Name: studying effects of cigarette smoke on pseudomonas infection in lung epithelial cells
Uploaded: 2020-05-11T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Studying Effects of Cigarette Smoke on Pseudomonas Infection in Lung Epithelial Cells at JoVE.com

Este trabalho foi apoiado em parte por um Instituto Nacional de Saúde R01 concede HL125435 e HL142997 (para CZ).

1. Preparação 100% CSE
<ol><li>Desenhe 10 mL de mídia de cultura celular livre de soro (DMEM/F12 para células BEAS-2B; meio basal de célula epitelial das vias aéreas para células HSAEC) em uma seringa de 60 mL.</li>
	<li>Anexar inversamente uma ponta de pipeta de 1 mL apropriadamente aparada ao bocal da seringa como adaptador para segurar o cigarro (3R4F).</li>
	<li>Remova o filtro do cigarro. Coloque um cigarro no adaptador de ponta e que combustão o cigarro.</li>
	<li>Desenhe 40 mL de ar contendo fumaça em 1...

<ol>
	<li>Vogelmeier, C. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+Strategy+for+the+Diagnosis,+Management,+and+Prevention+of+Chronic+Obstructive+Lung+Disease+2017+Report.+GOLD+Executive+Summary.">Global Strategy for the Diagnosis, Management, and Prevention of Chronic Obstructive Lung Disease 2017 Report. GOLD Executive Summary.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 195 (5), 557-582 (2017).</li><li>Malhotra, J., Malvezzi, M., Negri, E., La Vecchia, C., Boffetta, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Risk+factors+for+lung+cancer+worldwide.">Risk factors for lung cancer worldwide.</a> European Respiratory Care Journal. 48 (3), 889-902 (2016).</li><li>Lugade, A. 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D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aberrant+epithelial+differentiation+by+cigarette+smoke+dysregulates+respiratory+host+defence.">Aberrant epithelial differentiation by cigarette smoke dysregulates respiratory host defence.</a> European Respiratory Journal. 51 (4), 1701009 (2018).</li><li>Tan, Q., Choi, K. M., Sicard, D., Tschumperlin, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+airway+organoid+engineering+as+a+step+toward+lung+regeneration+and+disease+modeling.">Human airway organoid engineering as a step toward lung regeneration and disease modeling.</a> Biomaterials. 113, 118-132 (2017).</li><li>Miller, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+lung+organoids+from+human+pluripotent+stem+cells+in+vitro.">Generation of lung organoids from human pluripotent stem cells in vitro.</a> Nature Protocols. 14 (2), 518-540 (2019).</li></ol>

A invasão bacteriana em células epiteliais pulmonares é um passo crucial na patogênese das infecções bacterianas. O processo de invasão bacteriana nas células pode ser dividido nas seguintes três etapas: Primeiro, as bactérias entram em contato e aderem à superfície da célula epitelial usando sua flagela. Em segundo lugar, as bactérias são submetidas à internalização ou penetram na membrana celular. Finalmente, as bactérias se replicam e colonizam as células se escapam com sucesso dos mecanismos de de...

