Name: in vivo targeting of neural progenitor cells in ferret neocortex by in utero electroporation
Uploaded: 2020-05-06T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Targeting of Neural Progenitor Cells in Ferret Neocortex by In Utero Electroporation at JoVE.com

We zijn de diensten en faciliteiten van het Max Planck Instituut voor Moleculaire Celbiologie en Genetica dankbaar voor de uitstekende ondersteuning, met name het hele team van de Biomedische diensten (BMS) voor de uitstekende veeteelt van fretten en J. Peychl en zijn team van de Light Microscopie Facility. We zijn Katrin Reppe en Anna Pfeffer van het BMS bijzonder dankbaar voor uitzonderlijke veterinaire ondersteuning en Lei Xing van de Huttner-groep voor het assisteren bij fretoperaties.

Alle experimentele procedures werden uitgevoerd in overeenstemming met de Duitse dierenwelzijnswetgeving na goedkeuring door de Landesdirektion Sachsen (licenties TVV 2/2015 en TVV 21/2017).
1. Voorbereiding op utero-elektroporatie
<ol><li>Bereid het DNA-mengsel voor. In dit protocol wordt een uiteindelijke concentratie van 1 μg/μL pGFP gebruikt. Los DNA op in PBS en vul aan met 0,1% Fast Green om visualisatie te vergemakkelijken. Eenmaal bereid, meng het DNA-mengsel door pipetten op en ne...

In utero elektroporatie in fret is een belangrijke techniek, met voor- en nadelen met betrekking tot andere methoden. Er zijn kritieke stappen en beperkingen aan deze methode, evenals mogelijke wijzigingen en toekomstige toepassingen om in gedachten te houden.
Sinds het pionierswerk van Victor Borrell en collega's over genetische manipulatie van de postnatale fret neocortex via elektroporatie of virale injectie35,42,<sup cla...

