Name: blocking lymph flow by suturing afferent lymphatic vessels in mice
Uploaded: 2020-05-14T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Blocking Lymph Flow by Suturing Afferent Lymphatic Vessels in Mice at JoVE.com

Авторы благодарят Аву Зардынежад за корректорирование рукописи. Эта работа поддерживается Канадским институтом исследований в области здравоохранения (CIHR, PJT-156035) и Канадским фондом инноваций для SL (32930), а также Национальным фондом естественных наук Китая для Yujia Lin (81901576).

Вся работа с животными должна быть одобрена комитетом по институциональной и правительственной этике и обращению с животными.  Это операция, не связанная с выживанием.
1. Подготовка материалов
<ol><li>Приготовьте 100 мл 70% этанола, смешивая 70 мл 100% этанола с 30 мл стерильной во...

<ol>
	<li>Pflicke, H., Sixt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preformed+portals+facilitate+dendritic+cell+entry+into+afferent+lymphatic+vessels.">Preformed portals facilitate dendritic cell entry into afferent lymphatic vessels.</a> The Journal of Experimental Medicine. 206, 2925-2935 (2009).</li><li>Schmid-Schonbein, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microlymphatics+and+lymph+flow.">Microlymphatics and lymph flow.</a> Physiological Reviews. 70, 987-1028 (1990).</li><li>Skalak, T. C., Schmid-Schonbein, G. W., Zweifach, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+morphological+evidence+for+a+mechanism+of+lymph+formation+in+skeletal+muscle.">New morphological evidence for a mechanism of lymph formation in skeletal muscle.</a> Microvascular Research. 28, 95-112 (1984).</li><li>Johnston, M. G., Hay, J. B., Movat, H. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetics+of+prostaglandin+production+in+various+inflammatory+lesions,+measured+in+draining+lymph.">Kinetics of prostaglandin production in various inflammatory lesions, measured in draining lymph.</a> The American Journal of Pathology. 95, 225-238 (1979).</li><li>Eisenhoffer, J., Yuan, Z. Y., Johnston, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+that+the+L-arginine+pathway+plays+a+role+in+the+regulation+of+pumping+activity+in+bovine+mesenteric+lymphatic+vessels.">Evidence that the L-arginine pathway plays a role in the regulation of pumping activity in bovine mesenteric lymphatic vessels.</a> Microvascular Research. 50, 249-259 (1995).</li><li>Gasheva, O. Y., Zawieja, D. C., Gashev, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contraction-initiated+NO-dependent+lymphatic+relaxation:+a+self-regulatory+mechanism+in+rat+thoracic+duct.">Contraction-initiated NO-dependent lymphatic relaxation: a self-regulatory mechanism in rat thoracic duct.</a> Journal of Physiology. 575, 821-832 (2006).</li><li>Breslin, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+endothelial+growth+factor-C+stimulates+the+lymphatic+pump+by+a+VEGF+receptor-3-dependent+mechanism.">Vascular endothelial growth factor-C stimulates the lymphatic pump by a VEGF receptor-3-dependent mechanism.</a> American Journal of Physiology- Heart and Circulatory Physiology. 293, 709-718 (2007).</li><li>Randolph, G. J., Angeli, V., Swartz, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic-cell+trafficking+to+lymph+nodes+through+lymphatic+vessels.">Dendritic-cell trafficking to lymph nodes through lymphatic vessels.</a> Nature Reviews. Immunology. 5, 617-628 (2005).</li><li>Mempel, T. R., Henrickson, S. E., Von Andrian, U. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T-cell+priming+by+dendritic+cells+in+lymph+nodes+occurs+in+three+distinct+phases.">T-cell priming by dendritic cells in lymph nodes occurs in three distinct phases.</a> Nature. 427, 154-159 (2004).</li><li>Gerner, M. Y., Casey, K. A., Kastenmuller, W., Germain, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cell+and+antigen+dispersal+landscapes+regulate+T+cell+immunity.">Dendritic cell and antigen dispersal landscapes regulate T cell immunity.</a> The Journal of Experimental Medicine. 214, 3105-3122 (2017).</li><li>Kastenmuller, W., Torabi-Parizi, P., Subramanian, N., Lammermann, T., Germain, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+spatially-organized+multicellular+innate+immune+response+in+lymph+nodes+limits+systemic+pathogen+spread.">A spatially-organized multicellular innate immune response in lymph nodes limits systemic pathogen spread.