O tabagismo afeta a saúde pública de milhões de pessoas em todo o mundo. Muitas doenças deletérios, incluindo câncer de pulmão e doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC), estão relacionadas ao tabagismo1,,2. O tabagismo aumenta a suscetibilidade a infecções microbianas agudas no sistema respiratório3,,4,5. Além disso, evidências crescentes comprovam que o tabagismo aumenta a patogênese de muitas doenças crônicas6,,7,8. Por exemplo, o tabagismo pode aumentar as infecções virais ou bacterianas que causam a exacerbação da DPOC9. Entre os patógenos bacterianos que contribuem etiologicamente para a exacerbação aguda da DPOC, um patógeno de bacilo gram-negativo oportunista, Pseudomonas aeruginosa,causa infecções que se correlacionam com prognósticos ruins e maiores mortalidades10,11. A exacerbação da DPOC piora a doença acelerando a progressão patológica. Não há terapias eficazes contra a exacerbação da DPOC, exceto para a gestão antissintomática12. A exacerbação da DPOC promove a mortalidade do paciente, diminui a qualidade de vida e aumenta a carga econômica sobre a sociedade13.
As vias respiratórias são um sistema aberto, continuamente submetido a vários patógenos microbianos presentes externamente. Patógenos bacterianos oportunistas são geralmente detectados nas vias aéreas superiores, mas às vezes são observados nas vias aéreas inferiores14,15. Nos modelos animais P. aeruginosa pode ser detectado em sacos alveolares logo 1h após a infecção16. Como um grande mecanismo de defesa, células imunes como macrófagos ou neutrófilos eliminam as bactérias nas vias aéreas. As células epiteliais pulmonares, como a primeira barreira fisiológica, desempenham um papel único na defesa do hospedeiro contra infecções microbianas. As células epiteliais pulmonares podem regular a invasão microbiana, colonização ou replicação independente das células imunes17. Algumas moléculas encontradas em células epiteliais, incluindo PPARg, exercem funções antibacterianas, regulando assim a colonização bacteriana e a replicação nas células epiteliais pulmonares18. O tabagismo pode alterar as moléculas e prejudicar a função normal de defesa nas células epiteliais pulmonares19,20. Estudos recentes relataram exposição direta da fumaça do cigarro às células epiteliais pulmonares usando o aparelho de fumo robô21,22. A exposição à fumaça pode ser realizada de outras formas, incluindo a aplicação de CSE. A preparação do CSE é uma abordagem reprodutível com aplicações potenciais em outros tipos de células, incluindo células endoteliais vasculares que são indiretamente expostas à fumaça de cigarro.
Este relatório descreve um protocolo para gerar extrato de fumaça de cigarro para alterar a carga bacteriana em células epiteliais pulmonares. O CSE aumenta a carga bacteriana de P. aeruginosa,e pode contribuir para a recidiva de infecções bacterianas geralmente vistas na exacerbação da DPOC. Um método convencional é usado para a preparação de CSE. As células epiteliais pulmonares, em seu estágio de crescimento exponencial, são tratadas com 4% de ESC por 3 h. Alternativamente, as células epiteliais pulmonares cultivadas por monocamadas podem ser diretamente expostas à fumaça do cigarro em uma interface ar-líquido. As células tratadas com CSE são então desafiadas com Pseudomonas em uma multiplicidade de infecção (MOI) de 10. As bactérias são propagadas a uma velocidade de agitação particular para garantir que a morfologia de sua flagela permaneça intacta para manter sua capacidade invasiva total. A gentamicina é empregada para matar as bactérias deixadas no meio da cultura, reduzindo assim a contaminação potencial durante a subsequente determinação da carga bacteriana. O protocolo também usa Pseudomonascom a etiqueta GFP, que tem sido utilizada como uma poderosa ferramenta para estudar a infecção por Pseudomonas em diferentes modelos. Uma cepa representativa é P. fluorescens Migula23. O grau de infecção ou carga bacteriana após o tratamento de ESE é determinado de três maneiras: o método de placa de gota com contagem de colônias, PCR quantitativo usando primers pseudomonas 16S rRNA ou citometria de fluxo em células infectadas com Pseudomonasfluorescentes . Este protocolo é uma abordagem simples e reprodutível para estudar o efeito da fumaça de cigarro em infecções bacterianas em células epiteliais pulmonares.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:691px;" width="690">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">50mL syringe</td>
			<td style="width:148px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">airway epithelial cell basal medium</td>
			<td style="width:148px;">ATCC</td>
			<td>PCS-300-030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Bacteria shaker</td>
			<td style="width:148px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">bronchial epithelial cell growth kit</td>
			<td style="width:148px;">ATCC</td>
			<td>PCS-300-040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Cell Counter</td>
			<td style="width:148px;">Bio-Rad</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">CFX96 Real-Time PCR System</td>
			<td style="width:148px;">Bio-Rad</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">High-Capacity RNA-to-DNA KIT</td>
			<td style="width:148px;">ThermoFisher Scientific</td>
			<td align="right" style="width:161px;">4387406</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">HITES medium</td>
			<td style="width:148px;">ATCC</td>
			<td style="width:161px;">ATCC 30-2004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">human BEAS-2B cells</td>
			<td style="width:148px;">ATCC</td>
			<td style="width:161px;">ATCC CRL-9609</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">human primary small airway epithelial cells</td>
			<td style="width:148px;">ATCC</td>
			<td style="width:161px;">ATCC PCS-300-030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">LSRII flow cytometer</td>
			<td style="width:148px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Nikkon confocal microscope</td>
			<td style="width:148px;">Nikkon</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">OD reader</td>
			<td style="width:148px;">USA Scientific</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">PCR primers</td>
			<td style="width:148px;">ITD</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Pseudomonas aeruginosa</td>
			<td style="width:148px;">ATCC</td>
			<td style="width:161px;">ATCC 47085</td>
			<td style="width:167px;">PAO1-LAC</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Pseudomonas fluorescens Migula</td>
			<td style="width:148px;">ATCC</td>
			<td style="width:161px;">ATCC 27853</td>
			<td>P.aeruginosa GFP</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Research-grade cigarettes (3R4F)</td>
			<td style="width:148px;">University of Kentucky</td>
			<td style="width:161px;">TP-7-VA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RNeasy Mini Kit</td>
			<td style="width:148px;">Qiagen</td>
			<td align="right" style="width:161px;">74106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:215px;">Transprent PET Transwell Insert</td>
			<td style="width:148px;">Corning Costar</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:215px;">Tryptic Soy Broth</td>
			<td style="width:148px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

studying effects of cigarette smoke on pseudomonas infection in lung epithelial cells

