Name: isolation of human ventricular cardiomyocytes from vibratome-cut myocardial slices
Uploaded: 2020-05-10T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Human Ventricular Cardiomyocytes from Vibratome-Cut Myocardial Slices at JoVE.com

Мы хотели бы поблагодарить Андреаса Диндорфера из Вальтер-Брендель-Центр экспериментальной медицины, LMU Мюнхен, за помощь в нарезке протокола. За предоставление образцов миокардной ткани мы хотели бы поблагодарить Газали Минабари и Кристиана Хейма из кафедры кардиохирургии, университетской больницы Эрланген, Хендрика Милтинга из Института Эриха и Ханны Клессманн, Рур-Университета Бохума и Муханнада Алкассара из кафедры детской кардиологии Университетской больницы Эрлангена. За поддержку цитометрии потока мы хотели бы поблагодарить Симона Вёлькла и коллег из центра трансляционных исследований (TRC), Университетской больницы Эрлангена. Мы также хотели бы поблагодарить Лоренца МакКарго и Селин Грёнингер из Института клеточной и молекулярной физиологии Эрлангена за отличную техническую поддержку.
Эта работа была поддержана JK (Немецкий центр сердечно-сосудистых исследований), Междисциплинарный центр клинических исследований (ИЗКФ) в университетской больнице Университета Эрланген-Нюрнберга, и Universit'tsbund Эрланген-Нюрнберг.

Все эксперименты с крысами были одобрены Комитетом по уходу за животными и использованию Mittelfranken, Бавария, Германия. Сбор и использование образцов сердечной ткани человека было одобрено Институциональными советами по обзору Университета Эрлангена-Нюрнберга и Рур-Университета Бохума....

Хотя изоляция живых кардиомиоцитов была создана более 40 лет назад и до сих пор является необходимым условием для многих экспериментальных подходов в кардиологических исследованиях, она остается сложной техникой с непредсказуемыми исходами. Кардиомиоцитная изоляция через перфузию к?...