</a> Cell. 150, 1235-1248 (2012).</li><li>Gerner, M. Y., Torabi-Parizi, P., Germain, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategically+localized+dendritic+cells+promote+rapid+T+cell+responses+to+lymph-borne+particulate+antigens.">Strategically localized dendritic cells promote rapid T cell responses to lymph-borne particulate antigens.</a> Immunity. 42, 172-185 (2015).</li><li>Moussion, C., Girard, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cells+control+lymphocyte+entry+to+lymph+nodes+through+high+endothelial+venules.">Dendritic cells control lymphocyte entry to lymph nodes through high endothelial venules.</a> Nature. 479, 542-546 (2011).</li><li>Gretz, J. E., Norbury, C. C., Anderson, A. O., Proudfoot, A. E., Shaw, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymph-borne+chemokines+and+other+low+molecular+weight+molecules+reach+high+endothelial+venules+via+specialized+conduits+while+a+functional+barrier+limits+access+to+the+lymphocyte+microenvironments+in+lymph+node+cortex.">Lymph-borne chemokines and other low molecular weight molecules reach high endothelial venules via specialized conduits while a functional barrier limits access to the lymphocyte microenvironments in lymph node cortex.</a> The Journal of Experimental Medicine. 192, 1425-1440 (2000).</li><li>Mebius, R. E., Breve, J., Duijvestijn, A. M., Kraal, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+function+of+high+endothelial+venules+in+mouse+lymph+nodes+stimulated+by+oxazolone.">The function of high endothelial venules in mouse lymph nodes stimulated by oxazolone.</a> Immunology. 71, 423-427 (1990).</li><li>Mebius, R. E., Streeter, P. R., Breve, J., Duijvestijn, A. M., Kraal, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+afferent+lymphatic+vessel+interruption+on+vascular+addressin+expression.">The influence of afferent lymphatic vessel interruption on vascular addressin expression.</a> Journal of Cell Biology. 115, 85-95 (1991).</li><li>Mebius, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+GlyCAM-1,+an+endothelial+ligand+for+L-selectin,+is+affected+by+afferent+lymphatic+flow.">Expression of GlyCAM-1, an endothelial ligand for L-selectin, is affected by afferent lymphatic flow.</a> Journal of Immunology. 151, 6769-6776 (1993).</li><li>Drayton, D. L., Liao, S., Mounzer, R. H., Ruddle, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphoid+organ+development:+from+ontogeny+to+neogenesis.">Lymphoid organ development: from ontogeny to neogenesis.</a> Nature Immunology. 7, 344-353 (2006).</li><li>Tomei, A. A., Siegert, S., Britschgi, M. R., Luther, S. A., Swartz, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluid+flow+regulates+stromal+cell+organization+and+CCL21+expression+in+a+tissue-engineered+lymph+node+microenvironment.">Fluid flow regulates stromal cell organization and CCL21 expression in a tissue-engineered lymph node microenvironment.</a> Journal of Immunology. 183, 4273-4283 (2009).</li><li>Liao, S., Jones, D., Cheng, G., Padera, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Method+for+the+quantitative+measurement+of+collecting+lymphatic+vessel+contraction+in+mice.">Method for the quantitative measurement of collecting lymphatic vessel contraction in mice.</a> Journal of Biological Methods. 1, 6 (2014).</li><li>Lin, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perinodal+Adipose+Tissue+Participates+in+Immune+Protection+through+a+Lymphatic+Vessel-Independent+Route.">Perinodal Adipose Tissue Participates in Immune Protection through a Lymphatic Vessel-Independent Route.</a> Journal of Immunology. 201, 296-305 (2018).</li><li>Gardenier, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diphtheria+toxin-mediated+ablation+of+lymphatic+endothelial+cells+results+in+progressive+lymphedema.">Diphtheria toxin-mediated ablation of lymphatic endothelial cells results in progressive lymphedema.</a> Journal of Clinical Investigation Insight. 1, 84095 (2016).</li></ol>

Блокирование лимфатического потока будет иметь широкое применение в манипулировании доставкой антигена в ЛН в здоровых и больных условиях. Можно использовать этот метод для контроля сроков доставки антигена для того, чтобы изучить, как непрерывный поток лимфы регулирует иммунный отв...