O tabagismo é a principal causa etiológica para enfisema pulmonar e doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC). O tabagismo também promove a suscetibilidade a infecções bacterianas no sistema respiratório. No entanto, os efeitos do tabagismo em infecções bacterianas em células epiteliais pulmonares humanas ainda não foram estudados minuciosamente. Descrito aqui é um protocolo detalhado para a preparação de extratos de tabagismo de cigarro (ECA), tratamento de células epiteliais pulmonares humanas com ESC, e determinação de infecção bacteriana e infecção. O CSE foi preparado com um método convencional. As células epiteliais pulmonares foram tratadas com 4% de CSE para 3 h. As células tratadas com CSE foram, então, infectadas com Pseudomonas em uma multiplicidade de infecção (MOI) de 10. As cargas bacterianas das células foram determinadas por três métodos diferentes. Os resultados mostraram que a CSE aumentou a carga de Pseudomonas em células epiteliais pulmonares. Este protocolo, portanto, fornece uma abordagem simples e reprodutível para estudar o efeito da fumaça de cigarro em infecções bacterianas em células epiteliais pulmonares.

Um diagrama é usado para ilustrar o protocolo na Figura 1. As células BEAS-2B epiteliais pulmonares foram tratadas com ETE e desafiadas com Pseudomonas. Pseudomonas no meio de cultura foram mortas pela gentamicina adicionada e as células foram submetidas ao ensaio da placa de gota, detecção RT-qPCR de Pseudomonas ribossomo 16S RNA, e citometria de fluxo. Em comparação com o controle, o tratamento de ECs aumentou substancialmente a infecção bacteriana nos m...

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Studying Effects of Cigarette Smoke on Pseudomonas Infection in Lung Epithelial Cells

Descrito aqui é um protocolo para estudar como o extrato de fumaça de cigarro afeta a colonização bacteriana em células epiteliais pulmonares.

Estudando efeitos da fumaça do cigarro na infecção por pseudomonas em células epiteliais pulmonares

Cigarette smoking is the major etiological cause for lung emphysema and chronic obstructive pulmonary disease (COPD). Cigarette smoking also promotes ...

