Name: in vivo targeting of neural progenitor cells in ferret neocortex by in utero electroporation
Uploaded: 2020-05-06T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Targeting of Neural Progenitor Cells in Ferret Neocortex by In Utero Electroporation at JoVE.com

אנו אסירי תודה לשירותים ומתקנים של מכון מקס פלאנק לביולוגיה וגנטיקה של תאים מולקולריים על התמיכה יוצאת הדופן הניתנת, במיוחד כל הצוות של השירותים הביו-רפואיים (BMS) על גידול מצוין של חמוסים וג'יי פיכל וצוותו של מתקן המיקרוסקופיה הקלה. אנו אסירי תודה במיוחד קטין Reppe ואנה Pfeffer מ BMS לתמיכה וטרינרית יוצאת דופן ליי Xing מהקבוצה Huttner לסיוע עם ניתוחים חמוס.

כל ההליכים הניסיוניים התנהלו בהסכמה עם החקיקה הגרמנית לרווחת בעלי חיים לאחר אישור ה-Landesdirektion Sachsen (רישיונות TVV 2/2015 ו-TVV 21/2017).
1. הכנה לאלקטרואידציה ברחם
<ol><li>הכן את תערובת הדי.אן.איי. בפרוטוקול זה נעשה שימוש בריכוז סופי של 1 μg/μL של pGFP. להמיס DNA PBS ותוספת עם 0.1% ירוק מהיר כדי להקל ע?...

באלקטרו אידוי הרחם חמוס היא טכניקה חשובה, עם יתרונות וחסרונות ביחס לשיטות אחרות. ישנם שלבים ומגבלות קריטיים לשיטה זו, כמו גם שינויים פוטנציאליים ויישומים עתידיים שיש לזכור.
מאז עבודתו החלוצית של ויקטור בורל ועמיתיו על מניפולציה גנטית של neocortex חמוס שלאחר הלידהבאמצ...