Семенной метод, который проложил путь к важной идеи в кардиомиоцитов физиологии является изоляция живых желудочков кардиомиоцитов из нетронутыхсердец 1. Изолированные кардиомиоциты могут быть использованы для изучения нормальной клеточной структуры и функции, или последствия экспериментов in vivo; например, для оценки изменений в клеточной электрофизиологии или возбуждении-сокращении связи в животных моделях сердечных заболеваний. Кроме того, изолированные кардиомиоциты могут быть использованы для клеточной культуры, фармакологических вмешательств, передачи генов, тканевой инженерии и многих других применений. Поэтому эффективные методы изоляции кардиомиоцитов имеют основополагающее значение для фундаментальных и трансляционных сердечных исследований.
Кардиомиоциты мелких млекопитающих, таких как грызуны, и от крупных млекопитающих, таких как свиньи или собаки, обычно изолированы коронарной перфузией сердца с растворами, содержащими сырые коллагеназы и/или протеазы. Это было описано как "золотой стандарт" метод для кардиомиоцитов изоляции, в результате чего дает до 70% жизнеспособных клеток2. Подход также был использован с человеческим сердцем, в результате чего приемлемые кардиомиоцитыдает 3,,4,,5. Однако, поскольку коронарная перфузия возможна только в том случае, если имеется нетронутое сердце или большой клин миокарда, содержащий ветку коронарной артерии, большинство образцов сердца человека не подходят для такого подхода из-за их небольшого размера и отсутствия соответствующей сосудов. Таким образом, изоляция человеческих кардиомиоцитов является сложной задачей.
Образцы миокарда человека в основном состоят из кусков тканей переменного размера (примерно 0,5 х 0,5 х 0,5 см до 2 х 2 х 2 см), полученных через эндомиокардабиопсии 6,перегородки миэктомии 7, ВАЗимплантации 8, или от explantedсердца 9. Наиболее распространенные процедуры для изоляции кардиомиоцитов начинаются с заминки ткани с помощью ножниц или скальпеля. Контакты от клетки к клетке затем нарушаются погружением в буферы без кальция или с низким содержанием кальция. За этим следуют несколько шагов пищеварения с сырыми экстрактами ферментов или очищенных ферментов, таких как протеазы (например, трипсин), коллагеназа, гиалуронидаза или эластаза, что приводит к распаду внеклеточной матрицы и освобождению кардиомиоцитов. В заключительном, критическом шаге, физиологическая концентрация кальция должна быть тщательно восстановлена, или повреждение клеток может произойти из-закальция-парадокса 10,,11,,12. Такой подход к изоляции удобен, но обычно неэффективен. Например, одно исследование показало, что почти 1 г ткани миокарда требуется для получения достаточного количества кардиомиоцитов, пригодных для последующихэкспериментов 13. Возможной причиной низкой урожайности является относительно жесткий метод дования тканей. Это может особенно повредить кардиомиоциты, расположенные на краю куска, хотя эти миоциты, скорее всего, будут освобождены от энзиматического пищеварения.
Другим аспектом, который может повлиять на эффективность изоляции и качество клеток, полученных из человеческих образцов, является продолжительность ишемии тканей. В большинстве протоколов в качестве предпосылки для хороших результатов упоминается короткое время транспортировки в лабораторию. Это ограничивает изучение желудочковых кардиомиоцитов человека в лабораториях с близлежащими средствами кардиохирургии. В совокупности эти ограничения препятствуют проверке важных выводов, полученных от моделей животных в кардиомиоцитах человека. Поэтому желательно улучшить протоколы изоляции, которые позволяют высокой урожайности кардиомиоцитов из небольшого количества тканей, предпочтительно без серьезных повреждений после длительного времени транспортировки.
Описано здесь протокол изоляции, основанный на энзиматическом пищеварении тонких ломтиков миокарда ткани, генерируемых вибромой14,15. Мы демонстрируем, что изоляция от ломтиков тканей является гораздо более эффективным, чем от тканей куски фарш с ножницами. Описанный метод не только позволяет высокую урожайность жизнеспособных человеческих кардиомиоцитов из небольшого количества миокардной ткани, но и применим к образцам, хранящимся или транспортируемым в холодном кардиоплегическом растворе до 36 ч.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Chemicals</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2,3-butanedionemonoxime</td>
			<td>Carl Roth</td>
			<td>3494.1</td>
			<td>Purity&#62;99%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin</td>
			<td>Carl Roth</td>
			<td>163.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Carl Roth</td>
			<td>5239.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Creatine monohydrate</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>B250009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Merck</td>
			<td>50-99-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Carl Roth</td>
			<td>9105.3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Carl Roth</td>
			<td>P017.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>Carl Roth</td>
			<td>3904.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamic acid</td>
			<td>Fluka Biochemica</td>
			<td>49450</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low melting-point agarose</td>
			<td>Carl Roth</td>
			<td>6351.5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2 x 6H2O</td>
			<td>Carl Roth</td>
			<td>A537.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M-7506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Carl Roth</td>
			<td>9265.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Carl Roth</td>
			<td>8551.2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taurine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T8691</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dyes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Di-8-ANEPPS</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>D3167</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluo-4 AM</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>F14201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FluoVolt</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>F10488</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enzymes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase CLS type I</td>
			<td>Worthington</td>
			<td>LS004196</td>
			<td>Used for human tissue at 4 mg/mL 
			(activity: 280 U/mg)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase CLS type II</td>
			<td>Worthington</td>
			<td>LS004176</td>
			<td>Used for rat tissue at 1.5 mg/mL 
			(activity 330 U/mg)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protease XIV</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P8038</td>
			<td>Used for rat tissue at 0.5 mg/mL 
			(activity &#8805; 3.5 U/mg)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteinase XXIV</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P5147</td>
			<td>Used for human tissue at 0.5 mg/mL 
			(activity: 7-14 U/mg)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Material</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell analyzer (LSR Fortessa)</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>649225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge tube, 15 mL</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430790</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge tube, 50 mL</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430829</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compact shaker</td>
			<td>Edmund B&#252;hler</td>
			<td>KS-15 B control</td>
			<td>Agitation direction: horizontal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable plastic pasteur-pipettes</td>
			<td>Carl Roth</td>
			<td>EA65.1</td>
			<td>For cell trituration use only pipettes with an inner tip diameter &#8805;2 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>FST</td>
			<td>11271-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heatblock</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BARN88880030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon net filter, 180 &#181;m</td>
			<td>Merck</td>
			<td>NY8H04700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TC Dish 100, Standard</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>83.3902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TC Dish 35, Standard</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>83.3900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TC Dish 60, Standard</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>83.3901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vibratome (VT1200S)</td>
			<td>Leica</td>
			<td>1491200S001</td>
			<td>Includes VibroCheck for infrared-assisted correction of z-deflection</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of human ventricular cardiomyocytes from vibratome-cut myocardial slices

