Name: assessment of de novo protein synthesis rates in caenorhabditis elegans
Uploaded: 2020-09-12T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessment of de novo Protein Synthesis Rates in Caenorhabditis elegans at JoVE.com

אנו מודים לחאניוטקיס מ. וקונאקיס ק. על הקלטת וידאו ועריכה. K.P. ממומנת על ידי מענק מהקרן ההלנית למחקר וחדשנות (HFRI) והמזכירות הכללית למחקר וטכנולוגיה (GSRT). N.T. ממומן על ידי מענקים ממועצת המחקר האירופית (ERC – GA695190 – MANNA), תוכניות מסגרת הנציבות האירופית, ומשרד החינוך היווני.

הערה: ניתן להשתמש הן היתוך שעתוק והן תרגום פלואורופורים כדי להעריך את תרגום חלבון דה נובו במספר רקמות. ניתן להעריך את שיעורי סינתזת החלבון עבור משפחות חלבון מרובות המותאם לתאים תאייםשונים,כולל ציטופלסמה, מיטוכונדריה וגרעין 7 . הזנים הבאים משמשים כדי לפקח על שיעורי סינתזת חלבו...

<ol>
	<li>Syntichaki, P., Troulinaki, K., Tavernarakis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=eIF4E+function+in+somatic+cells+modulates+ageing+in+Caenorhabditis+elegans.">eIF4E function in somatic cells modulates ageing in Caenorhabditis elegans.</a> Nature. 445 (7130), 922-926 (2007).</li><li>Charmpilas, N., Daskalaki, I., Papandreou, M. E., Tavernarakis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+synthesis+as+an+integral+quality+control+mechanism+during+ageing.">Protein synthesis as an integral quality control mechanism during ageing.</a> Ageing Research Reviews. 23, 75-89 (2015).</li><li>Li, G. W., Burkhardt, D., Gross, C., Weissman, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+absolute+protein+synthesis+rates+reveals+principles+underlying+allocation+of+cellular+resources.">Quantifying absolute protein synthesis rates reveals principles underlying allocation of cellular resources.</a> Cell. 157 (3), 624-635 (2014).</li><li>Dermit, M., Dodel, M., Mardakheh, F. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+monitoring+and+measurement+of+protein+translation+in+time+and+space.">Methods for monitoring and measurement of protein translation in time and space.</a> Molecular Biosystems. 13 (12), 2477-2488 (2017).</li><li>Iwasaki, S., Ingolia, N. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Growing+Toolbox+for+Protein+Synthesis+Studies.">The Growing Toolbox for Protein Synthesis Studies.</a> Trends in Biochemical Sciences. 42 (8), 612-624 (2017).</li><li>Corsi, A. K., Wightman, B., Chalfie, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Transparent+Window+into+Biology:+A+Primer+on+Caenorhabditis+elegans.">A Transparent Window into Biology: A Primer on Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 200 (2), 387-407 (2015).</li><li>Kourtis, N., Tavernarakis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-specific+monitoring+of+protein+synthesis+in+vivo.">Cell-specific monitoring of protein synthesis in vivo.</a> PLoS One. 4 (2), 4547 (2009).</li><li>Parker, R., Sheth, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=P+bodies+and+the+control+of+mRNA+translation+and+degradation.">P bodies and the control of mRNA translation and degradation.</a> Molecular Cell. 25 (5), 635-646 (2007).</li><li>Rieckher, M., Markaki, M., Princz, A., Schumacher, B., Tavernarakis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintenance+of+Proteostasis+by+P+Body-Mediated+Regulation+of+eIF4E+Availability+during+Aging+in+Caenorhabditis+elegans.">Maintenance of Proteostasis by P Body-Mediated Regulation of eIF4E Availability during Aging in Caenorhabditis elegans.</a> Cell Reports. 25 (1), 199-211 (2018).</li><li>Reits, E. A., Neefjes, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+fixed+to+FRAP:+measuring+protein+mobility+and+activity+in+living+cells.">From fixed to FRAP: measuring protein mobility and activity in living cells.</a> Nature Cell Biology. 3 (6), 145-147 (2001).</li><li>Keith, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Graded+Proteasome+Dysfunction+in+Caenorhabditis+elegans+Activates+an+Adaptive+Response+Involving+the+Conserved+SKN-1+and+ELT-2+Transcription+Factors+and+the+Autophagy-Lysosome+Pathway.">Graded Proteasome Dysfunction in Caenorhabditis elegans Activates an Adaptive Response Involving the Conserved SKN-1 and ELT-2 Transcription Factors and the Autophagy-Lysosome Pathway.</a> PLoS Genetics. 12 (2), 1005823 (2016).</li><li>Kumsta, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+autophagy+receptor+p62/SQST-1+promotes+proteostasis+and+longevity+in+C.+elegans+by+inducing+autophagy.">The autophagy receptor p62/SQST-1 promotes proteostasis and longevity in C. elegans by inducing autophagy.</a> Nature Communications. 10 (1), 5648 (2019).</li><li>Gregersen, N., Bolund, L., Bross, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+misfolding,+aggregation,+and+degradation+in+disease.">Protein misfolding, aggregation, and degradation in disease.</a> Molecular Biotechnology. 31 (2), 141-150 (2005).</li></ol>