neocortex הוא הסדין החלקי של המוח היונקים ואת המושב של תפקודים קוגניטיביים גבוהיםיותר 1,,2,,3,,4,,5. על מנת להשיג מניפולציה גנטית חריפה neocortex היונקים ב vivo במהלך ההתפתחות העוברית, נחקרו שתי שיטות שונות: זיהוםנגיפי 6 ובאלקטרופורציהברחם 7. שתי השיטות מאפשרות פילוח יעיל של תאים ניאו-קליפטיים, אך סובלות ממגבלות מסוימות. היתרון העיקרי של אלקטרופורציה ברחם בהשוואה לזיהום נגיפי הוא היכולת להשיג ספציפיות מרחבית בתוך neocortex, אשר מושגת על ידי ויסות הכיוון של השדה החשמלי.
מאז אלקטרופורציה הוצגה לראשונה כדי להקל על הכניסה של DNA לתוך התאיםבמבחנה 8, זה הוחל כדי לספק DNA לתוך בעלי חוליות שונים ב vivo. במדעי המוח ההתפתחותיים, באלקטרו אידוי הרחם של neocortex העכבר דווח לראשונה ב 20019,10. שיטה זו מורכבת הזרקה של תערובת ה-DNA בחדר החוץ של המוח העוברי ויישום הבא של השדה החשמלי באמצעות אלקטרודות פינצטה, המאפשר דיוקמרחבי 7,11. באלקטרופורציה ברחם הוחל מאז כדי לספק חומצות גרעין על מנת לתמרן את הביטוי של גנים אנדוגניים או חוץ רחמים הוסיף neocortex העכבר. התקדמות חשובה נעשתה לאחרונה על ידי יישום המתודולוגיה של CRISPR / Cas9 בתיווך עריכת הגנום באמצעות אלקטרופורציה ברחם neocortex העכבר לבצע (1) הפרעה גנטית בנוירונים postmitotic12,,13 ותאי אבקדום עצבי 14,ו (2)גנום 15 ו אפיגנום16 עריכה.
זמן קצר לאחר הדיווח הראשון בעכבר, באלקטרופורציה של הרחם הוחל על neocortex חולדהעוברית 17,18. לא מכרסמים נותרו אתגר עד הראשון באלקטרו אידוי הרחם של חמוסים, טורף קטן, דווח ב 201219,20. מאז, באלקטרו אידוי הרחם של חמוסים הוחל כדי ללמוד את המנגנונים של התפתחות neocortex על ידי תיוג של פרוטוורים עצבייםונוירונים 20,21,2222,23, מניפולציה הביטוי של גנים אנדוגניים, כולל השימוש בטכנולוגיית CRISPR/Cas924, ועל ידי אספקת גנים חוץ רחמיים21 , 22,2522,כוללגנים ספציפיים לאדם 26. יתר על כן, באלקטרואידציה של רחם של חמוסים שימש כדי לטפל בתכונות של התפתחות neocortex אנושי בתנאיםפתולוגיים 27,28.
בהקשר של התפתחות neocortex, היתרונות של שימוש חמוסים כמו אורגניזם מודל לעומת עכברים הם בשל העובדה כי חמוסים טוב יותר לסכם סדרה של תכונות דמויי אדם. ברמה האנטומית, חמוסים מציגים תבנית אופיינית של קיפול קליפתי, אשרקיים גםבפרימטים אנושיים ורוב האחרים, אבל נעדר לחלוטין בעכברים אוחולדות 4,29,30,31. ברמה ההיסטולוגית יש שני אזורי נבט תת-ורטרליים נפרדים, המכונים האזורים התת-ורטרליים הפנימיים והפנימיים (ISVZ ו-OSVZ, בהתאמה)32,33,המופרדים על ידי שכבת הסיביםהפנימית 23. תכונות אלה משותפות גם עם פרימטים, כולל בני אדם, אך לא עם עכברים34. ISVZ ו OSVZ ב חמוסים ובני אדם מאוכלסים בשפע תאים עצביים אב אדם, בעוד האזור subventricular (SVZ) של עכברים מכיל רק אבות עצבייםדליל 21,32,35,36. ברמה התאית, חמוסים להפגין שיעור גבוה של תת סוג של אבות עצביים המכונה גליה בסיס או רדיאלית החוצה (bRG או oRG, בהתאמה), אשר נחשבים אינסטרומנטליים עבור ההתרחבות האבולוציונית של neocortexיונקים 34,37,38. bRG הם מכאן מאוד בשפע neocortex חמוס העוברי העוברי, אבל הם נדירים מאוד neocortex העכברהעוברי 35,36. יתר על כן, חמוס bRG מראה הטרוגניות מורפולוגית דומה לזה של bRG אנושי, הרבה יותר טוב עכבר bRG21. לבסוף, ברמה המולקולרית, פיתוח neocortex חמוס מראה דפוסי ביטוי גנים דומים מאוד לאלה של neocortex אנושי עוברי, אשר נחשבים לשלוט בהתפתחות של קיפול קליפתי, בין היתר39.
המאפיינים הביולוגיים והמולקולריים של החמוס bRG הופכים אותם לתווססים מאוד, בדומה ל-bRG האנושי. התוצאה היא ייצור מוגבר של נוירונים ופיתוח של neocortex מורחב ומורכב מאוד34. מאפיינים אלה הופכים חמוסים אורגניזמים מודל מעולה לחקר תכונות דמויי אדם של התפתחות neocortex כי לא ניתן לדגמןבעכברים 26,40. כדי לנצל את מלוא היתרונות של החמוס כאורגניזם מודל השיטה שהוצגה פותחה. הוא מורכב באלקטרו-אידוי רחם של עוברי חמוס E33 עם פלסמיד המביע GFP (pGFP) תחת שליטה של מקדם בכל מקום, CAG. לאחר מכן ניתן לנתח את העוברים המאלקטרו-אידויים באופן עוברי או לאחר הלידה. על מנת להפחית את מספר בעלי החיים שהוקרבו, חמוסים נקבה (ג'יל) מחטאים על ידי כריתת רחם ותרמו לאימוץ כחיות מחמד. אם העוברים המיויעדים נקטפים בשלבים עובריים, מתבצע ניתוח שני ועוברים מוסרים על ידי ניתוח קיסרי, בעוד שהנוברים עוברים כריתת רחם. אם העוברים המיויעדים מנותחים בשלבים שלאחר הלידה, ג'יל עובר כריתת רחם לאחר שהגורים נ גנחו או הוקרבו. לפיכך, מוצג גם פרוטוקול כריתת הרחם של ג'יל.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1ml syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309628</td>
			<td>Electroporation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 Vicryl suture</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>V392ZG</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aluminium spray</td>
			<td>cp-pharma</td>
			<td>98017</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amoxicilin+clavulanic acid (Synulox RTU)</td>
			<td>WDT</td>
			<td>6301</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cappilary holder</td>
			<td>WPI</td>
			<td>MPH6S12</td>
			<td>Electroporation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dexpanthenol Ointment solution</td>
			<td>Bayer</td>
