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•
14:00 min
January 29th, 2021
DOI :
10.3791/61164-v
Transcript
酵母是流行的模型生物体,不仅用于基因研究,而且用于从野生类型和突变酵母菌株中提取的蛋白质和其他大分子的生化研究。然而,由于它们坚固的细胞壁,研究人员面临的一个主要挑战是酵母细胞的这种高效解解,而不会损害细胞的含量。分离完整的生物大分子通常是关键的,取决于温度。
在低温下制备提取物可确保细胞内蛋白酶和核酸酶保持非活动状态,从而可靠地分离完整的蛋白质、核酸和其他大分子,以进行足够的分解。各种方法可用于通过酶、化学和物理溶解获得酵母提取物。然而,酶解是昂贵的,因为纯化酶需要消化细胞壁
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Summary
我们描述了一种可靠的方法,使用低温冷冻机制备酵母或其他细胞的整细胞提取物,从而最大限度地减少蛋白质的降解和变性。细胞提取物适用于功能性蛋白质复合物的纯化、蛋白质组分析、共免疫沉淀研究和实验室蛋白修饰的检测。
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