는 동안, 소뇌 정체성을 가진 여러 세포 인구 관찰. 이 동적 시스템에서 35 일 후, 소뇌 신경 에피텔륨은 증식 선조와 유면에 위치한 후유증 뉴런의 정량층과 함께 양봉 축을 따라 구성됩니다. 성숙 과정에서, 분화의 일 35-90에서, 소뇌 뉴런의 별개의 유형은 Purkinje 세포 (칼빈딘+),과립 세포 (PAX6+/MAP2+),골기 세포 (신경그라닌+),단극성 브러시 세포 (TBR2+),깊은 소뇌 핵 프로젝션 뉴런 (TBR1+)등 볼 수 있습니다. 또한, 배지에서 90일 후에 생성된 소뇌 기관지에서 세포사멸의 미미한 양이 관찰된다.
이 시스템에서 인간 iPSC 유래 오르가노이드는 다른 소뇌 뉴런으로 성숙하고 해리와 피더 공동 문화없이 최대 3 개월 동안 생존하여 질병 모델링을위한 인간 소뇌 뉴런의 원천을 제공합니다.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>3MM paper</td>
			<td>WHA3030861</td>
			<td>Merck</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accutase</td>
			<td>A6964 - 500mL</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>cell detachment medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-BARHL1 Antibody</td>
			<td>HPA004809</td>
			<td>Atlas Antibodies</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Calbindin D-28k Antibody</td>
			<td>CB28</td>
			<td>Millipore</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-MAP2 Antibody</td>
			<td>M4403</td>
			<td>Sigma</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-N-Cadherin Antibody</td>
			<td>610921</td>
			<td>BD Transduction</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-NESTIN Antibody</td>
			<td>MAB1259-SP</td>
			<td>R&#38;D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-OLIG2 Antibody</td>
			<td>MABN50</td>
			<td>Millipore</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-PAX6 Antibody</td>
			<td>PRB-278P</td>
			<td>Covance</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-SOX2 Antibody</td>
			<td>MAB2018</td>
			<td>R&#38;D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-TBR1 Antibody</td>
			<td>AB2261</td>
			<td>Millipore</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-TBR2 Antibody</td>
			<td>ab183991</td>
			<td>Abcam</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-TUJ1 Antibody</td>
			<td>801213</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Apo-transferrin</td>
			<td>T1147</td>
			<td>Sigma</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BrainPhys Neuronal Medium N2-A &#38; SM1 Kit</td>
			<td>5793 - 500mL</td>
			<td>Stem cell tecnhnologies</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemically defined lipid concentrate</td>
			<td>11905031</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslips 24x60mm</td>
			<td>631-1575</td>
			<td>VWR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Crystallization-purified BSA</td>
			<td>5470</td>
			<td>Sigma</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>10236276001</td>
			<td>Sigma</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dibutyryl cAMP</td>
			<td>SC- 201567B -500mg</td>
			<td>Frilabo</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM-F12</td>
			<td>32500-035</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>A3840001</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelatin from bovine skin</td>
			<td>G9391</td>
			<td>Sigma</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Copling Jar</td>
			<td>E94</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamax I</td>
			<td>10566-016</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>MB014001</td>
			<td>NZYtech</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ham&#8217;s F12</td>
			<td>21765029</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Episomal iPSC Line</td>
			<td>A18945</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>iPSC6.2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IMDM</td>
			<td>12440046</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin</td>
			<td>91077C</td>
			<td>Sigma</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>iPS DF6-9-9T.B</td>
			<td></td>
			<td>WiCell</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iso-pentane</td>
			<td>PHR1661-2ML</td>
			<td>Sigma</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Ascorbic acid</td>
			<td>A-92902</td>
			<td>Sigma</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel</td>
			<td>354230</td>
			<td>Corning</td>
			<td>basement membrane matrix</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monothioglycerol</td>
			<td>M6154</td>
			<td>Sigma</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mowiol</td>
			<td>475904</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mTeSR1</td>
			<td>85850 -500ml</td>
			<td>Stem cell technologies</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2 supplement</td>
			<td>17502048</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neurobasal</td>
			<td>12348017</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>158127</td>
			<td>Sigma</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS-0.1 Single-Use Vessel</td>
			<td>SKU: IA-0.1-D-001</td>
			<td>PBS Biotech</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS-MINI MagDrive Base Unit</td>
			<td>SKU: IA-UNI-B-501</td>
			<td>PBS Biotech</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human BDNF</td>
			<td>450-02</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human bFGF/FGF2</td>
			<td>100-18B</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human FGF19</td>
			<td>100-32</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human GDNF</td>
			<td>450-10</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human SDF1</td>
			<td>300-28A</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ROCK inhibitor Y-27632</td>
			<td>72302</td>
			<td>Stem cell technologies</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SB431542</td>
			<td>S4317</td>
			<td>Sigma</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>S7903</td>
			<td>Sigma</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SuperFrost Microscope slides</td>
			<td>12372098</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>adhesion microscope slides</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek O.C.T. Compound</td>
			<td>25608-930</td>
			<td>VWR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-HCL 1M</td>
			<td>T3038-1L</td>
			<td>Sigma</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>9002-93-1</td>
			<td>Sigma</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween-20</td>
			<td>P1379</td>
			<td>Sigma</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UltraPure 0.5M EDTA, pH 8.0</td>
			<td>15575020</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