			<td>6029009.00.00</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drape sheet 45x75cm</td>
			<td>Hartmann</td>
			<td>2513052</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrode Tweezer, platinum plated 5mm</td>
			<td>BTX</td>
			<td>45-0489</td>
			<td>Electroporation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electroporator</td>
			<td>BTX</td>
			<td>ECM830</td>
			<td>Electroporation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast Green</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F7258-25G</td>
			<td>Electroporation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ferret Mustela putorius furo</td>
			<td>Marshall</td>
			<td>NA</td>
			<td>Experimental organism</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiber optic light source</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>KL1500LCD</td>
			<td>Electroporation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>Allgaier instrumente</td>
			<td>08-033-130</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps 3C-SA</td>
			<td>Rubis Tech</td>
			<td>3C-SA</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps 55</td>
			<td>Dumostar</td>
			<td>11295-51</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps 5-SA</td>
			<td>Rubis Tech</td>
			<td>5-SA</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze swabs large</td>
			<td>Hartmann</td>
			<td>401723</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze swabs small</td>
			<td>Hartmann</td>
			<td>401721</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GFAP antibody</td>
			<td>Dako</td>
			<td>Z0334</td>
			<td>Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GFP antibody</td>
			<td>Aves labs</td>
			<td>GFP1020</td>
			<td>Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass cappilaries (Borosilicate glass with filament, OD:1.2mm, ID: 0.69mm, 10cm length)</td>
			<td>Sutter Instrument</td>
			<td>BF120-69-10</td>
			<td>Electroporation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Bela-pharm</td>
			<td>K4011-02</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat pad</td>
			<td>Hans Dinslage</td>
			<td>Sanitas SHK18</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodine (Betadine solution 100 mg/ml)</td>
			<td>Meda</td>
			<td>997437</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isofluran</td>
			<td>CP</td>
			<td>21311</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Loading tips 20&#181;l</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>#5242 956.003</td>
			<td>Electroporation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metamizol</td>
			<td>WDT</td>
			<td>99012</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metzenbaum dissecting scissors</td>
			<td>Aesculap</td>
			<td>BC600R</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette puller</td>
			<td>Sutter Instrument</td>
			<td>Model P-97</td>
			<td>Electroporation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pCAGGS-GFP</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td>From Kalebic et al., eLife, 2018</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCNA antibody</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>CBL407</td>
			<td>Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pH3 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab10543</td>
			<td>Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>Aesculap</td>
			<td>294200104</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaver</td>
			<td>Braun</td>
			<td>EP100</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sox2 antibody</td>
			<td>R+D Systems</td>
			<td>AF2018</td>
			<td>Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical clamp 13cm</td>
			<td>WDT</td>
			<td>27080</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical double spoon (Williger)</td>
			<td>WDT</td>
			<td>27232</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical drape</td>
			<td>WDT</td>
			<td>28800</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors small</td>
			<td>FST</td>
			<td>14090-09</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suturing needle holder</td>
			<td>Aesculap</td>
			<td>BM149R</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tbr2 antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab23345</td>
			<td>Antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer pipette 3ml</td>
			<td>Fischer scientific</td>
			<td>13439108</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water bath</td>
			<td>Julabo</td>
			<td>TW2</td>
			<td>Surgery</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo targeting of neural progenitor cells in ferret neocortex by in utero electroporation

