Name: measuring crop motility and food passaging in drosophila
Uploaded: 2020-05-09T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measuring Crop Motility and Food Passaging in Drosophila at JoVE.com

Bu çalışma Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (No. 31872287), Jiangsu Eyaleti Doğa Bilimleri Vakfı (NO) tarafından desteklenmiştir. BK20181456) ve Jiangsu Eyaleti'nde Altı yetenek zirveleri projesi (No. SWYY-146).

1. Deneysel sineklerin bakımı ve hazırlanması
<ol><li>10 mL taze gıda (%1 agar, %2,4 bira mayası, %3 sakaroz, %5 mısır unu) içeren şişelerde sinekleri %60 nem oranına sahip 25 °C'de bir kuvözde muhafaza edin. Kuvözdeki ışık döngüsünü 12 saat aydınlığa ayarlayın:12-h karanlık.</li>
	<li>İstenilen genotip çok sayıda aynı anda ecloses sağlamak için, kültür genç sinekler (1−3 gün eski) 3 gün boyunca yüzeyinde kuru maya ile standart gıda sinekler . Yumurta yumurtlamak için 2 gün b...

<ol>
	<li>Kusano, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gastrointestinal+motility+and+functional+gastrointestinal+diseases.">Gastrointestinal motility and functional gastrointestinal diseases.</a> Current Pharmaceutical Design. 20 (16), 2775-2782 (2014).</li><li>Reiter, L. T., Potocki, L., Chien, S., Gribskov, M., Bier, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+systematic+analysis+of+human+disease-associated+gene+sequences+in+Drosophila+melanogaster.">A systematic analysis of human disease-associated gene sequences in Drosophila melanogaster.</a> Genome Research. 11 (6), 1114-1125 (2001).</li><li>Apidianakis, Y., Rahme, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+melanogaster+as+a+model+for+human+intestinal+infection+and+pathology.">Drosophila melanogaster as a model for human intestinal infection and pathology.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 4 (1), 21-30 (2011).</li><li>Lemaitre, B., Miguel-Aliaga, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Digestive+Tract+of+Drosophila+melanogaster.">The Digestive Tract of Drosophila melanogaster.</a> Annual Review of Genetics. 47, 377-404 (2013).</li><li>Miguel-Aliaga, I., Jasper, H., Lemaitre, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomy+and+Physiology+of+the+Digestive+Tract+of+Drosophila+melanogaster.">Anatomy and Physiology of the Digestive Tract of Drosophila melanogaster.</a> Genetics. 210 (2), 357-396 (2018).</li><li>Strand, M., Micchelli, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quiescent+gastric+stem+cells+maintain+the+adult+Drosophila+stomach.">Quiescent gastric stem cells maintain the adult Drosophila stomach.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (43), 17696-17701 (2011).</li><li>Ren, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beadex+affects+gastric+emptying+in+Drosophila.">Beadex affects gastric emptying in Drosophila.</a> Cell Research. 24 (5), 636-639 (2014).</li><li>Xi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+TORC1+inhibitor+Nprl2+protects+age-related+digestive+function+in+Drosophila.">The TORC1 inhibitor Nprl2 protects age-related digestive function in Drosophila.</a> Aging. 11 (21), 9811-9828 (2019).</li><li>Wei, Y., Reveal, B., Cai, W., Lilly, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+GATOR1+Complex+Regulates+Metabolic+Homeostasis+and+the+Response+to+Nutrient+Stress+in+Drosophila+melanogaster.">The GATOR1 Complex Regulates Metabolic Homeostasis and the Response to Nutrient Stress in Drosophila melanogaster.</a> G3. 6 (12), 3859-3867 (2016).</li><li>Ja, W. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prandiology+of+Drosophila+and+the+CAFE+assay.">Prandiology of Drosophila and the CAFE assay.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104 (20), 8253-8256 (2007).</li><li>Diegelmann, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+CApillary+FEeder+Assay+Measures+Food+Intake+in+Drosophila+melanogaster.">The CApillary FEeder Assay Measures Food Intake in Drosophila melanogaster.</a> Journal of Visualized Experiments. (121), e55024 (2017).</li><li>Edgecomb, R. S., Harth, C. E., Schneiderman, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+feeding+behavior+in+adult+Drosophila+melanogaster+varies+with+feeding+regime+and+nutritional+state.">Regulation of feeding behavior in adult Drosophila melanogaster varies with feeding regime and nutritional state.</a> Journal of Experimental Biology. 197, 215-235 (1994).</li><li>Peller, C. R., Bacon, E. M., Bucheger, J. A., Blumenthal, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defective+gut+function+in+drop-dead+mutant+Drosophila.">Defective gut function in drop-dead mutant Drosophila.</a> Journal of Insect Physiology. 55 (9), 834-839 (2009).</li><li>Chtarbanova, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+C+virus+systemic+infection+leads+to+intestinal+obstruction.">Drosophila C virus systemic infection leads to intestinal obstruction.</a> Journal of Virology. 88 (24), 14057-14069 (2014).</li><li>Solari, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Opposite+effects+of+5-HT/AKH+and+octopamine+on+the+crop+contractions+in+adult+Drosophila+melanogaster:+Evidence+of+a+double+brain-gut+serotonergic+circuitry.">Opposite effects of 5-HT/AKH and octopamine on the crop contractions in adult Drosophila melanogaster: Evidence of a double brain-gut serotonergic circuitry.</a> PLoS One. 12 (3), 0174172 (2017).</li></ol>