De neocortex is het buitenste blad van de zoogdiercerebrum en de zetel van hogere cognitieve functies1,2,3,4,5. Om een acute genetische manipulatie in de zoogdiernetrocortex in vivo te bereiken tijdens de embryonale ontwikkeling, zijn twee verschillende methoden onderzocht: virale infectie6 en in utero elektroporatie7. Beide methoden maken efficiënte targeting van neocorticale cellen mogelijk, maar hebben last van enkele beperkingen. Het grote voordeel van in utero elektroporatie in vergelijking met virale infectie is het vermogen om ruimtelijke specificiteit te bereiken binnen de neocortex, die wordt bereikt door het reguleren van de richting van het elektrische veld.
Sinds elektroporatie voor het eerst werd aangetoond dat het de binnenkomst van DNA in de cellen in vitro8vergemakkelijkt, is het toegepast om DNA te leveren in verschillende gewervelde dieren in vivo. In de ontwikkelingsneurowetenschappen werd in utero-elektroporatie van de muis neocortex voor het eerst gemeld in 20019,10. Deze methode bestaat uit een injectie van het DNA-mengsel in de laterale ventrikel van de embryonale hersenen en de daaropvolgende toepassing van het elektrische veld met behulp van pincet-elektroden, die ruimtelijke precisie7,11mogelijk maakt . In utero elektroporatie is sindsdien toegepast om nucleïnezuren te leveren om de expressie van endogene of ectopisch toegevoegde genen in de muis neocortex te manipuleren. Belangrijke vooruitgang is onlangs geboekt door de toepassing van de methodologie van CRISPR/ Cas9-gemedieerde genoombewerking via in utero elektroporatie in de muis neocortex uit te voeren (1) genverstoring in postmitotische neuronen12,,13 en neurale voorloper cellen14, en (2) genoom15 en epigenome16 bewerken.
Zeer snel na het eerste rapport in de muis, in utero elektroporatie werd toegepast op de embryonale rat neocortex17,18. Niet-knaagdieren bleven een uitdaging tot de eerste in utero elektroporatie van fretten, een kleine carnivoor, werd gemeld in 201219,20. Sindsdien is in utero elektroporatie van fretten toegepast om de mechanismen van neocortexontwikkeling te bestuderen door neurale voorlopers en neuronen20,21 ,22,2223,te manipuleren, waarbij de expressie van endogene genen wordt gemanipuleerd, inclusief het gebruik van CRISPR/Cas9-technologie24, en door ectopische genen te leveren21,22,25, inclusief mensspecifieke genen26. Bovendien is in utero-elektroporatie van fretten gebruikt om kenmerken van de ontwikkeling van menselijke neocortex in pathologische omstandigheden27,28aan te pakken .
In de context van de ontwikkeling van neocortex zijn de voordelen van het gebruik van fretten als modelorganisme ten opzichte van muizen te wijten aan het feit dat fretten een reeks menselijke kenmerken beter samenvatten. Op anatomisch niveau vertonen fretten een karakteristiek patroon van corticale vouwen, dat ook aanwezig is in menselijke en meeste andere primaten, maar volledig afwezig is bij muizen of ratten4,29,30,31. Op histologisch niveau hebben fretten twee verschillende subventriculaire kiminale zones, aangeduid als de binnenste en buitenste subventriculaire zones (respectievelijk ISVZ en OSVZ)32,33, gescheiden door de binnenste vezellaag23. Deze functies worden ook gedeeld met primaten, waaronder mensen, maar niet met muizen34. De ISVZ en OSVZ in fretten en mensen zijn bevolkt met overvloedige neurale voorlopercellen, terwijl de subventriculaire zone (SVZ) van muizen bevat slechts schaarse neurale voorlopers21,32,35,36. Op cellulair niveau vertonen fretten een groot deel van een subtype neurale voorlopers die respectievelijk basale of buitenste radialeglia (bRG of oRG) worden genoemd, die als instrumenteel worden beschouwd voor de evolutionaire expansie van de zoogdiernecitator34,37,38. bRG zijn dus zeer overvloedig in de foetale menselijke en embryonale fret neocortex, maar ze zijn zeer zeldzaam in de embryonale muis neocortex35,36. Bovendien vertoont ferret bRG morfologische heterogeniteit vergelijkbaar met die van de menselijke bRG, veel beter dan muis bRG21. Ten slotte vertoont de ontwikkeling van fret neocortex op moleculair niveau genexpressiepatronen die sterk lijken op die van foetale menselijke neocortex, waarvan wordt aangenomen dat ze de ontwikkeling van corticale vouwen controleren, onder andere39.
De cel biologische en moleculaire kenmerken van fret bRG maken ze zeer proliferative, vergelijkbaar met de menselijke bRG. Dit resulteert in een verhoogde productie van neuronen en de ontwikkeling van een uitgebreide en zeer complexe neocortex34. Deze kenmerken maken fretten uitstekend model organismen voor het bestuderen van mens-achtige kenmerken van neocortex ontwikkeling die niet kunnen worden gemodelleerd in muizen26,40. Om optimaal gebruik te maken van de fret als modelorganisme werd de gepresenteerde methode ontwikkeld. Het bestaat uit in utero elektroporatie van E33 fret embryo's met een plasmide uitdrukken GFP (pGFP) onder de controle van een alomtegenwoordige promotor, CAG. De geëlektreerde embryo's kunnen vervolgens embryonaal of postnatally worden geanalyseerd. Om het aantal geofferde dieren te verminderen, worden vrouwelijke fretten (jills) gesteriliseerd door hysterectomie en gedoneerd voor adoptie als huisdier. Als de beoogde embryo's in embryonale stadia worden geoogst, wordt een tweede operatie uitgevoerd en worden de embryo's verwijderd door een keizersnede, terwijl de jills hysterectomized zijn. Als de beoogde embryo's worden geanalyseerd in postnatale stadia, worden de jills hysterectomized nadat de pups zijn gespeend of geofferd. Daarom wordt ook een protocol gepresenteerd voor de hysterectomie van jills.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1ml syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309628</td>
