Name: measuring crop motility and food passaging in drosophila
Uploaded: 2020-05-09T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measuring Crop Motility and Food Passaging in Drosophila at JoVE.com

이 작품은 중국 국립 자연과학 재단(제3187만2287호)의 지원을 받아 장쑤성 자연과학재단(NO. BK20181456) 및 강쑤성 6개 인재 피크 프로젝트(No. SWYY-146).

1. 실험용 파리 를 유지하고 준비합니다.
<ol><li>25°C에서 25°C의 인큐베이터에서 갓 만든 식품 10mL(1% 한천, 2.4% 양조업자 효모, 3% 자당, 옥수수 5%)를 함유한 바이알에서 파리를 유지합니다. 인큐베이터의 라이트 사이클을 12h 라이트:12-h 어둡게 설정합니다.</li>
	<li>원하는 유전자형의 다수가 동시에 닫히도록 하기 위해, 문화 젊은 파리 (1-3 일 오래 된) 표면에 건조 효모와 표준 식품에서 3 일 동안. 젖...

<ol>
	<li>Kusano, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gastrointestinal+motility+and+functional+gastrointestinal+diseases.">Gastrointestinal motility and functional gastrointestinal diseases.</a> Current Pharmaceutical Design. 20 (16), 2775-2782 (2014).</li><li>Reiter, L. T., Potocki, L., Chien, S., Gribskov, M., Bier, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+systematic+analysis+of+human+disease-associated+gene+sequences+in+Drosophila+melanogaster.">A systematic analysis of human disease-associated gene sequences in Drosophila melanogaster.</a> Genome Research. 11 (6), 1114-1125 (2001).</li><li>Apidianakis, Y., Rahme, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+melanogaster+as+a+model+for+human+intestinal+infection+and+pathology.">Drosophila melanogaster as a model for human intestinal infection and pathology.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 4 (1), 21-30 (2011).</li><li>Lemaitre, B., Miguel-Aliaga, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Digestive+Tract+of+Drosophila+melanogaster.">The Digestive Tract of Drosophila melanogaster.</a> Annual Review of Genetics. 47, 377-404 (2013).</li><li>Miguel-Aliaga, I., Jasper, H., Lemaitre, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomy+and+Physiology+of+the+Digestive+Tract+of+Drosophila+melanogaster.">Anatomy and Physiology of the Digestive Tract of Drosophila melanogaster.</a> Genetics. 210 (2), 357-396 (2018).</li><li>Strand, M., Micchelli, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quiescent+gastric+stem+cells+maintain+the+adult+Drosophila+stomach.">Quiescent gastric stem cells maintain the adult Drosophila stomach.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (43), 17696-17701 (2011).</li><li>Ren, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beadex+affects+gastric+emptying+in+Drosophila.">Beadex affects gastric emptying in Drosophila.</a> Cell Research. 24 (5), 636-639 (2014).</li><li>Xi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+TORC1+inhibitor+Nprl2+protects+age-related+digestive+function+in+Drosophila.">The TORC1 inhibitor Nprl2 protects age-related digestive function in Drosophila.</a> Aging. 11 (21), 9811-9828 (2019).</li><li>Wei, Y., Reveal, B., Cai, W., Lilly, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+GATOR1+Complex+Regulates+Metabolic+Homeostasis+and+the+Response+to+Nutrient+Stress+in+Drosophila+melanogaster.">The GATOR1 Complex Regulates Metabolic Homeostasis and the Response to Nutrient Stress in Drosophila melanogaster.</a> G3. 6 (12), 3859-3867 (2016).</li><li>Ja, W. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prandiology+of+Drosophila+and+the+CAFE+assay.">Prandiology of Drosophila and the CAFE assay.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104 (20), 8253-8256 (2007).</li><li>Diegelmann, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+CApillary+FEeder+Assay+Measures+Food+Intake+in+Drosophila+melanogaster.">The CApillary FEeder Assay Measures Food Intake in Drosophila melanogaster.</a> Journal of Visualized Experiments. (121), e55024 (2017).</li><li>Edgecomb, R. S., Harth, C. E., Schneiderman, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+feeding+behavior+in+adult+Drosophila+melanogaster+varies+with+feeding+regime+and+nutritional+state.">Regulation of feeding behavior in adult Drosophila melanogaster varies with feeding regime and nutritional state.</a> Journal of Experimental Biology. 197, 215-235 (1994).</li><li>Peller, C. R., Bacon, E. M., Bucheger, J. A., Blumenthal, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defective+gut+function+in+drop-dead+mutant+Drosophila.">Defective gut function in drop-dead mutant Drosophila.</a> Journal of Insect Physiology. 55 (9), 834-839 (2009).</li><li>Chtarbanova, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+C+virus+systemic+infection+leads+to+intestinal+obstruction.">Drosophila C virus systemic infection leads to intestinal obstruction.</a> Journal of Virology. 88 (24), 14057-14069 (2014).</li><li>Solari, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Opposite+effects+of+5-HT/AKH+and+octopamine+on+the+crop+contractions+in+adult+Drosophila+melanogaster:+Evidence+of+a+double+brain-gut+serotonergic+circuitry.">Opposite effects of 5-HT/AKH and octopamine on the crop contractions in adult Drosophila melanogaster: Evidence of a double brain-gut serotonergic circuitry.</a> PLoS One. 12 (3), 0174172 (2017).</li></ol>