אפנון סינתזה חלבון חיוני עבור הומיאוסטזיס אורגני. במהלך ההזדקנות, סינתזת חלבון גלובלית, כמו גם ספציפית הוא מוטרד. מחקרים שנעשו לאחרונה חושפים את העובדה שאיזון תרגום חלבונים שולט ישירות בסנסנס והזדקנות אינו רק תוצר לוואי של תהליך ההזדקנות. בפרט, רכיבים מרכזיים של מכונות התרגום כגון גורם ח?...

סינתזת חלבון והשפלה חיוניים להומיאוסטזיס אורגני. מספר רב של מחלות הקשורות לגיל הם יזם על ידי ייצור חלבון פגום1,,2. על מנת למדוד את שיעורי תרגום חלבון גלובליים, ישנן טכניקות ביוכימיות כגון פרופיל ריבוזומאל, אשר כרוך רצף עמוק של שברי mRNA מוגן ריבוזום כדי לפקח על הביטוי, כמו גם סינתזת חלבון רומן3. שיטה זו, מלבד היותו קריאה עקיפה של שיעורי תרגום, כמו שיוך RNA מוגברת לriבוזומים לא בהכרח אומר תרגום מוגבר, יש חסרונות טכניים, כגון עלות גבוהה ודרישה של כמות גדולה של חומר התחלה. מצד שני, שיטות מבוססות פרוטאומיקה מאפשרות כימות חלבון ישיר על ידי פרופיל חילוף החומרים של הדופק ואחריו ניתוח ספקטרומטריהמסה 4,5. עם זאת, זוהי גישה חצי כמותית עם רזולוציה זמנית מוגבלת שלא ניתן להשתמש בה בקלות ב-vivo. יתר על כן, תיוג של החלבון יכול להיות מופץ באופן לא שווה בבעלי חיים / רקמה של עניין. חשוב לציין, שתי שיטות אלה יכולות להסתיר וריאציות ספציפיות לרקמות או ספציפיות לתא בשיעורי תרגום חלבונים בבעלי חיים או ברקמות שלמים, בהתאמה.
Caenorhabditis elegans הוא אורגניזם מודל קל לשימוש שניתן לגדול במספרים גדולים6. בנוסף, היכולת הגנטית והשקיפות שלה מאפשרות הדמיה חיה ב-vivo. פרוטוקול זה מתאר את המתודולוגיה כדי לזהות שיעורי סינתזת חלבון באמצעות התאוששות פלואורסצנט לאחר פוטו-בליסינג (FRAP). אנו מנצלים את הביטוי הטרנסגני של חלבוני פלורסנט, או בכל האורגניזם או ברקמות/תאים ספציפיים. בעלי חיים טרנסגניים עשויים גם לבטא GFP באמצעות היזם של גן, אשר מבוטא באופן נרחב / גלובלי או מקדם ספציפי לרקמות כדי למקד סוגי תאים ספציפיים. טכניקה זו יכולה להיות מורחבת יזם ספציפי כדי לבחון את שיעורי סינתזת חלבון של חלבון מסוים.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>5040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Biozym</td>
			<td>8,40,004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose pads 2%</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride dehydrate (CaCl2&#8729;2H2O)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C5080</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cholesterol</td>
			<td>SERVA Electrophoresis</td>
			<td>17101.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cycloheximide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C-7698</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting stereomicroscope</td>
			<td>Nikon Corporation</td>
			<td></td>
			<td>SMZ645</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>edc-3(ok1427);Ex[punc-119GFP, pRF4]</td>
			<td>Tavernarakis lab</td>
			<td></td>
			<td>Maintain animals at 20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epifluorescence microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>Axio Imager Z2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Escherichia coli OP50 strain</td>
			<td>Caenorhabditis Genetics Center (CGC)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence dissecting stereomicroscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>SteREO Lumar V12</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Greiner Petri dishes (60 x 15 mm)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5237</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ife-2(ok306);Ex[pife-2GFP, pRF4]</td>
			<td>Tavernarakis lab</td>
			<td></td>
			<td>Maintain animals at 20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>image analysis software</td>
			<td>Fiji</td>
			<td></td>
