Name: measuring crop motility and food passaging in drosophila
Uploaded: 2020-05-09T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measuring Crop Motility and Food Passaging in Drosophila at JoVE.com

Diese Arbeit wurde von der National Natural Science Foundation of China (Nr. 31872287), Natural Science Foundation of Jiangsu Province (NO. BK20181456) und Six talent peaks project in Jiangsu Province (Nr. SWYY-146).

1. Pflege und Vorbereitung von Experimentellen Fliegen
<ol><li>Halten Sie Fliegen in Fläschchen mit 10 ml frisch zubereiteter Nahrung (1% Agar, 2,4% Bierhefe, 3% Saccharose, 5% Maismehl) in einem Brutkasten bei 25 °C mit 60% Luftfeuchtigkeit. Stellen Sie den Lichtzyklus des Inkubators auf 12-h-Licht:12-h dunkel ein.</li>
	<li>Um sicherzustellen, dass eine große Anzahl der gewünschten Genotypfliegen gleichzeitig eatiert, Kultur junge Fliegen (1-3 Tage alt) in Standard-Lebensmittel mit trockener Hefe auf der Oberflä...

<ol>
	<li>Kusano, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gastrointestinal+motility+and+functional+gastrointestinal+diseases.">Gastrointestinal motility and functional gastrointestinal diseases.</a> Current Pharmaceutical Design. 20 (16), 2775-2782 (2014).</li><li>Reiter, L. T., Potocki, L., Chien, S., Gribskov, M., Bier, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+systematic+analysis+of+human+disease-associated+gene+sequences+in+Drosophila+melanogaster.">A systematic analysis of human disease-associated gene sequences in Drosophila melanogaster.</a> Genome Research. 11 (6), 1114-1125 (2001).</li><li>Apidianakis, Y., Rahme, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+melanogaster+as+a+model+for+human+intestinal+infection+and+pathology.">Drosophila melanogaster as a model for human intestinal infection and pathology.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 4 (1), 21-30 (2011).</li><li>Lemaitre, B., Miguel-Aliaga, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Digestive+Tract+of+Drosophila+melanogaster.">The Digestive Tract of Drosophila melanogaster.</a> Annual Review of Genetics. 47, 377-404 (2013).</li><li>Miguel-Aliaga, I., Jasper, H., Lemaitre, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomy+and+Physiology+of+the+Digestive+Tract+of+Drosophila+melanogaster.">Anatomy and Physiology of the Digestive Tract of Drosophila melanogaster.</a> Genetics. 210 (2), 357-396 (2018).</li><li>Strand, M., Micchelli, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quiescent+gastric+stem+cells+maintain+the+adult+Drosophila+stomach.">Quiescent gastric stem cells maintain the adult Drosophila stomach.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (43), 17696-17701 (2011).</li><li>Ren, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beadex+affects+gastric+emptying+in+Drosophila.">Beadex affects gastric emptying in Drosophila.</a> Cell Research. 24 (5), 636-639 (2014).</li><li>Xi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+TORC1+inhibitor+Nprl2+protects+age-related+digestive+function+in+Drosophila.">The TORC1 inhibitor Nprl2 protects age-related digestive function in Drosophila.</a> Aging. 11 (21), 9811-9828 (2019).</li><li>Wei, Y., Reveal, B., Cai, W., Lilly, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+GATOR1+Complex+Regulates+Metabolic+Homeostasis+and+the+Response+to+Nutrient+Stress+in+Drosophila+melanogaster.">The GATOR1 Complex Regulates Metabolic Homeostasis and the Response to Nutrient Stress in Drosophila melanogaster.</a> G3. 6 (12), 3859-3867 (2016).</li><li>Ja, W. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prandiology+of+Drosophila+and+the+CAFE+assay.">Prandiology of Drosophila and the CAFE assay.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104 (20), 8253-8256 (2007).</li><li>Diegelmann, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+CApillary+FEeder+Assay+Measures+Food+Intake+in+Drosophila+melanogaster.">The CApillary FEeder Assay Measures Food Intake in Drosophila melanogaster.</a> Journal of Visualized Experiments. (121), e55024 (2017).</li><li>Edgecomb, R. S., Harth, C. E., Schneiderman, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+feeding+behavior+in+adult+Drosophila+melanogaster+varies+with+feeding+regime+and+nutritional+state.">Regulation of feeding behavior in adult Drosophila melanogaster varies with feeding regime and nutritional state.</a> Journal of Experimental Biology. 197, 215-235 (1994).</li><li>Peller, C. R., Bacon, E. M., Bucheger, J. A., Blumenthal, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defective+gut+function+in+drop-dead+mutant+Drosophila.">Defective gut function in drop-dead mutant Drosophila.</a> Journal of Insect Physiology. 55 (9), 834-839 (2009).</li><li>Chtarbanova, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+C+virus+systemic+infection+leads+to+intestinal+obstruction.">Drosophila C virus systemic infection leads to intestinal obstruction.</a> Journal of Virology. 88 (24), 14057-14069 (2014).</li><li>Solari, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Opposite+effects+of+5-HT/AKH+and+octopamine+on+the+crop+contractions+in+adult+Drosophila+melanogaster:+Evidence+of+a+double+brain-gut+serotonergic+circuitry.">Opposite effects of 5-HT/AKH and octopamine on the crop contractions in adult Drosophila melanogaster: Evidence of a double brain-gut serotonergic circuitry.</a> PLoS One. 12 (3), 0174172 (2017).</li></ol>