Drosophila sindirilir gıda sindirim için bağırsak için ürün hamle yutulur. Bu işlem sırasında, besin emilir, ve atık dışkı olarak vücuttan atılır. Böylece, dışkı ejeksiyon ile birlikte gıda yutma karşılaştırarak kabaca vücuttagıda hareketinin hızını değerlendirmek için kullanılabilir. Kılcal besleyici yöntemi (CAFE) yaygın gıda alımını ölçmek için kullanılır10,11. Dışkı sayı sayma yöntemi dışkı oluşt...

Çoğu hayvan, çevreden enerji ve besin leri absorbe etmek için gastrointestinal (GI) yolu adı verilen bir sindirim tüpüne sahiptir. İnsan GI yolu dört bölümden oluşur: yemek borusu, mide, ince bağırsak, ve kalın bağırsak (kolon). Mideden bağırsaklara gıda geçişi besin emilimi için gereklidir. Yaşlanma gibi bazı efektörler, toksik ilaçlar, ve enfeksiyon, bazı hastalıklar ve dispepsi, gastroözofageal reflü hastalığı gibi belirtileri ile ilgili düzensiz GI yol motilitesi ve mide boşalma neden, ve kabızlık1.
Meyve sineği(Drosophila melanogaster)biyomedikal araştırmalarda yaygın olarak kullanılan bir model hayvandır. Daha da önemlisi, insan hastalığı ile ilişkili genlerin yaklaşık% 77 Drosophila2bir homolog var. Drosophila kullanarak araştırma birçok hastalık mekanizmaları anlayışımızda büyük ilerlemeler yaptı. Güçlü bir genetik model organizma olarak, Drosophila yaygın GI yolu araştırmakullanılır 3. Drosophila üç ayrı etki alanları ayrılır basit bir sindirim sistemi vardır: foregut, midgut, ve hindgut4. Mahsul, foregut bir parçası, yutulur gıda depolama için bir site olarak hizmet veren bir çanta gibi bir yapıdır. Midgut uzun bir tüp ve eforlu tabaka ile gıda sindirim ve besin emilimi için site olarak işlevleri, hangi absorptive enterositler oluşur (ECs) ve salgı enteroendokrin (EE) hücreleri5. İlginçtir, Drosophila mide fonksiyonu iki bölüme ayrılır: gıda depolama ve bakır hücre bölgesi (CCR) olarak ürün fonksiyonları bir pH ile son derece asidik bir bölgedir < 36. Drosophilayılında , yutulan gıda başlangıçta ürün taşınır ve daha sonra midgut içine pompalanır7. Böylece, ürün gıda passaging kritik bir rol oynar. Visseral kaslar tarafından zarflı ve vanalar ve sfinkterler karmaşık bir dizi oluşan, ürün sözleşme tutar ve daha fazla sindirim için midgut içine gıda taşıma.
Bu protokol Drosophilamidgut için ürün gıda hareketinin tespiti için izin verir. Mahsul daralması, mahsul daralma sıklığı sayılarak değerlendirilir. Buna ek olarak, gıda passaging üzerinde ürün etkisi bitki ve bağırsak arasındaki gıda dağılımı tespit edilerek araştırılır. Ayrıca, gıda dağılımı farklı beslenme dönemleri kullanılarak acil gıda hareketi veya temel gıda durumunu yansıtmak için kullanılabilir. Birlikte ele alındığında, bu protokol hızla Drosophilaürün hareketliliği ve gıda passaging değerlendirmek için yöntemler sağlar.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>96-well plate</td>
			<td>Thermo fisher</td>
			<td>269620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brillant Blue FCF</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>E8500</td>
			<td>also called FD&#38;C Blue No. 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Thermo fisher</td>
			<td>Heraeus Pico 17</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectrophotometer</td>
			<td>Spectra Max</td>
			<td>cMax plus</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezers</td>
			<td>Dumont</td>
			<td>11252-30</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring crop motility and food passaging in drosophila

