Name: assessment of de novo protein synthesis rates in caenorhabditis elegans
Uploaded: 2020-09-12T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessment of de novo Protein Synthesis Rates in Caenorhabditis elegans at JoVE.com

Chaniotakis M. ve Kounakis K.'ya video kaydı ve kurgusu için teşekkür ederiz. K.P., Yunanistan Araştırma ve İnovasyon Vakfı (HFRI) ve Araştırma ve Teknoloji Genel Sekreterliği'nin (GSRT) bir bağışı ile finanse edilmektedir. N.T. Avrupa Araştırma Konseyi (ERC – GA695190 – MANNA), Avrupa Komisyonu Çerçeve Programları ve Yunanistan Eğitim Bakanlığı'nın bağışları ile finanse edilmektedir.

NOT: Florofororlara hem transkripsiyonel hem de çevirifüzyonu çeşitli dokularda de novo protein çevirisini değerlendirmek için kullanılabilir. Protein sentezi oranları, sitoplazma, mitokondri ve nükleus7gibi farklı hücresel bölmelerde lokalize olan birden fazla protein ailesi için değerlendirilebilir. Aşağıdaki suşlar küresel ve nöronal protein sentezi oranlarını izlemek için kullanılır, N2; Ex[pife-2GFP, pRF4], ife-2(ok306); Ex</...

<ol>
	<li>Syntichaki, P., Troulinaki, K., Tavernarakis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=eIF4E+function+in+somatic+cells+modulates+ageing+in+Caenorhabditis+elegans.">eIF4E function in somatic cells modulates ageing in Caenorhabditis elegans.</a> Nature. 445 (7130), 922-926 (2007).</li><li>Charmpilas, N., Daskalaki, I., Papandreou, M. E., Tavernarakis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+synthesis+as+an+integral+quality+control+mechanism+during+ageing.">Protein synthesis as an integral quality control mechanism during ageing.</a> Ageing Research Reviews. 23, 75-89 (2015).</li><li>Li, G. W., Burkhardt, D., Gross, C., Weissman, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+absolute+protein+synthesis+rates+reveals+principles+underlying+allocation+of+cellular+resources.">Quantifying absolute protein synthesis rates reveals principles underlying allocation of cellular resources.</a> Cell. 157 (3), 624-635 (2014).</li><li>Dermit, M., Dodel, M., Mardakheh, F. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+monitoring+and+measurement+of+protein+translation+in+time+and+space.">Methods for monitoring and measurement of protein translation in time and space.</a> Molecular Biosystems. 13 (12), 2477-2488 (2017).</li><li>Iwasaki, S., Ingolia, N. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Growing+Toolbox+for+Protein+Synthesis+Studies.">The Growing Toolbox for Protein Synthesis Studies.</a> Trends in Biochemical Sciences. 42 (8), 612-624 (2017).</li><li>Corsi, A. K., Wightman, B., Chalfie, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Transparent+Window+into+Biology:+A+Primer+on+Caenorhabditis+elegans.">A Transparent Window into Biology: A Primer on Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 200 (2), 387-407 (2015).</li><li>Kourtis, N., Tavernarakis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-specific+monitoring+of+protein+synthesis+in+vivo.">Cell-specific monitoring of protein synthesis in vivo.</a> PLoS One. 4 (2), 4547 (2009).</li><li>Parker, R., Sheth, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=P+bodies+and+the+control+of+mRNA+translation+and+degradation.">P bodies and the control of mRNA translation and degradation.</a> Molecular Cell. 25 (5), 635-646 (2007).</li><li>Rieckher, M., Markaki, M., Princz, A., Schumacher, B., Tavernarakis, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintenance+of+Proteostasis+by+P+Body-Mediated+Regulation+of+eIF4E+Availability+during+Aging+in+Caenorhabditis+elegans.">Maintenance of Proteostasis by P Body-Mediated Regulation of eIF4E Availability during Aging in Caenorhabditis elegans.</a> Cell Reports. 25 (1), 199-211 (2018).</li><li>Reits, E. A., Neefjes, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+fixed+to+FRAP:+measuring+protein+mobility+and+activity+in+living+cells.">From fixed to FRAP: measuring protein mobility and activity in living cells.</a> Nature Cell Biology. 3 (6), 145-147 (2001).</li><li>Keith, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Graded+Proteasome+Dysfunction+in+Caenorhabditis+elegans+Activates+an+Adaptive+Response+Involving+the+Conserved+SKN-1+and+ELT-2+Transcription+Factors+and+the+Autophagy-Lysosome+Pathway.">Graded Proteasome Dysfunction in Caenorhabditis elegans Activates an Adaptive Response Involving the Conserved SKN-1 and ELT-2 Transcription Factors and the Autophagy-Lysosome Pathway.</a> PLoS Genetics. 12 (2), 1005823 (2016).</li><li>Kumsta, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+autophagy+receptor+p62/SQST-1+promotes+proteostasis+and+longevity+in+C.+elegans+by+inducing+autophagy.">The autophagy receptor p62/SQST-1 promotes proteostasis and longevity in C. elegans by inducing autophagy.</a> Nature Communications. 10 (1), 5648 (2019).</li><li>Gregersen, N., Bolund, L., Bross, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+misfolding,+aggregation,+and+degradation+in+disease.">Protein misfolding, aggregation, and degradation in disease.</a> Molecular Biotechnology. 31 (2), 141-150 (2005).</li></ol>

