Name: in vivo targeting of neural progenitor cells in ferret neocortex by in utero electroporation
Uploaded: 2020-05-06T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Targeting of Neural Progenitor Cells in Ferret Neocortex by In Utero Electroporation at JoVE.com

Wir danken den Dienstleistungen und Einrichtungen des Max-Planck-Instituts für Molekulare Zellbiologie und Genetik für die hervorragende Unterstützung, insbesondere dem gesamten Team des Biomedizinischen Dienstes (BMS) für die hervorragende Frettchenhaltung und J. Peychl und seinem Team der Lichtmikroskopieanlage. Besonders dankbar sind wir Katrin Reppe und Anna Pfeffer vom BMS für die außergewöhnliche tierärztliche Unterstützung und Lei Xing von der Huttner-Gruppe für die Unterstützung bei Frettchenoperationen.

Alle Versuchsverfahren wurden nach Genehmigung durch die Landesdirektion Sachsen (Lizenzen TVV 2/2015 und TVV 21/2017) in Absprache mit dem Tierschutzgesetz durchgeführt.
1. Vorbereitung für die in utero Elektroporation
<ol><li>Bereiten Sie die DNA-Mischung vor. In diesem Protokoll wird eine Endkonzentration von 1 g/l pGFP verwendet. Lösen Sie DNA in PBS und ergänzen Sie mit 0,1% Fast Green, um die Visualisierung zu erleichtern. Nach der Vorbereitung die DNA-Mischung mischen, indem Sie m...

In der Utero-Elektroporation in Frettchen ist eine wichtige Technik, mit Vor- und Nachteilen gegenüber anderen Methoden. Es gibt wichtige Schritte und Einschränkungen für diese Methode, sowie mögliche Änderungen und zukünftige Anwendungen zu beachten.
Seit der Pionierarbeit von Victor Borrell und Kollegen zur genetischen Manipulation des postnatalen Frettchenneocortex mittels Elektroporation oder Virusinjektion35,42,<s...

