Name: an air-liquid interface bronchial epithelial model for realistic, repeated inhalation exposure to airborne particles for toxicity testing
Uploaded: 2020-05-13T14:00:00
Duration: 9 min 29 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about An Air-liquid Interface Bronchial Epithelial Model for Realistic, Repeated Inhalation Exposure to Airborne Particles for Toxicity Testing at JoVE.com

Эта работа финансируется ЕС-проект PATROLS (Физиологически якорные инструменты для реалистичных наноматериалов опасности aSsessment) и голландского министерства здравоохранения, социального обеспечения и спорта (проект V/050012). Мы хотели бы поблагодарить д-ра Ивонн Стаал и д-ра Яна ван Бентема за критический обзор рукописи.

<ol>
	<li>Geiser, M., Jeannet, N., Fierz, M., Burtscher, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluating+Adverse+Effects+of+Inhaled+Nanoparticles+by+Realistic+In+Vitro+Technology.">Evaluating Adverse Effects of Inhaled Nanoparticles by Realistic In Vitro Technology.</a> Nanomaterials (Basel). 7 (2), 49 (2017).</li><li>Herzog, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mimicking+exposures+to+acute+and+lifetime+concentrations+of+inhaled+silver+nanoparticles+by+two+different+in+vitro+approaches.">Mimicking exposures to acute and lifetime concentrations of inhaled silver nanoparticles by two different in vitro approaches.</a> The Beilstein Journal of Nanotechnology. 5, 1357-1370 (2014).</li><li>Lenz, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+dose-controlled+system+for+air-liquid+interface+cell+exposure+and+application+to+zinc+oxide+nanoparticles.">A dose-controlled system for air-liquid interface cell exposure and application to zinc oxide nanoparticles.</a> Particle and Fibre Toxicology. 6, 32 (2009).</li><li>Paur, H. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-vitro+cell+exposure+studies+for+the+assessment+of+nanoparticle+toxicity+in+the+lung-A+dialog+between+aerosol+science+and+biology.">In-vitro cell exposure studies for the assessment of nanoparticle toxicity in the lung-A dialog between aerosol science and biology.</a> Journal of Aerosol Science. 42 (10), 668-692 (2011).</li><li>Lacroix, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Air-Liquid+Interface+In+Vitro+Models+for+Respiratory+Toxicology+Research:+Consensus+Workshop+and+Recommendations.">Air-Liquid Interface In Vitro Models for Respiratory Toxicology Research: Consensus Workshop and Recommendations.</a> Applied in vitro Toxicology. 4 (2), 91-106 (2018).</li><li>Loret, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Air-liquid+interface+exposure+to+aerosols+of+poorly+soluble+nanomaterials+induces+different+biological+activation+levels+compared+to+exposure+to+suspensions.">Air-liquid interface exposure to aerosols of poorly soluble nanomaterials induces different biological activation levels compared to exposure to suspensions.</a> Particle and Fibre Toxicology. 13 (1), 58 (2016).</li><li>Zhu, Y., Chidekel, A., Shaffer, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cultured+human+airway+epithelial+cells+(calu-3):+a+model+of+human+respiratory+function,+structure,+and+inflammatory+responses.">Cultured human airway epithelial cells (calu-3): a model of human respiratory function, structure, and inflammatory responses.</a> Critical Care Research and Practice. 2010, (2010).</li><li>Braakhuis, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progress+and+future+of+in+vitro+models+to+study+translocation+of+nanoparticles.">Progress and future of in vitro models to study translocation of nanoparticles.</a> Archives in Toxicology. 89 (9), 1469-1495 (2015).</li><li>Ren, H., Birch, N. P., Suresh, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Optimised+Human+Cell+Culture+Model+for+Alveolar+Epithelial+Transport.">An Optimised Human Cell Culture Model for Alveolar Epithelial Transport.</a> PLoS One. 11 (10), 0165225 (2016).</li><li>Srinivasan, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TEER+measurement+techniques+for+in+vitro+barrier+model+systems.">TEER measurement techniques for in vitro barrier model systems.</a> Journal of Laboratory Automation. 20 (2), 107-126 (2015).</li><li>Papazian, D., Wurtzen, P. A., Hansen, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polarized+Airway+Epithelial+Models+for+Immunological+Co-Culture+Studies.">Polarized Airway Epithelial Models for Immunological Co-Culture Studies.</a> International Archives of Allergy and Immunology. 170 (1), 1-21 (2016).</li><li>Jeong, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+model+for+predicting+acute+inhalation+toxicity+by+using+a+Calu-3+epithelium+cytotoxicity+assay.">In vitro model for predicting acute inhalation toxicity by using a Calu-3 epithelium cytotoxicity assay.</a> Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 98, 106576 (2019).</li><li>Grainger, C. I., Greenwell, L. L., Lockley, D. J., Martin, G. P., Forbes, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+of+Calu-3+cells+at+the+air+interface+provides+a+representative+model+of+the+airway+epithelial+barrier.">Culture of Calu-3 cells at the air interface provides a representative model of the airway epithelial barrier.</a> Pharmacology Research. 23 (7), 1482-1490 (2006).</li><li>Harcourt, J. L., Caidi, H., Anderson, L. J., Haynes, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+Calu-3+cell+line+as+a+model+of+in+vitro+respiratory+syncytial+virus+infection.">Evaluation of the Calu-3 cell line as a model of in vitro respiratory syncytial virus infection.</a> Journal of Virological Methods. 174 (1-2), 144-149 (2011).</li><li>. Vitrocell&#174; Automated Exposure Station Available from: <a target="_blank" href="https://www.vitrocell.com/inhalation-toxicology/exposure-systems/automated-exposure-station1">https://www.vitrocell.com/inhalation-toxicology/exposure-systems/automated-exposure-station1</a> (2019)</li><li>M&#252;lhopt, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxicity+testing+of+combustion+aerosols+at+the+air-liquid+interface+with+a+self-contained+and+easy-to-use+exposure+system.">Toxicity testing of combustion aerosols at the air-liquid interface with a self-contained and easy-to-use exposure system.