드로소필라에서 섭취 한 음식은 작물에서 소화를위한 장으로 이동합니다. 이 과정에서 영양분이 흡수되고 폐기물이 대변으로 몸밖으로 추방됩니다. 따라서, 대변 배출과 함께 음식 섭취를 비교하는 것은 대략 바디에 있는 음식 운동의 속도를 평가하기 위하여 이용될 수 있습니다. 모세관 피더(CAFE)의 방법은 식품섭취(10,,11)를측정하는 데 널리 사...

대부분의 동물은 환경에서 에너지와 영양분을 흡수하는 위장관 (GI) 관에게 불린 소화관을 가지고 있습니다. 인간 기관은 식도, 위, 소장 및 대장 (결장)의 네 부분으로 구성됩니다. 위장에서 장으로 음식 통로는 영양 흡수에 필수적입니다. 노화, 독성 약물 및 감염과 같은 일부 이펙터는 소화 불량, 위식도 역류 질환 및 변비1과같은 일부 질병 및 증상과 관련된 장애된 기관 운동성 및 위 비우기를 유발합니다.
과일 파리(Drosophila 멜라노가스터)는쉽게 유전 적 조작으로 인해 생물 의학 연구에서 널리 사용되는 모델 동물입니다. 중요하게도, 인간 질병과 관련되었던 유전자의 대략 77%는 Drosophila2에 있는 호모로그를 가지고있습니다. Drosophila를 사용 하 여 연구는 많은 질병 메커니즘의 우리의 이해에 거 대 한 발전을 했다. 강력한 유전 적 모델 유기체로서, Drosophila는 GI tract 연구3에서널리 사용됩니다. 드로소필라는 세 가지 이산 영역으로 나뉘어져 있는 간단한 소화관을 가지고 있습니다: 전가, 미드구트 및 힌드구트4. 작물, 전장의 일부, 섭취 식품 저장에 대 한 사이트 역할을 하는 가방 같은 구조. 미드구트는 농생장세포(EC)와 분비장내분비(EE) 세포5로구성된 상피층을 통한 식품 소화 및 영양 흡수 부위로서 긴 튜브 및 기능이다. 흥미롭게도, 드로소필라의 위장 기능은 두 부분으로 나뉩니다: 식품 저장과 구리 세포 영역(CCR)으로서 작물 기능은 pH & lt;36을가진 고산성 영역이다. 드로소필라에서섭취된 음식은 처음에는 작물로 옮겨져 미드구트7로펌핑됩니다. 따라서, 작물은 음식 패시징에 중요한 역할을한다. 내장 근육에 둘러싸여 밸브와 스핑크터의 복잡한 배열로 구성된 작물은 추가 소화를 위해 중간 구장으로 음식을 수축하고 이동유지합니다.
이 프로토콜은 드로소필라의작물에서 미드구트까지 음식 이동을 감지할 수 있게 해줍니다. 작물 수축은 작물 수축 빈도를 계산하여 평가됩니다. 또한 작물과 장 사이의 식품 분포를 감지하여 식품 패싱에 대한 작물의 효과를 조사합니다. 또한, 식품 분포는 다른 수유 기간을 사용하여 즉각적인 음식 운동 또는 기본 식품 상태를 반영하는 데 사용할 수 있습니다. 종합하면, 이 프로토콜은 Drosophila에서작물 운동성과 음식 패청기를 신속하게 평가하는 방법을 제공합니다.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>96-well plate</td>
			<td>Thermo fisher</td>
			<td>269620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brillant Blue FCF</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>E8500</td>
			<td>also called FD&#38;C Blue No. 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Thermo fisher</td>
			<td>Heraeus Pico 17</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectrophotometer</td>
			<td>Spectra Max</td>
			<td>cMax plus</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezers</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>11252-30</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring crop motility and food passaging in drosophila