Der Neocortex ist das äußere Blatt des Säugetier-Großhirns und der Sitz der höheren kognitiven Funktionen1,2,3,4,5. Um eine akute genetische Manipulation des Säugetierneocortex in vivo während der embryonalen Entwicklung zu erreichen, wurden zwei verschiedene Methoden untersucht: Virusinfektion6 und utero Elektroporation7. Beide Methoden ermöglichen eine effiziente Ausrichtung auf neokortikale Zellen, leiden aber unter einigen Einschränkungen. Der hauptvorteil der Utero-Elektroporation im Vergleich zur Virusinfektion ist die Fähigkeit, räumliche Spezifität innerhalb des Neocortex zu erreichen, die durch die Regulierung der Richtung des elektrischen Feldes erreicht wird.
Da die Elektroporation erstmals gezeigt wurde, um den Eintrag von DNA in die Zellen in vitro8zu erleichtern, wurde sie angewendet, um DNA in verschiedenen Wirbeltieren in vivo zu liefern. In der Entwicklungsneurowissenschaft wurde in der Utero-Elektroporation der Maus Neocortex erstmals 2001 berichtet9,10. Dieses Verfahren besteht aus einer Injektion des DNA-Gemischs in den seitlichen Ventrikel des embryonalen Gehirns und der anschließenden Anwendung des elektrischen Feldes mit Pinzettenelektroden, die räumliche Präzision7,11ermöglicht. In der Gebärmutter wurde seitdem die Elektroporation angewendet, um Nukleinsäuren zu liefern, um die Expression endogener oder ektopisch zugesetzter Gene im Mausneocortex zu manipulieren. Wichtige Fortschritte wurden in letzter Zeit durch die Anwendung der Methodik der CRISPR/Cas9-vermittelten Genombearbeitung über die Utero-Elektroporation im Maus-Neocortex erzielt, um (1) Genstörungen in postmitotischen Neuronen12,,13 und neuronalen Vorläuferzellen14und (2) Genom15 und Epigenom16-Bearbeitung durchzuführen.
Sehr bald nach dem ersten Bericht in der Maus wurde in der Utero-Elektroporation auf die embryonale Ratte Neocortex17,18angewendet. Nicht-Nagetiere blieben eine Herausforderung, bis die erste in der Utero Elektroporation von Frettchen, ein kleiner Fleischfresser, wurde im Jahr 2012 gemeldet19,20. Seitdem wurde in der Utero-Elektroporation von Frettchen die Mechanismen der Neocortex-Entwicklung untersucht, indem neuronale Vorläufer und Neuronen20,21,22,22,manipuliert die Expression endogener Gene, einschließlich der Verwendung der CRISPR/Cas9-Technologie24, und durch die Bereitstellung von ektopischen Genen21,22,25, einschließlich humanspezifischer Gene26. Darüber hinaus wurde bei der Utero-Elektroporation von Frettchen verwendet, um Merkmale der menschlichen Neocortex-Entwicklung unter pathologischen Bedingungen zu adressieren27,28.
Im Kontext der Neocortex-Entwicklung sind die Vorteile der Verwendung von Frettchen als Modellorganismus im Vergleich zu Mäusen darauf zurückzuführen, dass Frettchen eine Reihe von menschenähnlichen Merkmalen besser rekapitulieren. Auf anatomischer Ebene weisen Frettchen ein charakteristisches Muster der kortikalen Faltung auf, das auch bei menschenverachtenden und den meisten anderen Primaten vorhanden ist, bei Mäusen oder Rattenjedochvöllig abwesend ist 4,29,30,31. Auf histologischer Ebene weisen Frettchen zwei unterschiedliche subventrikuläre Keimzonen auf, die als innere und äußere subventrikuläre Zonen (ISVZ bzw. OSVZ)32,33bezeichnet werden, die durch die innere Faserschicht23getrennt sind. Diese Eigenschaften werden auch mit Primaten geteilt, einschließlich Menschen, aber nicht mit Mäusen34. Die ISVZ und OSVZ bei Frettchen und Menschen sind mit reichlich neuronalen Vorläuferzellen bevölkert, während die subventrikuläre Zone (SVZ) von Mäusen nur spärliche neuronale Vorläufer21,32,35,36enthält. Auf zellulärer Ebene weisen Frettchen einen hohen Anteil eines Subtyps von neuronalen Vorläufern auf, die als basaler oder äußerer radialer Glia (bRG bzw. oRG) bezeichnet werden und als entscheidend für die evolutionäre Ausdehnung des Säugetierneocortex34,37,38angesehen werden. bRG sind daher sehr reichlich in der fetalen menschlichen und embryonalen Frettchen Neocortex, aber sie sind sehr selten in der embryonalen Maus Neocortex35,36. Darüber hinaus zeigt Frettchen bRG eine morphologische Heterogenität ähnlich der menschlichen bRG, weit überlegen gegenüber Maus bRG21. Schließlich zeigt die Entwicklung von Frettchen-Neocortex auf molekularer Ebene Genexpressionsmuster, die denen des fetalen menschlichen Neocortex sehr ähnlich sind, von denen angenommen wird, dass sie die Entwicklung der kortikalen Faltung steuern, unter anderem39.
Die zellbiologischen und molekularen Eigenschaften von Frettchen bRG machen sie hoch proliferativ, ähnlich wie menschliche bRG. Dies führt zu einer erhöhten Produktion von Neuronen und der Entwicklung eines erweiterten und hochkomplexen Neocortex34. Diese Eigenschaften machen Frettchen ausgezeichnete Modellorganismen für die Untersuchung von menschenähnlichen Merkmalen der Neocortex-Entwicklung, die nicht in Mäusen modelliert werden können26,40. Um das Frettchen als Modellorganismus voll auszunutzen, wurde die vorgestellte Methode entwickelt. Es besteht aus der Utero-Elektroporation von E33-Ferret-Embryonen mit einem Plasmid, das GFP (pGFP) unter der Kontrolle eines allgegenwärtigen Promotors, CAG, exzessiv ausdrückt. Die elektroporated Embryonen können dann embryonal oder postnatal analysiert werden. Um die Anzahl der geopferten Tiere zu reduzieren, werden weibliche Frettchen (Jills) durch Hysterektomie sterilisiert und zur Adoption als Haustiere gespendet. Wenn die gezielten Embryonen in embryonalen Stadien geerntet werden, wird eine zweite Operation durchgeführt und die Embryonen werden durch einen Kaiserschnitt entfernt, während die Jills hysterektomisiert sind. Wenn die gezielten Embryonen in postnatalen Stadien analysiert werden, werden die Jills hysterektomisiert, nachdem die Welpen entwöhnt oder geopfert wurden. Daher wird auch ein Protokoll für die Hysterektomie von Jills vorgestellt.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1ml syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309628</td>