Изоляция желудочковых сердечных миоцитов от сердца животных и человека является фундаментальным методом в кардиологических исследованиях. Кардиомиоциты животных обычно изолируются коронарной перфузией с пищеварительными ферментами. Тем не менее, изоляция человеческих кардиомиоцитов является сложной задачей, потому что человеческие образцы миокарда, как правило, не позволяют коронарной перфузии, и альтернативные протоколы изоляции привести к низкой урожайности жизнеспособных клеток. Кроме того, образцы миокарда человека встречаются редко и доступны только в учреждениях с кардиохирургией на месте. Это препятствует переводу находок с животных на кардиомиоциты человека. Описано здесь надежный протокол, который позволяет эффективно изоляции желудочковых миоцитов от человека и животных миокарда. Для увеличения соотношения поверхности к объему при минимизации повреждения клеток, ломтики миокардной ткани толщиной 300 мкм генерируются из образцов миокарда с вибромом. Ткань ломтиками затем переваривается с протеазы и коллагеназы. Крысиный миокард использовался для установления протокола и количественной оценки урожайности жизнеспособных, терпимых к кальцию миоцитоцитов путем подсчета потоко-цитометрических клеток. Сравнение с широко используемым методом тканей-куска показало значительно более высокие урожаи родообразных кардиомиоцитов (41,5 и 11,9 против 7,89 и 3,6%, р 0,05). Протокол был переведен на неудачный и несовершеный миокард человека, где урожайность была такой же, как в крысином миокарде, и, опять же, заметно выше, чем при методе тканевой кусок (45,0 и 15,0 против 6,87 и 5,23 клетки/мг, p lt; 0,05). Примечательно, что с представленным протоколом можно изолировать разумное количество жизнеспособных кардиомиоцитов человека (9–200 клеток/мг) от минимального количества тканей (lt;50 мг). Таким образом, метод применим к здоровому и отсутствию миокарда как из сердца человека, так и из сердца животных. Кроме того, можно изолировать возбудимые и контрактильные миоциты из образцов тканей человека, хранящихся до 36 ч в холодном кардиоплегическом растворе, что делает метод особенно полезным для лабораторий в учреждениях без кардиохирургии.

Для проверки эффективности изоляции протокол использовался с крысиным миокардом, и полученное в результате этого число жизнеспособных миоцитов сравнивали с числами, полученными в результате изоляции через коронарную перфузию и изоляции от небольших кусков ткани (изоляция куска, <strong...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Human Ventricular Cardiomyocytes from Vibratome-Cut Myocardial Slices at JoVE.com

Isolation of Human Ventricular Cardiomyocytes from Vibratome-Cut Myocardial Slices

Представлен протокол для изоляции человека и животных желудочков кардиомиоцитов от вибрато-вырезать миокарда ломтиками. Высокие урожаи клеток, терпимых к кальцию (до 200 клеток/мг), можно получить из небольшого количества тканей (lt;50 мг). Протокол применим к миокарду, подвергаемому воздействию холодной ишемии на срок до 36 ч.

Изоляция желудочковых кардиомиоцитов человека от ломтиков миокарда вибромы

The isolation of ventricular cardiac myocytes from animal and human hearts is a fundamental method in cardiac research. Animal cardiomyocytes are commonly ...