מניפולציה של ביטוי גנים ב vivo במהלך התפתחות עוברית היא שיטת הבחירה בעת ניתוח התפקיד של גנים בודדים במהלך התפתחות היונקים. באלקטרואידיות הרחם היא טכניקת מפתח למניפולציה של ביטוי גנים במוח היונק העוברי בvivio. פרוטוקול לאלקטרו-אידוי הרחם של הניאו-קורטקס העוברי של החמוסים, טורף קטן, מוצג כאן. החמוס משמש יותר ויותר כמודל להתפתחות neocortex, כי neocortex שלה מציג סדרה של תכונות אנטומיות, היסטולוגיות, תאיות, מולקולריות אשר נמצאים גם פרימטים אנושיים ולא אנושיים, אבל נעדר במודלים מכרסמים, כגון עכבר או חולדה. באלקטרו אידוי הרחם בוצע ביום העוברי (ה) 33, שלב midneurogenesis ב חמוס. באלקטרואידציה ברחם מטרות תאי האבות העצביים רירית החדרים הצדדיים של המוח. במהלך neurogenesis, תאים אלה של הצבי להוות את כל סוגי תאים עצביים אחרים. עבודה זו מציגה תוצאות וניתוחים מייצגים ב- E37, יום לאחר הלידה (P) 1 ו- P16, התואמים ל- 4, 9 ו- 24 ימים לאחר האלקטרואידציה של הרחם, בהתאמה. בשלבים מוקדמים יותר, הצטמיות של תאים ממוקדים מורכבת בעיקר של תת סוגים עצביים שונים, ואילו בשלבים מאוחרים יותר רוב התאים המסומנו הם נוירונים postmitotic. לכן, באלקטרואידיות הרחם מאפשרת לחקור את ההשפעה של מניפולציה גנטית על התכונות הסלולריות והמולקולריות של סוגים שונים של תאים עצביים. באמצעות השפעתו על אוכלוסיות תאים שונים, באלקטרופורציה ברחם יכול לשמש גם למניפולציה של תכונות היסטולוגיות ואנטומיות של neocortex החמוס. חשוב לציין, כל ההשפעות האלה הן אקוטיות ומבוצעות עם ספציפיות spatiotemporal שנקבע על ידי המשתמש.