Este protocolo usa três abordagens para determinar se a fumaça do cigarro afeta a carga bacteriana pseudomonas em células epiteliais pulmonares. Este método pode ser expandido para células endoteliais ou outras torneiras celulares. A preparação da extração da fumaça do cigarro, a infecção bacteriana e a determinação com uma carga bacteriana são bem descritas em detalhes neste vídeo.Este procedimento é muito fácil de seguir para os novos usuários. Desenhe 10 mililitros de cultura celular sem soro em uma seringa de 60 mililitros. Conecte a extremidade estreita de uma guarnição a uma ponta de pipeta mililitro no bocal da seringa, como adaptador para segurar o cigarro.Retire o filtro do cigarro e conecte o cigarro ao adaptador. Não mais do que 30 minutos antes de realizar o ensaio combustão do cigarro e desenhar 40 mililitros de fumaça contendo ar na seringa. Misture a fumaça com o meio sacudindo vigorosamente a seringa.Repita o processo de desenho até que o cigarro esteja completamente queimado, o que exigirá cerca de 11 empates em aproximadamente sete minutos. Para remover microrganismos e partículas insolúveis do meio, filtre-o através de um filtro de 0,22 míccro. Em seguida, transfira o meio para um tubo estéril fechado.Inocular um caldo de soja trippático ou placa de auger TSB com uma cepa de pseudomonas selecionada. Incubar a placa durante a noite a 37 graus Celsius. Prepare um tubo contendo 20 mililitros de TSB com 5% de glicerol como fonte de carbono.Recolhe uma mancha da placa de auger e inocula o TSB. Incubar a suspensão pseudomonas em um shaker de 37 graus Celsius a 200 RPM, por aproximadamente uma hora, até que a densidade óptica em 600 nanômetros seja de 0,6. Após a cultura das células epiteliais pulmonares, como descrito no manuscrito, adicione um mililitro de 0,25% de trippsina às células.Após aproximadamente cinco minutos, quando as células tiverem se separado completamente da parte inferior da placa, adicione 10 mililitros de altura completa para neutralizar a trippsina. Transfira as células para um tubo de 15 mililitros. Em seguida, centrifugar as células por cinco minutos a quatro graus Celsius e 300 vezes G.Remova e descarte o supernasce.Em seguida, suspenda novamente as células em mililitros de heights médios com 10% de FBS. Pipeta 10 microliters da suspensão da célula epitelial em uma nova placa. Use um contador celular automatizado para obter a concentração celular.Plaque as células epiteliais pulmonares a uma concentração de três vezes 10 a quinta células por mililitro, em um volume total de dois mililitros de médio por poço. Incubar as placas durante a noite. Quando as células atingirem aproximadamente 80% de confluência, substitua o meio por alturas médias, mais 1%FBS.Em seguida, adicione 4%CSE aos poços e incuba as placas por três horas. Adicione um pseudomonas a cada poço de células epiteliais pulmonares tratadas com ESE. Em seguida, incubar as placas por uma hora a 37 graus Celsius com 5% de dióxido de carbono.Em seguida, substitua o meio nas seis placas de poço por dois mililitros de altura fresca, contendo 4% de CSE e 100 microgramas por mililitro de gentamicina. Depois de incubar as placas por uma hora a 37 graus Celsius com 5% de dióxido de carbono, aspire o meio dos poços. Lave as células tratadas com gentamicina, duas vezes, com dois mililitros de PBS frio.A carga de bactérias nas células epiteliais pulmonares pode então ser detectada pelo método de placa de gota, qRT-PCR ou citometria de fluxo. Adicione um mililitro de tampão de lise celular a cada poço de células epiteliais pulmonares. Reparar diluições seriais do lise celular, variando de 1 a 10 a 10.000.Em seguida, inocular a placa de auger TSB. Após 16 horas de incubação, determine quantas unidades formadoras de colônias estavam presentes nas células epiteliais pulmonares, contando o número de colônias bacterianas. Adicione 0,35 mililitros do tampão de tiocianato guanidinium a cada poço de células epiteliais pulmonares.Colete as células com um raspador de células. Pipete o lise em um tubo de microcrédito e misture suavemente com a pipeta. Adicione 0,35 mililitros de recém-preparado a 70% de etanol ao lise e misture bem.Transfira todas as amostras para uma coluna de spin colocada em um tubo de coleta de dois mililitros. Centrifugar o tubo de coleta por 30 segundos a 10.000 vezes G e 20 a 25 graus Celsius. Descarte o tampão no tubo de coleta e lave a coluna com 0,7 mililitros de tampão de lavagem.Centrifugar a coluna a 10.000 vezes G por 30 segundos. Lave a coluna duas vezes com 0,5 mililitros de tampão. Repita a centrifugação a 10.000 vezes G por dois minutos.Coloque a coluna em um novo tubo de coleta de 1,5 mililitro e adicione 30 a 50 microliters de água sem RNase. Depois de centrifugar o tubo a 10.000 vezes G por um minuto, coletar o fluxo através e medir a concentração de RNA. Preparar-se para uma reação de transcrição reversa de 20 microliteres faz um micrograma de RNA total com 10 microliters de tampão de reação, um microliter de transcriptase reversa e água sem RNase.Conduza a reação de transcrição reversa a 37 graus Celsius por uma hora e depois a 95 graus Celsius por cinco minutos, de acordo com o protocolo do fabricante. Em seguida, misture um microliter de cada amostra de cDNA com cinco microliters da mistura mestre contendo corante cibernético e um microliter de cada 200 primer específico nanomolar. Adicione água para um volume total de 20 microliters.Realizar a análise de PCR, de acordo com as recomendações do fabricante. E, em seguida, use o método de tomografia comparativa para determinar a expressão. Nas células BEAS-2B, a viabilidade não mudou consideravelmente quando as células foram tratadas com 4% de CSE por três horas.Uma hora como infecção por pseudomonas também não afetou substancialmente a viabilidade. Finalmente, eles usam a gentamicina para matar pseudomonas no meio da cultura não teve um efeito estatisticamente significativo na viabilidade celular. Medida pelo método da placa de gota, a infecção bacteriana nas células BEAS-2B foi substancialmente aumentada pelo tratamento com ESC.O mesmo aconteceu com o tratamento de ECS do HSAEC. A infecção bacteriana das células BEAS-2B tratadas com CSE também foi avaliada pelo uso de RT-PCR para quantificar a quantidade de rRNA 16S presente, o que indicou um aumento em Pseudomonas aeruginosa. As células BEAS-2B tratadas com CSE e infectadas com Pseudomonas fluorescens Migula foram analisadas por citometria de fluxo em 509 nanômetros.O resultado também indicou que o tratamento de ESC aumenta a infecção bacteriana. Os resultados da microscopia fluorescente mostraram que as bactérias rotuladas por GFP co-localizadas com células BEAS-2B em um experimento de infecção por Pseudomonas fluorescens Migula. As células podem ser expostas à fumaça de cigarro com robôs fumando, o que pode imitar o comportamento humano e tornar possível estudar diretamente os efeitos da fumaça do cigarro nas células epiteliais pulmonares.Esta técnica poderia ser usada para explorar uma fumaça de cigarro em outras torneiras de celular no contexto de uma infecção pulmonar. A abordagem descrita é a base para o desenvolvimento de terapias eficazes contra uma lesão pulmonar dorsal do cigarro e C0PD extra