Protein sentezi modülasyonu organizmahomeostaziçin gereklidir. Yaşlanma sırasında, küresel yanı sıra spesifik protein sentezi tedirgin. Son çalışmalar protein çeviri dengesinin yaşlanmayı doğrudan kontrol ettiğini ve yaşlanmanın sadece yaşlanma sürecinin bir yan ürünü olmadığını ortaya koymaktadır. Özellikle, ökaryotik inisiyasyon faktörü 4E (eIF4E) gibi çeviri makinelerinin temel bileşenleri, çeviri başlatma sırasında mRNA kapamasını kolaylaştırır ve böylece kap-bağımlı pro...

Protein sentezi ve bozulma organizmahomestazis için gereklidir. Yaşa bağlı hastalıkların çok sayıda kusurlu protein üretimi 11tarafındanteşvik edilir ,2. Küresel protein çeviri oranlarını ölçmek için, ribozomal profilleme gibi biyokimyasal teknikler vardır, hangi ribozom korumalı mRNA parçalarıderin sıralama içeren ifade izlemek için yanı sıra yeni protein sentezi3. Bu yöntem, ribozomlara artan RNA ilişkisi mutlaka artan çeviri anlamına gelmez gibi, çeviri oranları dolaylı bir okuma olmanın yanı sıra, yüksek maliyet ve başlangıç malzeme büyük miktarda bir gereklilik gibi teknik dezavantajları vardır. Öte yandan, proteomik tabanlı yöntemler nabız metabolik profilleme ile doğrudan protein nicelliği için izin kitle spektrometresi analizi4,5. Ancak, bu kolayca in vivo kullanılamaz sınırlı zamansal çözünürlüğe sahip yarı-nicel bir yaklaşımdır. Ayrıca, proteinin etiketlenmesi ilgi hayvan /doku eşit olmayan dağıtılabilir. Daha da önemlisi, bu yöntemlerin her ikisi de dokuya özgü veya hücreye özgü protein çeviri oranlarındaki değişimleri tüm hayvanlarda veya dokularda gizleyebilirsiniz.
Caenorhabditis elegans çok sayıda yetiştirilebilir kolay kullanımlı bir model organizmadır6. Ayrıca, genetik amenability ve şeffaflık vivo canlı görüntüleme için izin verir. Bu protokol, fotobeyazrlama (FRAP) sonrası floresan geri kazanımını kullanarak protein sentezoranlarını saptamak için yapılan metodolojiyi açıklamaktadır. Floresan proteinlerin transgenik ekspresyonundan yararlanıyoruz, ya tüm organizmada ya da belirli dokularda/hücrelerde. Transgenik hayvanlar, yaygın olarak ifade edilen bir genin promoter'ı kullanarak GFP'yi ifade edebilir veya belirli hücre tiplerini hedeflemek için dokuya özgü bir organizatör olabilir. Bu teknik belirli bir proteinprotein sentez oranlarını incelemek için belirli bir organizatör genişletilebilir.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>5040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Biozym</td>
			<td>8,40,004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose pads 2%</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride dehydrate (CaCl2&#8729;2H2O)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C5080</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cholesterol</td>
			<td>SERVA Electrophoresis</td>
			<td>17101.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cycloheximide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C-7698</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting stereomicroscope</td>
			<td>Nikon Corporation</td>
			<td></td>
			<td>SMZ645</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>edc-3(ok1427);Ex[punc-119GFP, pRF4]</td>
			<td>Tavernarakis lab</td>
			<td></td>
			<td>Maintain animals at 20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epifluorescence microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>Axio Imager Z2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Escherichia coli OP50 strain</td>
			<td>Caenorhabditis Genetics Center (CGC)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence dissecting stereomicroscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>SteREO Lumar V12</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Greiner Petri dishes (60 x 15 mm)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5237</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ife-2(ok306);Ex[pife-2GFP, pRF4]</td>
			<td>Tavernarakis lab</td>
			<td></td>