Çoğu hayvan gıda sindirmek için gastrointestinal (GI) yolu kullanın. GI sisteminde yutulan gıda hareketi besin emilimi için gereklidir. Düzensiz GI motilitesi ve mide boşalması birçok hastalığa ve semptomlara neden olur. Güçlü bir genetik model organizma olarak, Drosophila GI motilite araştırmalarında kullanılabilir. Drosophila ürün sözleşmeler ve daha fazla sindirim için midgut içine gıda taşır bir organdır, fonksiyonel bir memeli mide benzer. Sunulan basit ölçüm araçları kullanarak Drosophila kırpma hareketliliği çalışma için bir protokoldür. Mahsul daralmalarını sayma yöntemi, mahsul hareketliliğini değerlendirmek için bir yöntem ve mahsulün gıda geçişi üzerindeki etkisini araştırmak için bir spektrofotometre kullanarak mahsul ve bağırsak arasındaki gıda nın dağılımını tespit etme yöntemi tanımlanmıştır. Yöntem kontrol ve nprl2 mutant sinekler arasındaki ürün hareketliliği farkı tespit etmek için kullanılmıştır. Bu protokol hem uygun maliyetli hem de mahsul hareketliliğine karşı son derece hassastır.

Mahsul daralma oranını saymak ve boyalı gıda dağılımını saptamak için kullanılan bu yöntemler, gıda hareketliliği üzerindeki mahsul işlevini değerlendirmek için kullanılabilir. Mahsul daralması, yiyecekleri bağırsaklara itme sıklığını yansıtır. Kısa bir beslenme döneminden sonra sinekteki boyanın dağılımı, mahsulden midguta hemen gıda geçişine işaret ediyor.
Rapamisin kompleksi 1 (TORC1) hedef besin ve hücre metabolizması aracılık bir ana regülatör...

Watch this Scientific Journal Video about Measuring Crop Motility and Food Passaging in Drosophila at JoVE.com

Measuring Crop Motility and Food Passaging in Drosophila

Bu protokolün amacı mahsul daralma ölçmek ve Drosophila bağırsak gıda dağılımı ölçmektir.

Drosophila'da Bitki Hareketliliği ve Gıda Geçişinin Ölçülmesi

Most animals use the gastrointestinal (GI) tract to digest food. The movement of the ingested food in the GI tract is essential for nutrient absorption. ...

