Name: assessment of de novo protein synthesis rates in caenorhabditis elegans
Uploaded: 2020-09-12T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessment of de novo Protein Synthesis Rates in Caenorhabditis elegans at JoVE.com

Wij danken Chaniotakis M. en Kounakis K. voor het opnemen en bewerken van video's. K.P. wordt gefinancierd met een subsidie van de Helleense Stichting voor Onderzoek en Innovatie (HFRI) en het Secretariaat-generaal voor Onderzoek en Technologie (GSRT). N.T. wordt gefinancierd door subsidies van de Europese Onderzoeksraad (ERC – GA695190 – MANNA), de kaderprogramma's van de Europese Commissie en het Griekse ministerie van Onderwijs.

OPMERKING: Zowel transcriptie- als translationele fusies met fluoroforen kunnen worden gebruikt om de novo-eiwitvertaling in verschillende weefsels te evalueren. Eiwitsynthese tarieven kunnen worden beoordeeld voor meerdere eiwitfamilies die gelokaliseerd in verschillende cellulaire compartimenten, met inbegrip van cytoplasma, mitochondriën en kern7. De volgende stammen worden gebruikt om wereldwijde en neuronale eiwitsynthese tarieven te controleren, N2; Ex[pife-2GFP...

<ol>
	<li>Syntichaki, P., Troulinaki, K., Tavernarakis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=eIF4E+function+in+somatic+cells+modulates+ageing+in+Caenorhabditis+elegans.">eIF4E function in somatic cells modulates ageing in Caenorhabditis elegans.</a> Nature. 445 (7130), 922-926 (2007).</li><li>Charmpilas, N., Daskalaki, I., Papandreou, M. E., Tavernarakis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+synthesis+as+an+integral+quality+control+mechanism+during+ageing.">Protein synthesis as an integral quality control mechanism during ageing.</a> Ageing Research Reviews. 23, 75-89 (2015).</li><li>Li, G. W., Burkhardt, D., Gross, C., Weissman, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+absolute+protein+synthesis+rates+reveals+principles+underlying+allocation+of+cellular+resources.">Quantifying absolute protein synthesis rates reveals principles underlying allocation of cellular resources.</a> Cell. 157 (3), 624-635 (2014).</li><li>Dermit, M., Dodel, M., Mardakheh, F. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+monitoring+and+measurement+of+protein+translation+in+time+and+space.">Methods for monitoring and measurement of protein translation in time and space.</a> Molecular Biosystems. 13 (12), 2477-2488 (2017).</li><li>Iwasaki, S., Ingolia, N. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Growing+Toolbox+for+Protein+Synthesis+Studies.">The Growing Toolbox for Protein Synthesis Studies.</a> Trends in Biochemical Sciences. 42 (8), 612-624 (2017).</li><li>Corsi, A. K., Wightman, B., Chalfie, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Transparent+Window+into+Biology:+A+Primer+on+Caenorhabditis+elegans.">A Transparent Window into Biology: A Primer on Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 200 (2), 387-407 (2015).</li><li>Kourtis, N., Tavernarakis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-specific+monitoring+of+protein+synthesis+in+vivo.">Cell-specific monitoring of protein synthesis in vivo.</a> PLoS One. 4 (2), 4547 (2009).</li><li>Parker, R., Sheth, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=P+bodies+and+the+control+of+mRNA+translation+and+degradation.">P bodies and the control of mRNA translation and degradation.</a> Molecular Cell. 25 (5), 635-646 (2007).</li><li>Rieckher, M., Markaki, M., Princz, A., Schumacher, B., Tavernarakis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintenance+of+Proteostasis+by+P+Body-Mediated+Regulation+of+eIF4E+Availability+during+Aging+in+Caenorhabditis+elegans.">Maintenance of Proteostasis by P Body-Mediated Regulation of eIF4E Availability during Aging in Caenorhabditis elegans.</a> Cell Reports. 25 (1), 199-211 (2018).</li><li>Reits, E. A., Neefjes, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+fixed+to+FRAP:+measuring+protein+mobility+and+activity+in+living+cells.">From fixed to FRAP: measuring protein mobility and activity in living cells.</a> Nature Cell Biology. 3 (6), 145-147 (2001).</li><li>Keith, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Graded+Proteasome+Dysfunction+in+Caenorhabditis+elegans+Activates+an+Adaptive+Response+Involving+the+Conserved+SKN-1+and+ELT-2+Transcription+Factors+and+the+Autophagy-Lysosome+Pathway.">Graded Proteasome Dysfunction in Caenorhabditis elegans Activates an Adaptive Response Involving the Conserved SKN-1 and ELT-2 Transcription Factors and the Autophagy-Lysosome Pathway.</a> PLoS Genetics. 12 (2), 1005823 (2016).</li><li>Kumsta, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+autophagy+receptor+p62/SQST-1+promotes+proteostasis+and+longevity+in+C.+elegans+by+inducing+autophagy.">The autophagy receptor p62/SQST-1 promotes proteostasis and longevity in C. elegans by inducing autophagy.</a> Nature Communications. 10 (1), 5648 (2019).</li><li>Gregersen, N., Bolund, L., Bross, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+misfolding,+aggregation,+and+degradation+in+disease.">Protein misfolding, aggregation, and degradation in disease.</a> Molecular Biotechnology. 31 (2), 141-150 (2005).</li></ol>