In Drosophila aufgenommene Nahrung bewegt sich von der Ernte in den Darm für die Verdauung. Dabei werden die Nährstoffe aufgenommen und der Abfall als Kot aus dem Körper vertrieben. So kann der Vergleich der Nahrungsaufnahme mit dem Kotauswurf verwendet werden, um die Geschwindigkeit der Nahrungsbewegung im Körper grob zu beurteilen. Die Methode der Kapillarzuführung (CAFE) ist weit verbreitet, um die Nahrungsaufnahme zu messen10,11. Die Methode der...

Die meisten Tiere haben eine Verdauungsröhre genannt magenintestinal (GI) Trakt, um Energie und Nährstoffe aus der Umwelt zu absorbieren. Der menschliche GI-Trakt besteht aus vier Teilen: Speiseröhre, Magen, Dünndarm und Dickdarm (Kolon). Der Nahrungsübergang vom Magen in den Darm ist für die Nährstoffaufnahme unerlässlich. Einige Effektoren, wie Alterung, toxische Medikamente, und Infektion, verursachen gestörte GI-Trakt Motilität und Magenentleerung, die mit einigen Krankheiten und ihre Symptome wie Dyspepsie, gastroösophageale Reflux-Krankheit, und Verstopfung1verbunden ist.
Die Fruchtfliege(Drosophila melanogaster) ist ein weit verbreitetes Mustertier in der biomedizinischen Forschung aufgrund seiner einfachen genetischen Manipulation. Wichtig ist, dass etwa 77% der Gene, die mit menschlichen Krankheiten assoziiert sind, einen Homolog in Drosophila2haben. Die Forschung mit Drosophila hat enorme Fortschritte in unserem Verständnis vieler Krankheitsmechanismen gemacht. Als mächtiger genetischer Modellorganismus ist Drosophila weit verbreitet in der GI-Traktforschung3. Drosophila hat einen einfacheren Verdauungstrakt, der in drei diskrete Bereiche unterteilt ist: Vorgut, Mittelgut und Hinterdarm4. Die Ernte, ein Teil des Vorguts, ist eine beutelartige Struktur, die als Ort für die Lagerung von aufgenommenen Lebensmitteln dient. Das Midgut ist eine lange Röhre und fungiert als Ort für die Verdauung und Nährstoffaufnahme durch die Epithelschicht, die aus absorptiven Enterozyten (ECs) und sekretorischen enteroendokrinen (EE) Zellenbesteht 5. Interessanterweise ist die Magenfunktion in Drosophila in zwei Teile unterteilt: Die Ernte funktioniert als Lebensmittellagerung und die Kupferzellregion (CCR) ist eine hochsäugische Region mit einem pH < 36. In Drosophilawird das aufgenommene Essen zunächst in die Ernte gebracht und anschließend in smittelgut7gepumpt. Daher spielt die Ernte eine entscheidende Rolle bei der Nahrungsweitergabe. Umhüllt von viszeralen Muskeln und bestehend aus einer komplexen Reihe von Ventilen und Schließmuskeln, zieht die Ernte immer wieder an und bewegt Nahrung zur weiteren Verdauung ins Mittelgut.
Dieses Protokoll ermöglicht den Nachweis der Lebensmittelbewegung von der Ernte bis zum Mittelgut in Drosophila. Die Erntekontraktion wird durch Zählen der Häufigkeit der Erntekontraktion bewertet. Darüber hinaus wird die Wirkung der Kultur auf die Weitergabe von Lebensmitteln untersucht, indem die Nahrungsverteilung zwischen Kultur und Darm festgestellt wird. Darüber hinaus kann die Lebensmittelverteilung verwendet werden, um die unmittelbare Lebensmittelbewegung oder den Grundlegendennahrungsstatus unter Verwendung unterschiedlicher Fütterungszeiten widerzuspiegeln. Zusammengenommen bietet dieses Protokoll Methoden zur schnellen Bewertung der Beweglichkeit von Pflanzen und der Nahrungsweitergabe in Drosophila.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>96-well plate</td>
			<td>Thermo fisher</td>
			<td>269620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brillant Blue FCF</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>E8500</td>
			<td>also called FD&#38;C Blue No. 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Thermo fisher</td>
			<td>Heraeus Pico 17</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectrophotometer</td>
			<td>Spectra Max</td>
			<td>cMax plus</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezers</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>11252-30</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring crop motility and food passaging in drosophila