Этот протокол работает с образцами из сердца человека и животных, даже после нескольких часов времени транспортировки. До 200 миоцитов на миллиграмм можно изолировать от ломтиков ткани, разрезанной вибратомом. Электрофизиологический, структурный и биохимический анализ кардиомиоцитов, помогает обнаружить и лучше понять механизмы сердечных заболеваний.После заполнения 100-миллиметровой ткани культуры блюдо, с 20 миллилитров холодного раствора резки, место образца ткани в культуре блюдо. Держите блюдо культуры на тарелке охлаждается до 4 градусов по Цельсию. Имейте в виду, что образцы живой ткани у животных и особенно людей потенциально заразны.Используйте ножницы или скальпель, чтобы удалить избыток фиброзной ткани и эпикардиального жира, из образца. Для оптимальной обработки вибромы больших образцов тканей используйте скальпель, чтобы вырезать из ткани восемь миллиметров кубиков. Для небольших образцов биопсии в этом нет необходимости.Эпикардиум можно определить по эпикардиального жировому слою. После удаления лишнего жира, поместите блок ткани, в блюдо, с эпикардием лицом вниз. Чтобы подготовиться к встраиванию тканей, варите 400 миллиграммов низкой точки плавления агарозы в десяти миллилитров режущей раствора.Заполните десятимилитрный шприц горячим растворенным гелем агарозы. Печать шприца и поместите его в 37 градусов по Цельсию водяной бане, по крайней мере 15 минут, чтобы агароза эквилибрировать. Используя миппы, переместите образец отделки в чистое 35-миллиметровое блюдо культуры тканей, с эпикардием лицом вниз.Затем удалите излишки жидкости из образца, с помощью стерильного тампона. Защитите образец от движения, удерживая его щипец. И опорожните шприц агарозы поверх него, убедившись, что полностью погрузить образец.Сразу же вы разместили блюдо на льду и дайте агарозе затвердеть в течение 10 минут. Намонтировать неиспользованное лезвие бритвы к держателю лезвия вибромы. Если это возможно, откалибровать вибром, путем регулировки отклонения от лезвия.Используйте скальпель, чтобы выдать блок ткани агарозы, который подходит держатель образца вибромы. Для обеспечения стабильности убедитесь, что ткань по-прежнему достаточно погружена в агарозу. С полями агарозы, по крайней мере восемь миллиметров.Нанесите тонкий слой клея цианоакрилата на держатель образца. И осторожно нажмите блок ткани агарозы, на держатель. Постройте вибромную ванну с раствором для резки.Затем заполните внешний резервуар охлаждения вибромы дробленым льдом, чтобы поддерживать температуру от четырех до шести градусов по Цельсию, на протяжении всего процесса резки. Поместите держатель образца, содержащий блок ткани агарозы, в ванну с вибромой. Используя настройки вибромы, описанные в рукописи, генерируйте 300 микролитров толстых ломтиков.Очень важно создать разделы в параллельном эпикардии, потому что это, как кардиомиоцитов волокна выровнены в желудочковой стенке. В противном случае, будет слишком много повреждений. Используйте стандартный световой микроскоп, чтобы проверить выравнивание кардиомиоцитов и ломтиков ткани.Чтобы не повредить ткани, держите агарозу, а не сам ткань. Кардиомиоцитные волокна, должны быть равномерно выровнены и миоциты, не должны быть заключены контракты. Поместите тепловую пластину на лабораторный шейкер и разогрейте ее до 37 градусов по Цельсию.Запустите лабораторный шейкер при 65 об/мин. Растворите протеиназу в двух миллилитров раствора один. И растворить коллагеназу, в двух миллилитров раствора один.Но не смешивайте протеиназу и коллагеназу. Добавьте хлорид кальция в раствор коллагеназы, для окончательной концентрации, из пяти микромоляров. Инкубировать оба решения при 37 градусах по Цельсию.Используйте типсы для переноса ломтика ткани в чистую 60-миллиметровую культурную тарелку. С пятью миллиметрами предварительно охлажденного раствора для резки. Сохраняя блюдо на льду или холодной тарелке, аккуратно извлекаем агарозу из ткани, используя лезвие или типсы.Для выполнения первоначального мытья тканей ломтиками, поместите чистую 35-миллиметровую ткань культуры блюдо на тепловом лезвии. И заполнить его, с двумя миллиметрами предварительно разогретый раствор один. Перенесите один или два ломтика ткани в приготовленное блюдо.Затем используйте одномиллиметровую пипетку для мытья ступеней. После мытья ломтиков, удалить раствор один из блюда и добавить два миллилитров раствора протеиназы. Инкубировать ломтики в течение 12 минут на тепловом лезвии, со шейкером при 65 об/мин.