			<td>Electroporation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 Vicryl suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>V392ZG</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aluminium spray</td>
			<td>cp-pharma</td>
			<td>98017</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amoxicilin+clavulanic acid (Synulox RTU)</td>
			<td>WDT</td>
			<td>6301</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cappilary holder</td>
			<td>WPI</td>
			<td>MPH6S12</td>
			<td>Electroporation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dexpanthenol Ointment solution</td>
			<td>Bayer</td>
			<td>6029009.00.00</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drape sheet 45x75cm</td>
			<td>Hartmann</td>
			<td>2513052</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrode Tweezer, platinum plated 5mm</td>
			<td>BTX</td>
			<td>45-0489</td>
			<td>Electroporation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electroporator</td>
			<td>BTX</td>
			<td>ECM830</td>
			<td>Electroporation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast Green</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F7258-25G</td>
			<td>Electroporation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ferret Mustela putorius furo</td>
			<td>Marshall</td>
			<td>NA</td>
			<td>Experimental organism</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiber optic light source</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>KL1500LCD</td>
			<td>Electroporation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>Allgaier instrumente</td>
			<td>08-033-130</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps 3C-SA</td>
			<td>Rubis Tech</td>
			<td>3C-SA</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps 55</td>
			<td>Dumostar</td>
			<td>11295-51</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps 5-SA</td>
			<td>Rubis Tech</td>
			<td>5-SA</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze swabs large</td>
			<td>Hartmann</td>
			<td>401723</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze swabs small</td>
			<td>Hartmann</td>
			<td>401721</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GFAP antibody</td>
			<td>Dako</td>
			<td>Z0334</td>
			<td>Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GFP antibody</td>
			<td>Aves labs</td>
			<td>GFP1020</td>
			<td>Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass cappilaries (Borosilicate glass with filament, OD:1.2mm, ID: 0.69mm, 10cm length)</td>
			<td>Sutter Instrument</td>
			<td>BF120-69-10</td>
			<td>Electroporation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Bela-pharm</td>
			<td>K4011-02</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat pad</td>
			<td>Hans Dinslage</td>
			<td>Sanitas SHK18</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodine (Betadine solution 100 mg/ml)</td>
			<td>Meda</td>
			<td>997437</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isofluran</td>
			<td>CP</td>
			<td>21311</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Loading tips 20&#181;l</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>#5242 956.003</td>
			<td>Electroporation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metamizol</td>
			<td>WDT</td>
			<td>99012</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metzenbaum dissecting scissors</td>
			<td>Aesculap</td>
			<td>BC600R</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette puller</td>
			<td>Sutter Instrument</td>
			<td>Model P-97</td>
			<td>Electroporation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pCAGGS-GFP</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td>From Kalebic et al., eLife, 2018</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCNA antibody</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>CBL407</td>
			<td>Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pH3 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab10543</td>
			<td>Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>Aesculap</td>
			<td>294200104</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaver</td>
			<td>Braun</td>
			<td>EP100</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sox2 antibody</td>
			<td>R+D Systems</td>
			<td>AF2018</td>
			<td>Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical clamp 13cm</td>
			<td>WDT</td>
			<td>27080</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical double spoon (Williger)</td>
			<td>WDT</td>
			<td>27232</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical drape</td>
			<td>WDT</td>
			<td>28800</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors small</td>
			<td>FST</td>
			<td>14090-09</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suturing needle holder</td>
			<td>Aesculap</td>
			<td>BM149R</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tbr2 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab23345</td>
			<td>Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer pipette 3ml</td>
			<td>Fischer scientific</td>
			<td>13439108</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water bath</td>
			<td>Julabo</td>
			<td>TW2</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo targeting of neural progenitor cells in ferret neocortex by in utero electroporation