Bu yöntem, mahsul daralması sayma ve sadece sindirim gıda dağılımı tespit yoluyla ürün hareketliliğini değerlendirmek için kullanılır. Bu tekniğin avantajı sürekli ürün hareketliliğini değerlendirir olmasıdır. Düşük maliyetli ve gerçekleştirmesi kolay.Bu yöntem gastrointestinal sistemde gıda pasajları sindirim fonksiyonu çalışma için bir model olarak sadece dolgu kullanmak mümkün kılar. Süreci niçin göstermek için yardımcı Junmeng Xi, benim laboratuvar bir yüksek lisans öğrencisi olacaktır. %60 nem ve 12 saat ışık, 12 saat karanlık döngüsü ile 25 derece santigrat santigrat kuvözde 10 mililitre taze yapılmış gıda içeren şişelerde sinekler korumak.Arzu fenotip çok sayıda kuru maya ile standart gıda ile genç sinekler kültüre tarafından aynı anda eclose sinekler emin olun sonra ıslak maya ile bir şişe yetişkin sinekler aktarmak ve yumurta yumurtlamak için iki gün izin. Geliştirmek ve daha fazla yumurta toplamak için yeni bir şişe yetişkin sinekler aktarmak için kuvözde yumurta bırakın. Eclosed erkek veya kadın sinekler her gün toplamak ve istenilen yaşa standart gıda ile yeni şişeler onları kültür.Sinekleri karbondioksitle anesthetize edin ve bir sineği 200 mikrolitre PBS ile bir kesme plakasına aktarın. Cımbız bir çift ile toraks kavramak ve cımbız başka bir çift ile toraks açın sonra karın açmak için ters yönde uçları çekin. Dikkatle vücuttan ekin ve bağırsak almak ve sinek uyanmak için bekleyin.Sinek uyanık olduğunda, bir dakika içinde mahsulün kaç kez büzüldin sayısını sayın. Her sayım arasında 30 saniye bekleyerek beş kez kontraksiyon u sayıyorum. Mavi boyayı tartın ve %20 konsantrasyonda PBS'de eritin.Daha sonra gıda soğutma işlemi sırasında% 5 son konsantrasyona haşlanmış sıvı bakım gıda içine karıştırın. Dört saat boyunca açlık gıda ile şişelerde sinek tuttuktan sonra, bakım koşullarında gıda yaklaşık iki saat içinde sinek geçer akılda tutarak, istenilen süre için boyalı gıda ve kültür ile yeni şişeler içine aktarın. 200 mikrolitre PBS içeren bir diseksiyon plakasına anestezili bir sineği aktarın.Toraks da sinek kavramak ve cımbız başka bir çift ile baş kaldırmak için cımbız kullanın, sonra PBS ile yeni bir kuyuya vücut transferi ve vücuda bağlı boya kaldırmak için nazik sallayarak yıkayın. Cımbız iki çift ile karın açın ve dikkatle vücuttan tüm bağırsak ayırın. Tüm bağırsak mahsulünü alın ve 100 mikrolitre PBS içeren bir tüpe koyun.PBS 100 mikrolitre ile başka bir tüp bağırsak geri kalanı koyun sonra kırpma ve bağırsak öğütmek ve PBS boya çözmek için pipet ipuçları kullanın. Yeterli ekin ve bağırsak lar toplanana kadar diseksiyonu tekrarlayın. Örnekleri topladıktan sonra tüpleri bir dakika boyunca en yüksek hızda santrifüj edin ve 90 mikrolitre süpernatant ile 96 kuyu plakasına aktarın.Bir kere10'dan 7-10'a mililitre başına 4 grama kadar konsantrasyonlarda bir dizi standart mavi boya seyreltme yapın ve bunları kuyulara ekleyin. Kuyuların 630 nanometrede emiciliği ölçün ve emicilik vs boya konsantrasyonunun bir çizgi grafiği çizmek için standart ölçümleri kullanın. Daha sonra örneklerin boya konsantrasyonu hesaplamak için eğriyi kullanın.Kırpma hareketliliği tsurük üç günlük NPRL mutant sinekler ve genetik arka plan kontrolleri üzerinde kırpma kasılmaları saymak için kullanılmıştır. Mutasyonun mahsul daralma oranını önemli ölçüde azalttığı bulunmuştur. NPRL2'nin mahsul üzerindeki işlevini doğrulamak için, sineklere boyalı gıda ların beslenmesi ile gıda hareketi tespit edildi.Tüm sinekler mahsul de boya benzer miktarlarda vardı ama NPRL2 sinekler azalmış ürün daralma oranı ile ilişkili olabilir bağırsak daha az boya vardı. Bu protokolü yazarken, mahsulün vücuda temas ettiğinden ve sinek hayatta ve uyanık olduğundan emin olun. Aksi takdirde, ürün sözleşme yeteneğini kaybedersiniz.Diseksiyon işlemi sırasında, ürün ve bağırsak temas olmalıdır. Boya diseksiyon ortamına sızarsa, numune artık kullanılamaz. İştahımızı dolduralım ve kısa sürede gıda nın dışarı atılması da tüm bağırsaktaki boya miktarı tespit edilerek değerlendirilebilir.