Пространственная организация лимфатической системы обеспечивает структурную и функциональную поддержку для эффективного удаления внеклеточной жидкости и транспортировки антигенов и антигеносующих клеток (БТР) в дренажные LNs. Первоначальные лимфатические сосуды (также называемые лимфатическими капиллярами) очень проницаемы из-за их прерывистых межклеточных соединений, которые облегчают эффективный сбор жидкостей, клеток и других материалов из окружающих внеклеточныхпространств 1. Первоначальные лимфатические сосуды сливаются в сбор лимфатических сосудов, которые имеют жесткие межклеточные соединения, непрерывную мембрану подвала, и лимфатического покрытия мышц. Сбор лимфатических сосудов несут ответственность за транспортировку собранных лимфатических в дренажных LNs и в конечном итоге возвращение лимфыв кровообращение 2,3. Собирающ лимфатические сосуды которые двигают лимфу в стекая LN будут afferent лимфатическими сосудами4,5,6,7. Препятствие афферентных лимфатических сосудов может блокировать поток лимфы в ЛП, что является полезным методом при изучении функции лимфатического потока.
Предыдущие исследования показали, что лимфатический поток играет значительную роль в транспортировке антигенов и БТР, а также поддержания ЛН гомеостаза. Хорошо известно, что ткани полученных БТР, как правило, активированных мигрирующих дендритных клеток (DCs), путешествия через афферентные лимфатические сосуды в ЛН, чтобы активироватьТ-клетки 8. Идея о том, что антигены свободной формы, такие как микробы или растворимые антигены, пассивно текут с лимфой в ЛН для активации БТР-резидентов ЛН, набираетпризнание в последнее десятилетие 9,10,11,12. Свободной формы антигенов путешествия с лимфой занять несколько минут после заражения, чтобы поехать в ЛН, и LN-резидентов активации клеток может произойти в течение 20 минут после стимуляции. Это гораздо быстрее, чем активация мигрирующих DCs, которая занимает более 8 ч, чтобы войти в дренаж LN9. Помимо транспортировки антигенов для инициирования иммунной защиты, лимфа также несет цитокины и ДК в ЛН для поддержания его микроокнижения, а также для поддержки гомеостазаиммунных клеток 13,14. Ранее, блокирование лимфатического потока, зашивая афферентных лимфатических сосудовпоказали,что лимфатические требуется для поддержания фенотипа HEV, необходимых для поддержки гомеостатической Т-клеток и B-клеток самонаведения в LN15,16,17. CCL21 является критическим хемокин, который направляет DC и Т-клеток позиционирования в LN8,18. Блокирование лимфатического потока прерывает выражение CCL21 в LN и потенциально прерывает позиционирование DC и Т-клеток и/или взаимодействие в LN19. Таким образом, блокирование лимфатического потока может прямо или косвенно отогреть антиген / DC доступ к дренажной ЛН, нарушая микроокноронику LN, которая регулирует иммунные реакции в ЛН. Чтобы лучше исследовать функцию лимфатического потока, представлен экспериментальный протокол(рисунок 1), чтобы блокировать лимфатический поток у мышей, засовывав афферентные лимфатические сосуды от подножки до pLN. Этот метод может быть важным методом для будущих исследований по лимфатической функции в здоровых и больных условиях.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.9% Sodium Chloride Saline</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>JB1323</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100% ethanol</td>
			<td>Greenfield Global</td>
			<td></td>
			<td>University of Calgary distribution services UN1170.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Depilatory cream</td>
			<td>Nair</td>
			<td></td>
			<td>Nair Sensitive Formula Hair Removal Cr&#232;me with Sweet Almond Oil and Baby Oil, 200-ml. Or similar product.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Evans Blue dye</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>E2129-10G</td>
			<td>For 1 ml of Evans blue dye, add 0.1g Evans blue to 10 ml PBS. The Evens Blue solution will be filtered through 0.22 mm filters and kept sterile in 1ml aliquots.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescein isothiocyanate isomer I (FITC)</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>F7250-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps Dumont #3</td>
			<td>WPI</td>
			<td>500337</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps Dumont #5</td>
			<td>WPI</td>
			<td>500233</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injection apparatus</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Connect one end of polyethylene tubing to 30G &#215; &#189; needle. Attach a 1ml TB syringe to the needle. Dislodge needle shaft from another 30G &#215; &#189; needle. Insert the blunt end of the 30G &#215; &#189; needle shaft into the other end of the tubing. The inside diameter of this tubing is 0.28mm. Thus, 1.6 cm of fluid in the tubing is 1 &#956;l.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringe</td>
			<td>Becton Dickinson and Company (BD)</td>
			<td>329461</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IRIS Forcep straight</td>
			<td>WPI</td>
			<td>15914</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IRIS scissors</td>
			<td>WPI</td>
			<td>14218-G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Narketan</td>
			<td>DIN 02374994</td>
			<td>The suppliers of Ketamine and Xylazine are usually under institutional and governmental regulation.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needles (26Gx3/8)</td>
			<td>Becton Dickinson and Company (BD)</td>
			<td>305110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needles (30Gx1/2)</td>
			<td>Becton Dickinson and Company (BD)</td>
			<td>305106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paton Needle Holder</td>
			<td>ROBOZ</td>
			<td>RS6403</td>
			<td>Straight, Without Lock; Serrated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-Buffered Saline (PBS)</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>P4417-100TAB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyethylene tubing</td>
			<td>Becton Dickinson and Company (BD)</td>
			<td>427401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical tape (1.25cmx9.1m )</td>
			<td>Transpore</td>
			<td>1527-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical tape (2.5cmx9.1m )</td>
			<td>Transpore</td>
			<td>1527-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture</td>
			<td>Davis and Geck CYANAMID Canada</td>
			<td>11/04</td>
			<td>0.7 metric monofilament polypropylene</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe (1ml)</td>
			<td>Becton Dickinson and Company (BD)</td>
			<td>309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VANNAS scissors</td>
			<td>World Precision Instruments (WPI)</td>
			<td>14122-G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Rompun</td>
			<td>DIN02169606</td>
			<td>The suppliers of Ketamine and Xylazine are usually under institutional and governmental regulation.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>Olympus S261 (522-STS OH141791) with light source: Olympus Highlight 3100</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td>SP8</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