Die meisten Tiere verwenden den Magen-Darm-Trakt (GI), um Nahrung zu verdauen. Die Bewegung der aufgenommenen Nahrung im GI-Trakt ist für die Nährstoffaufnahme unerlässlich. Gestörte GI-Motilität und Magenentleerung verursachen mehrere Krankheiten und Symptome. Als mächtiger genetischer Modellorganismus kann Drosophila in der GI-Motilitätsforschung eingesetzt werden. Die DD-Rosophila-Ernte ist ein Organ, das sich zusammenzieht und Nahrung zur weiteren Verdauung ins Mittelgut verschiebt, funktionell ähnlich wie ein Säugetiermagen. Präsentiert wird ein Protokoll zur Untersuchung der Beweglichkeit der Drosophila-Pflanzen mit einfachen Messwerkzeugen. Beschrieben wird eine Methode zum Zählen von Erntekontraktionen zur Bewertung der Beweglichkeit von Pflanzen und eine Methode zum Nachweis der Verteilung von blau gefärbten Lebensmitteln zwischen der Ernte und dem Darm, die ein Spektralphotometer verwenden, um die Auswirkungen der Kultur auf die Weitergabe von Lebensmitteln zu untersuchen. Die Methode wurde verwendet, um den Unterschied in der Beweglichkeit der Ernte zwischen Kontroll- und nprl2-Mutantenfliegen zu erkennen. Dieses Protokoll ist sowohl kosteneffizient als auch sehr empfindlich auf Diebeszeit.

Diese Methoden zur Zählung der Erntekontraktionsrate und zum Nachweis der Verteilung gefärbter Lebensmittel können verwendet werden, um die Erntefunktion auf die Beweglichkeit von Lebensmitteln zu bewerten. Die Erntekontraktion spiegelt die Häufigkeit wider, Lebensmittel in den Darm zu schieben. Die Verteilung von Farbstoff in der Fliege nach einer kurzen Fütterungszeit zeigt, dass die Nahrung von der Ernte bis zum Mittelgut sofort abgeht.
Target of rapamycin complex 1 (TORC1) ist ein Mas...

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Measuring Crop Motility and Food Passaging in Drosophila

Das Ziel dieses Protokolls ist es, die Kontraktion der Ernte zu messen und die Lebensmittelverteilung im Drosophila-Darm zu quantifizieren.

Messung der Pflanzenmotilität und Lebensmittelpassierung in Drosophila

Most animals use the gastrointestinal (GI) tract to digest food. The movement of the ingested food in the GI tract is essential for nutrient absorption. ...

