Name: assessment of de novo protein synthesis rates in caenorhabditis elegans
Uploaded: 2020-09-12T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessment of de novo Protein Synthesis Rates in Caenorhabditis elegans at JoVE.com

Vi takker Chaniotakis M. og Kounakis K. for videooptagelse og redigering. K.P. finansieres af et tilskud fra Den Hellenske Fond for Forskning og Innovation (HFRI) og Generalsekretariatet for Forskning og Teknologi (GSRT). N.T. finansieres af tilskud fra Det Europæiske Forskningsråd (EFR – GA695190 – MANNA), Europa-Kommissionens rammeprogrammer og det græske undervisningsministerium.

BEMÆRK: Både transskriptionelle og translationelle fusioner til fluorophores kan bruges til at evaluere de novo protein oversættelse i flere væv. Proteinsyntese satser kan vurderes for flere protein familier, der lokaliseres i forskellige cellulære rum, herunder cytoplasma, mitokondrier og kernen7. Følgende stammer bruges til at overvåge globale og neuronal proteinsyntese satser, N2; Ex[pife-2GFP, pRF4], ife-2(ok306); Ex[pife-2</s...

<ol>
	<li>Syntichaki, P., Troulinaki, K., Tavernarakis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=eIF4E+function+in+somatic+cells+modulates+ageing+in+Caenorhabditis+elegans.">eIF4E function in somatic cells modulates ageing in Caenorhabditis elegans.</a> Nature. 445 (7130), 922-926 (2007).</li><li>Charmpilas, N., Daskalaki, I., Papandreou, M. E., Tavernarakis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+synthesis+as+an+integral+quality+control+mechanism+during+ageing.">Protein synthesis as an integral quality control mechanism during ageing.</a> Ageing Research Reviews. 23, 75-89 (2015).</li><li>Li, G. W., Burkhardt, D., Gross, C., Weissman, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+absolute+protein+synthesis+rates+reveals+principles+underlying+allocation+of+cellular+resources.">Quantifying absolute protein synthesis rates reveals principles underlying allocation of cellular resources.</a> Cell. 157 (3), 624-635 (2014).</li><li>Dermit, M., Dodel, M., Mardakheh, F. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+monitoring+and+measurement+of+protein+translation+in+time+and+space.">Methods for monitoring and measurement of protein translation in time and space.</a> Molecular Biosystems. 13 (12), 2477-2488 (2017).</li><li>Iwasaki, S., Ingolia, N. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Growing+Toolbox+for+Protein+Synthesis+Studies.">The Growing Toolbox for Protein Synthesis Studies.</a> Trends in Biochemical Sciences. 42 (8), 612-624 (2017).</li><li>Corsi, A. K., Wightman, B., Chalfie, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Transparent+Window+into+Biology:+A+Primer+on+Caenorhabditis+elegans.">A Transparent Window into Biology: A Primer on Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 200 (2), 387-407 (2015).</li><li>Kourtis, N., Tavernarakis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-specific+monitoring+of+protein+synthesis+in+vivo.">Cell-specific monitoring of protein synthesis in vivo.</a> PLoS One. 4 (2), 4547 (2009).</li><li>Parker, R., Sheth, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=P+bodies+and+the+control+of+mRNA+translation+and+degradation.">P bodies and the control of mRNA translation and degradation.</a> Molecular Cell. 25 (5), 635-646 (2007).</li><li>Rieckher, M., Markaki, M., Princz, A., Schumacher, B., Tavernarakis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintenance+of+Proteostasis+by+P+Body-Mediated+Regulation+of+eIF4E+Availability+during+Aging+in+Caenorhabditis+elegans.">Maintenance of Proteostasis by P Body-Mediated Regulation of eIF4E Availability during Aging in Caenorhabditis elegans.</a> Cell Reports. 25 (1), 199-211 (2018).</li><li>Reits, E. A., Neefjes, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+fixed+to+FRAP:+measuring+protein+mobility+and+activity+in+living+cells.">From fixed to FRAP: measuring protein mobility and activity in living cells.</a> Nature Cell Biology. 3 (6), 145-147 (2001).</li><li>Keith, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Graded+Proteasome+Dysfunction+in+Caenorhabditis+elegans+Activates+an+Adaptive+Response+Involving+the+Conserved+SKN-1+and+ELT-2+Transcription+Factors+and+the+Autophagy-Lysosome+Pathway.">Graded Proteasome Dysfunction in Caenorhabditis elegans Activates an Adaptive Response Involving the Conserved SKN-1 and ELT-2 Transcription Factors and the Autophagy-Lysosome Pathway.</a> PLoS Genetics. 12 (2), 1005823 (2016).</li><li>Kumsta, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+autophagy+receptor+p62/SQST-1+promotes+proteostasis+and+longevity+in+C.+elegans+by+inducing+autophagy.">The autophagy receptor p62/SQST-1 promotes proteostasis and longevity in C. elegans by inducing autophagy.</a> Nature Communications. 10 (1), 5648 (2019).</li><li>Gregersen, N., Bolund, L., Bross, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+misfolding,+aggregation,+and+degradation+in+disease.">Protein misfolding, aggregation, and degradation in disease.</a> Molecular Biotechnology. 31 (2), 141-150 (2005).</li></ol>

