Name: three-dimensional echocardiographic method for the visualization and assessment of specific parameters of the pulmonary veins
Uploaded: 2020-10-28T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Three-Dimensional Echocardiographic Method for the Visualization and Assessment of Specific Parameters of the Pulmonary Veins at JoVE.com

עבודה זו מומנה על ידי קרן המחקר הממשלתית ההונגרית [GINOP-2.3.2-15-2016-00043, Szív- és érkutatási kiválóságközpont (IRONHEART)].

כל המטופלים חתמו על הסכמה מדעת לפני הבדיקה בהתאם לאישור ועדת האתיקה המקומית (OGYÉI/12743/2018).
1. הכנה
<ol><li>התחל את הבדיקה עם הכנת המטופל: הבטחת מצב צום של 4 שעות לפחות, שאלון על בעיות בבליעה ומחלות ידועות במערכת העיכול העליונה.</li>
	<li>ודא שההסכמה מדעת בכתב נקראת וחתומה.</li>
	<li>הכן קו ת?...

<ol>
	<li>Altinkaynak, D., Koktener, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+pulmonary+venous+variations+in+a+large+cohort:+Multidetector+computed+tomography+study+with+new+variations.">Evaluation of pulmonary venous variations in a large cohort: Multidetector computed tomography study with new variations.</a> Wiener klinische Wochenschrift. 131 (19-20), 475-484 (2019).</li><li>Haissaguerre, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+initiation+of+atrial+fibrillation+by+ectopic+beats+originating+in+the+pulmonary+veins.">Spontaneous initiation of atrial fibrillation by ectopic beats originating in the pulmonary veins.</a> New England Journal of Medicine. 339 (10), 659-666 (1998).</li><li>Nault, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drugs+vs.+ablation+for+the+treatment+of+atrial+fibrillation:+the+evidence+supporting+catheter+ablation.">Drugs vs. ablation for the treatment of atrial fibrillation: the evidence supporting catheter ablation.</a> European Heart Journal. 31 (9), 1046-1054 (2010).</li><li>Calkins, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HRS/EHRA/ECAS+expert+consensus+statement+on+catheter+and+surgical+ablation+of+atrial+fibrillation:+recommendations+for+patient+selection,+procedural+techniques,+patient+management+and+follow-up,+definitions,+endpoints,+and+research+trial+design:+a+report+of+the+Heart+Rhythm+Society+(HRS)+Task+Force+on+Catheter+and+Surgical+Ablation+of+Atrial+Fibrillation.">HRS/EHRA/ECAS expert consensus statement on catheter and surgical ablation of atrial fibrillation: recommendations for patient selection, procedural techniques, patient management and follow-up, definitions, endpoints, and research trial design: a report of the Heart Rhythm Society (HRS) Task Force on Catheter and Surgical Ablation of Atrial Fibrillation.</a> Heart Rhythm. 9 (4), 632-696 (2012).</li><li>Kojodjojo, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulmonary+venous+isolation+by+antral+ablation+with+a+large+cryoballoon+for+treatment+of+paroxysmal+and+persistent+atrial+fibrillation:+medium-term+outcomes+and+non-randomised+comparison+with+pulmonary+venous+isolation+by+radiofrequency+ablation.">Pulmonary venous isolation by antral ablation with a large cryoballoon for treatment of paroxysmal and persistent atrial fibrillation: medium-term outcomes and non-randomised comparison with pulmonary venous isolation by radiofrequency ablation.</a> Heart. 96 (17), 1379-1384 (2010).</li><li>Packer, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryoballoon+ablation+of+pulmonary+veins+for+paroxysmal+atrial+fibrillation:+first+results+of+the+North+American+Arctic+Front+(STOP+AF)+pivotal+trial.">Cryoballoon ablation of pulmonary veins for paroxysmal atrial fibrillation: first results of the North American Arctic Front (STOP AF) pivotal trial.</a> Journal of the American College of Cardiology. 61 (16), 1713-1723 (2013).</li><li>Kuck, K., Brugada, J., Albenque, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryoballoon+or+Radiofrequency+Ablation+for+Atrial+Fibrillation.">Cryoballoon or Radiofrequency Ablation for Atrial Fibrillation.</a> New England Journal of Medicine. 375 (11), 1100-1101 (2016).</li><li>Knecht, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomical+predictors+for+acute+and+mid-term+success+of+cryoballoon+ablation+of+atrial+fibrillation+using+the+28+mm+balloon.">Anatomical predictors for acute and mid-term success of cryoballoon ablation of atrial fibrillation using the 28 mm balloon.</a> Journal of Cardiovascular Electrophysiology. 24 (2), 132-138 (2013).</li><li>Cabrera, J. A., Ho, S. Y., Climent, V., Sanchez-Quintana, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+architecture+of+the+left+lateral+atrial+wall:+a+particular+anatomic+region+with+implications+for+ablation+of+atrial+fibrillation.">The architecture of the left lateral atrial wall: a particular anatomic region with implications for ablation of atrial fibrillation.