Eiwitsynthese modulatie is essentieel voor organismale homeostase. Tijdens de vergrijzing wordt zowel de wereldwijde als de specifieke eiwitsynthese verstoord. Recente studies tonen aan dat eiwitvertaalbalans senesescentie en veroudering direct controleert, is niet alleen een bijproduct van het verouderingsproces. In het bijzonder, kerncomponenten van de vertaalmachines zoals eukaryotische initiatiefactor 4E (eIF4E), die mRNA-aftopping tijdens de inleiding van de vertaling vergemakkelijkt, en dus de snelheid van cap-afha...

Eiwitsynthese en afbraak is essentieel voor organismale homeostase. Een veelheid van leeftijdsgebonden ziekten wordt aangespoord door gebrekkige eiwitproductie1,2. Om de wereldwijde eiwitvertalingssnelheden te meten, zijn er biochemische technieken zoals ribosomale profilering, waarbij diepe sequencing van ribosoom-beschermde mRNA-fragmenten wordt betrokken om expressie te monitoren, evenals nieuwe eiwitsynthese3. Deze methode, naast het feit dat een indirecte uitlezing van de translationele tarieven, zoals toegenomen RNA associatie met ribosomen betekent niet noodzakelijkerwijs meer vertaling, heeft technische nadelen, zoals hoge kosten en een eis van een grote hoeveelheid uitgangsmateriaal. Anderzijds maken proteomics-gebaseerde methoden directe eiwitkwantificering mogelijk door metabole pulsprofilering, gevolgd door massaspectrometrieanalyse4,5. Dit is echter een semi-kwantitatieve benadering met beperkte temporele resolutie die niet gemakkelijk in vivo kan worden gebruikt. Bovendien kan de etikettering van het eiwit ongelijk worden verdeeld in het dier/weefsel van belang. Belangrijk is dat beide methoden weefselspecifieke of celspecifieke variaties in eiwitvertalingssnelheden in respectievelijk hele dieren of weefsels kunnen verbergen.
Caenorhabditis elegans is een gebruiksvriendelijk modelorganisme dat in grote aantallen kan worden geteeld6. Bovendien zorgen de genetische besneerbaarheid en transparantie voor live beeldvorming in vivo. Dit protocol beschrijft de methodologie om eiwitsynthesesnelheden te detecteren met behulp van fluorescentieherstel na fotobleaching (FRAP). We maken gebruik van de transgene expressie van fluorescerende eiwitten, hetzij in het hele organisme, hetzij in specifieke weefsels/ cellen. Transgene dieren kunnen GFP uitdrukken met behulp van de promotor van een gen, dat op grote schaal/wereldwijd wordt uitgedrukt, ofwel een weefselspecifieke promotor om specifieke celtypen aan te pakken. Deze techniek kan worden uitgebreid tot een specifieke promotor om eiwitsynthese tarieven van een specifiek eiwit te onderzoeken.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>5040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Biozym</td>
			<td>8,40,004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose pads 2%</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride dehydrate (CaCl2&#8729;2H2O)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C5080</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cholesterol</td>
			<td>SERVA Electrophoresis</td>
			<td>17101.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cycloheximide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C-7698</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting stereomicroscope</td>
			<td>Nikon Corporation</td>
			<td></td>
			<td>SMZ645</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>edc-3(ok1427);Ex[punc-119GFP, pRF4]</td>
			<td>Tavernarakis lab</td>
			<td></td>
			<td>Maintain animals at 20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epifluorescence microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>Axio Imager Z2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Escherichia coli OP50 strain</td>
			<td>Caenorhabditis Genetics Center (CGC)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence dissecting stereomicroscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>SteREO Lumar V12</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Greiner Petri dishes (60 x 15 mm)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5237</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ife-2(ok306);Ex[pife-2GFP, pRF4]</td>
			<td>Tavernarakis lab</td>
			<td></td>
			<td>Maintain animals at 20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>image analysis software</td>
			<td>Fiji</td>
			<td></td>
			<td>https://fiji.sc</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>1,37,010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K2HPO4</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>1,04,873</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB liquid medium</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M9 buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium sulfate (MgSO4)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M7506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope slides (75 x 25 x 1 mm)</td>
			<td>Marienfeld, Lauda-Koenigshofen</td>
			<td>10 006 12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsoft Office 2011 Excel software package</td>
			<td>Microsoft Corporation, Redmond, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2;Ex[pife-2GFP; pRF4]</td>
			<td>Tavernarakis lab</td>
			<td></td>
			<td>Maintain animals at 20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2;Ex[psod-3GFP; pRF4]</td>
			<td>Tavernarakis lab</td>
			<td></td>
			<td>Maintain animals at 20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2;Ex[punc-119GFP; pRF4]</td>
			<td>Tavernarakis lab</td>
			<td></td>
			<td>Maintain animals at 20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na2HPO4</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>1,06,586</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nematode growth medium (NGM) agar plates</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nystatin stock solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N3503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peptone</td>
			<td>BD, Bacto</td>
			<td>211677</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride (NaCl)</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>1,06,40,41,000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard equipment for preparing agar plates (autoclave, Petri dishes, etc.)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard equipment for maintaining worms (platinum wire pick, incubators, etc.).</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>statistical analysis software</td>
			<td>GraphPad Software Inc., San Diego, USA</td>
			<td></td>
			<td>GraphPad Prism software package</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptomycin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S6501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UV Crosslinker</td>
			<td>Vilber Lourmat BIO-LINK BLX 254</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Worm pick</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessment of de novo protein synthesis rates in caenorhabditis elegans