blocking lymph flow by suturing afferent lymphatic vessels in mice

Лимфатические сосуды имеют решающее значение для поддержания баланса тканевой жидкости и оптимизации иммунной защиты путем транспортировки антигенов, цитокинов и клеток для слива лимфатических узлов (LNs). Прерывание лимфатического потока является важным методом при изучении функции лимфатических сосудов. Афферентные лимфатические сосуды от муринной подножки до поплитальных лимфатических узлов (pLNs) четко определены как единственные маршруты для лимфатического дренажа в pLNs. Засасывания этих афферентных лимфатических сосудов может избирательно предотвратить лимфатический поток в PLNs. Этот метод позволяет помехи в лимфатическом потоке с минимальным ущербом для лимфатических эндотелиальных клеток в дренажных ЛЬН, афферентных лимфатических сосудов, а также других лимфатических сосудов вокруг области. Этот метод был использован для изучения того, как лимфатические воздействия высоких эндотелиальных вен (HEV) и хемокин выражение в ЛН, и как лимфатические потоки через жировой ткани, окружающие ЛН в отсутствие функциональных лимфатических сосудов. С растущим признанием важности лимфатической функции, этот метод будет иметь более широкое применение для дальнейшего распутывания функции лимфатических сосудов в регулировании микроокноронности LN и иммунных реакций.

Лимфатический сосуд шов был использован впредыдущих исследованиях 15,16,17,19, где он служил важным инструментом для изучения функции лимфатического потока, прежде чем молекулярная биология лимфатических сосудов была ?...

Watch this Scientific Journal Video about Blocking Lymph Flow by Suturing Afferent Lymphatic Vessels in Mice at JoVE.com

Blocking Lymph Flow by Suturing Afferent Lymphatic Vessels in Mice

Представлен протокол блокирования лимфатического потока хирургическим завозом афферентных лимфатических сосудов.