scalable generation of mature cerebellar organoids from human pluripotent stem cells and characterization by immunostaining

소뇌는 균형과 모터 조정의 유지 보수에 중요한 역할을하며, 다른 소뇌 뉴런의 기능적 결함은 소뇌 기능 장애를 유발할 수 있습니다. 질병 관련 신경 표현형에 대한 현재 지식의 대부분은 질병 진행 및 발달의 이해를 어렵게 하는 사후 조직을 기반으로 합니다. 동물 모델과 불멸의 세포주 또한 신경 퇴행 성 장애에 대 한 모델로 사용 되었습니다. 그러나, 그들은 완전히 인간의 질병을 되풀이하지 않습니다. 인간 유도만능 줄기 세포 (iPSC)는 질병 모델링을위한 큰 잠재력을 가지고 있으며 재생 접근에 대한 귀중한 소스를 제공합니다. 최근 몇 년 동안, 환자 유래 iPSC에서 대뇌 오르가노이드의 생성은 신경 퇴행성 질환 모델링에 대한 전망을 향상. 그러나, 많은 수의 오르가노이드를 생성하는 프로토콜과 3D 배양 시스템에서 성숙한 뉴런의 높은 수율은 부족합니다. 제시된 프로토콜은 유기체가 소뇌 정체성을 취득하는 확장 가능한 일회용 생물 반응기를 사용하여 화학적으로 정의된 조건하에서 인간 iPSC 유래 오르가노이드의 재현 가능하고 확장 가능한 생성을 위한 새로운 접근법입니다. 생성된 오르가노이드는 mRNA 와 단백질 수준에서 특정 마커의 발현을 특징으로 한다. 단백질의 특정 단의 분석은 오르가노이드 구조의 평가에 중요 한 다른 소뇌 세포 집단의 검출을 허용. 유기체 극저분과 오르가노이드 슬라이스의 추가 면역 염색은 특정 소뇌 세포 집단과 공간 조직의 존재를 평가하는 데 사용됩니다.

프로토콜은 0.1 L 생물 반응기(도1A)를사용하여 세포 응집을 촉진함으로써 시작되었다. iPSC의 단일 세포 접종은 27 rpm의 교반 속도를 가진 매체의 60 mL에서 250,000 세포/mL 시드로 수행되었다. 이는 0일로 정의되었습니다. 24시간 후, 세포는 스페로이드 모양의 골재(1일째, 도 1B)를효율적으로 형성하고, 형태는 5일째까지 잘 유지되었고, 크기가 점진적으로 증?...

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Scalable Generation of Mature Cerebellar Organoids from Human Pluripotent Stem Cells and Characterization by Immunostaining

이 프로토콜은 인간 다능성 줄기 세포의 제어된 크기 응집을 생성하고 단일 사용 생물 반응기를 사용하여 화학적으로 정의되고 피더가 없는 조건하에서 소뇌 유기체의 분화를 더욱 자극하는 동적 배양 시스템을 설명합니다.