באלקטרואידציה של רחם של חמוסים ב E33 הביא מיקוד של תאי אב עצבי רירית פני השטח בחדר של neocortex עוברי(איור 1). תאים אלה נקראים progenitors אפי והם מאוד משגשגים, מה שנוצר את כל סוגי התאים האחרים במהלך הפיתוח. על חלוקה אסימטרית, הצמרים apical יצרו עוד צווי אפי ותא מובדל יותר, בדרך כלל ציד בסיס (...

Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Targeting of Neural Progenitor Cells in Ferret Neocortex by In Utero Electroporation at JoVE.com

In Vivo Targeting of Neural Progenitor Cells in Ferret Neocortex by In Utero Electroporation

מוצג כאן פרוטוקול לביצוע מניפולציה גנטית במוח החמוס העוברי באמצעות באלקטרואידיות הרחם. שיטה זו מאפשרת מיקוד של תאי האבות העצביים בneocortex ב vivo.

ב Vivo מיקוד של תאי הצבי העצבי Neocortex חמוס על ידי באלקטרופורציה ברחם

Manipulation of gene expression in vivo during embryonic development is the method of choice when analyzing the role of individual genes during mammalian ...

פרוטוקול זה מאפשר לנו לבצע מניפולציה גנטית ב-vivo במודל בעלי חיים מרכזי המאפשר לנו לחקור את ההתרחבות והקיפול של ניאוקורטקס מתפתח. היתרון העיקרי של שיטה זו הוא בשימוש בספציפיות מרחבית ותכובית גבוהה במיקוד אותם תאי גזע עצביים שהם סוג תא המפתח להתפתחות המוח. לפני תחילת ההליך, למשוך נימי זכוכית על מושך פיפטה מיקרו ולהשתמש מלקחיים לחתוך את החלק הדיסטלי של נימי כדי להתאים את הקוטר של קצה נימי.ביום העוברי 33, הוסיפו את הריכוז המתאים של דנ"א ב-PBS, בתוספת 0.1% Fast Green עם ערבוב עדין, וה מניחים חמוס נקבה בהריון בצום של 3 שעות על שולחן ניתוחים עם כרית חום. אשר את רמת ההשמדה המתאימה על ידי נגיעה בעור הצחיחיני וצביטת העור בין בהונות השני והשלישי או השלישי והרביעי של שתי הגפיים האחוריות. Isoflurane יכול לגרום לתופעות לוואי, כולל בחילות וסחרחורת.בעת טיפול isoflurane בצורה נוזלית, להשתמש בציוד מגן. במהלך הניתוח, השתמש במיכלים מתאימים כדי ללכוד את הגז. להזריק את החיה תת עורית עם משכך כאבים, אנטיביוטיקה, גלוקוז, ולהחדיר משחה על העיניים של החיה.השתמש קוצץ כדי לגלח את הבטן, ולנקות את העור החשוף עם מים, סבון, ותו תות העונה יוד. לאחר מכן, לייבש את העור עם ספוגיות גזה לחטא עם אלכוהול וקרצוף יוד. עבור אלקטרופורציה ברחם, מניחים וילון סטרילי מעל החיה ולהשתמש אזמל לעשות חתך בעור כ 5 ס"מ באלבה linea.השתמש מספריים כדי לחתוך דרך שכבת השריר ולה מניחים ספוגיות גזה סביב אתר החתך. הרטיבו את הגזה עם PBS וה מניחים את הרחם על ספוגיות. באמצעות פיפטה עם קצה ארוך, לטעון אחד נימי זכוכית משך עם 5 microliters של פתרון DNA לכל עובר להיות מוזרק.חבר את נימי טעון למחזיק ולחבר את הצד השני של המחזיק לצינור ושופר. אתר את ראשו של העובר הראשון והצב מקור אור סיב אופטי ליד הראש. באמצעות הקשתית פיגמנט כנקודת התייחסות, לחדור את העור, הגולגולת, ואת רקמת המוח עם קצה נימי זכוכית ולהשתמש pipetting הפה כדי להקל על המסירה של 3-5 microliters של פתרון ההזרקה לתוך החדר של אחת ההמיספרות המוחיות.מכיוון שהתובנה המוזרקת מכילה 0.1% Fast Green, הזרקה מוצלחת תגרום לכתמים ירוקים כהים של החדר המוזרק, שכעת יהיה גלוי כמבנה בצורת כליה. לאחר ההזרקה, מניחים את אלקטרודות פינצטה על הרחם מעל ראש העובר עם הקוטב החיובי מעל האזור להיות ממוקד ואת הקוטב השלילי מתחת לאזור מוזרק. הגדר את אורך הדופק של האלקטרופורט ל-50 אלפיות שנייה, את מתח הדופק ל-100 וולט, את מרווח הדופק לשנייה אחת ואת מספר הפולסים לחמש.כאשר כל הפרמטרים נקבעו, לחץ על Pulse"ושחרר במהירות כמה טיפות של PBS חם על העובר האלקטרופול. כאשר כל העוברים כבר אלקטרופולציה, להחזיר את הרחם לחלל צפי ולהשתמש תפר 4-0 כדי לסגור את שכבת השריר עם צדת. סוגרים את העור באופן דומה ומכסים את הפצע בתרסיס אלומיניום.ואז להחזיר את החיה לכלוב שלה עם מקור חום וניטור עד חקירה מלאה. ארבעה ימים לאחר אלקטרופוזיה ביום העוברי 37, רוב התאים הממוקדים וצאצאיהם עדיין נמצאים באזורים הנביטתיים והתאים נצפו לעתים רחוקות עוד יותר בבסאלי בתוך הלוח קליפת המוח. זהות אב יכולה להיבדק על ידי immunofluoresence עבור סמנים של תאי רכיבה על אופניים, כגון PCNA, ואילו תת קבוצה של אבים שעברו מיטוזה יכול להיות מוצג על ידי סמנים כגון פוספו-histone 3.ביום שלאחר הלידה אפס, שמונה ימים לאחר אלקטרופורציה, צאצאי התאים הממוקדים התפשטו לכל השכבות ההיסטולוגיות. באמצעות שילוב של סמני גורם שעתוק, ניתן לחשוף אוכלוסיות שונות של חותם בסיס. לדוגמה, Sox2 הוא סמן של תאים מולדים שגשוג, כולל גליה רדיאלי בסיס.וחלבון מוח T-box 2 הוא סמן של אגניטורים בזלית נוירוגניים, שהם בעיקר בני-אצאים בינוניים. ביום שלאחר הלידה 16, רוב התאים הממוקדים מפסיקים להתחלק ולהבדיל לנוירונים וגליה, עם חמוס לאחר לידה יום 16 neocortex המציג את דפוס הקיפול האופייני. אלקטרופורציה ברחם של עוברי חמוס היא שיטה רבת עוצמה ללמוד את הפונקציה של גנים.היא אפשרה לנו לחקור גנים שהיו מעורבים בהתפשטות הניאוקורטקס באבולוציה, כולל גנים ספציפיים לבני אדם. ובשיטתו רבת העוצמה הזו, אכן הצלחנו לגלות מאפיינים מרכזיים של האופן שבו ההתפשטות האבולוציונית של הניאוקורטקס האנושי ככל הנראה עבדה.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Combining Behavioral Endocrinology and Experimental Economics: Testosterone and Social Decision Making