Research

JoVE Journal

Biology

Measuring Crop Motility and Food Passaging in Drosophila

Passaging HuES Human Embryonic Stem Cell-lines with Trypsin.

Tripsin ile Pasajlanması tonlar İnsan Embriyonik Kök Hücre hatları

In this video we demonstrate how our lab routinely passages HuES human embryonic stem cell lines with trypsin.  Human embryonic stem cells are artifacts ...

Passaging Human Neural Stem Cells

İnsan Nöral Kök Hücreler Pasajlanması

The ability to manipulate human neural stem/precursor cells (hNSPCs) in vitro provides a means to investigate their utility as cell transplants for ...

Isolation of Protoplasts from Tissues of 14-day-old Seedlings of Arabidopsis thaliana

Isolation of Protoplasts from Tissues of 14-day-old Seedlings of Arabidopsis thaliana

14 gün eski Fideler Dokular protoplast izolasyonu Arabidopsis thaliana</em

Protoplasts are plant cells that have had their cell walls enzymatically removed. Isolation of protoplasts  from different plant tissues was first ...

Catheterization of Intestinal Loops in Ruminants

Ruminantlarda Bağırsak Döngüler kateterizasyonu

The intestine is a complex structure that is involved not only in absorption of nutrients, but also acts as a barrier between the individual and the ...

Robotics and Dynamic Image Analysis for Studies of Gene Expression in Plant Tissues

Bitkisel Dokular Gen İfade Araştırmalar Robotik ve Dinamik Görüntü Analizi

Gene expression in plant tissues is typically studied by destructive extraction of compounds from plant tissues for in vitro analyses. The methods ...

Gastrointestinal Motility Monitor (GIMM)

Gastrointestinal Motility Monitor GIMM

Gastrointestinal Motilite Monitör (Gimm)

The Gastrointestinal Motility Monitor (GIMM; Catamount Research and Development; St. Albans, VT) is an in vitro system that monitors propulsive motility ...

Detection of Protein Interactions in Plant using a Gateway Compatible Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) System

Detection of Protein Interactions in Plant using a Gateway Compatible Bimolecular Fluorescence Complementation BiFC System

Ağ Geçidi Uyumlu Bimoleküler Floresan tamamlama (BiFC) kullanarak Bitki Protein Etkileşimleri Tespiti

We have developed a BiFC technique to test the interaction between two proteins in vivo. This is accomplished by splitting a yellow fluorescent protein ...

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Apoptotik hücresi Temizliği görüntülenmesi sırasında Canlı<em&gt; Drosophila</em&gt; Embriyo

The  proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and  subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal  ...

Measuring Glutathione-induced Feeding Response in Hydra

Hydra Glutatyon kaynaklı Besleme Tepki Ölçüm

Hydra is among the most primitive organisms possessing a nervous system and chemosensation for detecting reduced glutathione (GSH) for capturing the prey. ...

Visualizing and Tracking Endogenous mRNAs in Live Drosophila melanogaster Egg Chambers

Visualizing and Tracking Endogenous mRNAs in Live Drosophila melanogaster Egg Chambers

Canlı Drosophila melanogaster yumurta Chambers Içinde endojen mrnas görselleştirme ve izleme

Fluorescence-based imaging techniques, in combination with developments in light microscopy, have revolutionized how cell biologists conduct live cell ...