인간 다능성 줄기 세포에서 성숙한 소뇌 오르가노이드의 확장 가능한 생성 및 면역 염색에 의한 특성화

The cerebellum plays a critical role in the maintenance of balance and motor coordination, and a functional defect in different cerebellar neurons can ...

우리는 처음으로, 재현 가능하고 확장 가능한 생성을 위한 새로운 접근, 세노란lar Organoids에서 파생된 IPS 세포의 및 화학적 정의된 조건, 일회용 생물 반응기를 사용하여 제시합니다. 바이오 반응기를 파종하기 위한 세포를 얻으려면 인간 iPSC의 6개의 웰 플레이트에 세포 분리 배지 1밀리리터를 추가합니다. 접시를 섭씨 37도에서 7분간 배양하고, 부드러운 흔들림이 잘에서 세포를 쉽게 분리할 때까지 배양합니다.P 1000 마이크로파이프를 사용하여 세포 분리 배지를 위아래로 피펫하여 세포가 단일 세포로 해리될 때까지 피펫합니다. 다음으로 각 웰에 완전한 세포 배양 배지의 2 밀리리터를 추가하여 효소 소화를 비활성화합니다. 그런 다음 파이펫을 사용하여 세포를 멸균 원문 튜브로 부드럽게 전달합니다.3 분 동안 210 배 중력으로 튜브를 원심 분리합니다. 상체를 제거하고 배양 배지에서 세포 펠릿을 다시 중단한다. 혈전계와 트라이판 블루 염료를 사용하여 세포를 계산합니다.밀리리터당 250, 000세포의 밀도로 iPSC의 생체 반응기 용기를 참조하십시오. 생체 반응기 선박을 유니버설 베이스 유닛에 넣고 섭씨 37도, 습도 95%, 이산화탄소 5%의 인큐베이터에 넣습니다. iPSC 집계를 촉진하려면 기본 제어 장치의 교반 속도를 27 RPM으로 설정합니다.첫날, 0일째는 생물반응기를 파종하는 날인 데, 생물반응기와 베이스 유닛을 멸균 유동 후드에 넣고, 혈청피펫을 사용하여 세포 현탁액의 1밀리리터 샘플을 수집합니다. 매우 낮은 부착, 24 웰 플레이트에 셀 서스펜션을 플레이트. 현미경을 사용하여 iPSC 파생 골체가 형성되어 있음을 확인합니다.그렇다면, 40 X 또는 100 X.에서 응집물의 이미지를 캡처하여 iPSC와 생물 반응기를 계속 배양하고, 골재의 평균 직경이 100 마이크로미터까지, 배지의 80%를 암억제제 없이 신선한 MT01로 교체한다. 골재가 직경 200~250마이크로미터에 도달하면 모든 오르가노이드가 생체 반응기의 바닥에 정착한 다음 모든 소비된 매체를 gfCDM 분화 매체로 교체합니다. 기체와 생체 반응기를 인큐베이터에 배치하고 교반을 25 RPM으로 감소시다.저장된 오르가노이드에서 상체를 제거 한 후 펠릿에 15 %의 자당 1 밀리리터를 넣고 부드럽게 소용돌이치면 잘 섞습니다. 하룻밤 동안 오르가노이드를 배양 한 후, 섭씨 4도에서 자당 용액을 제거 한 다음 15 % 자당, 7.5 %의 젤라틴1 밀리리터를 추가하고 부드럽게 소용돌이에 의해 빠르게 섞습니다. 오가노이드는 섭씨 37도에서 배양하는 동안 15% 자당 7.5%의 젤라틴 용액으로 플라스틱 용기를 반쯤 채우고 고화시킬 수 있습니다.오르가노이드가 1 시간 동안 배양 한 후, 파스퇴르 파이펫을 사용하여 고화 된 자당과 젤라틴 위에 오르가노이드 자당 젤라틴 혼합물한 방울을 놓습니다. 드롭이 고화되기까지 15분을 기다린 후, 플라스틱 용기의 나머지 부분을 15% 더 많이 채우고 7.5%의 젤라틴을 사용하여 실온에서 완전히 고화한 다음 섭씨 4도에서 20분 동안 배양할 수 있습니다. 중앙에 오르가노이드가 있는 큐브를 큐브로 자르고, 큐브를 100억 파운드한 방울로 골판지에 고정한 다음, 500밀리리터 컵에 이스펜타네 250 밀리리터를 넣고 액체 질소로 적절한 용기를 채웁니다.집게와 두꺼운 장갑을 사용하여 액체 질소 표면에 이스펜탄 컵을 조심스럽게 놓습니다. 