Proteinsyntesemodulering er afgørende for organisme homøostase. Under aldringen forstyrres såvel globale som specifikke proteinsyntese. Nylige undersøgelser viser, at protein oversættelse balance direkte kontrollerer senescens og aldring er ikke blot et biprodukt af aldringsprocessen. Især de centrale komponenter i oversættelsesmaskineriet såsom eukaryote indledningsfaktor 4E (eIF4E), som letter mRNA-udjævning under oversættelsesiniten, og dermed hastigheden af cap-afhængig proteinoversættelse, fremkalder oxi...

Proteinsyntese og nedbrydning er afgørende for organisme homøostase. En lang række aldersrelaterede sygdomme er ansporet af defekt proteinproduktion1,2. For at måle globale proteinoversættelsesrater er der biokemiske teknikker såsom ribosomal profilering, som indebærer dyb sekventering af ribosombeskyttede mRNA-fragmenter til overvågning af udtryk samt ny proteinsyntese3. Denne metode, ud over at være en indirekte udlæsning af oversættelsesrater, som øget RNA forening til ribosomer betyder ikke nødvendigvis øget oversættelse, har tekniske ulemper, såsom høje omkostninger og et krav om en stor mængde udgangsmateriale. På den anden side giver proteomicsbaserede metoder mulighed for direkte proteinkvificering ved impulsprofilering efterfulgt af massespektrometrianalyse4,5. Dette er imidlertid en semi-kvantitativ tilgang med begrænset tidsmæssig opløsning, der ikke let kan anvendes in vivo. Desuden kan mærkningen af proteinet fordeles ulige i det dyr/væv, der er af interesse. Det er vigtigt, at begge disse metoder kan skjule vævsspecifikke eller cellespecifikke variationer i proteinoversættelsesrater i henholdsvis hele dyr eller væv.
Caenorhabditis elegans er en nem at bruge model organisme, der kan dyrkes i stort tal6. Derudover giver dens genetiske amenability og gennemsigtighed mulighed for levende billeddannelse in vivo. Denne protokol beskriver metoden til påvisning af proteinsyntese ved hjælp af fluorescensgenvinding efter fotobleaching (FRAP). Vi udnytter det transgene udtryk for fluorescerende proteiner, enten i hele organismen eller i specifikke væv/celler. Transgene dyr kan enten udtrykke GFP ved hjælp af promotoren for et gen, som er bredt/globalt udtrykt, eller en vævsspecifik promotor til at målrette mod specifikke celletyper. Denne teknik kan udvides til en specifik promotor til at undersøge proteinsyntese satser for et bestemt protein.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>5040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Biozym</td>
			<td>8,40,004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose pads 2%</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride dehydrate (CaCl2&#8729;2H2O)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C5080</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cholesterol</td>
			<td>SERVA Electrophoresis</td>
			<td>17101.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cycloheximide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C-7698</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting stereomicroscope</td>
			<td>Nikon Corporation</td>
			<td></td>
			<td>SMZ645</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>edc-3(ok1427);Ex[punc-119GFP, pRF4]</td>
			<td>Tavernarakis lab</td>
			<td></td>
			<td>Maintain animals at 20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epifluorescence microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>Axio Imager Z2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Escherichia coli OP50 strain</td>
			<td>Caenorhabditis Genetics Center (CGC)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence dissecting stereomicroscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>SteREO Lumar V12</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Greiner Petri dishes (60 x 15 mm)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5237</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ife-2(ok306);Ex[pife-2GFP, pRF4]</td>
			<td>Tavernarakis lab</td>
			<td></td>
			<td>Maintain animals at 20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>image analysis software</td>
			<td>Fiji</td>
			<td></td>
			<td>https://fiji.sc</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>1,37,010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K2HPO4</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>1,04,873</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB liquid medium</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M9 buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium sulfate (MgSO4)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M7506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope slides (75 x 25 x 1 mm)</td>
			<td>Marienfeld, Lauda-Koenigshofen</td>
			<td>10 006 12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsoft Office 2011 Excel software package</td>
			<td>Microsoft Corporation, Redmond, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2;Ex[pife-2GFP; pRF4]</td>
			<td>Tavernarakis lab</td>
			<td></td>
			<td>Maintain animals at 20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2;Ex[psod-3GFP; pRF4]</td>
			<td>Tavernarakis lab</td>
			<td></td>
			<td>Maintain animals at 20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2;Ex[punc-119GFP; pRF4]</td>
			<td>Tavernarakis lab</td>
			<td></td>
			<td>Maintain animals at 20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na2HPO4</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>1,06,586</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nematode growth medium (NGM) agar plates</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nystatin stock solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N3503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peptone</td>
			<td>BD, Bacto</td>
			<td>211677</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride (NaCl)</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>1,06,40,41,000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard equipment for preparing agar plates (autoclave, Petri dishes, etc.)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard equipment for maintaining worms (platinum wire pick, incubators, etc.).</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>statistical analysis software</td>
			<td>GraphPad Software Inc., San Diego, USA</td>
			<td></td>
			<td>GraphPad Prism software package</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptomycin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S6501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UV Crosslinker</td>
			<td>Vilber Lourmat BIO-LINK BLX 254</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Worm pick</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessment of de novo protein synthesis rates in caenorhabditis elegans