			<td>Electroporation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 Vicryl suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>V392ZG</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aluminium spray</td>
			<td>cp-pharma</td>
			<td>98017</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amoxicilin+clavulanic acid (Synulox RTU)</td>
			<td>WDT</td>
			<td>6301</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cappilary holder</td>
			<td>WPI</td>
			<td>MPH6S12</td>
			<td>Electroporation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dexpanthenol Ointment solution</td>
			<td>Bayer</td>
			<td>6029009.00.00</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drape sheet 45x75cm</td>
			<td>Hartmann</td>
			<td>2513052</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrode Tweezer, platinum plated 5mm</td>
			<td>BTX</td>
			<td>45-0489</td>
			<td>Electroporation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electroporator</td>
			<td>BTX</td>
			<td>ECM830</td>
			<td>Electroporation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast Green</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F7258-25G</td>
			<td>Electroporation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ferret Mustela putorius furo</td>
			<td>Marshall</td>
			<td>NA</td>
			<td>Experimental organism</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiber optic light source</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>KL1500LCD</td>
			<td>Electroporation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>Allgaier instrumente</td>
			<td>08-033-130</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps 3C-SA</td>
			<td>Rubis Tech</td>
			<td>3C-SA</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps 55</td>
			<td>Dumostar</td>
			<td>11295-51</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps 5-SA</td>
			<td>Rubis Tech</td>
			<td>5-SA</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze swabs large</td>
			<td>Hartmann</td>
			<td>401723</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze swabs small</td>
			<td>Hartmann</td>
			<td>401721</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GFAP antibody</td>
			<td>Dako</td>
			<td>Z0334</td>
			<td>Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GFP antibody</td>
			<td>Aves labs</td>
			<td>GFP1020</td>
			<td>Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass cappilaries (Borosilicate glass with filament, OD:1.2mm, ID: 0.69mm, 10cm length)</td>
			<td>Sutter Instrument</td>
			<td>BF120-69-10</td>
			<td>Electroporation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Bela-pharm</td>
			<td>K4011-02</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat pad</td>
			<td>Hans Dinslage</td>
			<td>Sanitas SHK18</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodine (Betadine solution 100 mg/ml)</td>
			<td>Meda</td>
			<td>997437</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isofluran</td>
			<td>CP</td>
			<td>21311</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Loading tips 20&#181;l</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>#5242 956.003</td>
			<td>Electroporation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metamizol</td>
			<td>WDT</td>
			<td>99012</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metzenbaum dissecting scissors</td>
			<td>Aesculap</td>
			<td>BC600R</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette puller</td>
			<td>Sutter Instrument</td>
			<td>Model P-97</td>
			<td>Electroporation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pCAGGS-GFP</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td>From Kalebic et al., eLife, 2018</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCNA antibody</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>CBL407</td>
			<td>Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pH3 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab10543</td>
			<td>Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>Aesculap</td>
			<td>294200104</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaver</td>
			<td>Braun</td>
			<td>EP100</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sox2 antibody</td>
			<td>R+D Systems</td>
			<td>AF2018</td>
			<td>Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical clamp 13cm</td>
			<td>WDT</td>
			<td>27080</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical double spoon (Williger)</td>
			<td>WDT</td>
			<td>27232</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical drape</td>
			<td>WDT</td>
			<td>28800</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors small</td>
			<td>FST</td>
			<td>14090-09</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suturing needle holder</td>
			<td>Aesculap</td>
			<td>BM149R</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tbr2 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab23345</td>
			<td>Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer pipette 3ml</td>
			<td>Fischer scientific</td>
			<td>13439108</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water bath</td>
			<td>Julabo</td>
			<td>TW2</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo targeting of neural progenitor cells in ferret neocortex by in utero electroporation