이스펜탄과 액체 질소는 유해 시약입니다. 이 두 시약을 사용하려면 두꺼운 장갑과 적절한 환기를 포함한 개인 보호 장비가 필요합니다.이스토펜탄이 음수 섭씨 80도까지 냉각되면 젤라틴 큐브를 이스토탄에 놓아 얼때까지 놓습니다. 잘 냉동 된 큐브는 가볍게 집게로 도청 할 때 금속 사운드를 생성하여 저장할 준비가되었음을 나타냅니다. 50 밀리리터 1X PBS를 5분 동안 아구노이드 섹션으로 담은 현미경 슬라이드를 세척한 다음 슬라이드를 신선한 1X PBS를 포함하는 코플린 항아리로 옮겨냅니다.새로 준비된 글리신 50밀리리터를 함유한 코플린 항아리로 슬라이드를 옮기고 실온에서 10분 동안 인큐베이션한 다음 슬라이드를 0.1%트리톤의 50밀리리터를 함유한 코플린 항아리로 옮기고 실온에서 10분 동안 투과를 처리합니다. 슬라이드를 1X PBS로 두 번 세척하여 매번 5분간 세척합니다. 1X PBS에 담근 3mm 종이로 면역 염색 접시를 준비합니다.슬라이스 주위에 티슈로 슬라이드를 건조하고 3 밀리미터 종이에 놓습니다. 파스퇴르 파이펫을 사용하면 각 슬라이드를 블로킹 용액 0.5 밀리리터로 덮습니다. 실온에서 30분 동안 배양한 후, 과도한 차단 용액을 제거하고 슬라이스 주변의 조직으로 슬라이드를 운전하십시오.희석 된 1 차 항체 50 마이크로 리터를 각 슬라이드에 놓고 덮개 전표로 덮습니다. 슬라이드를 레이스, 이전에 준비 된 면역 염색 접시에, 4 섭씨에서 그들을 배양. 하룻밤 동안 잠복 한 후, 코플린 항아리에 슬라이드를 전송, 와 50 TBST의 밀리리터, 커버 슬립을 떠나시키는, 다음 TBST와 함께 슬라이드를 세 번 세척, 5 시간 마다.각 슬라이드에 희석 된 이차 항체 50 마이크로 리터를 놓고 커버 슬립으로 덮습니다. 슬라이드를 이전에 준비된 면역 스테인딩 접시에 놓고, 빛으로부터 보호된 실온에서 30분 동안 배양합니다. 슬라이드를 코플린 항아리로 다시 옮기고 TBST 50 밀리리터로 매번 5분 간 세 번 씻습니다.파스퇴르 파이펫을 사용하여 0.5 밀리리터의 dappy 용액을 각 슬라이드의 전체 표면에 걸쳐 실온에서 5 분 동안 배양하십시오. 생물 반응기에서 24 시간 후, iPSC의 효율적으로 형성 스페로이드 모양의 골재. 형태는 5일째까지 잘 유지되었고, 점차 크기가 증가했습니다.동질성의 높은 수준을 시연. 현미경 검사법에 의한 정량적 분석은 또한 정상 분포, 1일별 집계 크기, 두 세포주 모두 둘째 날까지 최적의 골재 크기를 달성했다. 원하는 골체 직경이 달성된 후, 신경 약정이 유도되었고, 그 후 다른 소뇌 선조의 생성이 촉진되었다.분화 오르가노이드 동안, 발광 공간을 가진 신경관 같이 구조물과 유사한 더 뚜렷한 상피화를 보여주었습니다. 또한, 오르가노이드 직경 분포는 14일째까지 초기 소뇌 약정 중에 균질했다. 면역형광분석은 iPSC 유래 오르가노이드의 효율적인 신경 약념이 이미 7일째까지 달성되고 있음을 뒷받침한다.면역 염색은 또한 소뇌 유기체의 능률적인 소뇌 약정 및 능률적인 성숙을 보여주었습니다. 더욱이, 생물 반응기에서 80 일 후에, 유기체의 살아있는 죽은 염색은 높은 세포 생존력을 보여주었고, 괴사 영역의 아무 기록도 보여주지 않았습니다. 이 기술은 병리학적 경로를 연구하기 위한 중요한 도구를 나타내며, 신약의 치료 효과를 평가하고 관찰된 소뇌의 변성에 관여합니다.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Development, Expansion, and In vivo Monitoring of Human NK Cells from Human Embryonic Stem Cells (hESCs) and Induced Pluripotent Stem Cells (iPSCs)