Opretholdelse af en sund proteome er afgørende for celle og organisme homøostase. Forstyrrelsen af balancen mellem protein translationel kontrol og nedbrydning ansporer en lang række aldersrelaterede sygdomme. Forringelse af proteostasekvalitetskontrolmekanismerne er kendetegnende for aldring. Biokemiske metoder til påvisning af de novo-proteinsyntese er stadig begrænsede, har flere ulemper og kan ikke udføres i levende celler eller dyr. Caenorhabditis elegans, er gennemsigtig og let genetisk modificeret, er en glimrende model til at overvåge proteinsyntese satser ved hjælp af billeddannelse teknikker. Her introducerer og beskriver vi en metode til at måle de novo proteinsyntese in vivo ved hjælp af fluorescensgenvinding efter photobleaching (FRAP). Transgene dyr, der udtrykker fluorescerende proteiner i specifikke celler eller væv, bestråles af en kraftig lyskilde, der resulterer i fluorescensfotobleaching. Til gengæld betyder vurderingen af fluorescensgenoprettelse ny proteinsyntese i celler og/eller væv af interesse. Derfor kan kombinationen af transgene nematoder, genetiske og/eller farmakologiske indgreb sammen med levende billeddannelse af proteinsyntesehastigheder kaste lys over mekanismer, der mæglede aldersafhængige proteostasekollaps.

Ved hjælp af den procedure, der præsenteres her, blev vilde typer og mutante transgene nematoder, der udtrykker følgendesomatiskejournalister, pife-2GFP, psod-3GFP og punc-119GFP, anvendt til at vurdere proteinsyntese i henhold til de respektive protokoller. Især, vilde type og ife-2 mutant orme udtrykke cytoplasmic GFP hele deres somatiske væv ved hjælp af ife-2 promotor blev sammenlignet før, umi...

Watch this Scientific Journal Video about Assessment of de novo Protein Synthesis Rates in Caenorhabditis elegans at JoVE.com

Assessment of de novo Protein Synthesis Rates in Caenorhabditis elegans

Her introducerer og beskriver vi en ikke-radioaktiv og noninvasive metode til at vurdere de novo proteinsyntese in vivo, ved hjælp af nematode Caenorhabditis elegans og fluorescens opsving efter photobleaching (FRAP). Denne metode kan kombineres med genetiske og/eller farmakologiske skærme for at identificere nye modulatorer af proteinsyntese.

