Name: modeling age-associated neurodegenerative diseases in caenorhabditis elegans
Uploaded: 2020-08-15T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Modeling Age-Associated Neurodegenerative Diseases in Caenorhabditis elegans at JoVE.com

Wir danken Chaniotakis M. und Kounakis K. für die Videoaufnahme und -bearbeitung. K.P. wird durch ein Stipendium der Hellenischen Stiftung für Forschung und Innovation (HFRI) und des Generalsekretariats für Forschung und Technologie (GSRT) finanziert. N.T. wird durch Zuschüsse des Europäischen Forschungsrats (ERC – GA695190 – MANNA), der Rahmenprogramme der Europäischen Kommission und des griechischen Bildungsministeriums finanziert.

1. Nekrotische Zelltod-induziert durch hyperaktive Ionenkanäle
HINWEIS: Gain-of-Funktionsmutationen in der Genfamilie von Degenerinen, einschließlich mec-4 und deg-3 unter anderem, führt zur Erzeugung von hyperaktiven Ionenkanälen, die den nekrotischen Zelltod von sechs Für die Mechanosensation bei Würmern erforderlichen Mürrezeptorneuronen auslösen3. Nekrose, die durch die aberrante Stimulation von Degenerinen induziert wird, weist mehrere mecha...

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	<li>Nikoletopoulou, V., Tavernarakis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Necrotic+cell+death+in+Caenorhabditis+elegans.">Necrotic cell death in Caenorhabditis elegans.</a> Methods in Enzymology. 545, 127-155 (2014).</li><li>Syntichaki, P., Tavernarakis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+biochemistry+of+neuronal+necrosis:+rogue+biology.">The biochemistry of neuronal necrosis: rogue biology.</a> Nature Reviews Neuroscience. 4 (8), 672-684 (2003).</li><li>Syntichaki, P., Tavernarakis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+models+of+mechanotransduction:+the+nematode+Caenorhabditis+elegans.">Genetic models of mechanotransduction: the nematode Caenorhabditis elegans.</a> Physiological Reviews. 84 (4), 1097-1153 (2004).</li><li>Berkowitz, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+a+C.+elegans+dopamine+neuron+degeneration+assay+for+the+validation+of+potential+Parkinson's+disease+genes.">Application of a C. elegans dopamine neuron degeneration assay for the validation of potential Parkinson's disease genes.</a> Journal of Visualized Experiments. (17), (2008).</li><li>Brignull, H. R., Moore, F. E., Tang, S. J., Morimoto, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polyglutamine+proteins+at+the+pathogenic+threshold+display+neuron-specific+aggregation+in+a+pan-neuronal+Caenorhabditis+elegans+model.">Polyglutamine proteins at the pathogenic threshold display neuron-specific aggregation in a pan-neuronal Caenorhabditis elegans model.</a> Journal of Neuroscience. 26 (29), 7597-7606 (2006).</li><li>Gidalevitz, T., Ben-Zvi, A., Ho, K. H., Brignull, H. R., Morimoto, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progressive+disruption+of+cellular+protein+folding+in+models+of+polyglutamine+diseases.">Progressive disruption of cellular protein folding in models of polyglutamine diseases.</a> Science. 311 (5766), 1471-1474 (2006).</li><li>Gitler, A. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Parkinson's+disease+protein+alpha-synuclein+disrupts+cellular+Rab+homeostasis.">The Parkinson's disease protein alpha-synuclein disrupts cellular Rab homeostasis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (1), 145-150 (2008).</li><li>Klaips, C. L., Jayaraj, G. G., Hartl, F. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathways+of+cellular+proteostasis+in+aging+and+disease.">Pathways of cellular proteostasis in aging and disease.</a> Journal of Cell Biology. 217 (1), 51-63 (2018).</li><li>Labbadia, J., Morimoto, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+biology+of+proteostasis+in+aging+and+disease.">The biology of proteostasis in aging and disease.</a> Annual Review of Biochemistry. 84, 435-464 (2015).</li><li>Tucci, M. L., Harrington, A. J., Caldwell, G. A., Caldwell, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+dopamine+neuron+degeneration+in+Caenorhabditis+elegans.">Modeling dopamine neuron degeneration in Caenorhabditis elegans.</a> Methods in Molecular Biology. 793, 129-148 (2011).</li><li>Kourtis, N., Nikoletopoulou, V., Tavernarakis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small+heat-shock+proteins+protect+from+heat-stroke-associated+neurodegeneration.">Small heat-shock proteins protect from heat-stroke-associated neurodegeneration.</a> Nature. 490 (7419), 213-218 (2012).</li><li>Kourtis, N., Tavernarakis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small+heat+shock+proteins+and+neurodegeneration:+recent+developments.">Small heat shock proteins and neurodegeneration: recent developments.</a> BioMolecular Concepts. 9 (1), 94-102 (2018).</li><li>Kumsta, C., Chang, J. T., Schmalz, J., Hansen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hormetic+heat+stress+and+HSF-1+induce+autophagy+to+improve+survival+and+proteostasis+in+C.+elegans.">Hormetic heat stress and HSF-1 induce autophagy to improve survival and proteostasis in C. elegans.</a> Nature Communications. 8, 14337 (2017).</li><li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiji:+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis.">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li><li>Palikaras, K., Lionaki, E., Tavernarakis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coordination+of+mitophagy+and+mitochondrial+biogenesis+during+ageing+in+C.+elegans.">Coordination of mitophagy and mitochondrial biogenesis during ageing in C. elegans.</a> Nature. 521 (7553), 525-528 (2015).</li><li>Samara, C., Syntichaki, P., Tavernarakis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autophagy+is+required+for+necrotic+cell+death+in+Caenorhabditis+elegans.">Autophagy is required for necrotic cell death in Caenorhabditis elegans.</a> Cell Death and Differentiation. 15 (1), 105-112 (2008).</li></ol>