Diese Methode wird verwendet, um die Beweglichkeit der Kultur zu bewerten, indem die Erntekontraktion gezählt und die Nahrungsverteilung nur im Verdauungsmittel erkannt wird. Der Vorteil dieser Technik ist, dass sie kontinuierlich die Beweglichkeit der Ernte bewertet. Es ist kostengünstig und einfach durchzuführen.Diese Methode ermöglicht es, nur Füllstoff als Modell zu verwenden, um die Verdauungsfunktion auf den Nahrungsgängen im Magen-Darm-Trakt zu untersuchen. Helfen, den Prozess zu demonstrieren wird Junmeng Xi, ein Student aus meinem Labor. Halten Sie Fliegen in Fläschchen mit 10 Milliliterfrisch erlegten Lebensmitteln in einem 25 Grad Celsius Inkubator mit 60% Luftfeuchtigkeit und einem 12-stündigen hellen, 12-stündigen dunklen Zyklus.Stellen Sie sicher, dass eine große Anzahl der Wunsch-Phänotyp-Fliegen gleichzeitig eclose, indem Sie junge Fliegen mit Standardnahrung mit trockener Hefe kultivieren, dann die erwachsenen Fliegen auf eine Durchstechflasche mit nasser Hefe übertragen und zwei Tage für die Eiablage zulassen. Lassen Sie die Eier im Brutkasten, um erwachsene Fliegen zu entwickeln und in eine neue Durchstechflasche zu bringen, um mehr Eier zu sammeln. Sammeln Sie die geschlossenen männlichen oder weiblichen Fliegen jeden Tag und Kultur sie in neuen Fläschchen mit Standard-Lebensmittel auf das gewünschte Alter.Anästhesisieren Sie die Fliegen mit Kohlendioxid und übertragen Sie eine Fliege in eine Sezierenplatte gut mit 200 Mikroliter PBS. Greifen Sie die Fliege an ihrem Thorax mit einer Pinzette und öffnen Sie den Thorax mit einem anderen Paar Pinzette dann ziehen Sie die Enden in entgegengesetzte Richtungen, um den Bauch zu öffnen. Nehmen Sie vorsichtig die Ernte und darm aus dem Körper und warten Sie, bis die Fliege aufwacht.Wenn die Fliege wach ist, zählen Sie die Anzahl der Ernteverträge in einer Minute. Wiederholen Sie die Kontraktionszählung fünfmal und warten Sie 30 Sekunden zwischen den einzelnen Zählungen. Wiegen Sie den blauen Farbstoff und lösen Sie ihn in PBS in einer Konzentration von 20%.Dann rühren Sie es in die gekochte flüssige Pflegenahrung auf eine Endkonzentration von 5% während des Lebensmittelkühlprozesses. Nachdem Sie Fliegen vier Stunden lang in Fläschchen mit Hungerfutter gehalten haben, überführen Sie sie in neue Fläschchen mit dem gefärbten Essen und bebauen Sie sie für die gewünschte Zeit, wobei Zudenken, dass das Essen bei Wartungsbedingungen in etwa zwei Stunden durch die Fliege geht. Übertragen Sie eine anästhesierte Fliege in einen Sezierenden Plattenbrunnen, der 200 Mikroliter PBS enthält.Verwenden Sie Pinzette, um die Fliege am Thorax zu greifen und den Kopf mit einem anderen Paar Pinzette zu entfernen, dann übertragen Sie den Körper zu einem neuen Brunnen mit PBS und waschen Sie es mit sanftem Schütteln, um den Farbstoff am Körper befestigt zu entfernen. Öffnen Sie den Bauch mit zwei Pinzetten und trennen Sie vorsichtig den ganzen Darm vom Körper. Nehmen Sie die Ernte aus dem ganzen Darm und legen Sie es in ein Rohr mit 100 Mikroliter PBS.Legen Sie den Rest des Darms in ein anderes Rohr mit 100 Mikroliter PBS dann verwenden Pipettenspitzen, um die Ernte und Darm zu schleifen und lösen Sie den Farbstoff in PBS. Wiederholen Sie die Sezierung, bis genügend Pflanzen und Eingeweide gesammelt werden. Nach dem Sammeln der Proben zentrieren Sie die Rohre mit der höchsten Geschwindigkeit für eine Minute und übertragen Sie 90 Mikroliter Überstand auf gut eine 96-Well-Platte.Machen Sie eine Reihe von Standard-Blaufarbstoff verdünnungen in Konzentrationen von einmal 10 bis 7 bis 10 bis 4. Gramm pro Milliliter und fügen Sie sie zu den Brunnen. Messen Sie die Absorption bei 630 Nanometern der Brunnen und verwenden Sie die Standardmessungen, um einen Liniendiagramm der Absorptions- und Farbstoffkonzentration zu zeichnen. Verwenden Sie dann die Kurve, um die Farbstoffkonzentration der Proben zu berechnen.Der Pflanzenmotilitätstest wurde verwendet, um Erntekontraktionen auf drei Tage alte NPRL-Mutantenfliegen und genetische Hintergrundkontrollen zu zählen. Es wurde festgestellt, dass die Mutation die Rate der Erntekontraktion signifikant verringerte. Um die Funktion von NPRL2 auf der Ernte weiter zu bestätigen, wurde die Nahrungsbewegung durch die Fütterung von gefärbten Lebensmitteln an die Fliegen nachgewiesen.Alle Fliegen hatten ähnliche Mengen an Farbstoff in der Ernte, aber die NPRL2 Fliegen hatten weniger Farbstoff im Darm, die mit der verringerten Erntekontraktionsrate verbunden sein können. Achten Sie bei der Eingabe dieses Protokolls darauf, dass die Ernte mit dem Körper in Kontakt bleibt und die Fliege lebendig und wach ist. Andernfalls verliert die Ernte die Fähigkeit, sich zu verancverträge.Während des Sezierens sollten die Ernte und der Darm in Kontakt sein. Wenn Farbstoffe in das Seziermedium austreten, kann die Probe nicht mehr verwendet werden. Lassen Sie uns einfach unseren Appetit füllen und der Lebensmittelauswurf innerhalb kurzer Zeit kann auch durch die Erkennung der Farbstoffmenge im ganzen Darm bewertet werden.