</a> Journal of Aerosol Science. 96, 38-55 (2016).</li><li>. VITROCELL&#174; Cloud for the exposure to liquid aerosols Available from: <a target="_blank" href="https://www.vitrocell.com/inhalation-toxicology/exposure-systems/vitrocell-cloud-system">https://www.vitrocell.com/inhalation-toxicology/exposure-systems/vitrocell-cloud-system</a> (2019)</li><li>Endes, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+in+vitro+testing+strategy+towards+mimicking+the+inhalation+of+high+aspect+ratio+nanoparticles.">An in vitro testing strategy towards mimicking the inhalation of high aspect ratio nanoparticles.</a> Particle and Fibre Toxicology. 11 (1), 40 (2014).</li><li>Lenz, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+bioactive+delivery+of+aerosolized+drugs+to+human+pulmonary+epithelial+cells+cultured+in+air-liquid+interface+conditions.">Efficient bioactive delivery of aerosolized drugs to human pulmonary epithelial cells cultured in air-liquid interface conditions.</a> Am J Respir Cell Mol Biol. 51 (4), 526-535 (2014).</li><li>Borm, P. J., Tran, L., Donaldson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+carcinogenic+action+of+crystalline+silica:+a+review+of+the+evidence+supporting+secondary+inflammation-driven+genotoxicity+as+a+principal+mechanism.">The carcinogenic action of crystalline silica: a review of the evidence supporting secondary inflammation-driven genotoxicity as a principal mechanism.</a> Critical Reviews in Toxicology. 41 (9), 756-770 (2011).</li><li>Borm, P. J. A., Fowler, P., Kirkland, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+updated+review+of+the+genotoxicity+of+respirable+crystalline+silica.">An updated review of the genotoxicity of respirable crystalline silica.</a> Particle and Fibre Toxicology. 15 (1), 23 (2018).</li><li>Kawasaki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mechanistic+review+of+silica-induced+inhalation+toxicity.">A mechanistic review of silica-induced inhalation toxicity.</a> Inhalation Toxicology. 27 (8), 363-377 (2015).</li><li>Sayes, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changing+the+dose+metric+for+inhalation+toxicity+studies:+short-term+study+in+rats+with+engineered+aerosolized+amorphous+silica+nanoparticles.">Changing the dose metric for inhalation toxicity studies: short-term study in rats with engineered aerosolized amorphous silica nanoparticles.</a> Inhalation Toxicology. 22 (4), 348-354 (2010).</li><li>Driscoll, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulmonary+response+to+inhaled+silica+or+titanium+dioxide.">Pulmonary response to inhaled silica or titanium dioxide.</a> Toxicology and Applied Pharmacology. 111 (2), 201-210 (1991).</li><li>Muhle, H., Kittel, B., Ernst, H., Mohr, U., Mermelstein, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neoplastic+lung+lesions+in+rat+after+chronic+exposure+to+crystalline+silica.">Neoplastic lung lesions in rat after chronic exposure to crystalline silica.</a> Scandinavian Journal of Work, Environment and Health. 21, 27-29 (1995).</li><li>Peeters, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silica-induced+NLRP3+inflammasome+activation+in+vitro+and+in+rat+lungs.">Silica-induced NLRP3 inflammasome activation in vitro and in rat lungs.</a> Particle and Fibre Toxicology. 11, 58 (2014).</li><li>Reuzel, P. G., Bruijntjes, J. P., Feron, V. J., Woutersen, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subchronic+inhalation+toxicity+of+amorphous+silicas+and+quartz+dust+in+rats.">Subchronic inhalation toxicity of amorphous silicas and quartz dust in rats.</a> Food and Chemical Toxicology. 29 (5), 341-354 (1991).</li><li>Arts, J. H., Muijser, H., Duistermaat, E., Junker, K., Kuper, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Five-day+inhalation+toxicity+study+of+three+types+of+synthetic+amorphous+silicas+in+Wistar+rats+and+post-exposure+evaluations+for+up+to+3+months.">Five-day inhalation toxicity study of three types of synthetic amorphous silicas in Wistar rats and post-exposure evaluations for up to 3 months.</a> Food and Chemical Toxicology. 45 (10), 1856-1867 (2007).</li><li>Cho, W. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+mediators+induced+by+intratracheal+instillation+of+ultrafine+amorphous+silica+particles.">Inflammatory mediators induced by intratracheal instillation of ultrafine amorphous silica particles.</a> Toxicology Letters. 175 (1-3), 24-33 (2007).</li><li>Herzog, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exposure+of+silver-nanoparticles+and+silver-ions+to+lung+cells+in+vitro+at+the+air-liquid+interface.">Exposure of silver-nanoparticles and silver-ions to lung cells in vitro at the air-liquid interface.</a> Particle and Fibre Toxicology. 10 (1), 11 (2013).</li><li>M&#252;lhopt, S., Diabate, S., Krebs, T., Weiss, C., Paur, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+toxicity+determination+by+in+vitro+exposure+at+the+air+liquid+interface+with+an+integrated+online+dose+measurement.">Lung toxicity determination by in vitro exposure at the air liquid interface with an integrated online dose measurement.</a> Journal of Physics: Conference Series. 170, 012008 (2009).</li><li>van Ravenzwaay, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparing+fate+and+effects+of+three+particles+of+different+surface+properties:+nano-TiO(2),+pigmentary+TiO(2)+and+quartz.">Comparing fate and effects of three particles of different surface properties: nano-TiO(2), pigmentary TiO(2) and quartz.</a> Toxicology Letters. 186 (2), 152-159 (2009).</li><li>Henderson, R. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+the+inflammatory+response+of+the+lung+to+inhaled+versus+instilled+particles+in+F344+rats.">A comparison of the inflammatory response of the lung to inhaled versus instilled particles in F344 rats.</a> Fundamental and Applied Toxicology. 24 (2), 183-197 (1995).</li></ol>