			<td>https://fiji.sc</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>1,37,010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K2HPO4</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>1,04,873</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB liquid medium</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M9 buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium sulfate (MgSO4)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M7506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope slides (75 x 25 x 1 mm)</td>
			<td>Marienfeld, Lauda-Koenigshofen</td>
			<td>10 006 12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsoft Office 2011 Excel software package</td>
			<td>Microsoft Corporation, Redmond, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2;Ex[pife-2GFP; pRF4]</td>
			<td>Tavernarakis lab</td>
			<td></td>
			<td>Maintain animals at 20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2;Ex[psod-3GFP; pRF4]</td>
			<td>Tavernarakis lab</td>
			<td></td>
			<td>Maintain animals at 20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2;Ex[punc-119GFP; pRF4]</td>
			<td>Tavernarakis lab</td>
			<td></td>
			<td>Maintain animals at 20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na2HPO4</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>1,06,586</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nematode growth medium (NGM) agar plates</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nystatin stock solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N3503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peptone</td>
			<td>BD, Bacto</td>
			<td>211677</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride (NaCl)</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>1,06,40,41,000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard equipment for preparing agar plates (autoclave, Petri dishes, etc.)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard equipment for maintaining worms (platinum wire pick, incubators, etc.).</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>statistical analysis software</td>
			<td>GraphPad Software Inc., San Diego, USA</td>
			<td></td>
			<td>GraphPad Prism software package</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptomycin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S6501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UV Crosslinker</td>
			<td>Vilber Lourmat BIO-LINK BLX 254</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Worm pick</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessment of de novo protein synthesis rates in caenorhabditis elegans

שמירה על פרוטאום בריא חיוני עבור תא והומטזיס אורגני. אידיאום האיזון בין שליטה תרגום חלבון והשפלה תירגם מספר רב של מחלות הקשורות לגיל. ירידה של מנגנוני בקרת איכות proteostasis הוא סימן ההיכר של הזדקנות. שיטות ביוכימיות לזיהוי סינתזת חלבון דה נובו עדיין מוגבלות, יש מספר חסרונות ולא ניתן לבצע בתאים חיים או בעלי חיים. Caenorhabditis elegans, להיות שקוף ומהונדס גנטית בקלות, הוא מודל מצוין כדי לפקח על שיעורי סינתזת חלבון באמצעות טכניקות הדמיה. כאן, אנו מציגים ומתארים שיטה למדוד סינתזת חלבון דה נובו ב vivo ניצול התאוששות פלואורסצנט לאחר פוטובלאצ'י (FRAP). בעלי חיים טרנסגניים המביעים חלבוני פלורסנט בתאים או ברקמות ספציפיים מופרים על ידי מקור אור רב עוצמה וכתוצאה מכך פוטו-בליח פלואורסצנטי. בתורו, הערכה של התאוששות פלואורסץ מסמל סינתזת חלבון חדשה בתאים ו / או רקמות של עניין. לפיכך, השילוב של נמטודות טרנסגנית, התערבויות גנטיות ו/או פרמקולוגיות יחד עם הדמיה חיה של שיעורי סינתזת חלבונים יכול לשפוך אור על מנגנונים בתיווך קריסת פרוטאוסטזיס תלויי גיל.