Вымойте ткани ломтиками в два раза больше, с двумя миллилитров предварительно разогретого раствора один. Затем удалите раствор один из блюда и добавьте два миллилитров раствора коллагеназы. Инкубировать ломтики, по крайней мере 30 минут на тепловом лезвии, с тряской при 65 об/мин.После 15 минут инкубации, проверьте бесплатно отдельных миоцитов, изучая блюдо под легким микроскопом. Продолжайте проверять каждые пять минут, пока не будут видны отдельные миоциты. Затем, alt пищеварения путем мытья ломтиков в два раза, с двумя миллилитров предварительно разогретого раствора два.И пополнить блюдо, с двумя миллилитров раствора два. Аккуратно потяните волокна ткани ломтиком друг от друга, используя тонкие миппы. Продолжайте работать осторожно, чтобы избежать повреждения кардиомиоцитов.И пипетка несколько раз, с одним использованием прошлом ваш пипетка. Затем подтвердите, что родообразные кардиомиоциты отделились, изучая блюдо, под легким микроскопом. Поместите блюдо обратно на тепловую плиту при температуре 37 градусов по Цельсию и агитировать, встряхивая.Добавляя 10 миллимоляров и 100 миллимоляров растворов хлорида кальция, медленно увеличивать концентрацию кальция в подвеске ткани с пяти микромоляров до 1,5 миллимолара. Когда увеличение кальция завершено, используйте типсы, чтобы удалить все оставшиеся непереваренные куски ткани. Во-первых, остановить агитацию подвески.Затем, используя 1000 микролитровую пипетку, медленно удалите 1/3 раствора из верхней части подвески. Избегайте аспирации кардиомиоцитов. Затем добавьте 700 микролитров раствора три, в клетки.После 10 минут агитации повторите эти шаги мытья. Перенесите подвеску в 15-миллилитровую центрифугу. И позволит кардиомиоцитов осадков при комнатной температуре, в течение как минимум 10 минут и максимум 30 минут.Удалите супернатант полностью. И повторное разрешение гранулы в модифицированном растворе тирода или желаемом буфере экспериментов. Используя световой микроскоп, проявите качество клеток.От 30 до 50% кардиомиоцитов должны быть стержнем формы, гладкой без мембранных blebs. И дисплей, четкие перекрестные полосы. Для проверки эффективности изоляции протокол был применен к крысиной миокарду.И по сравнению с изоляцией через коронарную перфузию и изоляцию, от небольших кусков ткани. При использовании протокола наблюдалась более низкая доля клеток в форме стержня, затем после изоляции перфузией. Но общее число по-прежнему высока.В отличие от этого, изоляция от тканей куски, дали меньше стержнеобразных клеток. Цитометрия потока, была использована для сравнения результатов количественно. Изоляция кардиомиоцитов от ломтиков тканей, не достигает доходности, полученной коронарной перфузией.Но обеспечивает, значительно более высокие урожаи, чем изоляция миоцитов, от тканей куски. Затем протокол был применен к миокарду человека. Изоляция от ломтиков миокарда, дали Хайд номера и большая доля стержня формы человека миоцитов.И лишь небольшая часть округлых кардиомиоцитов. Изоляция от ломтиков миокарда, привела к поразительно большему количеству миоцитов в форме стержня, чем изоляция от кусков тканей. Фотометрическая квантификация подтвердила значительно более высокую жизнеспособность миоцитов после изоляции от ломтиков миокарда.Клетки человека, изолированные с описанным протоколом, могут подвергаться структурному анализу. Альфа актинин окрашивания, показали плотный регулярный шаблон линии и средняя длина саркомера 1,92 микрометра, в отдыха кардиомиоцитов. LTCC и RyR окрашивания, показали четкое скопление совместно локализованных вблизи клеточной мембраны и Т трубочек.Изолированные кардиомиоциты возбудимы и могут быть использованы для исследований клеточной электрофизиологии или возбуждения сокращения связи. Потенциальное действие формы и продолжительности, был в диапазоне сообщили другие, для желудочковых кардиомиоцитов, от отказа человеческого сердца. Переходные кальция, записанные сканированием вокальной линии Хана, показали четкий подъем после стимуляции.И, приемлемый сигнал к соотношению шума. Кардиомиоцитов сокращения на сокращение можно увидеть от отклонения нижней границы клеток. Из-за большого количества изоляторов кардиомиоцитов, полученных по этому протоколу, возможна клеточная культура.Это может позволить для передачи генов, фармакологического тестирования и тканевой инженерии человека кардиомиоцитов. Важным приложением является проверка результатов, полученных с животных моделей в клетках человека. Сердечная недостаточность является клиническим синдромом с очень ограниченными терапевтическими возможностями.Улучшенные методы изоляции кардиомиоцитов помогут определить клеточные цели для диагностики и будущих методов лечения.