Hier stellen wir allgemein zugängliche Methoden für Wachstum, Synchronisation und mikroskopische Untersuchung einiger vielseitiger C. elegans-Modelle zur Untersuchung der altersabhängigen Neurodegeneration vor und beschreiben sie. Insbesondere bewerten und sezieren wir die zellulären und molekularen Grundlagen des altersbedingten neuronalen Abbaus unter Verwendung von hyperaktivierter Ionenkanal-induzierter Nekrose und Protein-Aggregat-induzierter Neurotoxizität1,<sup clas...

In den letzten zwei Jahrzehnten wurde C. elegans weithin als Modellorganismus verwendet, um die molekularen Mechanismen des nekrotischen Zellsterbens zu untersuchen. C. elegans bietet ein außergewöhnlich gut charakterisiertes und kartiertes Nervensystem, eine transparente Körperstruktur und ein vielfältiges Repertoire an genetischen und bildgebenden Methoden zur Überwachung der in vivo zellulären Funktion und des Überlebens während des gesamten Alterns. So wurden bereits mehrere genetische Modelle von C. elegans der Neurodegeneration entwickelt, um die neuronale Lebensfähigkeit zu bewerten. Insbesondere sind gut beschriebene und verwendete Nematodenmodelle die hyperaktive Ionenkanal-induzierte Nekrose1,2,3 und der Zelltod, ausgelöst durch erhöhte Proteinaggregation4,5,6,7,8,9,10 und Hitzehub11,12, unter anderem.
Die kurzfristige Exposition gegenüber subtödlichen Temperaturen führte zu einer Resistenz gegen den nekrotischen Zelltod, ausgelöst durch einen anschließenden Hitzestress sowohl bei Nematoden als auch bei Säugetierneuronen11. Interessanterweise schützt die tägliche Vorkonditionierung von Nematoden bei einer milden erhöhten Temperatur vor Neurodegeneration, die durch verschiedene Reize wie ionisches Ungleichgewicht (z.B. mec-4(u231) und/oder deg-3(u662)) und Proteinaggregation (z.B. Synuclein und PolyQ40)11,13verursacht wird.
Hier beschreiben wir vielseitige Methoden, mit denen C. elegans verwendet wird, um die altersabhängige Neurodegeneration in etablierten Modellen menschlicher Krankheiten zu überwachen und zu bewerten, wie z. B. exzitotoxizitätsgesteuerter Zelltod, Parkinson und Huntington. Darüber hinaus unterstreichen wir die neuroprotektive Rolle der Wärmevorkonditionierung in mehreren Modellen der Neurodegeneration. Eine Kombination dieser Techniken zusammen mit genetischen und/oder pharmakologischen Screens wird zur Identifizierung und Charakterisierung neuartiger Zelltodmodulatoren mit potenziellem therapeutischem Interesse führen.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>5040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Biozym</td>
			<td>8,40,004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AM101: rmsIs110[prgef-1Q40::YFP]</td>
			<td>Caenorhabditis Genetics Center (CGC)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride dehydrate (CaCl2&#8729;2H2O)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C5080</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cholesterol</td>
			<td>SERVA Electrophoresis</td>
			<td>17101.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>deg-3(u662)V or deg-3(d)</td>
			<td>Caenorhabditis Genetics Center (CGC)</td>
			<td></td>
			<td>Maintain animals at 20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DIC microscope (Nomarsky)</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>Axio Vert A1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting stereomicroscope</td>
			<td>Nikon Corporation</td>
			<td></td>
			<td>SMZ645</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epifluorescence microscope</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td>EVOS Cell Imaging Systems</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Escherichia coli OP50 strain</td>
			<td>Caenorhabditis Genetics Center (CGC)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Greiner Petri dishes (60 mm x 15 mm)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5237</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>image analysis software</td>
			<td>Fiji</td>
			<td></td>