באמצעות ההליך המוצג כאן, סוג בר ונמטודות טרנסגנית מוטציה לבטא את הכתבים סומטי הבאים, pife-2GFP, psod-3GFP ו punc-119GFP, שימשו כדי להעריך את שיעורי סינתזת חלבון על פי הפרוטוקולים המתאימים. במיוחד, סוג פראי ife-2 תולעים מוטציה המביעים GFP צטופלסמי לא...

Watch this Scientific Journal Video about Assessment of de novo Protein Synthesis Rates in Caenorhabditis elegans at JoVE.com

Assessment of de novo Protein Synthesis Rates in Caenorhabditis elegans

כאן, אנו מציגים ומתארים שיטה לא רדיואקטיבית ולא פולשנית כדי להעריך סינתזת חלבון דה נובו ב vivo, ניצול elegans caenorhabditis נמטודה והתאוששות פלואורסצנציה לאחר photobleaching (FRAP). שיטה זו יכולה להיות משולבת עם מסכים גנטיים ו/או תרופתיים כדי לזהות אפנונים חדשניים של סינתזת חלבונים.

הערכה של דה נובו חלבון סינתזה שיעורי Caenorhabditis elegans

Maintaining a healthy proteome is essential for cell and organismal homeostasis. Perturbation of the balance between protein translational control and ...