Авторов нечего раскрывать.

В настоящем документе описывается метод культивирования человеческих бронхиальных эпителиальных клеток под АЛИ и подвергая эту бронхиатальную модель аэрозолям или газам. Преимущество использования клеток Calu-3 заключается в том, что они образуют плотные соединения, остаются монослойными, способны выдерживать поток воздуха и могут быть выдержат в течение нескольких недель в ALI, в отличие от многих других типов клеток (например, 16HBE, H292 и BEAS-2B). Использование автоматизированнойстанции ® vitroCELL (AES) имеет то преимущество, что клетки могут подвергаться воздействию в реалистичных и соответствующих условиях, поскольку низкие концентрации могут быть применены с помощью непрерывного воздушного потока.
Системы постоянного потока, такие как AES, имеют преимущества по сравнениюс использованием облачныхсистем 3,32, которые используют одну небулизацию подвески. Непрерывный поток является более реалистичным, и многие переменные, такие как скорость потока, влажность и температура контролируются. Кроме того, осаждение может быть усилено с помощью электрического поля. Наконец, аэрозольные характеристики, такие как размер, концентрация числа и масса, контролируются в Режиме онлайн. Недостатком является то, что системы постоянного потока являются более сложными по сравнению с облачными системами. Поэтому важно провести подготовительные эксперименты, которые сосредоточены на характеристиках частиц аэрозоля и доставленной дозе на вставке. Начальная начальная концентрация частиц и настройки AES могут быть скорректированы для достижения желаемой дозы на клетках33. В зависимости от типа тестируются частицы, метод генерации аэрозолей может отличаться. Использование электростатического осаждения зависит от типа частиц и лучше всего подходит для металлических частиц. Для частиц с положительным поверхностным зарядом следует применять отрицательное электростатическое поле и наоборот.
Выбор концентраций воздействия может быть трудным для любого эксперимента воздействия жидкости воздуха. Для воздействия D-12 цель состояла в том, чтобы достичь общей совокупной дозы 1мкг/см 2 после 3 недель воздействия, 5 дней в неделю, 4 ч в день. Эта доза похожа на дозы, которые индуцированных эффект в vivo21,25,27,32,33. При выполнении экспозиций, было некоторое различие между различными днями экспозиции. Хотя фактическая отложенная доза 1,6мкг/см 2 выше, чем доза 1 мкг/см2, которая была направлена на, доза, возможно, была слишком низкой, чтобы наблюдать эффекты в модели Calu-3. Между воздействием чистого воздуха и воздействием D'12 наблюдались лишь незначительные различия в TEER, жизнеспособности и реакции цитокинов, и эти различия не были статистически значимыми. Объяснением наблюдения о том, что воздействие D-12 в течение 3 недель не вызывали значительных эффектов в клетках Calu-3, является то, что макрофаги отсутствовали в модели Calu-3. Возможно, после поглощения ДЕС12 макрофаги производят провоспалительные цитокины, которые могут повлиять на клетки Calu-3. Другое объяснение заключается в том, что партия D-12, которая использовалась для экспериментов, была не так реактивна, как ожидалось. При использовании LPS в качестве положительного вещества контроля, Calu-3 показывает ответ, как измеряется увеличением выброса LDH и увеличением TNF-α выпуска. Это означает, что модель может обнаружить токсичность.
Модель ячейки Calu-3 имеет много преимуществ, о чем говорится в разделе результатов. Кроме того, при культуре в течение более длительного времени на АЛИ, Калу-3 клетки могут расти реснички / реснички,как структуры 13 и производить слизь 11,12,13. Несмотря на эти преимущества, модель имеет ограничения в отношении своей физиологической значимости. Клеточные линии Calu-3 происходят от аденокарциномы, в то время как 16HBE и BEAS-2B происходят из здоровых тканей. К сожалению, последние два не подходят для повторного воздействия ALI, поскольку они не остаются стабильным монослой с течением времени. Другим ограничением модели Calu-3 является то, что она представляет только один тип ячейки. В легких человека, несколько типов клеток, которые взаимодействуют и по-разному реагируют на воздействие присутствуют. Вдыхаемые частицы будут отложены в различных областях легких в зависимости от их аэродинамического размера. Здесь частицы соедут с эпителиальным клеточным барьером, как это имитирует модель Calu-3. В легких человека, альвеолярные макрофаги привлекают частицы, поглотить их, и очистить их от легких. Макрофаги также играют важную роль в реакции воспаления на воздействие частиц. Поэтому предпринимаются усилия по расширению модели Calu-3 путем добавления первичных макрофагов для более тесного имитации легочного барьера. Недостатком макрофагов является то, что они остаются жизнеспособными только в течение 7 дней, когда культурные на вершине Калу-3 клеток на АЛИ. Поэтому макрофаги следует читать еженедельно, чтобы превратить текущую модель Calu-3 в модель совместной культуры. В настоящее время проводится оптимизация протокола совместной культуры.
Учитывая вышесказанное, бронхиальная модель Calu-3 является подходящей моделью для повторного воздействия аэрозолей частично растворимых веществ, таких как химические вещества от сигаретного дыма и LPS. Эти растворимые вещества вызывают значительное увеличение реакций цитокинов в клетках Калу-3. Для тестирования нерастворимых частиц, таких как дизельные выхлопные газы и D-12, необходима модель кокультуры, поскольку макрофаги играют решающую роль в индукции эффектов при воздействии частиц.
Для описанных экспозиций использовались вставки мембран с порами 3,0 мкм. Основная причина выбора этого типа вставки заключается в том, что можно проверить транслокацию наноматериалов. При использовании меньшего размера поры 0,4 мкм, агломераты частиц не смогут пересечь мембрану вставки. Недостатком использования большого размера пор является то, что клеткам нужно больше времени, чтобы вырастить слияние и что труднее визуализировать морфологию клеток с помощью световой микроскопии. Чтобы проверить, что клетки действительно образуют слияние монослой, TEER должен быть 1000 фунтов стерлингов Ωсм 2 до начала экспозиции.
В совокупности представленная здесь бронхиальная модель Calu-3 подходит для повторного воздействия аэрозолей, по крайней мере, до 3 недель. Модель может выдерживать культуру и воздействие с помощью непрерывного воздушного потока и способна обнаруживать токсичность бронхового эпителия.