Vurdering af de novo proteinsyntese i Caenorhabditis elegans

Maintaining a healthy proteome is essential for cell and organismal homeostasis. Perturbation of the balance between protein translational control and ...

Hastigheden af proteinsyntese er forstyrret under sygdom og aldring. Fluorescens opsving efter fotobleaching, eller FRAP, tillader måling af hastigheden af proteinsyntese in vivo. Vi bruger gennemsigtige C.elegans orme, der udtrykker GFP, som en model til at overvåge den nye proteinsyntese efter photobleaching.Vi giver praktiske retningslinjer for at måle fluorescens opsving ved hjælp af transgene orme, som udtrykker GFP under forskellige initiativtagere, enten bredt udtrykt eller i specifikke celler eller væv. Også, denne metode tilbyder proteinsyntese hastighed overvågning i realtid. Brug et dissekerende stereomikroskop til at vurdere udviklingsstadiet og væksten af vilde og mutante transgene nematoder.Pick 10 L4 larver af vilde-type og mutant transgene dyr bærer den ønskede fluorescerende reporter på nematode vækst medier plader seedet med E.coli. Inkuber og dyrk nematoderne ved standardtemperaturen på 20 grader Celsius. Fire dage senere, pladen indeholder en blandet population af transgene orme.Vælg og overfør 15 L4 larver af hver stamme på nysåede OP50 NGM plader. Udfør FRAP assay, og overvåge proteinsyntese sats på dag ét af voksenalderen. Den næste dag, forberede og bruge cycloheximide-holdige NGM plader som en positiv kontrol.Dræb bakterier ved at udsætte de seedede NGM plader i 15 minutter med UV-lys. Tilsæt cycloheximide på toppen af bakterie-seedede plader for 500 mikrogram pr. ml endelig koncentration i agarvolumen. Lad pladerne tørre.Transgene nematoder, der udtrykker GFP, overføres på køretøjets og cykcyklopholdige plader. Inkuber dyr i to timer ved standardtemperaturen på 20 grader Celsius. Pick og overføre en-dags voksne transgene dyr til individuelle NGM plader seedet med en 20 mikroliters OP50 dråbe i midten.Fjern låget og placere hver plade under en 20H objektiv af en epifluorescerende mikroskop. Fokuser og tag et referencebillede før fotobleaching. Photobleach hver prøve i 10 minutter.Tag et billede efter fotobleaching. Hold dyrene i individuelle NGM plader, og lad dem komme sig. Billede og optage inddrivelse af hver fluorescerende reporter hver en time i mindst seks timer på et epifluorescerende stereomikroskop.Forbered 2% agarose puder, og tilsæt 10 mikroliters dråbe M9 buffer i midten af agarose pad. Overfør fem transgene nematoder, der udtrykker panneuronal cytoplasmic GFP, til en dråbe M9-buffer. Brug en øjenvipper til at sprede væsken.Dyr udviser reducerede bevægelser inden for to minutter på grund af M9 absorbans i agaren. Skift nematode position ved hjælp af en øjenvipper pick. Anlæven anbringes ved 40H-objektivet på et epifluorescerende mikroskop uden at bruge en dækselsseddel.Fokuser og tag et referencebillede. Photobleach et målrettet område af interesse i 90 sekunder. Tag et billede efter fotobleaching.Tilføj en 10 mikroliters dråbe M9 buffer på fotobleached nematoder. Lad dyrene komme sig i fem minutter. Brug øjenvipper pick eller en pipette til at overføre nematoder til individuelle NGM plader seedet med 20 mikroliter OP50 dråbe i midten.Tag et billede af hver prøve hver eneste time under et epifluorescerende stereomikroskop. Vilde og fe-2 mutant orme udtrykker cytoplasmic GFP i hele deres somatiske væv ved hjælp af fe-2 promotor blev sammenlignet før, umiddelbart efter photobleaching, og fem timer efter helbredelse. Vilde dyr kom sig fuldt ud, mens fe-2 mutanter havde minerne restitutionskapacitet.Vilde orme indleder således den normale proteinsyntese efter fotobleaching, mens orme, der mangler mRNA-oversættelsesstartfaktor fe-2, ikke er i stand til at gøre det, hvilket indikerer, at hastigheden af fluorescerende opsving illustrerer hastigheden af proteinsyntese in vivo. Cycloheximid, en specifik hæmmer af mRNA oversættelse kan bruges som en positiv kontrol for protein oversættelse hæmning. Faktisk genvinder cycloheximide-behandlede transgene dyr, der udtrykker cytoplasmic GFP under promotoren, ikke deres fluorescens ved fotobleaching.mRNA-behandlingsorganer påvirker hastigheden af proteinoversættelse. Vildtype og edc-3 mutant nematoder, der udtrykker GFP pan-neuronally blev undersøgt for deres inddrivelse kapacitet på målrettet photobleaching på hovedet regionen. Fluorescerende opsving er meget langsommere i EDC-3-mangelfuld dyr i forhold til vilde-type orme.Proteinsyntesemodulering er afgørende for organisme homøostase. Under aldring, globale såvel som specifikke proteinsyntese er forstyrret. Protein oversættelse balance direkte styrer senescens og aldring.Specifikt, centrale komponenter i oversættelsen maskiner samt P-krop interagerende komponenter fremskynde aldringsprocessen. Perturbation af oversættelse indledning decelererer aldring. Derfor, måling af globale proteinsyntese satser ved FRAP er en direkte udlæsning af aldringsprocessen.