Die Manipulation der Genexpression in vivo während der embryonalen Entwicklung ist die Methode der Wahl bei der Analyse der Rolle einzelner Gene während der Entwicklung von Säugetieren. In der Gebärmutterelektroporation ist eine Schlüsseltechnik für die Manipulation der Genexpression im embryonalen Säugetiergehirn in vivo. Ein Protokoll zur In-Utero-Elektroporation des embryonalen Neocortex von Frettchen, einem kleinen Fleischfresser, wird hier vorgestellt. Das Frettchen wird zunehmend als Modell für die Neocortex-Entwicklung verwendet, weil sein Neocortex eine Reihe anatomischer, histologischer, zellulärer und molekularer Merkmale aufweist, die auch bei menschlichen und nichtmenschlichen Primaten vorhanden sind, aber in Nagetiermodellen wie Maus oder Ratte fehlen. Bei der Utero-Elektroporation wurde am embryonalen Tag (E) 33, einem Midneurogenese-Stadium bei Frettchen, durchgeführt. In der Gebärmutter-Elektroporation zielt auf neuronale Vorläuferzellen, die die lateralen Ventrikel des Gehirns auskleiden. Während der Neurogenese, Diese Vorläuferzellen geben alle anderen neuronalen Zelltypen. Diese Arbeit zeigt repräsentative Ergebnisse und Analysen bei E37, Postnataltag (P) 1 und P16, entsprechend 4, 9 und 24 Tagen nach der Utero-Elektroporation. In früheren Stadien besteht die Nachkommenschaft der Zielzellen hauptsächlich aus verschiedenen neuronalen Vorläufersubtypen, während in späteren Stadien die meisten markierten Zellen postmitotische Neuronen sind. So ermöglicht die in der Utero-Elektroporation die Untersuchung der Wirkung genetischer Manipulation auf die zellulären und molekularen Merkmale verschiedener Arten von Nervenzellen. Durch seine Wirkung auf verschiedene Zellpopulationen, in der Utero Elektroporation kann auch für die Manipulation von histologischen und anatomischen Merkmalen des Frettchen neocortex verwendet werden. Wichtig ist, dass alle diese Effekte akut sind und mit einer vom Benutzer bestimmten spatiotemporalen Spezifität durchgeführt werden.