Het handhaven van een gezond proteoom is essentieel voor cel- en organismale homeostase. Verstoring van het evenwicht tussen eiwit translationele controle en afbraak veroorzaakt een veelheid van leeftijdsgebonden ziekten. De achteruitgang van de proteostasekwaliteitscontrolemechanismen is een kenmerk van veroudering. Biochemische methoden om de novo eiwitsynthese te detecteren zijn nog steeds beperkt, hebben verschillende nadelen en kunnen niet worden uitgevoerd in levende cellen of dieren. Caenorhabditis elegans, transparant en gemakkelijk genetisch gemodificeerd, is een uitstekend model om eiwitsynthese tarieven te controleren met behulp van beeldvormende technieken. Hier introduceren en beschrijven we een methode om de novo-eiwitsynthese in vivo te meten met behulp van fluorescentieherstel na fotobleaching (FRAP). Transgene dieren die fluorescerende eiwitten uitdrukken in specifieke cellen of weefsels worden bestraald door een krachtige lichtbron die resulteert in fluorescentie fotobleaching. Op zijn beurt betekent de beoordeling van fluorescentieherstel nieuwe eiwitsynthese in cellen en/of weefsels van belang. Vandaar dat de combinatie van transgene aaltjes, genetische en/of farmacologische interventies samen met live beeldvorming van eiwitsynthesesnelheden licht kan werpen op mechanismen die leeftijdsafhankelijke proteostaseinstorten.

Met behulp van de procedure hier gepresenteerd, wilde type en mutant transgene nematoden uitdrukken van de volgende somatische verslaggevers, pife-22GFP, psod-3GFP en punc-119GFP, werden gebruikt om eiwitsynthese tarieven te beoordelen volgens de respectieve protocollen. In het bijzonder werden wilde type- en ife-2 gemuteerde wormen die cytoplasmische GFP in hun somatische weefsels uitdrukken met behulp van de <em...

Watch this Scientific Journal Video about Assessment of de novo Protein Synthesis Rates in Caenorhabditis elegans at JoVE.com

Assessment of de novo Protein Synthesis Rates in Caenorhabditis elegans

Hier introduceren en beschrijven we een niet-radioactieve en niet-invasieve methode om de novo-eiwitsynthese in vivo te beoordelen, waarbij gebruik wordt gemaakt van de nematode Caenorhabditis elegans en fluorescentieherstel na fotobleaching (FRAP). Deze methode kan worden gecombineerd met genetische en/of farmacologische schermen om nieuwe modulatoren van eiwitsynthese te identificeren.

Beoordeling van de novo Eiwit synthese tarieven in Caenorhabditis elegans

Maintaining a healthy proteome is essential for cell and organismal homeostasis. Perturbation of the balance between protein translational control and ...