			<td>Maintain animals at 20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>image analysis software</td>
			<td>Fiji</td>
			<td></td>
			<td>https://fiji.sc</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>1,37,010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K2HPO4</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>1,04,873</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB liquid medium</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M9 buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium sulfate (MgSO4)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M7506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope slides (75 x 25 x 1 mm)</td>
			<td>Marienfeld, Lauda-Koenigshofen</td>
			<td>10 006 12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsoft Office 2011 Excel software package</td>
			<td>Microsoft Corporation, Redmond, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2;Ex[pife-2GFP; pRF4]</td>
			<td>Tavernarakis lab</td>
			<td></td>
			<td>Maintain animals at 20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2;Ex[psod-3GFP; pRF4]</td>
			<td>Tavernarakis lab</td>
			<td></td>
			<td>Maintain animals at 20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2;Ex[punc-119GFP; pRF4]</td>
			<td>Tavernarakis lab</td>
			<td></td>
			<td>Maintain animals at 20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na2HPO4</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>1,06,586</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nematode growth medium (NGM) agar plates</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nystatin stock solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N3503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peptone</td>
			<td>BD, Bacto</td>
			<td>211677</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride (NaCl)</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>1,06,40,41,000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard equipment for preparing agar plates (autoclave, Petri dishes, etc.)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard equipment for maintaining worms (platinum wire pick, incubators, etc.).</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>statistical analysis software</td>
			<td>GraphPad Software Inc., San Diego, USA</td>
			<td></td>
			<td>GraphPad Prism software package</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptomycin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S6501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UV Crosslinker</td>
			<td>Vilber Lourmat BIO-LINK BLX 254</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Worm pick</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessment of de novo protein synthesis rates in caenorhabditis elegans

Sağlıklı bir proteom bakımı hücre ve organizmahomestaz için gereklidir. Protein çevirikontrolü ile bozulma arasındaki dengenin bozulması yaşa bağlı çok sayıda hastalığı teşvik eder. Proteostaz kalite kontrol mekanizmalarının azalması yaşlanmanın bir özelliğidir. De novo protein sentezini saptamak için biyokimyasal yöntemler hala sınırlıdır, çeşitli dezavantajları vardır ve canlı hücrelerde veya hayvanlarda yapılamaz. Caenorhabditis elegans, şeffaf ve kolayca genetiği değiştirilmiş olmak, görüntüleme teknikleri kullanarak protein sentezoranlarını izlemek için mükemmel bir modeldir. Burada, fotobleaching (FRAP) sonrası floresan kurtarma kullanarak vivo de novo protein sentezini ölçmek için bir yöntem tanıtmak ve tanımlamak. Belirli hücre veya dokularda floresan proteinleri ifade eden transgenik hayvanlar floresan fotobeyazrlama ile sonuçlanan güçlü bir ışık kaynağı tarafından ışınlanır. Buna karşılık, floresan kurtarma değerlendirilmesi hücre ve / veya ilgi dokularda yeni protein sentezi anlamına gelir. Bu nedenle, transgenik nematodların, genetik ve/veya farmakolojik müdahalelerin birleşimi ve protein sentezoranlarının canlı görüntülenmesi yaşa bağlı proteostazın çöküşüne aracılık eden mekanizmalara ışık tutabilir.