Легкие уязвимы для ингаляционного воздействия частиц, передающихся воздушно-капельным путем. Для оценки потенциальной токсичности частиц, передающихся воздушно-капельным путем, достигнут прогресс в разработке системвоздействия воздухо-жидкого интерфейса(АЛИ) 1,2,3,4,5. Системы воздействия ALI позволяют более релевантные и реалистичные модели экспозиции по сравнению с традиционным подводным воздействием через культурную среду, которая изменяет характеристики и кинетикичастиц 6. Системы воздействия ALI предусмотрят специфические требования к моделям клеточной культуры, так как модели не имеют культуры среды и, следовательно, питательных веществ на апической стороне. Многие модели клеток негативно влияют на то, что они культурны и подвергаются воздействию воздуха (например, высыхания) и остаются жизнеспособными только в течение нескольких дней. Это ограничивает условия воздействия, которые могут быть использованы в этих моделях: обычно относительно высокие концентрации применяются в течение короткого периода времени в качестве облака (т.е. капель, содержащих частицы, которые быстро оседают). Такие экспериментальные условия не отражают реалистичного долгосрочного воздействия низких концентраций частиц; таким образом, актуальность результатов может быть поставилась под сомнение. Для преодоления этих ограничений был оптимизирован протокол культуры и экспозиции для бронхиальной модели, состоящей из бронхиальной эпителиальной клеточной линии человекаCalu-3 7.
Большинство моделей легких in vitro, используемых для воздействия ALI, содержат другие клеточные линии, такие как A549, BEAS-2B и 16HBE14o- (16HBE) или первичные клетки в качестве основы8. Эти клеточные линии имеют недостаток, что они остаются жизнеспособными в течение всего нескольких дней, когда культурные на ALI. Кроме того, некоторые из этих клеточных линий разрастаются при культуре в течение более 5 дней. Наконец, A549 клетки пропустить функциональные жесткие соединения и поэтому не может сформировать жесткий барьер, который необходим дляимитации легких 9,10. Первичные эпителиальные клетки могут быть хорошим вариантом для воздействия АЛИ, поскольку они могут быть культурно на АЛИ в течение нескольких недель. Тем не менее, первичные клетки отличаются от партии к партии, являются более трудными в обслуживании, и являются более дорогостоящими по сравнению с клеточными линиями, что делает их менее пригодными для тестирования токсичности и скрининга. При сравнении различных линий бронхиальных эпителиальных клеток человека (16HBE, Calu-3, H292 и BEAS-2B), только клетки Calu-3 отвечают всем критериям, необходимым для реалистичного, повторного воздействия ALI: они остаются жизнеспособными в течение нескольких недель, пока они культурны в ALI, обеспечивают высокую барьерную целостность, не перерастают, и легко культуры и поддержания. Клетки Calu-3 происходят от аденокарциномы и способны производить слизь11,12. Есть несоответствия о том, клетки могут развиваться реснички11,13. Клетки Calu-3 также являются подходящей моделью для изучения респираторно-синцитиальных вирусных инфекций (РСВ), которые инфицируют цилиированные эпителиальные клеткидыхательных путей 14.
Помимо клеточной модели, автоматизированная система экспозиции (AES) используется для воздействия жидкости ввоздухе на аэрозоли 15,16. Преимущество AES заключается в том, что он использует непрерывный воздушный поток для воздействия модели клеток на аэрозоли. Это в отличие от других систем воздействия жидкости воздуха, которые обычно используют относительно высокие концентрации в течение короткого периода времени в качестве облака (т.е. капли, содержащие частицы, которые быстрооседают) 17,18,19. Эти облачные системы не отражают реалистичного долгосрочного воздействия низких концентраций частиц. Применяя непрерывный поток воздуха с помощью AES, модель клетки может подвергаться воздействию низкой концентрации частиц в течение более длительного периода времени, отражая реалистичные условия воздействия. Еще одним преимуществом облачных систем является то, что AES имеет возможность соединять инструменты характеристики частиц, что позволяет измерять размер частиц, концентрацию числа и массу с течением времени. Ограничение AES заключается в том, что он использует относительно высокие воздушные потоки между 10 мл/мин и 100 мл/мин.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.01 M NaOH</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S5881</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.1M (x10) PBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14200-059</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2&#8217;,7&#8217;-dichlorodihydrofluoresin diacetate (DCFH2-DA)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D6883</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-Morpholinosydnonimine hydrochloride (SIN-1 hydrochloride)</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab141525</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amphotericin B</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific Inc.</td>
			<td>15290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automated exposure station</td>
			<td>Vitrocell</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell proliferation reagent WST-1</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11644807001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CPC</td>
			<td>TSI inc., St Paul MN, USA</td>
			<td>3022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytotoxicity detection kit LDH</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11644793001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DQ12</td>
			<td>IOM</td>
			<td></td>
			<td>nanomaterials</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ELISA Ready-SET-Go</td>
			<td>Fischer Scientific</td>
			<td>88-8086-86, 88-7399-88</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EVOM2</td>
			<td>World Precision Instruments Inc., FL, USA</td>
			<td>EVOM2-STX2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Greiner bio-one</td>
			<td>758093</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow splitter</td>
			<td>TSI inc., St Paul MN, USA</td>
			<td>model 3708</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescein diacetate (F-DA)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F7378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific Inc.</td>
			<td>14175</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>CKX41</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mass flow controllers</td>
			<td>MFC, Bronkhorst, the Netherlands</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol (analytical grade)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>34860</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microbalance</td>
			<td>Sartorius, Goettingen, Germany</td>
			<td>ME-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minimum essential medium (MEM) + GlutaMAX</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific Inc.</td>
			<td>41090</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NEAA</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific Inc.</td>
			<td>11140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OPS</td>
			<td>TSI inc., St Paul MN, USA</td>
			<td>3339</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pen/Strep</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific Inc.</td>
			<td>15140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol red free MEM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10500-064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pure water</td>
			<td>Merck</td>
			<td>MilliQ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SMPS</td>
			<td>TSI inc., St Paul MN, USA</td>
			<td>3936</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spray nozzle</td>
			<td>Schlick, Coburg, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Teflon filters</td>
			<td>Pall</td>
			<td>R2PJ46</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TEOM</td>
			<td>Rupprecht &#38; Patashnick NY, USA</td>
			<td>series 1400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture flask</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific Inc.</td>
			<td>690175, 658175, 660175</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transwell inserts</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3460, 3462</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific Inc.</td>
			<td>25300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptan Blue</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T8154</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an air-liquid interface bronchial epithelial model for realistic, repeated inhalation exposure to airborne particles for toxicity testing