De snelheid van eiwitsynthese wordt verstoord tijdens ziekte en veroudering. Fluorescentie herstel na fotobleaching, of FRAP, maakt het mogelijk de snelheid van eiwitsynthese in vivo. We gebruiken transparante C.elegans wormen, die GFP uitdrukken, als een model om de nieuwe eiwitsynthese te monitoren na het fotoblelen.We bieden praktische richtlijnen om fluorescentieherstel te meten met behulp van transgene wormen, die GFP uitdrukken onder verschillende promotors, hetzij op grote schaal uitgedrukt of in specifieke cellen of weefsels. Ook biedt deze methode eiwitsynthese snelheid monitoring in real time. Gebruik een ontledende stereomicroscoop om de ontwikkelingsstadia en groei van wilde en gemuteerde transgene aaltjes te beoordelen.Kies 10 L4 larven van wilde en gemuteerde transgene dieren die de gewenste fluorescerende reporter op nematode groeimediaplaten met E.coli. Incubeer en kweek de aaltjes bij de standaardtemperatuur van 20 graden Celsius. Vier dagen later bevat de plaat een gemengde populatie transgene wormen.Selecteer en breng 15 L4 larven van elke stam over op vers gezaaide OP50 NGM-platen. Voer FRAP-test uit en controleer de eiwitsynthesesnelheid op dag één van de volwassenheid. De volgende dag, voor te bereiden en te gebruiken cycloheximide-bevattende NGM platen als een positieve controle.Dood bacteriën door het blootstellen van de gezaaide NGM platen gedurende 15 minuten met UV-licht. Voeg cycloheximide op de top van bacteriële gezaaide platen ook 500 microgram per mL uiteindelijke concentratie in de agar volume. Laat platen drogen.Breng transgene aaltjes over die GFP uitdrukken op voertuig- en cycloheximide-bevattende platen. Twee uur lang dieren uitbroeden bij de standaardtemperatuur van 20 graden Celsius. Kies en breng eendaagse volwassen transgene dieren naar individuele NGM-platen gezaaid met een OP50-daling van 20 microliters in het midden.Verwijder het deksel en plaats elke plaat onder een 20H objectieve lens van een epifluorescente microscoop. Focus en leg een referentieafbeelding vast voordat je fotobleekt. Photobleach elk monster gedurende 10 minuten.Maak een afbeelding na photobleaching. Houd dieren in individuele NGM-platen, en laat ze herstellen. Beeld en neem het herstel van elke tl-reporter elk uur gedurende ten minste zes uur op een epifluorescente stereomicroscoop.Bereid 2%agarose pads, en voeg 10 microliter druppel M9 buffer in het midden van de agarose pad. Breng vijf transgene aaltjes die pan-neuronale cytoplasmatische GFP uitdrukken over in een druppel M9-buffer. Gebruik een wimper om de vloeistof te verspreiden.Dieren vertonen verminderde bewegingen binnen twee minuten als gevolg van M9 absorptie in de agar. Verander de positie van nematode met behulp van een wimperpluk. Plaats het monster op de 40H objectieve lens van een epifluorescent microscoop zonder gebruik te maken van een cover slip.Focus en leg een referentieafbeelding vast. Photobleach een gericht gebied van belang voor 90 seconden. Maak een afbeelding na photobleaching.Voeg een 10 microliter druppel M9 buffer op fotobleached aaltjes. Laat de dieren vijf minuten herstellen. Gebruik de wimper pick of een pipet om de aaltjes over te brengen naar individuele NGM platen gezaaid met 20 microliters OP50 daling in het midden.Leg elk uur een beeld vast van elk monster onder een epifluorescente stereomicroscoop. Wild-type en fe-2 mutant wormen uitdrukken cytoplasmatische GFP in hun somatische weefsels met behulp van de fe-2 promotor werden vergeleken vóór, onmiddellijk na fotobleaching, en vijf uur na herstel. Wilde dieren volledig hersteld, terwijl fe-2 mutanten had de mini's herstelcapaciteit.Dus wild type wormen initiëren van de normale eiwitsynthese na photobleaching, terwijl wormen ontbreekt mRNA vertaling initiatie factor fe-2 zijn niet in staat om dit te doen, wat aangeeft dat de snelheid van fluorescerend herstel illustreert de snelheid van eiwitsynthese in vivo. Cycloheximide, een specifieke remmer van mRNA vertaling kan worden gebruikt als een positieve controle voor eiwit vertaling remming. Cycloheximide-behandelde transgene dieren die cytoplasmisch GFP onder de promotor uitdrukken, herstellen hun fluorescentie niet bij het fotobleaching.mRNA-verwerkingsorganen beïnvloeden de snelheid van eiwitvertaling. Wild-type en edc-3 mutantaaltjes die GFP pan-neuronaal uitdrukken werden onderzocht op hun herstelcapaciteit bij gerichte fotobleaching op het hoofdgebied. Fluorescerend herstel is veel langzamer bij edc-3-deficiënte dieren in vergelijking met wild-type wormen.Eiwitsynthese modulatie is essentieel voor organismale homeostase. Tijdens het ouder worden, wordt zowel de wereldwijde als de specifieke eiwitsynthese verstoord. Eiwitvertaalbalans controleert direct senescentie en veroudering.Met name de kerncomponenten van de vertaalmachines en de interageringscomponenten van de P-body versnellen het verouderingsproces. Verstoring van de vertaling initiatie vertraagt veroudering. Daarom is het meten van wereldwijde eiwitsynthese door FRAP een directe uitlezing van het verouderingsproces.