Burada sunulan prosedür kullanılarak, protein sentez oranlarını ilgili protokollere göre değerlendirmek için aşağıdaki somatik muhabirleri ifade eden yabani tip ve mutant transgenik nematodlar, pife-2GFP, psod-3GFP ve punc-119GFP kullanılmıştır. Özellikle ife-2 promotörü kullanılarak somatik dokularında sitoplazmik GFP ifade eden yabani tip ve ife-2 mutant solucanlar fotobeyaztlama dan ...

Watch this Scientific Journal Video about Assessment of de novo Protein Synthesis Rates in Caenorhabditis elegans at JoVE.com

Assessment of de novo Protein Synthesis Rates in Caenorhabditis elegans

Burada, de novo protein sentezini in vivo değerlendirmek için, fotobeyazrlama (FRAP) sonrası nematod Caenorhabditis elegans ve floresan kurtarma kullanan radyoaktif olmayan ve noninvaziv bir yöntem sınıyoruz ve tanımlıyoruz. Bu yöntem, protein sentezinin yeni modülatörlerini belirlemek için genetik ve/veya farmakolojik ekranlar ile kombine edilebilir.

Caenorhabditis elegans de novo Protein Sentez Oranlarının Değerlendirilmesi

Maintaining a healthy proteome is essential for cell and organismal homeostasis. Perturbation of the balance between protein translational control and ...