</a> European Heart Journal. 29 (3), 356-362 (2008).</li><li>Kubala, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+pulmonary+veins+anatomy+is+associated+with+better+AF-free+survival+after+cryoablation+as+compared+to+atypical+anatomy+with+common+left+pulmonary+vein.">Normal pulmonary veins anatomy is associated with better AF-free survival after cryoablation as compared to atypical anatomy with common left pulmonary vein.</a> Pacing and Clinical Electrophysiology. 34 (7), 837-843 (2011).</li><li>Guler, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Pulmonary+Vein+Anatomy+and+Pulmonary+Vein+Diameters+on+Outcome+of+Cryoballoon+Catheter+Ablation+for+Atrial+Fibrillation.">Effect of Pulmonary Vein Anatomy and Pulmonary Vein Diameters on Outcome of Cryoballoon Catheter Ablation for Atrial Fibrillation.</a> Pacing and Clinical Electrophysiology. 38 (8), 989-996 (2015).</li><li>Baran, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+pulmonary+vein+ostia+anatomy+on+efficacy+of+cryoballoon+ablation+for+atrial+fibrillation.">Impact of pulmonary vein ostia anatomy on efficacy of cryoballoon ablation for atrial fibrillation.</a> Heart Beat Journal. 1, 65-70 (2017).</li><li>Sorgente, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulmonary+vein+ostium+shape+and+orientation+as+possible+predictors+of+occlusion+in+patients+with+drug-refractory+paroxysmal+atrial+fibrillation+undergoing+cryoballoon+ablation.">Pulmonary vein ostium shape and orientation as possible predictors of occlusion in patients with drug-refractory paroxysmal atrial fibrillation undergoing cryoballoon ablation.</a> Europace. 13 (2), 205-212 (2011).</li><li>Chun, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+'single+big+cryoballoon'+technique+for+acute+pulmonary+vein+isolation+in+patients+with+paroxysmal+atrial+fibrillation:+a+prospective+observational+single+centre+study.">The 'single big cryoballoon' technique for acute pulmonary vein isolation in patients with paroxysmal atrial fibrillation: a prospective observational single centre study.</a> European Heart Journal. 30 (6), 699-709 (2009).</li><li>Cabrera, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+evidence+of+muscular+connections+between+contiguous+pulmonary+venous+orifices:+relevance+of+the+interpulmonary+isthmus+for+catheter+ablation+in+atrial+fibrillation.">Morphological evidence of muscular connections between contiguous pulmonary venous orifices: relevance of the interpulmonary isthmus for catheter ablation in atrial fibrillation.</a> Heart Rhythm. 6 (8), 1192-1198 (2009).</li><li>McLellan, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulmonary+vein+isolation:+the+impact+of+pulmonary+venous+anatomy+on+long-term+outcome+of+catheter+ablation+for+paroxysmal+atrial+fibrillation.">Pulmonary vein isolation: the impact of pulmonary venous anatomy on long-term outcome of catheter ablation for paroxysmal atrial fibrillation.</a> Heart Rhythm. 11 (4), 549-556 (2014).</li><li>Mansour, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+anatomy+of+the+left+atrium+by+magnetic+resonance+angiography:+implications+for+catheter+ablation+for+atrial+fibrillation.">Three-dimensional anatomy of the left atrium by magnetic resonance angiography: implications for catheter ablation for atrial fibrillation.</a> Journal of Cardiovascular Electrophysiology. 17 (7), 719-723 (2006).</li><li>Ottaviano, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryoballoon+ablation+for+atrial+fibrillation+guided+by+real-time+three-dimensional+transoesophageal+echocardiography:+a+feasibility+study.">Cryoballoon ablation for atrial fibrillation guided by real-time three-dimensional transoesophageal echocardiography: a feasibility study.</a> Europace. 15 (7), 944-950 (2013).</li><li>Faletra, F. F., Regoli, F., Acena, M., Auricchio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Value+of+real-time+transesophageal+3-dimensional+echocardiography+in+guiding+ablation+of+isthmus-dependent+atrial+flutter+and+pulmonary+vein+isolation.">Value of real-time transesophageal 3-dimensional echocardiography in guiding ablation of isthmus-dependent atrial flutter and pulmonary vein isolation.</a> Circulation Journal. 76 (1), 5-14 (2012).</li><li>Coulombe, N., Paulin, J., Su, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+in+vivo+performance+of+second-generation+cryoballoon+for+pulmonary+vein+isolation.">Improved in vivo performance of second-generation cryoballoon for pulmonary vein isolation.</a> Journal of Cardiovascular Electrophysiology. 24 (8), 919-925 (2013).</li></ol>