Блокирование лимфатического потока путем засовывания афферентных лимфатических сосудов у мышей

Lymphatic vessels are critical in maintaining tissue fluid balance and optimizing immune protection by transporting antigens, cytokines, and cells to ...

Этот метод прерывает лимфатический поток с минимальным повреждением лимфатических эндотелиальных клеток, и с точным контролем времени блокады, он может быть использован для изучения того, как лимфатический поток влияет на гомеостаз и иммунные реакции в лимфатическом узле. Помочь продемонстрировать процедуру будет Цзиньгна Сюэ, аспирант моей лаборатории. Для подготовки инъекционного аппарата вырежьте около 30 сантиметров полиэтиленовых труб.Подключите кончик иглы А к одному концу трубки. Аккуратно выбить другую иглу и соединить сломанную сторону с другим концом полиэтиленовой трубки. Затем прикрепите иглу А к одноми миллилитровому трубчатому шприцу.Непосредственно перед использованием, подготовить 10:1 кетамин-ксилазин смеси в солевой раствор. После анестезии мыши путем введения 250 микролитров кетамина / ксилазина смеси инстраперитонически, обеспечить полную анестезию с щепоткой ноша. Бритье меха вокруг ног с ножницами для волос, а затем применить крем для депиляатора вокруг ноги.Через пять минут протрите остаточный мех и крем для депиля с помощью влажной ткани, затем очистите ногу стерильной водой. Спрей 70% этанола вокруг ноги, чтобы стерилизовать операционную площадь. Поместите мышь в положение, подверженную, и использовать хирургическую ленту, чтобы разоблачить область операции на правой ноге.Внутридермально вводят пять микролитров 1%Эванс синий краситель, или девять сантиметров жидкости из инъекционного аппарата трубки в правой ноге площадку мыши. Аккуратно массируйте подножку, чтобы помочь жидкости войти в лимфатические сосуды. Под рассеченным микроскопом найдите место разреза в пяти миллиметрах от нижней кромки поплитальной ямки.Используя ножницы, сделайте небольшой разрез длиной около пяти миллиметров. Затем используйте тонкие типсы операции, чтобы растянуть разрез и подвергать сбора лимфатических сосудов. Определите оба афферентных лимфатических сосудов, ведущих к popliteal лимфатических узлов.Используя держатель иглы, осторожно вставьте швовую иглу между афферентными лимфатическими сосудами и сафеновой артерией. Аккуратно вытащите иглу вокруг афферентных лимфатических сосудов. Аккуратно потяните шовную веревку, оставив позади около двух сантиметров шовной струны.Используйте держатель иглы, чтобы помочь связать узел хирурга. Аккуратно массируйте подножку для ног, чтобы не Эванс синий краситель проходит шов сайт, а затем сократить избыток строки с ножницами. Шов других афферентных лимфатических сосудов, а затем закрыть разрез кожи с тем же швом, который был использован для лимфатических сосудов.Для фиктивного контроля, внутридермально ввести пять микролитров 1%Evans синий краситель в левой ноге площадку, и массаж ноги площадку. Откройте кожу разрезом, а затем закройте рану, не завяв сосуд. При мониторинге мыши после операции, правая нога должна показать отек, с Эванс синий краситель распространяется на бедро, в то время как контрольная нога покажет Эванс синий краситель ограничивается ноги площадку.Сразу после операции внутридермально вводят 10 микролитров 2%FITC как в правой ноге, так и в левой. Два, шесть и 12 часов после инъекции FITC, собирать popliteal лимфатических узлов из ямы усыпанных мышей. Тщательно удалите перинодальную жировую ткань вокруг pLNs.Вставлять pLNs в оптимальной резки температурного соединения с медуллярной области пазухи лицом к стороне крио формы. Используйте криотом для подготовки 20-микрон замороженных секций. Чтобы определить распределение FITC в pLNs, изображение крио-разделов под конфокалятивным микроскопом.Конфокальные изображения, сделанные через два, шесть и 12 часов после инъекции FITC, показывают существенное снижение накопления FITC в поплитальных лимфатических узлах после за швов на афферентные лимфатические сосуды. Остаточный FITC в pLNs был преференциарен аккумулирован в пазухах лимфатических узлов. Конфокальные изображения перинодальной жировой ткани показывают, когда лимфатические сосуды блокируются швами, FITC попадает в ткань, когда лимфатические узлы пазухи, но это не эффективно распределены по лимфатическим узлам.При попытке этого метода, важно помнить, что вставка шва иглы между кровеносным сосудом и лимфатическим сосудом имеет решающее значение. Неудача этого шага может сломать сосуды. После выполнения этого метода, можно иммунизации мышей с инфекцией или другой иммунной стимуляции для изучения того, как лимфатический поток регулирует иммунную защиту.Функция лимфатического потока не очень хорошо понимается. Этот метод может быть использован для изучения миграции клеток в лимфатическом узле при отсутствии лимфатического потока.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Measuring Calpain Activity in Fixed and Living Cells by Flow Cytometry