קצב סינתזת החלבון מוטרד במהלך המחלה וההזדקנות. התאוששות פלואורסצנטיות לאחר photobleaching, או FRAP, מאפשר מדידה של קצב סינתזת החלבון ב vivo. אנו משתמשים בתולעי C.elegans שקופות, המבטאת GFP, כמודל לניטור סינתזת החלבון החדשנית לאחר צילום.אנו מספקים הנחיות מעשיות למדידת התאוששות פלואורסצנטיות באמצעות תולעים מהונדסות, המבטאות GFP תחת מקדמים שונים, בין אם באופן נרחב או בתאים או ברקמות ספציפיים. כמו כן, שיטה זו מציעה ניטור מהירות סינתזה של חלבונים בזמן אמת. השתמש בסטריאומיקרוסקופ ניתוח כדי להעריך את השלבים ההתפתחותיים והצמיחה של נמטודות מהופנטות מסוג פראי ומוטנטים.בחר 10 זחלי L4 של בעלי חיים מהונדסים מסוג פראי ומוטנטים הנושאים את הכתב הפלואורסצנטי הרצוי על לוחות מדיה לצמיחה נמטודה זרע עם E.coli. דגירה ולגדל את nematodes בטמפרטורה הסטנדרטית של 20 מעלות צלזיוס. ארבעה ימים לאחר מכן, הלוחית מכילה אוכלוסייה מעורבת של תולעים מהוונות.בחר והעבר 15 זחלי L4 של כל זן על צלחות OP50 NGM טריות. בצע בדיקת FRAP, ונטר את קצב סינתזת החלבון ביום הראשון לבגרות. למחרת, להכין ולהשתמש cycloheximide המכיל לוחות NGM כשליטה חיובית.להרוג חיידקים על ידי חשיפת צלחות NGM זרע במשך 15 דקות עם אור UV. הוסף cycloheximide על החלק העליון של צלחות זרעי חיידקים מדי 500 מיקרוגרם לכל ריכוז סופי mL בנפח אגר. אפשר לצלחות להתייבש.העבר nematodes מהופנטים המבטאים GFP על הרכב ו cycloheximide המכיל לוחות. דגירה בעלי חיים במשך שעתיים בטמפרטורה הסטנדרטית של 20 מעלות צלזיוס. בחרו והעבירו בעלי חיים מהומרים למבוגרים ליום אחד לצלחות NGM בודדות עם טיפת OP50 של 20 מיקרוליטרים במרכז.הסר את המכסה והצב כל צלחת תחת עדשה אובייקטיבית 20H של מיקרוסקופ epifluorescent. התמקד ולכוד תמונת ייחוס לפני צילום. פוטובלך כל דגימה במשך 10 דקות.לכוד תמונה לאחר צילום. שמור בעלי חיים בצלחות NGM בודדות, ולתת להם להתאושש. תדמיין ותקליט את ההתאוששות של כל כתב פלואורסצנטי כל שעה במשך שש שעות לפחות בסטריאומיקרוסקופ אפיפלואורסצנטי.הכינו רפידות של 2%agarose, והוסיפו 10 טיפות מיקרוליטר של מאגר M9 במרכז כרית אגרוז. העבר חמישה נמטודות מהופנטות המבטאת GFP ציטופלסמי פאן-עצבי לתוך טיפה של חיץ M9. השתמש עפעף כדי להפיץ את הנוזל.בעלי חיים מציגים תנועות מופחתות תוך שתי דקות בגלל ספיגת M9 לתוך הגר. לשנות את המיקום של nematode באמצעות פיק עפעף. מניחים את המדגם בעדשה אובייקטיבית 40H של מיקרוסקופ epifluorescent מבלי להשתמש בתעודת כיסוי.מיקוד ולכידה של תמונת ייחוס. פוטובלך אזור עניין ממוקד למשך 90 שניות. לכוד תמונה לאחר צילום.הוסף טיפת 10 מיקרוליטר של מאגר M9 על נמטודות פוטובלאק. תן לחיות להתאושש לחמש דקות. השתמש בבחירה עפעף או פיפטה כדי להעביר את nematodes לצלחות NGM בודדים זרע עם 20 microliters OP50 טיפה במרכז.לכוד תמונה של כל דגימה כל שעה תחת סטריאומיקרוסקופ אפיפלואורסצנטי. תולעים מוטנטיות מסוג Wild-type ו-fe-2 המבטאת GFP ציטופלסמי לאורך כל הרקמות סומטיות שלהם באמצעות מקדם fe-2 הושוו בעבר, מיד לאחר photobleaching, וחמש שעות לאחר ההחלמה. בעלי חיים מסוג בר החלימו לחלוטין בזמן שלמוטנטים FE-2 הייתה יכולת התאוששות מיני.לכן תולעים מסוג פראי ליזום את סינתזת החלבון הרגילה לאחר photobleaching, בעוד תולעים חסרות גורם חניכה תרגום mRNA fe-2 אינם מסוגלים לעשות זאת, המציין כי קצב ההתאוששות פלואורסצנטי ממחיש את קצב סינתזת החלבון ב vivo. Cycloheximide, מעכב ספציפי של תרגום mRNA יכול לשמש שליטה חיובית עבור עיכוב תרגום חלבון. ואכן, בעלי חיים מהופנטים שטופלו בציקלוהקסימיים המבטאים GFP ציטופלסמי תחת האמרגן אינם משחזרים את הפלואורסצנטיות שלהם עם הצילום.גופי עיבוד mRNA משפיעים על קצב תרגום החלבון. נמטודות מוטנטים מסוג Wild-type ו- edc-3 המבטאת GFP pan-neuronally נבדקו עבור יכולת ההחלמה שלהם על פוטובלאצ'ים ממוקדים באזור הראש. התאוששות פלואורסצנטית היא הרבה יותר איטית בבעלי חיים edc-3 לקוי בהשוואה תולעים מסוג בר.אפנון סינתזת חלבונים חיוני להונוסטזיס אורגניזם. במהלך ההזדקנות, סינתזת חלבונים גלובלית, כמו גם ספציפית, מוטרדת. איזון תרגום חלבונים שולט ישירות ברגישות ובהזדקנות.באופן ספציפי, רכיבי הליבה של מכונות התרגום, כמו גם P-body אינטראקציה רכיבים להאיץ את תהליך ההזדקנות. הפרעה של חניכת תרגום מאטת את ההזדקנות. לפיכך, מדידת שיעורי סינתזת החלבון העולמית על ידי FRAP היא קריאה ישירה של תהליך ההזדקנות.