כאן, אנו מדגימים מתודולוגיה שלב אחר שלב כדי ללמוד את PVs, המבנים הסובבים שלהם ואת המאפיינים האנטומיים עם אקו קרדיוגרפיה 3D. השיטה המתוארת לעיל להדמיה תלת-ממדית של ה-PVs היא שיטה הניתנת לתקנון בקלות, המספקת תמונות תלת-ממד באיכות גבוהה ברוב המטופלים המתאימות למדידות מדויקות. איכות אופטימלית ואו?...

דפוס הניקוז של ורידים ריאתיים (PV) משתנה מאוד עם 56.5% שונות באוכלוסייה הממוצעת1. הערכה של דפוס ניקוז PV היא קריטית בעת תכנון בידוד PV (PVI), המהווה את הטיפול ההתערבותי הנפוץ ביותר של פרפור פרוזדורים בימינו2,3,4. למרות שאבלציה קטטר בתדרי רדיו הייתה הטכנולוגיה הסטנדרטית להשגת PVI, טכנולוגיית אבלציה (CA) המבוססת על קריובלון (CB) היא שיטה חלופית הדורשת פחות זמן פרוצדורלי. הטכניקה פחות מסובכת בהשוואה ל- ablation בתדר רדיו5,6, בעוד היעילות והבטיחות של CA דומות לאלה של אבלציה בתדר רדיו7.
שיעור החסימה הפרוצדורלית PV על ידי CB ואת הרחבה היקפית מתמשכת של פגיעה ברקמות באוסטיום PV קובע את ההצלחה הקבועה של PVI לאחר CA. אחד הגורמים העיקריים של החסם PV הוא וריאציה של אנטומיה PV. במחקרים שנערכו לאחרונה, טומוגרפיה ממוחשבת( (CT) ו- MRI לב, זוהו מספר פרמטרי PV עם ערכים חזויים של שיעורי הצלחה לטווח קצר וארוך בעקבות CA. פרמטרים אלה כללו וריאציות של האנטומיה של PV (PV משותף שמאלי, PVs8 supernumerary, 9,10, שטח ראוותני, מדד אליפסה8,11,12,13) וסביבתה (רכס בין-ורידי8,14,15,16, עובי של רכס לרוחב שמאל 8,9,17).
למרות אקו-קרדיוגרפיה דו-ממדית קונבנציונלית אינה מתאימה להצגה ומדידת רוב הפרמטרים לעיל, אקו-קרדיוגרפיה תלת-ממדית של הוושט (3D TEE) נראית ככלי חלופי להדמיית ה- PVs, כפי שהודגם בנתוני ספרות קודמים18,19.
יתר על כן, 3D TEE לפני PVI מביא ערך נוסף בהשוואה CT או MRI, כפי שהוא לא רק מספק נתונים על מאפייני PV עבור עיצוב פרוצדורלי, אלא גם מבהיר אם פקקת בנספח הפרוזדורים השמאלי (LAA) קיים. חקירה זו חשובה במיוחד לפני PVI. יחד עם זאת, 3D TEE דורש פחות זמן, העלות הפרוצדורלית שלה נמוכה, וזה לא חושף את המטופל ואת הצוות הרפואי לקרינה.
בעבר, מספר סוגים של CBs היו קיימים בגדלים שונים, מה שהקשה להסיק כיצד הפרמטרים השונים של ה- PVs משפיעים על שיעור ההצלחה של CA. כיום, CB הדור השני שהוצג לאחרונה משמש עבור CA, אשר קיים רק בגודל אחד. הודות לאפקט הקירור המשופר שלו, הדור השני של CB מציע ביצועים גבוהים בהרבה בהשוואה לדור הראשון של CB20, מה שמדגיש עוד יותר את החשיבות של אנטומיה של PV ותכנון התערבותי לפני PVI.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>4D Cardio-view 3 software</td>
			<td>Tomtec Imaging Systems GmbH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epiq 7G scanner</td>
			<td>Philips</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Q-Lab Software</td>
			<td>Philips</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X5-1 transducer</td>
			<td>Philips</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