Manipulatie van genexpressie in vivo tijdens de embryonale ontwikkeling is de methode van keuze bij het analyseren van de rol van individuele genen tijdens de ontwikkeling van zoogdieren. In utero elektroporatie is een belangrijke techniek voor de manipulatie van genexpressie in de embryonale zoogdier hersenen in vivo. Hier wordt een protocol gepresenteerd voor in utero elektroporatie van de embryonale neocortex van fretten, een kleine carnivoor. De fret wordt steeds vaker gebruikt als een model voor neocortex ontwikkeling, omdat de neocortex vertoont een reeks van anatomische, histologische, cellulaire, en moleculaire kenmerken die ook aanwezig zijn in menselijke en niet-menselijke primaten, maar afwezig in knaagdier modellen, zoals muis of rat. In utero elektroporatie werd uitgevoerd op embryonale dag (E) 33, een midneurogenese stadium in fret. In utero elektroporatie richt neurale voorloper cellen langs de laterale ventrikels van de hersenen. Tijdens neurogenese, deze voorloper cellen aanleiding geven tot alle andere neurale celtypes. Dit werk toont representatieve resultaten en analyses op E37, postnatale dag (P) 1 en P16, wat overeenkomt met respectievelijk 4, 9 en 24 dagen na utero-elektroporatie. In eerdere stadia bestaat het nageslacht van gerichte cellen voornamelijk uit verschillende neurale voorloper subtypes, terwijl in latere stadia de meeste gelabelde cellen postmitotische neuronen zijn. Dus, in utero elektroporatie maakt de studie van het effect van genetische manipulatie op de cellulaire en moleculaire kenmerken van verschillende soorten neurale cellen. Door het effect ervan op verschillende celpopulaties, in utero elektroporatie kan ook worden gebruikt voor de manipulatie van histologische en anatomische kenmerken van de fret neocortex. Belangrijk is dat al deze effecten acuut zijn en worden uitgevoerd met een spatiotemporale specificiteit bepaald door de gebruiker.