Research

JoVE Journal

Biology

Assessment of de novo Protein Synthesis Rates in Caenorhabditis elegans

Osmotic Avoidance in Caenorhabditis elegans: Synaptic Function of Two Genes, Orthologues of Human NRXN1 and NLGN1, as Candidates for Autism

Osmotic Avoidance in Caenorhabditis elegans: Synaptic Function of Two Genes, Orthologues of Human NRXN1 and NLGN1, as Candidates for Autism

Osmotische Vermijden in Caenorhabditis elegans: Synaptic Functie van twee genen, orthologen van de Mens NRXN1 En NLGN1, Als kandidaten voor Autisme

Neurexins and neuroligins are cell adhesion molecules present in excitatory and inhibitory synapses, and they are required for correct neuron network ...

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Time-lapse microscopie van de vroege embryogenese in Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans has often been used as a model system in studies of early developmental processes.  The transparency of the 
embryos, the genetic ...

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Basis-<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; Methoden: Synchronisatie-en-

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has ...

Biochemical and High Throughput Microscopic Assessment of Fat Mass in Caenorhabditis Elegans

Biochemical and High Throughput Microscopic Assessment of Fat Mass in Caenorhabditis Elegans

Biochemische en High Throughput microscopische beoordeling van Fat Mass in<em&gt; Caenorhabditis Elegans</em

The nematode C. elegans has emerged as an important  model for the study of conserved genetic pathways regulating fat metabolism as  it relates to human ...

Prostaglandin Extraction and Analysis in Caenorhabditis elegans

Prostaglandin Extraction and Analysis in Caenorhabditis elegans

Prostaglandine-extractie en analyse in<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Caenorhabditis elegans is emerging as a powerful animal model to study the biology of lipids1-9. Prostaglandins are an important class of eicosanoids, ...

Protein WISDOM: A Workbench for In silico De novo Design of BioMolecules

Protein WISDOM: A Workbench for In silico De novo Design of BioMolecules

Proteïne WIJSHEID: Een Workbench voor<em&gt; In silico</em&gt;<em&gt; De novo</em&gt; Ontwerp van biomoleculen

The aim of de novo protein design is to find the amino acid sequences that will fold into a desired 3-dimensional structure with improvements in specific ...

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

Gebruik<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; Als een modelsysteem voor de Protein Homeostase studeren in een meercellige

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the ...

Methods to Study Changes in Inherent Protein Aggregation with Age in Caenorhabditis elegans

Methods to Study Changes in Inherent Protein Aggregation with Age in Caenorhabditis elegans

Methoden om wijzigingen van de studie in inherente aggregatie van eiwitten met de leeftijd in Caenorhabditis elegans

In the last decades, the prevalence of neurodegenerative disorders, such as Alzheimer's disease (AD) and Parkinson's disease (PD), has grown. These ...

De Novo Generation of Somatic Stem Cells by YAP/TAZ

De Novo Generation of Somatic Stem Cells by YAP/TAZ

DOVO Generatie van somatische stamcellen door YAP/TAZ

Here we present protocols to isolate primary differentiated cells and turn them into stem/progenitor cells (SCs) of the same lineage by transient ...

Detecting Protein Subcellular Localization by Green Fluorescence Protein Tagging and 4',6-Diamidino-2-phenylindole Staining in Caenorhabditis elegans

Detecting Protein Subcellular Localization by Green Fluorescence Protein Tagging and 4',6-Diamidino-2-phenylindole Staining in Caenorhabditis elegans

Opsporen van Eiwit Subcellular Localisatie door Green fluorescentie eiwit Tagging en 4', 6-Diamidino-2-phenylindole vlekken in Caenorhabditis elegans

In this protocol, a green fluorescence protein (GFP) fusion protein and 4',6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) staining are used to track protein ...