three-dimensional echocardiographic method for the visualization and assessment of specific parameters of the pulmonary veins

הממדים של ורידים ריאתיים הם פרמטרים חשובים בעת תכנון בידוד וריד ריאתי (PVI), במיוחד עם טכניקת אבלציה cryoballoon. הכרה בממדים ובווריאציות האנטומיות של ורידים ריאתיים (PVs) עשויה לשפר את תוצאות ההתערבות. אקו-קרדיוגרפיה טראנסו-ושטית קונבנציונלית יכולה לספק רק נתונים מוגבלים על ממדי ה-PVs; עם זאת, אקוקרדיוגרפיה תלת-ממדית יכולה להעריך עוד יותר קטרים ואזורים רלוונטיים של PVs, כמו גם את הקשר המרחבי שלהם למבנים שמסביב. בנתוני ספרות קודמים כבר זוהו פרמטרים המשפיעים על שיעור ההצלחה של PVI. אלה הם הרכס לרוחב השמאלי, הרכס הבין-ורידי, האזור הראוותני של PVs ומדד הסגלגלות של האוסטניום. הדמיה נכונה של PVs על ידי אקוקרדיוגרפיה תלת-ממדית היא שיטה מאתגרת מבחינה טכנית. צעד מכריע אחד הוא אוסף התמונות. שלוש עמדות מתמר בודדות נחוצות כדי לדמיין את המבנים החשובים; אלה הם הרכס לרוחב השמאלי, האוסטניום של PVs ואת הרכס השזור של PVs שמאל וימין. לאחר מכן, תמונות תלת-ממד נרכשות ונשמרות כלולאות דיגיטליות. ערכות נתונים אלה נחתכות, מה שגורם לתצוגות en face המציגות קשרי גומלין מרחביים. ניתן להשתמש בשלב זה גם כדי לקבוע את הווריאציות האנטומיות של PVs. לבסוף, שחזורים רב-כוכביים נוצרים כדי למדוד כל פרמטר בודד של PVs.
איכות אופטימלית ואוריינטציה של התמונות שנרכשו הם בעלי חשיבות עליונה להערכה המתאימה של אנטומיה PV. בעבודה הנוכחית בדקנו את הנראות בתלת-ממד של ה-PVS ואת התאמת השיטה הנ"ל ב-80 מטופלים. המטרה הייתה לספק מתאר מפורט של הצעדים החיוניים ומלכודות פוטנציאליות של הדמיה והערכה של PV עם אקוקרדיוגרפיה תלת-ממדית.

באמצעות פרוטוקול רכישת התמונות המתואר לעיל, השלב הראשון הוא לדמיין את נספח האיתור השמאלי (LAA) באמצעות רכישת דו-משמעית (איור 1). הבדיקה נמצאת בתנוחה הטרנסו-ושט העליונה (או האמצעית) ב-20-45 מעלות. התמונה מציגה את LAA. הרכס הרוחב השמאלי וה-PV השמאלי העליון מוצגים ב- 60-80° (איו...