대부분의 동물은 음식을 소화하기 위해 위장관 (GI) 항로를 사용합니다. 기관에서 섭취 한 음식의 움직임은 영양소 흡수에 필수적입니다. 무질서한 GI 운동성 및 위 비우는 다중 질병 및 현상을 일으키는 원인이 됩니다. 강력한 유전 모델 유기체로서 Drosophila는 GI 운동성 연구에 사용될 수 있습니다. D로소필라 작물은 포유류 위장과 기능적으로 유사한 추가 소화를 위해 음식을 미드구트로 계약하고 이동하는 기관입니다. 제시는 간단한 측정 도구를 사용하여 Drosophila 작물 운동성을 연구하는 프로토콜입니다. 작물 수축을 계산하여 작물 의 운동성을 평가하는 방법과 분광계를 사용하여 작물과 장 사이에 파란색으로 염색된 식품의 분포를 검출하여 식품 패세이징에 대한 작물의 효과를 조사하는 방법이 설명되어 있다. 이 방법은 대조군과 nprl2 돌연변이 파리 사이의 작물 운동성의 차이를 감지하는 데 사용되었습니다. 이 프로토콜은 비용 효율적이며 작물 운동성에 매우 민감합니다.

작물 수축 속도를 계산하고 염색 된 식품 분포를 감지하는 이러한 방법은 식품 운동성에 작물 기능을 평가하는 데 사용할 수 있습니다. 작물 수축은 음식을 창자에 밀어 넣는 빈도를 반영합니다. 짧은 수유 기간 후에 즉석에서 염료의 분포는 작물에서 미드구트로 지나가는 즉각적인 음식을 나타냅니다.
라파마이신 복합체 1(TORC1)의 표적은 영양소와 세포 대사를 중재하는 마스...

Watch this Scientific Journal Video about Measuring Crop Motility and Food Passaging in Drosophila at JoVE.com

Measuring Crop Motility and Food Passaging in Drosophila

이 프로토콜의 목표는 드로소필라 용기의 작물 수축을 측정하고 식품 유통을 정량화하는 것입니다.

드로소필라에서 작물 운동성과 음식 패시징 측정

Most animals use the gastrointestinal (GI) tract to digest food. The movement of the ingested food in the GI tract is essential for nutrient absorption. ...