Bei der Utero-Elektroporation von Frettchen bei E33 wurde die neurale Vorläuferzelle gezielt, die die ventrikuläre Oberfläche des embryonalen Neocortex auskleide (Abbildung 1). Diese Zellen werden apikale Vorläufer genannt und sind sehr proliferativ, was zu allen anderen Zelltypen während der Entwicklung führt. Nach asymmetrischer Teilung erzeugten apikale Vorläufer einen weiteren apikalen Vorläufer und eine differenziertere Zelle, typischerweise einen Basalvorläufer (BP), der von d...

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In Vivo Targeting of Neural Progenitor Cells in Ferret Neocortex by In Utero Electroporation

Hier wird ein Protokoll zur genetischen Manipulation im embryonalen Frettchenhirn unter Verwendung der Utero-Elektroporation vorgestellt. Diese Methode ermöglicht die Ausrichtung von neuronalen Vorläuferzellen im Neocortex in vivo.

In Vivo Targeting von neuronalen Vorläuferzellen in Ferret Neocortex durch Utero Elektroporation

Manipulation of gene expression in vivo during embryonic development is the method of choice when analyzing the role of individual genes during mammalian ...

Dieses Protokoll ermöglicht es uns, eine genetische Manipulation in vivo in einem wichtigen Tiermodell durchzuführen, das es uns ermöglicht, die Ausdehnung und Faltung eines sich entwickelnden Neocortex zu untersuchen. Der Hauptvorteil dieser Methode besteht darin, eine hohe räumliche und zeitliche Spezifität zu verwenden, wenn sie auf jene neuronalen Stammzellen abzielt, die der Schlüsselzelltyp für die Entwicklung des Gehirns sind. Ziehen Sie vor Beginn des Verfahrens Glaskapillaren an einem Mikropipettenzieher und schneiden Sie mit Zangen den distalen Teil der Kapillare ab, um den Durchmesser der Kapillarspitze anzupassen.Am embryonalen Tag 33 die entsprechende DNA-Konzentration in PBS hinzufügen, ergänzt mit 0,1%Fast Green mit sanftem Mischen, und legen Sie ein 3-stündiges, anästhesiertes, schwangeres weibliches Frettchen auf einen Operationstisch mit einem Heatpad. Bestätigen Sie den entsprechenden Sedierungsgrad, indem Sie die periokuläre Haut berühren und die Haut zwischen dem zweiten und dritten oder dritten und vierten Zehen beider Hinterbeine kneifen. Isofluran kann Nebenwirkungen verursachen, einschließlich Übelkeit und Schwindel.Verwenden Sie bei der Handhabung von Isofluran in flüssiger Form die Schutzausrüstung. Verwenden Sie während der Operation geeignete Kanister, um das Gas zu fangen. Injizieren Sie das Tier subkutan mit Schmerzmittel, Antibiotikum und Glukose, und legen Sie Salbe auf die Augen des Tieres.Verwenden Sie Clippers, um den Bauch zu rasieren, und reinigen Sie die exponierte Haut mit einer Wasser-, Seifen- und Jodlösung. Dann trocknen Sie die Haut mit Gazetupfer und desinfizieren Sie mit Alkohol und Jodpeelings. Denn bei der Utero-Elektroporation einen sterilen Vorhang über das Tier legen und mit einem Skalpell einen etwa 5-Zentimeter-Hautschnitt an der Linea alba machen.Verwenden Sie eine Schere, um die Muskelschicht zu durchschneiden und Gaze-Tupfer um die Einschnittstelle zu legen. Die Gaze mit PBS befeuchten und die Gebärmutter auf die Tupfer legen. Mit einer Pipette mit langer Spitze eine der gezogenen Glaskapillaren mit 5 Mikroliter NIV DNA-Lösung pro embryonalen Embryo beladen.Befestigen Sie die geladene Kapillare an einem Halter und verbinden Sie die andere Seite des Halters an ein Rohr und ein Mundstück. Suchen Sie den Kopf des ersten Embryos und platzieren Sie eine Faseroptik-Lichtquelle neben dem Kopf. Mit der pigmentierten Iris als Bezugspunkt, durchdringen Sie die Haut, Schädel, und Hirngewebe mit der Spitze der Glaskapillare und verwenden Mund Pipettierung, um die Lieferung von 3-5 Mikroliter der Injektionslösung in den Ventrikel einer der zerebralen Hemisphären zu erleichtern.Da die injizierte Lösung 0,1% Fast Green enthält, führt eine erfolgreiche Injektion zu einer dunkelgrünen Färbung des injizierten Ventrikels, die nun als nierenförmige Struktur sichtbar ist. Legen Sie nach der Injektion die Pinzettenelektroden auf die Gebärmutter über dem Kopf des Embryos mit dem positiven Pol über dem zielgerichteten Bereich und dem negativen Pol unterhalb des injizierten Bereichs. Stellen Sie die Pulslänge des Elektropols auf 50 Millisekunden, die Pulsspannung auf 100 Volt, das Pulsintervall auf eine Sekunde und die Anzahl der Impulse auf fünf ein.Wenn alle Parameter eingestellt sind, drücken Sie Pulse" und lassen Sie schnell mehrere Tropfen warmer PBS auf den elektroporated Embryo fallen. Wenn alle Embryonen elektropoiert wurden, kehren Sie die Gebärmutter in die Peritonealhöhle zurück und verwenden Sie eine 4-0 Naht, um die Muskelschicht mit dem Peritoneum zu schließen. Schließen Sie die Haut in ähnlicher Weise und bedecken Sie die Wunde mit Aluminiumspray.Dann kehren Sie das Tier in seinen Käfig mit einer Wärmequelle und Überwachung bis zur vollen Rekumbency. Vier Tage nach der Elektroporation am embryonalen Tag 37 befinden sich die meisten Zielzellen und ihre Nachkommen noch in den Keimzonen und die Zellen werden selten weiter basal innerhalb der kortikalen Platte beobachtet. Die Vorläuferidentität kann durch Immunfluoresen auf Marker von Zykluszellen wie PCNA untersucht werden, während eine Untergruppe von Vorläufern, die sich einer Mitose unterziehen, durch Marker wie Phospho-Histon 3 nachgewiesen werden kann.Am postnatalen Tag Null, acht Tage nach der Elektroporation, breitet sich die Nachkommenschaft der Zielzellen auf alle histologischen Schichten aus. Mit einer Kombination von Transkriptionsfaktormarkern können verschiedene Basalvorläuferpopulationen aufgedeckt werden. Sox2 ist beispielsweise ein Marker proliferativer Vorläuferzellen, einschließlich der basalen radialen Glia.Und T-Box Gehirnprotein 2 ist ein Marker für neurogene Basalvorläufer, die hauptsächlich zwischengeschaltete Vorläufer sind. Am postnatalen Tag 16 hört ein Großteil der Zielzellen auf, sich zu teilen und in Neuronen und Glia zu differenzieren, wobei Frettchen postnatale Tag 16 Neocortex das charakteristische Faltmuster aufweist. Die inutero Elektroporation von Frettchenembryonen ist eine extrem leistungsfähige Methode, um die Funktion von Genen zu untersuchen.Es hat uns erlaubt, Gene zu studieren, die an der Ausdehnung des Neocortex in der Evolution beteiligt waren, einschließlich menschenspezifischer Gene. Und mit dieser leistungsstarken Methode konnten wir in der Tat Schlüsselmerkmale herausfinden, wie die evolutionäre Ausdehnung des menschlichen Neocortex wahrscheinlich funktionierte.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Combining Behavioral Endocrinology and Experimental Economics: Testosterone and Social Decision Making