Измерение кальпаин деятельности в фиксированных и живых клеток методом проточной цитометрии

Calpains are ubiquitous intracellular, calcium-sensitive, neutral cysteine proteases 1. Calpains play crucial roles in many physiological processes, ...

Non-surgical Intratracheal Instillation of Mice with Analysis of Lungs and Lung Draining Lymph Nodes by Flow Cytometry

Безоперационное эндотрахеальном введении мышей с анализа легких и легочных Слив лимфатических узлов методом проточной цитометрии

Phagocytic cells such as alveolar macrophages and lung dendritic cells (LDCs) continuously sample antigens from the alveolar spaces in the 
lungs. LDCs, ...

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

Представляем напряжения сдвига в изучении бактериальной адгезии

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

The Mesenteric Lymph Duct Cannulated Rat Model: Application to the Assessment of Intestinal Lymphatic Drug Transport

Mesenteric лимфатический проток канюлированного крысиной модели: Приложение к оценке кишечных лимфатической транспорта лекарства

The intestinal lymphatic system plays key roles in fluid transport, lipid absorption and immune function. Lymph flows directly from the small intestine ...

Vasodilation of Isolated Vessels and the Isolation of the Extracellular Matrix of Tight-skin Mice

Вазодилатацию изолированных судов и Изоляция внеклеточного матрикса мышей Плотно кожи

The interferon regulatory factor 5 (IRF5) is crucial for cells to determine if they respond in a pro-inflammatory or anti-inflammatory fashion. IRF5's ...

Intracellular Staining and Flow Cytometry to Identify Lymphocyte Subsets within Murine Aorta, Kidney and Lymph Nodes in a Model of Hypertension

Внутриклеточные Окрашивание и проточной цитометрии для идентификации субпопуляций лимфоцитов в пределах мышиной аорте, почек и лимфатических узлов в модели артериальной гипертензии

It is now well known that T lymphocytes play a critical role in the development of several cardiovascular diseases1,2,3,4,5. For example, studies from our ...

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Изоляции и в пробирке культуры мышиных и человека альвеолярные макрофаги

Alveolar macrophages are terminally differentiated, lung-resident macrophages of prenatal origin. Alveolar macrophages are unique in their long life and ...

Deep Vein Thrombosis Induced by Stasis in Mice Monitored by High Frequency Ultrasonography

Тромбоз глубоких вен, индуцированных застой в мышей, под контролем УЗИ высокой частоты

Venous thrombosis is a common condition affecting 1 - 2% of the population, with an annual incidence of 1 in 500. Venous thrombosis can lead to death ...

Digestion of the Murine Liver for a Flow Cytometric Analysis of Lymphatic Endothelial Cells

Пищеварение мышиных печени для анализа гранулярных поток лимфы эндотелиальных клеток

Within the liver, lymphatic vessels are found within the portal triad, and their described function is to remove interstitial fluid from the liver to the ...

Determination of Regulatory T Cell Subsets in Murine Thymus, Pancreatic Draining Lymph Node and Spleen Using Flow Cytometry

Определение нормативных Т-клеток подмножеств в мышиных вилочковой железы, поджелудочной железы, дренаж лимфатических узлов и селезенки, с помощью проточной цитометрии

Our immune system consists of a number and variety of immune cells including regulatory T cells (Treg) cells. Treg cells can be divided into two subsets, ...