In utero elektroporatie van fretten op E33 resulteerde in targeting van de neurale voorloper cellen langs het ventriculaire oppervlak van de embryonale neocortex (Figuur 1). Deze cellen worden apicale voorlopers genoemd en zijn zeer proliferative, wat aanleiding geeft tot alle andere celtypen tijdens de ontwikkeling. Bij asymmetrische verdeling, apicale voorlopers gegenereerd een andere apicale voorloper en een meer gedifferentieerde cel, meestal een basale voorloper (BP), die gedelamineerd ...

Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Targeting of Neural Progenitor Cells in Ferret Neocortex by In Utero Electroporation at JoVE.com

In Vivo Targeting of Neural Progenitor Cells in Ferret Neocortex by In Utero Electroporation

Hier gepresenteerd is een protocol om genetische manipulatie uit te voeren in de embryonale fret hersenen met behulp van in utero elektroporatie. Deze methode maakt het mogelijk om neurale voorlopercellen in de neocortex in vivo te targeten.

In Vivo Targeting of Neural Progenitor Cells in Ferret Neocortex door In Utero Electroporation

Manipulation of gene expression in vivo during embryonic development is the method of choice when analyzing the role of individual genes during mammalian ...

Dit protocol stelt ons in staat om een genetische manipulatie in vivo uit te voeren in een belangrijk diermodel dat ons in staat stelt om de expansie en vouwen van een zich ontwikkelende neocortex te bestuderen. Het belangrijkste voordeel van deze methode is in het gebruik van hoge ruimtelijke en temporele specificiteit in het richten van die neurale stamcellen die de belangrijkste cel type voor de ontwikkeling van de hersenen. Trek vóór het begin van de procedure glazen haarvaten aan een micropipettrekker en gebruik tangen om het distale deel van de haarvaten af te snijden om de diameter van de haarvatenpunt aan te passen.Voeg op embryonale dag 33 de juiste concentratie DNA toe in PBS, aangevuld met 0,1%Fast Green met zachte menging, en plaats een 3 uur durende vastende, verdoofde, zwangere vrouwelijke fret op een operatietafel met een warmtekussen. Bevestig het juiste sedatieniveau door de perioculaire huid aan te raken en de huid tussen de tweede en derde of derde en vierde tenen van beide achterpoten te knijpen. Isoflurane kan bijwerkingen veroorzaken, waaronder misselijkheid en duizeligheid.Gebruik bij het hanteren van isoflur in vloeibare vorm de beschermingsmiddelen. Gebruik tijdens de operatie de juiste bussen om het gas op te vangen. Injecteer het dier onderhuids met pijnstillend, antibioticum en glucose, en plaats zalf op de ogen van het dier.Gebruik tondeuse om de buik te scheren, en maak de blootgestelde huid schoon met een water-, zeep- en jodiumoplossing. Droog vervolgens de huid met gaastentjes en ontsmet met alcohol- en jodiumscrubs. Voor in utero elektroporatie, plaats een steriele gordijnen over het dier en gebruik een scalpel om een ongeveer 5-centimeter huid incisie te maken op de linea alba.Gebruik een schaar om door de spierlaag te snijden en gaastentjes rond de incisieplaats te plaatsen. Maak het gaas met PBS nat en plaats de baarmoeder op de wattenstaafjes. Met behulp van een pipet met een lange punt, laad een van de getrokken glazen haarvaten met 5 microliter DNA-oplossing per te injecteren embryo.Bevestig de geladen capillaire aan een houder en sluit de andere kant van de houder aan op een buis en een mondstuk. Zoek het hoofd van het eerste embryo en plaats een glasvezellichtbron naast het hoofd. Met behulp van de gepigmenteerde iris als referentiepunt, penetreren de huid, schedel, en hersenweefsel met de punt van het glas capillaire en gebruik mond pipetting om de levering van 3-5 microliter van de injectieoplossing in de ventrikel van een van de hersenhelften te vergemakkelijken.Omdat de geïnjecteerde oplossing 0,1% Fast Green bevat, zal een succesvolle injectie resulteren in een donkergroene kleuring van de geïnjecteerde ventrikel, die nu zichtbaar zal zijn als een niervormige structuur. Na de injectie plaatst u de pincet-elektroden op de baarmoeder boven het hoofd van het embryo met de positieve pool boven het te richten gebied en de negatieve pool onder het geïnjecteerde gebied. Stel de pulslengte van de elektroporaat in op 50 milliseconden, de pulsspanning op 100 volt, het pulsinterval op één seconde en het aantal pulsen op vijf.Wanneer alle parameters zijn ingesteld, drukt u op Pulse en laat u snel enkele druppels warme PBS op het geëlektreerde embryo vallen. Wanneer alle embryo's zijn geëlektrooeerd, breng de baarmoeder terug naar de buikholte en gebruik een 4-0 hechting om de spierlaag met het buikvlies te sluiten. Sluit de huid op een vergelijkbare manier en bedek de wond met aluminiumspray.Breng het dier vervolgens terug naar zijn kooi met een warmtebron en controle tot volledige recumbency. Vier dagen na elektroporatie op embryonale dag 37 bevinden de meeste beoogde cellen en hun nakomelingen zich nog steeds in de kiemzones en worden de cellen zelden meer basaal waargenomen binnen de corticale plaat. De voorvaderidentiteit kan worden onderzocht door immunofluoresence voor markers van fietscellen, zoals PCNA, terwijl een subset van voorouders die mitose ondergaan kan worden aangetoond door markers zoals fosfo-histone 3.Bij postnatale dag nul, acht dagen na elektroporatie, verspreidde het nageslacht van de beoogde cellen zich naar alle histologische lagen. Met behulp van een combinatie van transcriptie factor markers, verschillende basale voorloper populaties kunnen worden onthuld. Sox2 is bijvoorbeeld een marker van proliferative voorlopercellen, waaronder basale radiale glia.En T-box brain protein 2 is een marker van neurogene basale voorouders, die voornamelijk tussenliggende voorouders zijn. Door postnatale dag 16, een meerderheid van de beoogde cellen stoppen met verdelen en differentiëren in neuronen en glia, met fret post-natale dag 16 neocortex vertonen van de karakteristieke vouwpatroon. De in utero elektroporatie van fret embryo's is een uiterst krachtige methode om de functie van genen te bestuderen.Het heeft ons in staat gesteld om genen te bestuderen die betrokken zijn geweest bij de expansie van de neocortex in de evolutie, inclusief mensspecifieke genen. En met behulp van deze krachtige methode, hebben we inderdaad in staat geweest om erachter te komen belangrijke kenmerken van hoe de evolutionaire expansie van de menselijke neocortex waarschijnlijk werkte.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Combining Behavioral Endocrinology and Experimental Economics: Testosterone and Social Decision Making