Research

JoVE Journal

Biology

Assessment of de novo Protein Synthesis Rates in Caenorhabditis elegans

Osmotic Avoidance in Caenorhabditis elegans: Synaptic Function of Two Genes, Orthologues of Human NRXN1 and NLGN1, as Candidates for Autism

Osmotic Avoidance in Caenorhabditis elegans: Synaptic Function of Two Genes, Orthologues of Human NRXN1 and NLGN1, as Candidates for Autism

הימנעות אוסמוטי ב Caenorhabditis elegans: Synaptic פונקציה של שני גנים, Orthologues של האדם NRXN1 ו NLGN1, כמו מועמדים אוטיזם

Neurexins and neuroligins are cell adhesion molecules present in excitatory and inhibitory synapses, and they are required for correct neuron network ...

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

זמן לשגות מיקרוסקופית של העובר בשלב מוקדם Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans has often been used as a model system in studies of early developmental processes.  The transparency of the 
embryos, the genetic ...

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

בסיסי<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; שיטות: סנכרון תצפית

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has ...

Biochemical and High Throughput Microscopic Assessment of Fat Mass in Caenorhabditis Elegans

Biochemical and High Throughput Microscopic Assessment of Fat Mass in Caenorhabditis Elegans

הערכה ביוכימית ותפוקה גבוהה מיקרוסקופית של מסת שומן ב<em&gt; Elegans Caenorhabditis</em

The nematode C. elegans has emerged as an important  model for the study of conserved genetic pathways regulating fat metabolism as  it relates to human ...

Prostaglandin Extraction and Analysis in Caenorhabditis elegans

Prostaglandin Extraction and Analysis in Caenorhabditis elegans

הפקה וניתוח בפרוסטגלנדין<em&gt; Elegans Caenorhabditis</em

Caenorhabditis elegans is emerging as a powerful animal model to study the biology of lipids1-9. Prostaglandins are an important class of eicosanoids, ...

Protein WISDOM: A Workbench for In silico De novo Design of BioMolecules

Protein WISDOM: A Workbench for In silico De novo Design of BioMolecules

חוכמת חלבון: Workbench ל<em&gt; בסיליקון</em&gt;<em&gt; דה נובו</em&gt; עיצוב של ביומולקולות

The aim of de novo protein design is to find the amino acid sequences that will fold into a desired 3-dimensional structure with improvements in specific ...

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the ...

Methods to Study Changes in Inherent Protein Aggregation with Age in Caenorhabditis elegans

Methods to Study Changes in Inherent Protein Aggregation with Age in Caenorhabditis elegans

שיטות מחקר לשינויים הגלום צבירת חלבון עם הגיל ב Caenorhabditis elegans

In the last decades, the prevalence of neurodegenerative disorders, such as Alzheimer's disease (AD) and Parkinson's disease (PD), has grown. These ...

De Novo Generation of Somatic Stem Cells by YAP/TAZ

De Novo Generation of Somatic Stem Cells by YAP/TAZ

דה נובו דור בתאי גזע סומאטית מאת הפה/טאז

Here we present protocols to isolate primary differentiated cells and turn them into stem/progenitor cells (SCs) of the same lineage by transient ...

Detecting Protein Subcellular Localization by Green Fluorescence Protein Tagging and 4',6-Diamidino-2-phenylindole Staining in Caenorhabditis elegans