Research

JoVE Journal

Biology

Measuring Crop Motility and Food Passaging in Drosophila

Passaging HuES Human Embryonic Stem Cell-lines with Trypsin.

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In this video we demonstrate how our lab routinely passages HuES human embryonic stem cell lines with trypsin.  Human embryonic stem cells are artifacts ...

Forschung

Biologie

Passaging Human Neural Stem Cells

Passagierung humaner neuraler Stammzellen

The ability to manipulate human neural stem/precursor cells (hNSPCs) in vitro provides a means to investigate their utility as cell transplants for ...

Isolation of Protoplasts from Tissues of 14-day-old Seedlings of Arabidopsis thaliana

Isolation of Protoplasts from Tissues of 14-day-old Seedlings of Arabidopsis thaliana

Isolation von Protoplasten aus Geweben von 14-Tage alte Keimlinge von Arabidopsis thaliana</em

Protoplasts are plant cells that have had their cell walls enzymatically removed. Isolation of protoplasts  from different plant tissues was first ...

Catheterization of Intestinal Loops in Ruminants

Katheterisierung der Darmschlingen bei Wiederkäuern

The intestine is a complex structure that is involved not only in absorption of nutrients, but also acts as a barrier between the individual and the ...

Robotics and Dynamic Image Analysis for Studies of Gene Expression in Plant Tissues

Robotik und Dynamic Image Analysis für Studies of Gene Expression in pflanzlichen Geweben

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Gastrointestinal Motility Monitor (GIMM)

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Gastrointestinale Motilität Monitor (Gimm)

The Gastrointestinal Motility Monitor (GIMM; Catamount Research and Development; St. Albans, VT) is an in vitro system that monitors propulsive motility ...

Detection of Protein Interactions in Plant using a Gateway Compatible Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) System

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Detektion von Protein-Wechselwirkungen in Plant mit einem Gateway kompatibel bimolekularen Fluoreszenz Komplementation (BIFC) System

We have developed a BiFC technique to test the interaction between two proteins in vivo. This is accomplished by splitting a yellow fluorescent protein ...

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

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Live-Imaging von apoptotischen Ausverkauf während<em&gt; Drosophila</em&gt; Embryogenese

The  proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and  subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal  ...

Measuring Glutathione-induced Feeding Response in Hydra

Mess Glutathion-induzierte Fütterung Antwort in Hydra

Hydra is among the most primitive organisms possessing a nervous system and chemosensation for detecting reduced glutathione (GSH) for capturing the prey. ...

Visualizing and Tracking Endogenous mRNAs in Live Drosophila melanogaster Egg Chambers

Visualizing and Tracking Endogenous mRNAs in Live Drosophila melanogaster Egg Chambers

Visualisierung und Verfolgung endogenes mRNAs in Live Drosophila melanogaster Eierkammern

Fluorescence-based imaging techniques, in combination with developments in light microscopy, have revolutionized how cell biologists conduct live cell ...