Protein sentezi oranı hastalık ve yaşlanma sırasında tedirgin. Fotobeyaztma veya FRAP sonrası floresan geri kazanımı, in vivo protein sentezi oranının ölçülmesine olanak sağlar. Biz fotobeyazrlama sonra yeni protein sentezini izlemek için bir model olarak, GFP ifade şeffaf C.elegans solucanlar kullanın.Yaygın olarak ifade edilen veya belirli hücre veya dokularda farklı organizatörler altında GFP ifade transgenik solucanlar kullanarak floresan iyileşmesini ölçmek için pratik kurallar salıyoruz. Ayrıca, bu yöntem gerçek zamanlı olarak protein sentezi hızı izleme sunuyor. Yabani tip ve mutant transgenik nematodların gelişim aşamalarını ve büyümesini değerlendirmek için bir diseksiyon stereomikroskop kullanın.E.coli ile tohumlanmış nematode büyüme medya plakaları üzerine istenilen floresan muhabiri taşıyan vahşi tip ve mutant transgenik hayvanların 10 L4 larvaseçin. Kuluçka ve 20 santigrat derece standart sıcaklıkta nematodlar büyümek. Dört gün sonra, plaka transgenik solucanların karışık bir popülasyon içerir.Taze tohumlu OP50 NGM plakalarında her bir suştan 15 Adet L4 larva seçin ve aktarın. FRAP tayini yapın ve yetişkinliğin ilk gününde protein sentezhızını izleyin. Ertesi gün, olumlu bir kontrol olarak siklohekamid içeren NGM plakaları hazırlamak ve kullanın.UV ışığı ile 15 dakika boyunca tohumlu NGM plakaları maruz bırakarak bakterileri öldürün. Agar hacminde mL son konsantrasyonbaşına çok 500 mikrogram bakteriyel tohumlu plakaların üstüne siklohekmid ekleyin. Tabakların kurumasını bekleyin.Araç ve siklohekmid içeren plakalarda GFP ifade eden transgenik nematodların transferi. Hayvanları standart sıcaklıkta 20 santigrat dereceye kadar iki saat kuluçkaya yatırın. Bir günlük yetişkin transgenik hayvanları, merkezde 20 mikrolitre OP50 damlaile tohumlanmış tek tek NGM plakalarına toplayıp aktarın.Kapağı çıkarın ve her plakayı epifloresan mikroskobun 20H objektif lensin altına yerleştirin. Fotobeyaztlamadan önce bir referans görüntüsünü odaklayın ve yakalayın. Photobleach her örnek için 10 dakika.Fotobeyaztlama dan sonra bir görüntü yakalayın. Hayvanları tek tek NGM plakalarında tutun ve onları kurtarın. Epifloresan stereomikroskopta en az altı saat boyunca her floresan muhabirin iyileşmesini en az altı saat boyunca görüntüleyin ve kaydedin.Hazırlamak 2% agarose pedleri, ve agarose ped merkezinde M9 tampon 10 mikrolitre damla ekleyin. Pan-nöronal sitoplazmik GFP'yi ifade eden beş transgenik nematodun bir damla M9 tamponuna aktarılması. Sıvı yaymak için bir kirpik kullanın.Hayvanlar agar içine M9 absorbance nedeniyle iki dakika içinde azaltılmış hareketleri görüntüler. Kirpik çekme kullanarak nematodun konumunu değiştirin. Numuneyi kapak fişi kullanmadan epifloresan mikroskobun 40H objektifine yerleştirin.Bir referans görüntüsünü odaklayın ve yakalayın. Photobleach 90 saniye için ilgi hedeflenen bir alan. Fotobeyaztlama dan sonra bir görüntü yakalayın.Fotobeyaztlanmış nematodlara 10 mikrolitre lik m9 tamponu ekleyin. Hayvanların beş dakika lığına iyileşmesine izin verin. Nematodları merkezde 20 mikrolitre OP50 damla ile tohumlanmış tek tek NGM plakaları aktarmak için kirpik aşur veya bir pipet kullanın.Epifloresan stereomikroskop altında her bir saat içinde her numunenin bir görüntüsünü yakalayın. Fe-2 promotörü kullanılarak somatik dokuları boyunca sitoplazmik GFP ifade eden yabani tip ve fe-2 mutant solucanlar önce karşılaştırıldı, fotobeyazrlama hemen sonra, ve beş saat sonrası kurtarma. Fe-2 mutantları minis kurtarma kapasitesine sahip ken vahşi tip hayvanlar tamamen kurtarıldı.Böylece yabani tip solucanlar fotobeyazlatma sonrası normal protein sentezini başlatırken, mRNA çeviri başlatma faktörü fe-2'den yoksun solucanlar bunu yapamazlar ve floresan iyileşme oranının in vivo protein sentezoranını gösterdiğini gösterir. Siklohekmid, mRNA çevirispesifik bir inhibitörü protein çeviri inhibisyonu için pozitif bir kontrol olarak kullanılabilir. Gerçekten de, sitoplazmik GFP'yi promotör altında ifade eden siklohekamid ile tedavi edilen transgenik hayvanlar fotobeyaztlama üzerine floresanlarını geri kazanamazlar.mRNA işleme organları protein çevirisi oranını etkiler. GFP pan-nöronsal olarak ifade eden yabani tip ve edc-3 mutant nematodlar, baş bölgesinde hedeflenen fotobeyaztlama sırasında iyileşme kapasiteleri incelendi. Floresan geri kazanımı, edc-3-eksikliği olan hayvanlarda yabani solucanlara göre çok daha yavaştır.Protein sentezi modülasyonu organizmahomeostaziçin gereklidir. Yaşlanma sırasında, küresel yanı sıra spesifik protein sentezi tedirgin. Protein çeviri dengesi doğrudan yaşlanmayı ve yaşlanmayı kontrol eder.Özellikle, çeviri makinelerinin temel bileşenleri ve P-vücut etkileşen bileşenleri yaşlanma sürecini hızlandırır. Çeviri nin algılanması yaşlanmayı uzatır. Bu nedenle, FRAP ile küresel protein sentezi oranlarının ölçülmesi yaşlanma sürecinin doğrudan bir okumasidır.