이 방법은 작물 수축을 계산하고 단지 소화에서 음식 분포를 검출하여 작물 운동성을 평가하는 데 사용됩니다. 이 기술의 장점은 작물 운동성을 지속적으로 평가한다는 것입니다. 그것은 낮은 비용과 수행하기 쉽습니다.이 방법을 사용하면 위장의 음식 통로에서 소화 기능을 연구하는 모델로 필러만 사용할 수 있습니다. 그 과정을 입증하는 데 도움이 되는 것은 제 실험실대학원생인 준멩 시(Junmeng Xi)가 될 것입니다. 60%의 습도와 12시간 암울한 주기로 25도 의 섭씨 25도 의 갓 만든 음식 10 밀리리터가 들어있는 바이알에서 파리를 유지하십시오.많은 수의 욕망 표현형이 건조한 효모로 표준 음식으로 어린 파리를 배양하여 동시에 닫히는지 확인하고 성인파리를 젖은 효모로 유리병으로 옮기고 달걀 누워를 위해 이틀간 기다립니다. 인큐베이터에 계란을 두고 성인 파리를 새로운 유리병으로 옮겨 더 많은 계란을 수집합니다. 매일 밀폐된 남성 또는 암컷 파리를 수집하고 원하는 나이에 표준 음식과 함께 새로운 바이알로 배양하십시오.이산화탄소로 파리를 마취하고 PBS 200 마이크로리터를 잘 해부하는 접시에 날아갑니다. 두꺼비에 핀셋을 넣고 흉부에서 비행을 잡은 다음 다른 핀셋으로 흉부를 열고 복부를 열기 위해 반대 방향으로 끝을 당깁니다. 조심스럽게 몸에서 작물과 용기를 가지고 비행이 깨어 날 때까지 기다립니다.비행이 깨어있을 때, 1 분에 작물 계약의 횟수를 계산합니다. 각 카운트 사이에 30초를 기다리며 다섯 번 카운트하는 수축을 반복합니다. 파란색 염료의 무게를 측정하고 20 %의 농도로 PBS에 용해하십시오.그런 다음 식품 냉각 과정에서 삶은 액체 유지 보수 식품에 넣고 5 %의 최종 농도로 저어줍니다. 4 시간 동안 굶주린 음식과 유리병에 파리를 유지 한 후, 염색 된 음식과 함께 새로운 유리로 전송하고 원하는 시간 동안 그들을 문화, 유지 보수 조건에서 식품은 약 2 시간 만에 비행을 통과 한다는 것을 명심하십시오. 200 마이크로리터를 포함하는 해부 판으로 마취 된 비행을 전송합니다.핀셋을 사용하여 흉부에서 비행을 파악하고 다른 핀셋으로 머리를 제거한 다음, 몸을 PBS로 새로운 우물로 옮기고 몸에 부착 된 염료를 제거하기 위해 부드러운 흔들림으로 씻어 내세요. 두 쌍의 핀셋으로 복부를 열고 몸에서 전체 용기를 조심스럽게 분리하십시오. 전체 창자의 작물을 벗고 PBS의 100 마이크로 리터와 튜브에 넣어.PBS의 100 마이크로 리터와 다른 튜브에 창자의 나머지부분을 넣어 다음 파이펫 팁을 사용 하 여 작물과 창 자를 갈기 하 고 PBS에서 염료를 용해. 충분한 작물과 내장이 수집 될 때까지 해부를 반복합니다. 샘플을 수집한 후 1분 동안 가장 빠른 속도로 튜브를 원심분리하고 96개의 웰 플레이트로 90마이크로리터의 상퍼리터를 전달합니다.1회 10~7일 에서 10까지 농도에서 밀리리터당 4그램까지 다양한 표준 블루 염료 희석제시리즈를 만들고 우물에 추가합니다. 우물의 630 나노미터에서 흡광도를 측정하고 표준 측정을 사용하여 흡광도 대 염료 농도의 라인 그래프를 플롯합니다. 그런 다음 곡선을 사용하여 샘플의 염료 농도를 계산합니다.작물 운동성 분석3 일 된 NPRL 돌연변이 파리및 유전 배경 제어에 작물 수축을 계산 하는 데 사용 되었다. 돌연변이는 작물 수축의 비율을 현저하게 감소시키기 위하여 찾아냈습니다. 작물에 NPRL2의 기능을 더 확인하기 위해, 음식 운동은 파리에 염색 된 음식을 공급하여 검출되었다.모든 파리는 작물에 비슷한 양의 염료를 가지고 있었지만 NPRL2 파리는 작물 수축률 감소와 관련될 수 있는 용기에 염료가 적어졌다. 이 프로토콜을 입력할 때 작물이 신체에 계속 접촉하고 비행이 살아 있고 깨어 있는지 확인하십시오. 그렇지 않으면 작물은 계약 할 수있는 능력을 잃게됩니다.해부 과정에서 작물과 용기에 접촉해야합니다. 염료가 해부 매체로 누출되면 더 이상 샘플을 사용할 수 없습니다. 식욕을 채우고 짧은 시간 내에 음식 배출을 채우자 전체 장에서 염료 양을 감지하여 평가할 수도 있습니다.