Development, Expansion, and In vivo Monitoring of Human NK Cells from Human Embryonic Stem Cells hESCs and Induced Pluripotent Stem Cells iPSCs

개발, 확대,<em&gt; 생체 내</em&gt; 인간 배아 줄기 세포 (hESCs에)에서 인간 NK 세포의 모니터링 및 및 유도 된 pluripotent 줄기 세포 (유도 만능)

We present a method for deriving natural killer (NK) cells from undifferentiated hESCs and iPSCs using a feeder-free approach. This method gives rise to ...

연구

생체공학

Transplantation of Induced Pluripotent Stem Cell-derived Mesoangioblast-like Myogenic Progenitors in Mouse Models of Muscle Regeneration

근육 재생의 마우스 모델에서 유도 만능 줄기 세포 유래 메소안지오블라스트 와 같은 근생 성 전구의 이식

Patient-derived iPSCs could be an invaluable source of cells for future autologous cell therapy protocols. iPSC-derived myogenic stem/progenitor cells ...

Efficient Generation and Editing of Feeder-free IPSCs from Human Pancreatic Cells Using the CRISPR-Cas9 System

효율적인 생성 및 급지대 무료 Ipsc CRISPR Cas9 시스템을 사용 하 여 인간의 췌 장 세포에서의 편집

Embryonic and induced pluripotent stem cells can self-renew and differentiate into multiple cell types of the body. The pluripotent cells are thus coveted ...

Detection of Endotoxin in Nano-formulations Using Limulus Amoebocyte Lysate (LAL) Assays

Detection of Endotoxin in Nano-formulations Using Limulus Amoebocyte Lysate LAL Assays

나노 제형에도 Limulus Amoebocyte Lysate (LAL) 분석 실험을 사용 하 여

When present in pharmaceutical products, a Gram-negative bacterial cell wall component endotoxin (often also called lipopolysaccharide) can cause ...

Growth and Characterization of Irradiated Organoids from Mammary Glands

유 방 땀 샘에서 조사 된 유기 체의 성장과 특성화

Organoids derived from the digested tissue are multicellular three-dimensional (3D) constructs that better recapitulate in vivo conditions than cell ...

Isolation of Adult Human Dermal Fibroblasts from Abdominal Skin and Generation of Induced Pluripotent Stem Cells Using a Non-Integrating Method

비통합 방법을 사용하여 복부 피부에서 성인 인간 진피 섬유 아세포의 분리 및 유도 만능 줄기 세포의 생성

Induced pluripotent stem cells (iPSCs) could be considered, to date, a promising source of pluripotent cells for the management of currently untreatable ...

Guided Differentiation of Mature Kidney Podocytes from Human Induced Pluripotent Stem Cells Under Chemically Defined Conditions

화학적으로 정의된 조건하에서 인간 유도된 다능성 줄기 세포에서 성숙한 신장 분피의 유도된 분화

Kidney disease affects more than 10% of the global population and costs billions of dollars in federal expenditures. The most severe forms of kidney ...

Single-Cell Optical Action Potential Measurement in Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Cardiomyocytes

인간 유도 만능 줄기 세포 유래 심근 세포에서 단세포 광학 작용 잠재적 측정

Conventional intracellular microelectrode techniques to quantify cardiomyocyte electrophysiology are extremely complex, labor intensive, and typically ...

Fibroblast Derived Human Engineered Connective Tissue for Screening Applications

섬유아세포, 선별 애플리케이션을 위한 인간 공학형 결합 조직

Fibroblasts are phenotypically highly dynamic cells, which quickly transdifferentiate into myofibroblasts in response to biochemical and biomechanical ...