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation of Stem Cells from Human Pancreatic Cancer Xenografts

Выделение стволовых клеток из прав ксенотрансплантаты рака поджелудочной железы

Cancer stem cells (CSCs) have been identified in a growing number of malignancies and are functionally defined by their ability to undergo self-renewal ...

Efficient Derivation of Human Cardiac Precursors and Cardiomyocytes from Pluripotent Human Embryonic Stem Cells with Small Molecule Induction

Эффективное Вывод прав Сердечная Прекурсоры и кардиомиоциты из плюрипотентных эмбриональных стволовых клеток человека с малыми Индукционная Молекула

To date, the lack of a suitable human cardiac cell source has been the major setback in regenerating the human myocardium, either by cell-based ...

Isolation and Kv Channel Recordings in Murine Atrial and Ventricular Cardiomyocytes

Выделение и записи Kv канала в мышиной предсердий и желудочков кардиомиоцитов

KCNE genes encode for a small family of Kv channel ancillary subunits that form heteromeric complexes with Kv channel alpha subunits to modify their ...

Isolation and Culture of Neonatal Mouse Cardiomyocytes

Выделение и Культура неонатологическую мыши кардиомиоцитов

Cultured neonatal cardiomyocytes have long been used to study  myofibrillogenesis and myofibrillar functions. Cultured cardiomyocytes allow  for easy ...

Generation of Human Cardiomyocytes: A Differentiation Protocol from Feeder-free Human Induced Pluripotent Stem Cells

Поколению прав кардиомиоцитов: Дифференциация Протокол от Ф-свободной человеческой индуцированных плюрипотентных стволовых клеток

In order to investigate the events driving heart development and to determine the molecular mechanisms leading to myocardial diseases in humans, it is ...

Isolation of Embryonic Ventricular Endothelial Cells

Выделение эмбриональных клетках эндотелия желудочков

Cell culture has greatly enhanced our ability to assess individual populations of cells under myriad culture conditions. While immortalized cell lines ...

Isolation and Physiological Analysis of Mouse Cardiomyocytes

Выделение и физиологический анализ мыши кардиомиоцитов

Cardiomyocytes, the workhorse cell of the heart, contain exquisitely organized cytoskeletal and contractile elements that generate the contractile force ...

Isolation of Small Noncoding RNAs from Human Serum

Выделение малых некодирующих РНК из сыворотки крови человека

The analysis of RNA and its expression is a common feature in many laboratories. Of significance is the emergence of small RNAs like microRNAs, which are ...

Isolation of Myofibroblasts from Mouse and Human Esophagus

Выделение Миофибробласты из мышиных и человеческих пищевода

Murine and human esophageal myofibroblasts are generated via enzymatic digestion. Neonate (8-12 day old) murine esophagus is harvested, minced, washed, ...

Isolation, Culture and Transduction of Adult Mouse Cardiomyocytes

Изоляция, культуры и трансдукция взрослых мышей кардиомиоцитов

Cultured cardiomyocytes can be used to study cardiomyocyte biology using techniques that are complementary to in vivo systems. For example, the purity and ...