De combinatie van Behavioral Endocrinologie en Experimentele Economie: Testosteron en Sociaal Decision Making

Behavioral endocrinological research in humans as well as in animals suggests that testosterone plays a key role in social interactions. Studies in ...

In utero Electroporation followed by Primary Neuronal Culture for Studying Gene Function in Subset of Cortical Neurons

In utero Electroporation followed by Primary Neuronal Culture for Studying Gene Function in Subset of Cortical Neurons

In utero Elektroporatie gevolgd door primaire neuronale Cultuur voor het bestuderen van Gene Functie in subset van de corticale neuronen

In vitro study of primary neuronal cultures allows for quantitative analyses of neurite outgrowth. In order to study how genetic alterations affect ...

Time-lapse Live Imaging of Clonally Related Neural Progenitor Cells in the Developing Zebrafish Forebrain

Time-lapse Live-Imaging van klonaal verwante neurale progenitorcellen in de ontwikkelingslanden zebravis voorhersenen

Precise patterns of division, migration and differentiation of neural progenitor cells are crucial for proper brain development and function1,2. To ...

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

Transfectie van Mouse retinale ganglioncellen door In vivo Elektroporatie

The targeting and refinement of RGC projections to the midbrain is a popular and powerful model system for studying how precise patterns of neural ...

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell imaging van zintuig voorloper cellen in Intact Drosophila Poppen

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Mouse in Utero Electroporation: Controlled Spatiotemporal Gene Transfection

Mouse in Utero Electroporation: Controlled Spatiotemporal Gene Transfection

Muis In Utero Elektroporatie: Gecontroleerde spatiotemporele Gene Transfectie

In order to understand the function of genes expressed in specific region of the developing brain, including signaling molecules and axon guidance ...

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

Functionele neuroimaging Met behulp van ultrasone bloed-hersen barrière verstoring en mangaan-enhanced MRI

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

Expansion of Embryonic and Adult Neural Stem Cells by In Utero Electroporation or Viral Stereotaxic Injection

Expansion of Embryonic and Adult Neural Stem Cells by In Utero Electroporation or Viral Stereotaxic Injection

Uitbreiding van embryonale en adulte neurale stamcellen door<em&gt; In Utero</em&gt; Electroporation of Viral stereotactische injectie

Somatic stem cells can divide to generate additional stem cells (expansion) or more differentiated cell types (differentiation), which is fundamental for ...

Generation of Topically Transgenic Rats by In utero Electroporation and In vivo Bioluminescence Screening

Generation of Topically Transgenic Rats by In utero Electroporation and In vivo Bioluminescence Screening

Generatie Topisch transgene Rats door<em&gt; In de baarmoeder</em&gt; Elektroporatie en<em&gt; In vivo</em&gt; Bioluminescence Screening

 In utero electroporation (IUE) is a technique which allows genetic modification of cells in the brain for investigating neuronal development. So far, the ...

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

Simultaan<em&gt; Ex vivo</em&gt; Functioneel testen van Two netvliezen door<em&gt; In vivo</em&gt; Elektroretinogram System

An In vivo electroretinogram (ERG) signal is composed of several overlapping components originating from different retinal cell types, as well as noise ...