Die Kombination Behavioral Endokrinologie und Experimentelle Wirtschaftsforschung: Testosteron und Social Decision Making

Behavioral endocrinological research in humans as well as in animals suggests that testosterone plays a key role in social interactions. Studies in ...

Forschung

Neurowissenschaften

In utero Electroporation followed by Primary Neuronal Culture for Studying Gene Function in Subset of Cortical Neurons

In utero Electroporation followed by Primary Neuronal Culture for Studying Gene Function in Subset of Cortical Neurons

In utero Elektroporation gefolgt von primären neuronalen Kultur für ein Studium Gene Function in Subset von kortikalen Neuronen

In vitro study of primary neuronal cultures allows for quantitative analyses of neurite outgrowth. In order to study how genetic alterations affect ...

Time-lapse Live Imaging of Clonally Related Neural Progenitor Cells in the Developing Zebrafish Forebrain

Zeitraffer-Live-Imaging von klonal verbundenen neuronalen Vorläuferzellen in der Entwicklung von Zebrafisch Vorderhirnneuronen

Precise patterns of division, migration and differentiation of neural progenitor cells are crucial for proper brain development and function1,2. To ...

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

Die Transfektion von Maus retinalen Ganglienzellen durch In vivo Elektroporation

The targeting and refinement of RGC projections to the midbrain is a popular and powerful model system for studying how precise patterns of neural ...

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-Cell-Imaging von Sinnesorgan Vorläuferzellen im Intact Drosophila Puppen

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Mouse in Utero Electroporation: Controlled Spatiotemporal Gene Transfection

Mouse in Utero Electroporation: Controlled Spatiotemporal Gene Transfection

Maus in Utero Elektroporation: Kontrollierte Spatiotemporal Gene Transefection

In order to understand the function of genes expressed in specific region of the developing brain, including signaling molecules and axon guidance ...

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

Funktionelle Bildgebung mit Ultraschall-Blut-Hirnschranke Störung und Mangan-MRT

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

Expansion of Embryonic and Adult Neural Stem Cells by In Utero Electroporation or Viral Stereotaxic Injection

Expansion of Embryonic and Adult Neural Stem Cells by In Utero Electroporation or Viral Stereotaxic Injection

Erweiterung der embryonalen und adulten neuralen Stammzellen<em&gt; In Utero</em&gt; Elektroporation oder Viral stereotaktische Injektion

Somatic stem cells can divide to generate additional stem cells (expansion) or more differentiated cell types (differentiation), which is fundamental for ...

Generation of Topically Transgenic Rats by In utero Electroporation and In vivo Bioluminescence Screening

Generation of Topically Transgenic Rats by In utero Electroporation and In vivo Bioluminescence Screening

Erzeugung von Aktuell transgenen Ratten durch<em&gt; In utero</em&gt; Elektroporation und<em&gt; In-vivo-</em&gt; Biolumineszenz Screening

 In utero electroporation (IUE) is a technique which allows genetic modification of cells in the brain for investigating neuronal development. So far, the ...

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

Gleichzeitig<em&gt; Ex vivo</em&gt; Funktionsprüfung von zwei Netzhäute von<em&gt; In vivo</em&gt; Elektroretinogramm-System

An In vivo electroretinogram (ERG) signal is composed of several overlapping components originating from different retinal cell types, as well as noise ...