			<td>https://fiji.sc</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>1,37,010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K2HPO4</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>1,04,873</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium sulfate (MgSO4)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M7506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mec-4(u231)X or mec-4(d)</td>
			<td>Caenorhabditis Genetics Center (CGC)</td>
			<td></td>
			<td>Maintain animals at 20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope slides (75 mm x 25 mm x 1 mm)</td>
			<td>Marienfeld, Lauda-Koenigshofen</td>
			<td>10 006 12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope cover glass (18 mm x 18 mm)</td>
			<td>Marienfeld, Lauda-Koenigshofen</td>
			<td>01 010 30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsoft Office 2011 Excel software package</td>
			<td>Microsoft Corporation, Redmond, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na2HPO4</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>1,06,586</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nematode growth medium (NGM) agar plates</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nystatin stock solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N3503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peptone</td>
			<td>BD, Bacto</td>
			<td>211677</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride (NaCl)</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>1,06,40,41,000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard equipment for preparing agar plates (autoclave, Petri dishes, etc.)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard equipment for maintaining worms (platinum wire pick, incubators, etc.)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>statistical analysis software</td>
			<td>GraphPad Software Inc., San Diego, USA</td>
			<td></td>
			<td>GraphPad Prism software package</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptomycin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S6501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tetramisole hydrochloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>L9756</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UA44: Is[baIn1; pdat-1&#945;-syn, pdat-1GFP]</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Upon request: G. Caldwell (University of Alabama, Tuscaloosa AL)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modeling age-associated neurodegenerative diseases in caenorhabditis elegans

Die Bekämpfung menschlicher neurodegenerativer Pathologien und die Bewältigung ihrer allgegenwärtigen sozioökonomischen Auswirkungen werden zu einer globalen Priorität. Ungeachtet ihrer nachteiligen Auswirkungen auf die Lebensqualität des Menschen und das Gesundheitssystem ist die Mehrheit der neurodegenerativen Erkrankungen des Menschen nach wie vor unheilbar und nicht vermeidbar. Daher wird die Entwicklung neuartiger therapeutischer Interventionen gegen solche Krankheiten zu einer dringenden Dringlichkeit. Die altersassoziierte Verschlechterung der neuronalen Schaltkreise und -funktion wird in so unterschiedlichen Organismen wie dem niederschwelligen Wurm Caenorhabditis elegans und dem Menschen evolutionär konserviert, was Ähnlichkeiten in den zugrunde liegenden zellulären und molekularen Mechanismen bedeutet. C. elegans ist ein hochformbares genetisches Modell, das ein gut charakterisiertes Nervensystem, Körpertransparenz und ein vielfältiges Repertoire an genetischen und bildgebenden Verfahren zur Beurteilung der neuronalen Aktivität und Qualitätskontrolle während des Alterns bietet. Hier führen wir Methoden mit einigen vielseitigen Nematodenmodellen ein, einschließlich hyperaktivierter Ionenkanal-induzierter Nekrose (z. B. deg-3(d) und mec-4(d)) und Proteinaggregat (z. B. Syunclein und Polyglutamat)-induzierte Neurotoxizität, um die zelluläre und molekulare Untermauerung altersbedingter Neuronenzugung zu überwachen und zu sezieren. Eine Kombination dieser Tier-Neurodegeneration-Modelle, zusammen mit genetischen und pharmakologischen Screens für Zelltodmodulatoren, wird zu einem beispiellosen Verständnis des altersbedingten Abbaus der neuronalen Funktion führen und kritische Einblicke mit breiter Relevanz für die menschliche Gesundheit und Lebensqualität liefern.