Для тестирования токсичности частиц, передающихся воздушно-капельным путем, были разработаны системы воздействия воздухо-жидкого интерфейса (ALI) для испытаний in vitro, чтобы имитировать реалистичные условия воздействия. Это ставит конкретные требования к моделям клеточной культуры. Многие типы клеток негативно влияют на воздействие воздуха (например, высыхание) и остаются жизнеспособными только в течение нескольких дней. Это ограничивает условия воздействия, которые могут быть использованы в этих моделях: обычно относительно высокие концентрации применяются в качестве облака (т.е. капель, содержащих частицы, которые быстро оседают) в течение короткого периода времени. Такие экспериментальные условия не отражают реалистичного долгосрочного воздействия низких концентраций частиц. Для преодоления этих ограничений было исследовано использование линии бронхиальных эпителиальных клеток человека. Эти клетки могут быть откоунены в условиях АЛИ в течение нескольких недель, сохраняя при этом здоровую морфологию и стабильный монослой с плотными соединениями. Кроме того, эта бронхиальная модель подходит для тестирования последствий повторного воздействия низких, реалистичных концентраций частиц в воздухе с помощью системы воздействия ALI. Эта система использует непрерывный поток воздуха в отличие от других систем воздействия ALI, которые используют одну небулизацию, производящую облако. Таким образом, система непрерывного потока подходит для повторного и длительного воздействия частиц, передающихся воздушно-капельным путем, при непрерывном мониторинге характеристик частиц, концентрации воздействия и доставленной дозы. В совокупности эта бронхиальная модель в сочетании с системой непрерывного воздействия потока способна имитировать реалистичные, повторяющиеся условия воздействия ингаляций, которые могут быть использованы для тестирования токсичности.