שילוב של התנהגות אנדוקרינולוגיה וכלכלה ניסויית: החלטת טסטוסטרון חברתית ביצוע

Behavioral endocrinological research in humans as well as in animals suggests that testosterone plays a key role in social interactions. Studies in ...

In utero Electroporation followed by Primary Neuronal Culture for Studying Gene Function in Subset of Cortical Neurons

In utero Electroporation followed by Primary Neuronal Culture for Studying Gene Function in Subset of Cortical Neurons

ברחם electroporation ואחריו תרבות עצבית ראשונית ללימוד פונקציה ג&#39;ין בתת קבוצה של נוירונים קליפתיים

In vitro study of primary neuronal cultures allows for quantitative analyses of neurite outgrowth. In order to study how genetic alterations affect ...

Time-lapse Live Imaging of Clonally Related Neural Progenitor Cells in the Developing Zebrafish Forebrain

זמן לשגות הדמיה חיה של Related Clonally ובתאים עצבית של פיתוח דג הזברה forebrain

Precise patterns of division, migration and differentiation of neural progenitor cells are crucial for proper brain development and function1,2. To ...

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

Transfection של תאים עכבר רשתית גנגליון על ידי In vivo Electroporation

The targeting and refinement of RGC projections to the midbrain is a popular and powerful model system for studying how precise patterns of neural ...

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-תא הדמיה של תאים מבשר חושי האיברים אינטקט תסיסנית גלמים

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Mouse in Utero Electroporation: Controlled Spatiotemporal Gene Transfection

Mouse in Utero Electroporation: Controlled Spatiotemporal Gene Transfection

עכבר בתוך הרחם Electroporation: ג&#39;ין מבוקרת transfection Spatiotemporal

In order to understand the function of genes expressed in specific region of the developing brain, including signaling molecules and axon guidance ...

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

הדמייה תפקודית באמצעות שיבוש Ultrasonic הדם למוח הגדר מנגן משופרת MRI

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

Expansion of Embryonic and Adult Neural Stem Cells by In Utero Electroporation or Viral Stereotaxic Injection

Expansion of Embryonic and Adult Neural Stem Cells by In Utero Electroporation or Viral Stereotaxic Injection

התרחבות של תאי גזע עצביים עובריים ומבוגרים על ידי<em&gt; ברחם</em&gt; Electroporation או הזרקת Stereotaxic ויראלי

Somatic stem cells can divide to generate additional stem cells (expansion) or more differentiated cell types (differentiation), which is fundamental for ...

Generation of Topically Transgenic Rats by In utero Electroporation and In vivo Bioluminescence Screening

Generation of Topically Transgenic Rats by In utero Electroporation and In vivo Bioluminescence Screening

דור של חולדות למריחה מהונדסים על ידי<em&gt; ברחם</em&gt; Electroporation ו<em&gt; בvivo</em&gt; הקרנת פליטת אור

 In utero electroporation (IUE) is a technique which allows genetic modification of cells in the brain for investigating neuronal development. So far, the ...

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

Simultaneous ex vivo Functional Testing of Two Retinas by in vivo Electroretinogram System

בו זמנית<em&gt; Vivo לשעבר</em&gt; בדיקות פונקציונליות של שתי הרשתיות על ידי<em&gt; In vivo</emמערכת electroretinogram&gt;

An In vivo electroretinogram (ERG) signal is composed of several overlapping components originating from different retinal cell types, as well as noise ...