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Studying Effects of Cigarette Smoke on Pseudomonas Infection in Lung Epithelial Cells

Co-culture Models of Pseudomonas aeruginosa Biofilms Grown on Live Human Airway Cells

Co-culture Models of Pseudomonas aeruginosa Biofilms Grown on Live Human Airway Cells

Co-cultura de Modelos Pseudomonas aeruginosa Biofilmes Grown no Live Células Airway Humanos

Bacterial biofilms have been associated with a number of different human diseases, but biofilm development has generally been studied on non-living ...

Imunologia e Infecção

Pseudomonas aeruginosa and Saccharomyces cerevisiae Biofilm in Flow Cells

Pseudomonas aeruginosa and Saccharomyces cerevisiae Biofilm in Flow Cells

Pseudomonas aeruginosa e Saccharomyces cerevisiae Biofilme em Células de Fluxo

Many microbial cells have the ability to form sessile microbial communities defined as biofilms that have altered physiological and pathological ...

Application of a Mouse Ligated Peyer&#x2019;s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

Application of a Mouse Ligated PeyerÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â€žÂ¢s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

Aplicação de um rato ligado patch Peyer Assay alça intestinal para avaliar absorção pelas células bacterianas M

The inside of our gut is inhabited with enormous number of commensal bacteria. The mucosal surface of the gastrointestinal tract is continuously exposed ...

Use of Artificial Sputum Medium to Test Antibiotic Efficacy Against Pseudomonas aeruginosa in Conditions More Relevant to the Cystic Fibrosis Lung

Use of Artificial Sputum Medium to Test Antibiotic Efficacy Against Pseudomonas aeruginosa in Conditions More Relevant to the Cystic Fibrosis Lung

Uso de meio de escarro Artificial para testar a eficácia antibiótica contra<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; Em condições mais relevantes para o Pulmão Fibrose Cística

There  is growing concern about the relevance of in vitro antimicrobial  susceptibility tests when applied to isolates of P. aeruginosa from  cystic ...

Flow Cytometric Isolation of Primary Murine Type II Alveolar Epithelial Cells for Functional and Molecular Studies

Isolamento de citometria de fluxo de células primárias Murino Tipo II epiteliais alveolares de Estudos funcionais e Molecular

Throughout  the last years, the contribution of alveolar type II epithelial cells (AECII)  to various aspects of immune regulation in the lung has been ...

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

Pseudomonas aeruginosa Lesão Pulmonar Induzida Modelo

In order to study human acute lung injury and pneumonia, it is important to develop animal models to mimic various pathological features of this disease. ...

Analyzing the Effects of Stromal Cells on the Recruitment of Leukocytes from Flow

Análise dos efeitos de células estromais no recrutamento de leucócitos de Fluxo

Stromal cells regulate the recruitment of circulating leukocytes during inflammation through cross-talk with neighboring endothelial cells. Here we ...

Flow Cytometric Analysis of Particle-bound Bet v 1 Allergen in PM10

Citometria de fluxo de partículas ligadas aos Bet v 1 alérgeno no PM10

Flow cytometry is a method widely used to quantify suspended solids such as cells or bacteria in a size range from 0.5 to several tens of micrometers in ...

Visualizing the Effects of Sputum on Biofilm Development Using a Chambered Coverglass Model

Visualizando os Efeitos de escarro no desenvolvimento de biofilmes usando um modelo Chambered lamela

Biofilms consist of groups of bacteria encased in a self-secreted matrix. They play an important role in industrial contamination as well as in the ...