Research

JoVE Journal

Biology

Assessment of de novo Protein Synthesis Rates in Caenorhabditis elegans

Osmotic Avoidance in Caenorhabditis elegans: Synaptic Function of Two Genes, Orthologues of Human NRXN1 and NLGN1, as Candidates for Autism

Osmotic Avoidance in Caenorhabditis elegans: Synaptic Function of Two Genes, Orthologues of Human NRXN1 and NLGN1, as Candidates for Autism

Neurexins and neuroligins are cell adhesion molecules present in excitatory and inhibitory synapses, and they are required for correct neuron network ...

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans has often been used as a model system in studies of early developmental processes.  The transparency of the 
embryos, the genetic ...

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Grundlæggende<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; Metoder: Synkronisering og Observation

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has ...

Biochemical and High Throughput Microscopic Assessment of Fat Mass in Caenorhabditis Elegans

Biochemical and High Throughput Microscopic Assessment of Fat Mass in Caenorhabditis Elegans

Biokemisk og High Throughput Mikroskopisk vurdering af Fat Mass i<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

The nematode C. elegans has emerged as an important  model for the study of conserved genetic pathways regulating fat metabolism as  it relates to human ...

Prostaglandin Extraction and Analysis in Caenorhabditis elegans

Prostaglandin Extraction and Analysis in Caenorhabditis elegans

Prostaglandin Udvinding og Analyse i<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Caenorhabditis elegans is emerging as a powerful animal model to study the biology of lipids1-9. Prostaglandins are an important class of eicosanoids, ...

Protein WISDOM: A Workbench for In silico De novo Design of BioMolecules

Protein WISDOM: A Workbench for In silico De novo Design of BioMolecules

Protein VISDOM: A Workbench for<em&gt; I silico</em&gt;<em&gt; De novo</em&gt; Design af biomolekyler

The aim of de novo protein design is to find the amino acid sequences that will fold into a desired 3-dimensional structure with improvements in specific ...

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the ...

Methods to Study Changes in Inherent Protein Aggregation with Age in Caenorhabditis elegans

Methods to Study Changes in Inherent Protein Aggregation with Age in Caenorhabditis elegans

Metoder til undersøgelse ændringer i iboende Protein sammenlægning med alder i Caenorhabditis elegans

In the last decades, the prevalence of neurodegenerative disorders, such as Alzheimer's disease (AD) and Parkinson's disease (PD), has grown. These ...

De Novo Generation of Somatic Stem Cells by YAP/TAZ

De Novo Generation of Somatic Stem Cells by YAP/TAZ

De Novo Generation af somatiske stamceller af YAP/TAZ

Here we present protocols to isolate primary differentiated cells and turn them into stem/progenitor cells (SCs) of the same lineage by transient ...

Detecting Protein Subcellular Localization by Green Fluorescence Protein Tagging and 4',6-Diamidino-2-phenylindole Staining in Caenorhabditis elegans

Detecting Protein Subcellular Localization by Green Fluorescence Protein Tagging and 4',6-Diamidino-2-phenylindole Staining in Caenorhabditis elegans

Påvisning af Protein subcellulært lokalisering af grøn fluorescens Protein Tagging og 4', 6-Diamidino-2-phenylindole farvning i Caenorhabditis elegans