Research

JoVE Journal

Biology

Measuring Crop Motility and Food Passaging in Drosophila

Passaging HuES Human Embryonic Stem Cell-lines with Trypsin.

트립신과 Passaging 색채 인간의 배아 줄기 세포 - 라인

In this video we demonstrate how our lab routinely passages HuES human embryonic stem cell lines with trypsin.  Human embryonic stem cells are artifacts ...

연구

생물학

Passaging Human Neural Stem Cells

인간 신경 줄기 세포를 Passaging

The ability to manipulate human neural stem/precursor cells (hNSPCs) in vitro provides a means to investigate their utility as cell transplants for ...

Isolation of Protoplasts from Tissues of 14-day-old Seedlings of Arabidopsis thaliana

Isolation of Protoplasts from Tissues of 14-day-old Seedlings of Arabidopsis thaliana

14 일 된 모종의 조직에서 Protoplasts의 분리 Arabidopsis thaliana</em

Protoplasts are plant cells that have had their cell walls enzymatically removed. Isolation of protoplasts  from different plant tissues was first ...

Catheterization of Intestinal Loops in Ruminants

Ruminants에 창자 루프 Catheterization

The intestine is a complex structure that is involved not only in absorption of nutrients, but also acts as a barrier between the individual and the ...

Robotics and Dynamic Image Analysis for Studies of Gene Expression in Plant Tissues

로보틱스 및 식물 조직에서 유전자 발현의 연구 동적 이미지 분석

Gene expression in plant tissues is typically studied by destructive extraction of compounds from plant tissues for in vitro analyses. The methods ...

Gastrointestinal Motility Monitor (GIMM)

Gastrointestinal Motility Monitor GIMM

위장 운동성 모니터 (GIMM)

The Gastrointestinal Motility Monitor (GIMM; Catamount Research and Development; St. Albans, VT) is an in vitro system that monitors propulsive motility ...

Detection of Protein Interactions in Plant using a Gateway Compatible Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) System

Detection of Protein Interactions in Plant using a Gateway Compatible Bimolecular Fluorescence Complementation BiFC System

게이트웨이 가능 Bimolecular의 형광 Complementation (BiFC) 시스템을 사용하여 공장에서 단백질 상호 작용의 검출

We have developed a BiFC technique to test the interaction between two proteins in vivo. This is accomplished by splitting a yellow fluorescent protein ...

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

사멸 세포 간극의 이미지를하는 동안 라이브<em&gt; 초파리</em&gt; 배아

The  proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and  subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal  ...

Measuring Glutathione-induced Feeding Response in Hydra

히드라의 글루타티온 유도 먹이 반응을 측정

Hydra is among the most primitive organisms possessing a nervous system and chemosensation for detecting reduced glutathione (GSH) for capturing the prey. ...

Visualizing and Tracking Endogenous mRNAs in Live Drosophila melanogaster Egg Chambers

Visualizing and Tracking Endogenous mRNAs in Live Drosophila melanogaster Egg Chambers

라이브 드로소필라 멜라노가스터 에그 챔버에서 내인성 mRNA 를 시각화하고 추적

Fluorescence-based imaging techniques, in combination with developments in light microscopy, have revolutionized how cell biologists conduct live cell ...