Nekrotische Zelltod-induziert durch hyperaktive Ionenkanäle Mit den hier vorgestellten Verfahren wurden mec-4(u231) und deg-3u662) mutierte Embryonen entweder 25 min bei 34 °C inkubiert oder bei der Standardtemperatur von 20 °C gehalten. Beim Schlüpfen wurde die Anzahl der neuronalen Zellleichen im L1-Larvenstadium beider Gruppen bestimmt. Nekrotische Zelltod wird in Nematoden, die aus Hitzeschock vorkonditionierte Eier geschlüpft vermindert(Abbildung 1</str...

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Modeling Age-Associated Neurodegenerative Diseases in Caenorhabditis elegans

Hier führen wir weithin zugängliche Methoden mit einigen vielseitigen Nematodenmodellen ein, einschließlich hyperaktivierter Ionenkanal-induzierter Nekrose und Protein-Aggregat-induzierter Neurotoxizität, um die zellulären und molekularen Grundlagen altersassoziierter neurodegenerativer Erkrankungen zu überwachen und zu sezieren.

Modellierung altersassoziierter neurodegenerativer Erkrankungen bei Caenorhabditis elegans

Battling human neurodegenerative pathologies and managing their pervasive socioeconomic impact is becoming a global priority. Notwithstanding their ...