Эта статья предоставляет метод для культивирования и разоблачения человеческих бронхиальных эпителиальных клеток в АЛИ, который имитирует реалистичные, повторяющиеся условия воздействия ингаляции, которые могут быть использованы для тестирования токсичности. Характеристики как клеточной модели, так и системы воздействия имеют важное значение для достижения реалистичной модели ингаляционного воздействия, которая может быть использована для повторного воздействия. Результаты по этим характеристикам приведены ниже.
Требования к модели ячейки и выбор
При выборе подходящей модели ячейки необходимо учитывать следующие характеристики:
<ol><li>Клеточная модель должна быть в состоянии сформировать стечение монослой с функционирующими плотными узлами для имитации легочного барьера.</li>
<li>Модель ячейки должна показывать оптимальную производительность при повторном воздействии обусловленного (температурного и влажностного) воздуха.</li>
<li>Модель ячейки должна реагировать на воздействие.</li>
</ol>Это исследование началось с четырех различных линий бронхиальных эпителиальных клеток человека: 16HBE, Calu-3, H292 и BEAS-2B. Все они широко используются для тестирования токсичности наноматериалов и химических веществ. Из четырех клеточных линий только ячейки Calu-3 выполнили все вышеперечисленные требования. Клетки сформировали монослой с плотными соединениями(рисунок 3), который оставался стабильным барьером с течением времени, как измеряется TEER, в то время как другие клеточные линии либо не образуют барьер или показали падение барьерной функции при культуре на ALI (Рисунок 4). Кроме того, H292 и BEAS-2B, как правило, перерастают в несколько слоев клеток при культуре в течение более длительного периода времени. Традиционное культивирование подводных клеток и культивирование АЛИ сильно отличались, потому что в ALI питательные вещества были доступны только с базолатеральной стороны и клетки подвергались воздействию сухих условий на апической стороне. Эти условия могут вызвать стресс для клеточных моделей, которые могут наблюдаться путем измерения жизнеспособности клеток с течением времени. Сотовые линии 16HBE, H292 и BEAS-2B показали увеличение выпуска LDH при культуре в ALI, в то время как клетки Calu-3 показали лишь небольшой релиз LDH (Рисунок 5).
Затем была опробована реакция модели Calu-3 на вещества. В качестве положительного вещества контроля, LPS вводился через небулизацию к апической стороне модели. Отложенная доза составила 0,25 мкг/см2. Клетки Calu-3 показали реакцию на липополисахарид (LPS) увеличением высвобождения LDH и в высвобождении фактора некроза опухоли альфа (TNF-α)(рисунок 6).
Наконец, монослой Calu-3 подвергся воздействию кварцевого кремнезема (D-12) наноматериалов (МОМ, Эдинбург). Кристаллический кремнезем может вызвать силикоз, а также может вызвать опухоли легких. Поэтому Международное агентство по исследованию рака (IARC) классифицировало кристаллический кремнезем как канцероген человека группы I20. Механизм действия кристаллического кремнезема, как полагают, через индукцию постоянного воспаления, вызванного его реактивнойповерхности 21,22,23. Несколько исследований in vivo как у крыс, так и у мышей сообщают о индукции воспаления и гистопатологических изменений, включая опухоли и фиброз, послеингаляционного воздействия кристаллического кремнезема 24,25,26,27,28,29. Все эти эффекты наблюдаются после повторного воздействия и/или долгосрочного наблюдения. Модель Calu-3 использовалась для изучения того, можно ли имитировать наблюдения, проведенные в исследованиях in vivo, с помощью модели in vitro, которая может подвергаться повторному воздействию в ALI.
Клетки Калу-3 подвергались воздействию в течение 3 недель подряд, 5 дней в неделю, 4 ч в день до Д-12. Отложенная доза была измерена с помощью ККМ. Средняя отложенная доза составила 120нг/см 2 в день, с кумулятивной дозой 1,6 мкг/см2, каки дозы, вызывающие эффект in vivo. Другие характеристики частиц показаны в таблице 1. После 3 недель воздействия, D-12 индуцированных никаких значительных эффектов в TEER, жизнеспособность клеток, и моноцитов химиоаттракант белка 1 (MCP-1) релиз, по сравнению с чистым управлением воздухом (Рисунок 7). Поскольку на основе данных in vivo ожидалось больше токсичности D-12, реактивность частиц была проверена с помощью ацеллюлярного анализа в соответствии с протоколом, оптимизированным в рамках проекта ЕС GRACIOUS (поставляется 5,3). Реактивность партии D-12 была ниже, чем ожидалось(рисунок 8), на порядок ниже по сравнению с положительными частицами контроля углеродного черного цвета (CB). Такое отсутствие реактивности может объяснить отсутствие реакции на токсичность в модели Calu-3.