Research

JoVE Journal

Biology

Assessment of de novo Protein Synthesis Rates in Caenorhabditis elegans

Osmotic Avoidance in Caenorhabditis elegans: Synaptic Function of Two Genes, Orthologues of Human NRXN1 and NLGN1, as Candidates for Autism

Osmotic Avoidance in Caenorhabditis elegans: Synaptic Function of Two Genes, Orthologues of Human NRXN1 and NLGN1, as Candidates for Autism

Osmotik Kaçınma IN Caenorhabditis elegans: İki Genler Synaptic Fonksiyonu, İnsan Orthologues NRXN1 Ve NLGN1</emOtizm> olarak Adaylar

Neurexins and neuroligins are cell adhesion molecules present in excitatory and inhibitory synapses, and they are required for correct neuron network ...

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Erken Embriyo Oluşumu Zaman atlamalı Mikroskopi Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans has often been used as a model system in studies of early developmental processes.  The transparency of the 
embryos, the genetic ...

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Temel<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; Yöntem: Senkronizasyon ve Gözlem

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has ...

Biochemical and High Throughput Microscopic Assessment of Fat Mass in Caenorhabditis Elegans

Biochemical and High Throughput Microscopic Assessment of Fat Mass in Caenorhabditis Elegans

Fat Kütle Biyokimyasal ve Yüksek Verimli Mikroskobik Değerlendirme<em&gt; Caenorhabditis Elegans</em

The nematode C. elegans has emerged as an important  model for the study of conserved genetic pathways regulating fat metabolism as  it relates to human ...

Prostaglandin Extraction and Analysis in Caenorhabditis elegans

Prostaglandin Extraction and Analysis in Caenorhabditis elegans

Prostaglandin Ekstraksiyon ve Analiz<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Caenorhabditis elegans is emerging as a powerful animal model to study the biology of lipids1-9. Prostaglandins are an important class of eicosanoids, ...

Protein WISDOM: A Workbench for In silico De novo Design of BioMolecules

Protein WISDOM: A Workbench for In silico De novo Design of BioMolecules

Protein AKIL: A Tezgahı<em&gt; Siliko olarak</em&gt;<em&gt; De novo</emBiyomoleküllerin&gt; Tasarım

The aim of de novo protein design is to find the amino acid sequences that will fold into a desired 3-dimensional structure with improvements in specific ...

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the ...

Methods to Study Changes in Inherent Protein Aggregation with Age in Caenorhabditis elegans

Methods to Study Changes in Inherent Protein Aggregation with Age in Caenorhabditis elegans

Yöntemleri ile Caenorhabditis elegans çağda doğal Protein toplama çalışma değişikliklere

In the last decades, the prevalence of neurodegenerative disorders, such as Alzheimer's disease (AD) and Parkinson's disease (PD), has grown. These ...

De Novo Generation of Somatic Stem Cells by YAP/TAZ

De Novo Generation of Somatic Stem Cells by YAP/TAZ

De Novo Somatik kök hücreleri tarafından YAP/TAZ nesil

Here we present protocols to isolate primary differentiated cells and turn them into stem/progenitor cells (SCs) of the same lineage by transient ...

Detecting Protein Subcellular Localization by Green Fluorescence Protein Tagging and 4',6-Diamidino-2-phenylindole Staining in Caenorhabditis elegans

Detecting Protein Subcellular Localization by Green Fluorescence Protein Tagging and 4',6-Diamidino-2-phenylindole Staining in Caenorhabditis elegans

Protein hücre altı yerelleştirme yeşil floresans Protein etiketleme ve 4', 6-Diamidino-2-phenylindole Caenorhabditis elegans içinde boyama tarafından tespit