In den letzten Jahrzehnten wurde die Lebensspanne der Menschen aufgrund der Verbesserung des Lebensstandards und der Fortschritte in der medizinischen Wissenschaft verlängert. Das Alter ist der größte Risikofaktor für viele lebensbedrohliche Krankheiten, einschließlich neurodegenerativer Erkrankungen wie Alzheimer, Parkinson und Huntington. Hier zeigen wir Methoden unter Verwendung einiger vielseitiger neuer Methodenmodelle, einschließlich hyperaktiver Ionenkanal-induzierter Nekrose und Proteinaggregate, die Neurotoxizität induzieren, um den zellulären molekularen Mechanismus der neuronalen Degeneration zu überwachen und zu sezieren.Peak gesunde Larven aus machen vier und machen drei Newton Nematoden auf Nematoden Wachstumsmedienplatte, Siebung mit E.Coli mit sezierenden Stereomikroskop. Platzieren Sie zehn und vier Nematoden, parasitäre Enzymplatte und wachsen Sie sie bei der Standardtemperatur von 20 Grad Celsius. Fünf Tage später die Platte mit 1 ml und 9 Puffer waschen und die Tiere in 1,5 ml Rohr sammeln.Zentrifugieren Sie 30 Sekunden lang bei 30.000 g und entfernen Sie den Überstand. Fügen Sie 0,5 ml Beschichtungslösung hinzu. Die Beschichtungslösung wird bei Raumtemperatur gelagert.Wirbel und überwachen regelmäßig, bis sie sich alle aufgelöst haben. Vermeiden Sie die Beschichtung für Zeiträume von mehr als fünf Minuten. Zentrifugieren Sie 30 Sekunden lang bei 10.000 g und entfernen Sie den Überstand.Zweimal die Palette mit 1 ml und neun Puffern waschen. Zentrifugieren Sie 30 Sekunden lang bei 10000 g und entfernen Sie den Überstand. Nach dem Waschen die Eier in 200 MikroliterM9-Puffer wieder aussetzen und 25 Minuten bei 34 Grad Celsius in einem Wasserbad bebrüten.Pflegen Sie eine separate Gruppe von Eiern bei 20 Grad Celsius. Pipette 100 Mikroliter mit Kontroll- oder Hitzeschock behandelten Eiern und legen Sie sie auf ungesättigte 10 GN Platte. Jeder Teller enthält mindestens 100 bis 200 Eier.Die Eier bei 20 Grad Celsius bis zum Schlüpfen bebrüten. Verwenden sie und M9 Puffer, um Platten zu waschen und L1 Leben und Nematoden in 1,5 ml Tube zu sammeln. Zentrifuge bei 10.000 g für 30 Sekunden.Entfernen Sie den Überstand und behalten Sie die Palette bei. Fügen Sie 100 Mikroliter 20 Millimolar M9 LevangialPuffer hinzu, um die Nematoden zu anästhesieren. Pipette 10 Mikroliter M9-Levangialpuffer, die L1-Uhr enthalten und in 2%agar-ls Punkt setzen Sie sanft einen Deckelrutsch auf der Oberseite der Probe.Beobachten Sie die Uhr mit der DIC-Mikroskopie. Scanning Degeneration der 630 Rezeptorneuronen durch Zählen von Zellen mit einem charakteristischen virtuellen unterstützten Aussehen dieses Nematoden. Synchronisieren Sie Nematoden, indem Sie 15 bis 20 L4-Larven von jeweils einem Stamm auf zuerst Bakterien C und dann GENETISCH veränderte Platten auswählen und übertragen.Inkubieren und lassen Sie die Nematoden bei der Standardtemperatur von 20 Grad Celsius wachsen. Führen Sie die tägliche Vorkonditionierung für 30 Minuten durch Übertragung der Platten in einem Inkubator auf 34 Grad Celsius. Dann kehren Sie die vorkonditionierten Nematoden bei der Standardtemperatur von 20 Grad Celsius zurück.Fügen Sie 10 Mikroliter von 20 Millimolar M9 Levangial Puffer Tropfen in der Mitte der Agar-ls-Spot. Wählen Sie die jeweiligen transgenen Nematoden aus und übertragen Sie sie in M9-Lewangialtropfen. Platzieren Sie 20 bis 30 Nematoden pro Tropfen.Legen Sie den Deckel vorsichtig auf die Oberseite der Probe. Versiegeln Sie den Deckelschlupf mit Nagellack, um die Feuchtigkeit während des gesamten Bildgebungsprozesses zu erhalten. Mit einem Fluoreszenzmikroskop in Kombination mit einer Kamera können Sie Ihre Studienbilder des Kopfbereichs mit 20 x Vergrößerung erkennen und erfassen.Überwachen Sie sieben Tage transgene Nematoden auf den tod von dopaminergen neuronalen Zellen. Messen Sie die neuronalen Policul-Aggregate im Kopfbereich von vier Tage alten transgenen Tieren, die 240 Fusionen mit lebenden Menschen ausdrücken. Nekrotische Zelltod induziert ehyperaktive Ionenkanäle ist die wichtigste in Nematoden, die ehemalige Hitzeschock Vorbedingung Eier hat.Hitzeschock-Voraussetzung, die eine Vorhersage gegen Alpha-Synuclein-induzierten Zelltod bei sieben Tage alten erwachsenen Hermaphrodit fördert und Q40-Proteinaggregate im Kopfbereich von vier Tage alten Erwachsenen verringert. Das Altern ist eine Folge von Schäden, die durch die allmähliche Degeneration der Zell- und Gewebehomöostase verursacht werden. Daher ist das Verständnis der Manipulation des altersbedingten neuronalen Abbaus oberste Prioritäten.Die vorgestellten Techniken in Kombination mit genetischen und pharmakologischen Untersuchungen könnten zu einer Meldung normaler Zelltodmodulatoren mit potenziellem therapeutischem Interesse führen.

Research

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