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61210/61210fig01.jpg"> Рисунок 1: Автоматизированная станция экспозиции (AES). Левая фигура показывает внешнюю часть шкафа с сенсорной панелью. AES имеет три уровня с модулями воздействия: верхний уровень для воздействия чистого воздуха, и средний и нижний уровень для воздействия аэрозолей. Правая фигура показывает модуль экспозиции, в котором расположены вставки с ячейками. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61210/61210fig01large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61210/61210fig02.jpg"> Рисунок 2: Схематическое представление установки экспозиции. Слева направо: 1) подвеска ENM, подключенная к сопла спрей через перистальтический насос; 2) Использование сжатого воздуха спрей сопла nebulizes подвески ENM и через камеру смешивания аэрозолей привели к AES; 3) Незадолго до ввода AES, аэрозольные характеристики инструменты подключены: SMPS, OPS, КПК, и TEOM. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61210/61210fig02large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61210/61210fig03.jpg"> Рисунок 3: Репрезентативное изображение клеток Calu-3 после культивирования в воздушно-жидком интерфейсе (ALI) в течение 10 дней. Флуоресценция микроскопии изображение клеток Calu-3 после культивирования в АЛИ в течение 10 дней. Плотный узел белка ЗО-1 окрашен в зеленый цвет, ядра клеток окрашены в синий цвет. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61210/61210fig03large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61210/61210fig04.jpg"> Рисунок 4: Трансепителиальное электрическое сопротивление (TEER) четырех различных клеточных линий в период культуры 21 дней. ЗНАЧЕНИЯ TEER 16HBE, Calu-3, H292 и BEAS-2B при культуре в течение 21 дня: первые 7 дней погружены в воду, а затем 14 дней в ALI. Значения TEER были скорректированы для фонового сопротивления вставки и умножены на площадь поверхности вставки. Символы и бары ошибок представляют среднее значение и стандартное отклонение шести вставок. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61210/61210fig04large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61210/61210fig05.jpg"> Рисунок 5: LDH релиз четырех различных клеточных линий в период культуры 21 дней. LDH релиз 16HBE, Calu-3, H292, и BEAS-2B, когда культурный в течение 21 дней: 7 дней погружены, а затем 14 дней в ALI. Показанные значения LDH относительно максимального выпуска LDH для каждого типа ячейки. Символы и бары ошибок представляют среднее значение и стандартное отклонение пяти вставок. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61210/61210fig05large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61210/61210fig06.jpg"> Рисунок 6: Сотовые эффекты в клетках Calu-3 подвергаются воздействию LPS. Клетки Calu-3 подвергались воздействию небулялизации облаков до 0,25 мкг/см2 LPS. (A)Преобразование WST-1. (B) выпуск LDH. (C) TNF-α после воздействия LPS. Символы и бары ошибок представляют средние значения и стандартные отклонения трех вставок. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61210/61210fig06large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61210/61210fig07.jpg"> Рисунок 7: Сотовые эффекты в клетках Calu-3 подвергаются воздействию наноматериалов D-12. Клетки Калу-3 подвергались воздействию в течение 3 недель (4 ч в день, 5 дней в неделю) к наноматериалам ДЗ12, около 120нг/см 2 в день, совокупная доза 1,6 мкг/см2. (A)Значения TEER. (B) выпуск LDH. (C) MCP-1 релиз после воздействия D'12. Все символы и бары ошибок представляют средние значения и стандартные отклонения трех вставок для элементов управления и шести вставок для экспозиции D-12. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61210/61210fig07large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.</a>
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61210/61210fig08.jpg"> Рисунок 8: Ацеллюлярная реактивность Д-12. D-12 был инкубирован зондом 2ʹ,7ʹ-Dichlorofluorescein Diacetate (DCFH-DA) для обнаружения его поверхностной реактивности. В качестве положительного контроля были включены частицы углерода черного цвета (CB). По сравнению с ЦБ, D-12 имеет очень низкую поверхностную реактивность. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61210/61210fig08large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Масса частиц (мкг/м3)</td>
			<td>Номер частицы (к/см3)</td>
			<td>Размер частиц подвижности (нм)</td>
			<td>Геометрическое стандартное отклонение</td>
			<td>Размер оптических частиц (мкм)</td>
		</tr>
<tr>
<td>2969 (418)</td>
			<td>83983 (10215)</td>
			<td>66.6</td>
			<td>2.5</td>
			<td>1.1 (1.3)</td>
		</tr>
</tbody></table>Таблица 1: Характеристики экспозиции D-12. Значения отображаются как средние со стандартным отклонением в скобках.