Watch this Scientific Journal Video about Three-Dimensional Echocardiographic Method for the Visualization and Assessment of Specific Parameters of the Pulmonary Veins at JoVE.com

Three-Dimensional Echocardiographic Method for the Visualization and Assessment of Specific Parameters of the Pulmonary Veins

הממדים של ורידים ריאתיים (PV) הם פרמטרים חשובים בעת תכנון בידוד וריד ריאתי. אקו-קרדיוגרפיה טרנסו-ושטית 2D יכולה לספק רק נתונים מוגבלים על ה-PVs; עם זאת, אקוקרדיוגרפיה תלת-ממדית יכולה להעריך קטרים ואזורים רלוונטיים של PVs, כמו גם את הקשר המרחבי שלהם למבנים שמסביב.

שיטה אקו-קרדיוגרפית תלת מימדית להדמיה והערכה של פרמטרים ספציפיים של ורידים ריאתיים

The dimensions of the pulmonary veins are important parameters when planning pulmonary vein isolation (PVI), especially with the cryoballoon ablation ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Alginate Hydrogels for Three-Dimensional Organ Culture of Ovaries and Oviducts

אלגינט הידרוג לתרבות תלת ממדי איברים של השחלות Oviducts

Ovarian cancer is the fifth leading cause of cancer deaths in women and has a 63% mortality rate in the United States1. The cell type of origin for ...

The Three-Dimensional Human Skin Reconstruct Model: a Tool to Study Normal  Skin and Melanoma Progression

עור תלת ממדי האדם לשחזר דגם: ככלי מחקר עור רגיל התקדמות מלנומה

Most in vitro studies in experimental skin biology have been done in 2-dimensional (2D) monocultures, while accumulating evidence suggests that cells ...

Planar and Three-Dimensional Printing of Conductive Inks

הדפסה מישוריים תלת ממדי של דיו מוליך

Printed electronics rely on low-cost, large-area fabrication routes to create flexible or multidimensional electronic, optoelectronic, and biomedical ...

Three-dimensional Cell Culture Model for Measuring the Effects of Interstitial Fluid Flow on Tumor Cell Invasion

תלת מימדי תרבית תאים מודל למדידת השפעת זרימת הנוזל ביניים על הפלישה תאים סרטניים

The growth and progression of most solid tumors depend on the initial transformation of the cancer cells and their response to stroma-associated signaling ...

Patient-specific Modeling of the Heart: Estimation of Ventricular Fiber Orientations

דוגמנות מטופל ספציפי של לב: אומדן של אורינטציות סיבי חדרית

Patient-specific  simulations of heart (dys)function aimed at personalizing cardiac therapy are hampered  by the absence of in vivo imaging technology for ...

Investigating the Three-dimensional Flow Separation Induced by a Model Vocal Fold Polyp

חקירת הפרדת הזרימה התלת מימדית הנגרמת על ידי מודל פוליפ קיפול ווקאלי

The fluid-structure energy exchange process for normal speech has been studied extensively, but it is not well understood for pathological conditions. ...

Human Cartilage Tissue Fabrication Using Three-dimensional Inkjet Printing Technology

ייצור רקמת סחוס אנושי באמצעות שלושה ממדי הזרקת דיו טכנולוגיית הדפסה

Bioprinting, which is based on thermal inkjet printing, is one of the most attractive enabling technologies in the field of tissue engineering and ...

Analysis of Cell Migration within a Three-dimensional Collagen Matrix

ניתוח של נדידת תאים בתוך קולגן מטריקס תלת ממדי

The ability to migrate is a hallmark of various cell types and plays a crucial role in several physiological processes, including&#160;embryonic ...

Generation of a Three-dimensional Full Thickness Skin Equivalent and Automated Wounding

דור של עור בעובי מלא תלת ממדי Equivalent ואוטומטי פציעה

In vitro models are a cost effective and ethical alternative to study cutaneous wound healing processes. Moreover, by using human cells, these models ...

Studying Protein Function and the Role of Altered Protein Expression by Antibody Interference and Three-dimensional Reconstructions

תפקוד חלבון לימוד ותפקיד ביטוי חלבון לשנות על ידי הפרעת נוגדן שחזור תלת ממדי

A strict management of protein expression is not only essential to every organism alive, but also an important strategy to investigate protein functions ...