Watch this Scientific Journal Video about An Air-liquid Interface Bronchial Epithelial Model for Realistic, Repeated Inhalation Exposure to Airborne Particles for Toxicity Testing at JoVE.com

An Air-liquid Interface Bronchial Epithelial Model for Realistic, Repeated Inhalation Exposure to Airborne Particles for Toxicity Testing

Описана клеточная культура и метод воздействия бронхов in vitro для реалистичного, повторного ингаляционного воздействия частиц для тестирования токсичности.

Воздушно-жидкий интерфейс Бронхиальный эпителиальный модель для реалистичных, повторных ингаляционных воздействия воздушно-капельным путем частиц для тестирования токсичности

For toxicity testing of airborne particles, air-liquid interface (ALI) exposure systems have been developed for in vitro tests in order to mimic realistic ...

Research

JoVE Journal

Biology

Testing Nicotine Tolerance in Aphids Using an Artificial Diet Experiment

Тестирование Никотин толерантности в Тли Использование искусственного эксперимента диета

Plants may upregulate the production of many different seconday metabolites in response to insect feeding. One of these metabolites, nicotine, is well ...

Using an EEG-Based Brain-Computer Interface for Virtual Cursor Movement with BCI2000

Использование ЭЭГ основе интерфейса мозг-компьютер для виртуальных движения курсора с BCI2000

A brain-computer interface (BCI) functions by translating a neural signal, such as the electroencephalogram (EEG), into a signal that can be used to ...

Primary Human Bronchial Epithelial Cells Grown from Explants

Первичные человеческие бронхиальные эпителиальные клетки, выращенных из эксплантов

Human bronchial epithelial cells are needed for cell models of disease and to investigate the effect of excipients and pharmacologic agents on the ...

Whole-Body Nanoparticle Aerosol Inhalation Exposures

Всего тела наночастиц Воздействие аэрозолей при вдыхании

Inhalation is the most likely exposure route for individuals working with aerosolizable engineered nano-materials (ENM). To properly perform nanoparticle ...

Culturing of Human Nasal Epithelial Cells at the Air Liquid Interface

Культивирование носа человека эпителиальных клеток в Военно-воздушной жидкость

In vitro models using human primary  epithelial cells are essential in understanding key functions of the respiratory  epithelium in the context of ...

Procedure to Evaluate the Efficiency of Flocculants for the Removal of Dispersed Particles from Plant Extracts

Процедура оценки эффективности флокулянтов для удаления дисперсных частиц из растительных экстрактов

Plants are important to humans not only because they provide commodities such as food, feed and raw materials, but increasingly because they can be used ...

Optimal Lentivirus Production and Cell Culture Conditions Necessary to Successfully Transduce Primary Human Bronchial Epithelial Cells

Оптимальное Лентивирус производства и клеточной культуры условия, необходимые для успешного трансдукции Первичные человеческие бронхиальные эпителиальные клетки

In vitro culture of primary human bronchial epithelial (HBE) cells using air-liquid interface conditions provides a useful model to study the processes of ...

Experimental Protocol for Using Drosophila As an Invertebrate Model System for Toxicity Testing in the Laboratory

Experimental Protocol for Using Drosophila As an Invertebrate Model System for Toxicity Testing in the Laboratory

Экспериментальный протокол для использования дрозофилы как система беспозвоночных модель для токсичности тестирования в лаборатории

Emergent properties and external factors (population-level and ecosystem-level interactions, in particular) play important roles in mediating ...

Protocols for Testing the Toxicity of Novel Insecticidal Chemistries to Mosquitoes

Протоколы для испытания на токсичность новых инсектицидных химия комаров

New classes of insecticides with novel modes of action are needed to control insecticide resistant populations of mosquitoes that transmit diseases such ...

Glomerular Outgrowth as an Ex Vivo Assay to Analyze Pathways Involved in Parietal Epithelial Cell Activation

Гломерулярный рост, как Ex Vivo Assay для анализа путей, участвующих в пареталальной активации клеток

Parietal epithelial cell (PEC) activation is one of the key factors involved in the development and progression of glomerulosclerosis. Inhibition of ...